2021-009801

特願２０１９－１６３４５５「ブルトン型チロシンキナーゼ阻害剤の結晶形態」拒絶査定不服審判事件〔令和 ２年 １月３０日出願公開、特開２０２０－ １５７４４〕について、次のとおり審決する。

結 論 本件審判の請求は、成り立たない。

理 由 第１ 手続の経緯 この出願は、２０１３年（平成２５年）６月３日（パリ条約による優先権外国庁受理 ２０１２年６月４日、米国（ＵＳ））を国際出願日とする特願２０１５－５１６０９１号の一部を平成２９年１０月２６日に特願２０１７－２０７５９１号として新たな特許出願とし、さらにその一部を令和元年９月６日に新たな特許出願としたものであって、同年１０月４日に手続補正書が提出され、令和２年９月１１日付けで拒絶理由が通知され、令和３年２月１５日に意見書及び手続補正書が提出され、同年３月１９日付けで拒絶査定され、同年７月２１日に拒絶査定不服審判が請求されると同時に手続補正書が提出され、同年９月９日に手続補正書（方式）が提出されたものである。 第２ 本願発明について この出願の特許請求の範囲の記載は、令和３年７月２１日に提出された手続補正書により補正された特許請求の範囲の請求項１～３２に記載されたとおりであるところ、その請求項６に係る発明（以下「本願発明」という。）は、以下のとおりである。 「 【請求項６】 １－（（Ｒ）－３－（４－アミノ－３－（４－フェノキシフェニル）－１Ｈ－ピラゾロ［３，４－ｄ］ピリミジン－１－イル）ピペリジン－１－イル）プロプ－２－エン－１－オンの結晶形であって、該結晶形は、７．０±０．１°２－シータ、１４．０±０．１°２－シータ、１５．７±０．１°２－シータ、１８．２±０．１°２－シータ、１９．１±０．１°２－シータ、１９．５±０．１°２－シータ、２０．３±０．１°２－シータ、２２．１±０．１°２－シータ、及び２２．９±０．１°２－シータに特徴的なピークを伴うＸＲＰＤパターンを有する、結晶形。」 第３ 原査定の拒絶の理由 原査定の拒絶の理由となった令和２年９月１１日付けで通知した拒絶理由の理由１は、概略、以下のとおりである。 この出願の請求項１～２５、２９～３２に係る発明は、本願の優先権主張の日（以下「本願優先日」という。）前に日本国内又は外国において頒布された刊行物である下記の引用文献１に記載された発明及び本願優先日時点の技術常識に基いて、本願優先日前にその発明の属する技術の分野における通常の知識を有する者が容易に発明をすることができたものであるから、特許法２９条２項の規定により特許を受けることができない、というものである。 １ 特表２０１０－５０４３２４号公報 ２ 平山令明編、有機化合物結晶作製ハンドブック －原理とノウハウ－、丸善株式会社、２００８年 ７月２５日、ｐ．５７～８４ ３ ＰＨＡＲＭ ＳＴＡＧＥ、２００７年、６、ｐ．２０～２５ ４ 特表２０１０－５３５２３２号公報 引用文献２～４は、本願優先日時点の技術常識を示す文献である。 令和２年９月１１日付けで通知した拒絶理由の対象となった令和元年１０月４日に提出された手続補正書により補正された特許請求の範囲に記載された請求項６に係る発明、及び、上記拒絶査定の対象となった令和３年２月１５日に提出された手続補正書により補正された特許請求の範囲に記載された請求項６に係る発明は、ともに本願発明に対応している。 第４ 当審の判断 当審合議体は、上記原査定の拒絶の理由１のとおり、本願発明は、本願優先日前に日本国内又は外国において頒布された刊行物である下記の引用文献１に記載された発明及び本願優先日時点の技術常識に基いて、本願優先日前にその発明の属する技術の分野における通常の知識を有する者が容易に発明をすることができたものであるから、特許法第２９条第２項の規定により特許を受けることができないと考える。 理由は、以下のとおりである。 引用文献１：特表２０１０－５０４３２４号公報 引用文献２：平山令明編、有機化合物結晶作製ハンドブック －原理とノウハウ－、丸善株式会社、２００８年 ７月２５日、ｐ．５７～８４ 引用文献３：ＰＨＡＲＭ ＳＴＡＧＥ、Ｖｏｌ．６、Ｎｏ．１０、２００７年、ｐ．２０～２５ 引用文献４：岡野定舗編著、新・薬剤学総論 改訂第３版、株式会社南江堂、１９８７年４月１０日、ｐ．２６，１１１，２５６，２５７ 引用文献５：C. G. WERMUTH編、長瀬博監訳、最新 創薬化学 下巻、株式会社テクノミック、１９９９年９月２５日、ｐ．４５２～４５３ 引用文献６：社団法人日本化学会編、化学便覧 応用化学編 第６版、丸善株式会社、２００３年１月３０日、ｐ．１７８ 引用文献７：松岡正邦監修、結晶多形の基礎と応用 普及版、株式会社シーエムシー出版、２０１０年１０月２２日、ｐ．１０５ 引用文献８：浅原照三 外４名編、溶剤ハンドブック、株式会社講談社、１９８５年９月１日、ｐ．４７～５１ なお、引用文献２～８は、本願優先日時点の技術常識を示すためのものである。 １ 引用文献及びその記載事項 （１）引用文献１：（原査定で引用された引用文献１） 原査定で引用された本願優先日前に頒布された引用文献１には、次の記載がある。 （１ａ）「【技術分野】 ・・・ 【０００２】 本明細書に記載されているのは、チロシンキナーゼの活性を阻害するための化合物、そのような化合物の製造方法、そのような化合物を含む医薬組成物および薬物、並びにそれらの化合物および組成物の使用方法である。 【背景技術】 【０００３】 Ｔｅｃファミリー非受容体型チロシンキナーゼのメンバーである、ブルートンチロシンキナーゼ（Ｂｔｋ）は、Ｔリンパ球およびナチュラルキラー細胞を除く、ありとあらゆる造血細胞において発現している重要なシグナル酵素である。Ｂｔｋは、Ｂ細胞のシグナル経路において、細胞表面のＢ細胞受容体（ＢＣＲ）の刺激と下流の細胞内の反応とを結び付ける、重要な役割を果たしている。 ・・・ 【０００５】 （発明の概要） 本明細書に記載されているのは、ブルートンチロシンキナーゼ(Ｂｔｋ)の阻害剤である。・・・さらに記載されているのは、Ｂｔｋの不可逆的な阻害剤を含む医薬製剤である。 ・・・ 【０００７】 一つの形態において、本明細書で提供されているのは式（Ｄ）の化合物である。式（Ｄ）を以下に示す： 【化１】 ［図：0001399818000001.jpg］ [式中、 Ｌａは、ＣＨ２、Ｏ、ＮＨ、またはＳであり; Ａｒは、置換もしくは無置換アリール、または、置換もしくは無置換ヘテロアリールであり; Ｙは、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、およびヘテロアリールから選択される適宜置換された基であり; Ｚは、Ｃ(＝Ｏ)、ＯＣ(＝Ｏ)、ＮＨＣ(＝Ｏ)、Ｃ（＝Ｓ）、Ｓ(＝Ｏ)ｘ、ＯＳ(＝Ｏ)ｘ、ＮＨＳ(＝Ｏ)ｘであり、その中でｘは１または２であり； Ｒ７およびＲ８は独立して、Ｈ、無置換Ｃ１－Ｃ４アルキル、置換Ｃ１－Ｃ４アルキル、無置換Ｃ１－Ｃ４ヘテロアルキル、置換Ｃ１－Ｃ４ヘテロアルキル、無置換Ｃ３－Ｃ６シクロアルキル、置換Ｃ３－Ｃ６シクロアルキル、無置換Ｃ２－Ｃ６ヘテロシクロアルキル、および置換Ｃ２－Ｃ６ヘテロシクロアルキルから選択され;あるいは、 Ｒ７およびＲ８は、一緒になって結合を形成し; Ｒ６は、Ｈ、置換もしくは無置換Ｃ１－Ｃ４アルキル、置換もしくは無置換Ｃ１－Ｃ４ヘテロアルキル、Ｃ１－Ｃ６アルコキシアルキル、Ｃ１－Ｃ８アルキルアミノアルキル、置換もしくは無置換Ｃ３－Ｃ６シクロアルキル、置換もしくは無置換アリール、置換もしくは無置換Ｃ２－Ｃ８ヘテロシクロアルキル、置換もしくは無置換ヘテロアリール、Ｃ１－Ｃ４アルキル(アリール)、Ｃ１－Ｃ４アルキル(ヘテロアリール)、Ｃ１－Ｃ４アルキル(Ｃ３－Ｃ８シクロアルキル)、またはＣ１－Ｃ４アルキル(Ｃ２－Ｃ８ヘテロシクロアルキル)である] によって表される構造を有する化合物、並びに、その医薬的に活性な代謝物、または医薬的に許容される溶媒和物、医薬的に許容される塩、または医薬的に許容されるプロドラッグ。 【０００８】 いずれの、および全ての態様において、置換基は示した選択肢の部分集合の中から選択することができる。例えばある態様において、ＬａはＣＨ２、ＯまたはＮＨである。別の態様において、ＬａはＯまたはＮＨである。さらに別の態様において、ＬａはＯである。 【０００９】 ある態様において、Ａｒは置換もしくは無置換アリールである。別の態様において、Ａｒは６員アリールである。さらに別の態様において、Ａｒはフェニルである。 【００１０】 ある態様において、Ｘは２である。別の態様において、ＺはＣ（＝Ｏ）、ＯＣ（＝Ｏ）、ＮＨＣ（＝Ｏ）、Ｓ（＝Ｏ）ｘ、ＯＳ（＝Ｏ）ｘ、またはＮＨＳ（＝Ｏ）ｘである。さらに別の態様において、ＺはＣ（＝Ｏ）、ＮＨＣ（＝Ｏ）、またはＳ（＝Ｏ）２である。 【００１１】 ある態様において、Ｒ７およびＲ８は独立して、Ｈ、無置換Ｃ１－Ｃ４アルキル、置換Ｃ１－Ｃ４アルキル、無置換Ｃ１－Ｃ４ヘテロアルキル、および置換Ｃ１－Ｃ４ヘテロアルキルから選択され；あるいは、Ｒ７およびＲ８は一緒になって結合を形成する。別の態様において、Ｒ７およびＲ８のそれぞれはＨであり；あるいは、Ｒ７およびＲ８は一緒になって結合を形成する。 【００１２】 ある態様において、Ｒ６はＨ、置換もしくは無置換Ｃ１－Ｃ４アルキル、置換もしくは無置換Ｃ１－Ｃ４ヘテロアルキル、Ｃ１－Ｃ６アルコキシアルキル、Ｃ１－Ｃ８アルキルアミノアルキル、置換もしくは無置換アリール、置換もしくは無置換ヘテロアリール、Ｃ１－Ｃ４アルキル（アリール）、Ｃ１－Ｃ４アルキル（ヘテロアリール）、Ｃ１－Ｃ４アルキル（Ｃ３－Ｃ８シクロアルキル）、またはＣ１－Ｃ４アルキル（Ｃ２－Ｃ８ヘテロシクロアルキル）である。別の態様において、Ｒ６はＨ、置換もしくは無置換Ｃ１－Ｃ４アルキル、置換もしくは無置換Ｃ１－Ｃ４ヘテロアルキル、Ｃ１－Ｃ６アルコキシアルキル、Ｃ１－Ｃ２アルキル－Ｎ（Ｃ１－Ｃ３アルキル）２、Ｃ１－Ｃ４アルキル（アリール）、Ｃ１－Ｃ４アルキル（ヘテロアリール）、Ｃ１－Ｃ４アルキル（Ｃ３－Ｃ８シクロアルキル）、またはＣ１－Ｃ４アルキル（Ｃ２－Ｃ８ヘテロシクロアルキル）である。別の態様において、Ｒ６はＨ、置換もしくは無置換Ｃ１－Ｃ４アルキル、－ＣＨ２－Ｏ－（Ｃ１－Ｃ３アルキル）、－ＣＨ２－Ｎ（Ｃ１－Ｃ３アルキル）２、Ｃ１－Ｃ４アルキル（フェニル）、またはＣ１－Ｃ４アルキル（５または６員ヘテロアリール）。別の態様において、Ｒ６はＨ、置換もしくは無置換Ｃ１－Ｃ４アルキル、－ＣＨ２－Ｏ－（Ｃ１－Ｃ３アルキル）、－ＣＨ２－（Ｃ１－Ｃ６アルキルアミノ）、Ｃ１－Ｃ４アルキル（フェニル）、またはＣ１－Ｃ４アルキル（５または６員ヘテロアリール）。また別の態様において、Ｒ６はＨ、置換もしくは無置換Ｃ１－Ｃ４アルキル、－ＣＨ２－Ｏ－（Ｃ１－Ｃ３アルキル）、－ＣＨ２－Ｎ（Ｃ１－Ｃ３アルキル）２、Ｃ１－Ｃ４アルキル（フェニル）、またはＣ１－Ｃ４アルキル（Ｎ原子を１つまたは２つ含む、５または６員ヘテロアリール）、またはＣ１－Ｃ４アルキル（Ｎ原子を１つまたは２つ含む、５または６員ヘテロシクロアルキル）。 【００１３】 ある態様において、Ｙはアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、およびヘテロシクロアルキルから選択される適宜置換された基である。別の態様において、ＹはＣ１－Ｃ６アルキル、Ｃ１－Ｃ６ヘテロアルキル、４、５、６、もしくは７員シクロアルキル、および４、５、６、もしくは７員ヘテロシクロアルキルから選択される適宜置換された基である。別の態様において、ＹはＣ１－Ｃ６アルキル、Ｃ１－Ｃ６ヘテロアルキル、５もしくは６員シクロアルキル、およびＮ原子を１つまたは２つ含む５もしくは６員ヘテロシクロアルキルから選択される適宜置換された基である。別の態様において、Ｙは５もしくは６員シクロアルキル、またはＮ原子を１つまたは２つ含む５もしくは６員ヘテロシクロアルキルである。さらに別の態様において、Ｙは４、５、６、もしくは７員シクロアルキル環であるか；またはＹは４、５、６、もしくは７員ヘテロシクロアルキル環である。 【００１４】 様々な置換基の記号についての上で記載されているいずれの基の組み合わせについてもここでは意図されている。本明細書で提供されている化合物の置換基および置換パターンは、当該技術分野の通常の技術の一つを選択して、化学的に安定で、周知の手法により合成できる化合物、並びに本明細書で示された化合物を提供できると理解されている。 【００１５】 ある形態において、本明細書で提供されているのは、 １－（３－（４－アミノ－３－（４－フェノキシフェニル）－１Ｈ－ピラゾロ[３,４－ｄ]ピリミジン－１－イル）ピペリジン－１－イル）プロパ－２－エン－１－オン（化合物４）； （Ｅ）－１－（３－（４－アミノ－３－（４－フェノキシフェニル）－１Ｈ－ピラゾロ[３,４－ｄ]ピリミジン－１－イル）ピペリジン－１－イル）ブタ－２－エン－１－オン（化合物５）； １－（３－（４－アミノ－３－（４－フェノキシフェニル）－１Ｈ－ピラゾロ[３,４－ｄ]ピリミジン－１－イル）ピペリジン－１－イル）スルホニルエテン（化合物６）； １－（３－（４－アミノ－３－（４－フェノキシフェニル）－１Ｈ－ピラゾロ[３,４－ｄ]ピリミジン－１－イル）ピペリジン－１－イル）プロパ－２－イン－１－オン（化合物８）； １－（４－（４－アミノ－３－（４－フェノキシフェニル）－１Ｈ－ピラゾロ[３,４－ｄ]ピリミジン－１－イル）ピペリジン－１－イル）プロパ－２－エン－１－オン（化合物９）； Ｎ－（（１ｓ,４ｓ）－４－（４－アミノ－３－（４－フェノキシフェニル）－１Ｈ－ピラゾロ[３,４－ｄ]ピリミジン－１－イル）シクロヘキシル）アクリルアミド（化合物１０）； １－（（Ｒ）－３－（４－アミノ－３－（４－フェノキシフェニル）－１Ｈ－ピラゾロ[３,４－ｄ]ピリミジン－１－イル）ピロリジン－１－イル）プロパ－２－エン－１－オン（化合物１１）； １－（（Ｓ）－３－（４－アミノ－３－（４－フェノキシフェニル）－１Ｈ－ピラゾロ[３,４－ｄ]ピリミジン－１－イル）ピロリジン－１－イル）プロパ－２－エン－１－オン（化合物１２）； １－（（Ｒ）－３－（４－アミノ－３－（４－フェノキシフェニル）－１Ｈ－ピラゾロ[３,４－ｄ]ピリミジン－１－イル）ピペリジン－１－イル）プロパ－２－エン－１－オン（化合物１３）； １－（（Ｓ）－３－（４－アミノ－３－（４－フェノキシフェニル）－１Ｈ－ピラゾロ[３,４－ｄ]ピリミジン－１－イル）ピペリジン－１－イル）プロパ－２－エン－１－オン（化合物１４）；および、 （Ｅ）－１－（３－（４－アミノ－３－（４－フェノキシフェニル）－１Ｈ－ピラゾロ[３,４－d]ピリミジン－１－イル）ピペリジン－１－イル）－４－（ジメチルアミノ）ブタ－２－エン－１－オン（化合物１５） の中から選択される化合物である。 【００１６】 さらなる形態において、本明細書のいずれかの少なくとも一つの治療上の有効量の化合物を含む医薬的組成物、または医薬的に許容される塩、医薬的に活性な代謝物、医薬的に許容されるプロドラッグ、もしくは医薬的に許容される溶媒和物が提供されている。ある特定の態様において、本明細書で提供される組成物にはさらに医薬的に許容される希釈剤、賦形剤および／または結合剤が含まれる。 ・・・ 【００２３】 別の態様において本明細書で提供される化合物は、チロシンキナーゼ活性の阻害のための薬物の製剤に用いられる。また別の態様において本明細書で提供されている化合物は、ブルートンチロシンキナーゼ（Ｂｔｋ）活性の阻害のための薬物の製剤に用いられる。」 （１ｂ）「【０２２９】 本明細書に記載されている方法および製剤には、Ｎ－オキシド、結晶形（多形体としても知られている）、または本明細書に記載されている化合物の医薬的に許容される塩、並びにそれらの化合物で同じ種類の活性を有する活性代謝物の使用が含まれる。ある状況において、化合物は互変異性体として存在し得る。全ての互変異性体は、本明細書で示されている化合物の範囲内で含まれている。加えて、本明細書に記載されている化合物は、非溶媒和物の中、並びに医薬的に許容される溶媒である水、エタノール、などを加えた溶媒和物の形で存在することができる。本明細書で示されている化合物の溶媒和物の形も、本明細書で開示するために、また検討されている。」 （１ｃ）「【０２４２】 本明細書に記載されている化合物は、多様な形であり得て、以下に限定されないが、非晶形、製粉された形およびナノ微粒子形が含まれる。加えて、本明細書に記載されている化合物には、結晶形が含まれ、これは多形体としても知られている。多形体には、化合物の同じ組成物成分を有する異なる結晶充填構造が含まれる。多形体は通常、異なるＸ線回折図形、赤外線スペクトル、融点、密度、硬度、結晶形、光学的および電気的性質、安定性、並びに溶解度を有する。多様な要因、例えば再結晶化溶媒、結晶化率、および保管温度が、単結晶形が占めることを引き起こし得る。 【０２４３】 医薬的に許容される塩、多形体および／または溶媒和物のスクリーニングおよび特徴付けは、様々な技術を用いて達成され得て、それらにはこれらに限定されないが、熱解析、Ｘ線回折、分光法、蒸気吸着、および顕微鏡使用が含まれる。熱解析方法は、熱化学分解または熱力学的プロセスを扱い、多形転移が含まれるがこれに限定されることはなく、そしてそのような方法は、多形層同士の関係を分析する、重量損失を決定する、ガラス転移温度を見つける、または賦形剤適合性研究のために用いられる。そのような方法には、これらに限定されないが、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、変調示差走査熱量測定（ＭＤＣＳ）、熱重量分析（ＴＧＡ）、並びに熱重量および赤外分析（Thermogravi-metric and Infrared analysis）（ＴＧ／ＩＲ）が含まれる。Ｘ線回折方法には、これらに限定されないが、単結晶、および粉末回折計、およびシンクロトロン放射源が含まれる。用いられている多様な分光技術には、これらに限定されないが、ラマン、ＦＴＩＲ、ＵＶＩＳ、およびＮＭＲ（液体および固体状態）が含まれる。多様な顕微鏡使用技術には、これらに限定されないが、偏光顕微鏡、エネルギー分散型Ｘ線分析（ＥＤＸ）とともに用いる走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）、ＥＤＸ（気体または水蒸気雰囲気の中）とともに用いる環境制御型走査電子顕微鏡、ＩＲ顕微鏡、およびラマン顕微鏡が含まれる。 【０２４４】 明細書を通して、それらの基および置換基は、安定な部分および化合物を提供するために当業者によって選ばれ得る。」 （１ｄ）「【０３８９】実施例１：化合物の合成 ４－アミノ－３－（４－フェノキシフェニル）－１Ｈ－ピラゾロ[３，４－ｄ]ピリミジン（中間体２）の製造 国際特許出願国際公開第ＷＯ０１／０１９８２９号に開示されているように、４－アミノ－３－（４－フェノキシフェニル）－１Ｈ－ピラゾロ[３，４－ｄ]ピリミジン（中間体２）は製造される。簡潔に、４－フェノキシ安息香酸（４８ｇ）を、塩化チオニル（１００ｍｌ）に加え、そして穏やかに還流させながら１時間加熱する。塩化チオニルは蒸留を用いて除去し、残った油状物はトルエンに溶かし、揮発性物質は８０℃／２０ｍｂａｒで除去する。生じた酸塩化物は、トルエン（２００ｍｌ）およびテトラヒドロフラン（３５ｍｌ）に溶解する。マロノニトリル（１４.８ｇ）を加え、トルエン（１５０ｍｌ）に溶かしたジイソプロピルエチルエチルアミン（５７.９ｇ）を加えながら、溶液を－１０℃で攪拌し、温度を０℃以下に維持する。０℃のまま１時間した後、混合物を２０℃で一晩攪拌する。アミン塩酸塩は、ろ過を用いて移し、そのろ過液は減圧下で蒸発する。その残基は、酢酸エチルに取り込まれ、硫酸１.２５Ｍで、次に食塩水で洗浄し、そしてナトリウム硫酸塩を用いて乾燥する。溶媒の蒸発で半固体の残基が得られ、それはわずかな酢酸エチル処理により、１，１－ジシアノ－２－ヒドロキシ－２－（４－フェノキシフェニル）エテン（４.１ｇ）を白色固形物（融点は１６０から１６２℃）として得られる。蒸発のろ過液は、５６.５ｇ（９６％）の１，１－ジシアノ－２－ヒドロキシ－２－（４－フェノキシフェニル）エテンを灰褐色固形物として得られ、それはその後に用いる上で十分に純粋である。 【０３９０】 １，１－ジシアノ－２－ヒドロキシ－２－（４－フェノキシフェニル）エテン（５６.５ｇ）のアセトニトリル（７８０ｍｌ）およびメタノール（８５ｍｌ）溶液を、窒素のもとで０℃で攪拌し、一方でジイソプロピルエチルアミン（５２.５ｍｌ）を、続いて２Ｍのトリメチルシリルジアゾメタン（１５０ｍｌ）のＴＨＦ溶液を加える。反応は２日かけて２０℃で攪拌し、次にのシリカ（２g）を加える（クロマトグラフィーのために）。その赤褐色溶液を減圧下で蒸発し、その残基を酢酸エチルに溶解し、水で、次いで食塩水で十分に洗浄し、乾燥および蒸発する。その残基を、不溶性の油からデカントし、ジエチルエーテル（３ｘ２５０ｍｌ）で抽出する。エーテル抽出物の蒸発で、１，１－ジシアノ－２－メトキシ－２－（４－フェノキシフェニル）エテン（２２.５g）が薄い橙色固形物として得られる。不溶性の油状物をフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、１５.０gの赤橙色が得られる。 【０３９１】 １，１－ジシアノ－２－メトキシ－２－（４－フェノキシフェニル）エテン（２２.５ｇ）、および１，１－ジシアノ－２－メトキシ－２－（４－フェノキシフェニル）エテンの油状物（１５ｇ）は、ヒドラジン水和物（１８ｍｌ）のエタノール（２５ｍｌ）溶液によって処理し、スチームバスで１時間加熱する。エタノール（１５ｍｌ）を加え、続いて水（１０ｍｌ）を加える。その沈殿固形物を回収し、エタノール：水（４：１）を用いて洗浄し、続いて空気中で乾燥し、３－アミノ－４－シアノ－５－（４－フェノキシフェニル）ピラゾールが薄い橙色固体として得られる。 【０３９２】 ３－アミノ－４－シアノ－５－（４－フェノキシフェニル）ピラゾール（２９.５ｇ）を、ホルムアミド（３００ｍｌ）で懸濁し、窒素下、４時間１８０℃で加熱する。その反応混合物を、３０℃まで冷却し、水（３００ｍｌ）を加える。その固形物を回収し、水を用いて、次にメタノールを用いて十分に洗浄し、そして空気中で乾燥し、４－アミノ－３－（４－フェノキシフェニル）－１Ｈ－ピラゾロ[３，４－ｄ]ピリミジンが得られる。 【０３９３】 実施例１ａ：１－（３－（４－アミノ－３－（４－フェノキシフェニル）－１Ｈ－ピラゾロ[３，４－ｄ]ピリミジン－１－イル）ピペリジン－１－イル）プロパ－２－エン－１－オン（化合物４）の合成 反応式１ 【化２２】 ［図：0001399818000002.jpg］ 化合物４の合成；ａ）重合体に結合したトリフェニルホスフィン（ＴＰＰ）、ジアゾジカルボン酸ジイソプロピル（ＤＩＡＤ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）；ｂ）ＨＣｌ／ジオキサン；次いで塩化アクリロイル、トリエチルアミン（ＴＥＡ）。 本明細書に記載されている化合物は、反応式１で述べた手順に従って合成する。反応式１で示されている、反応条件の詳細な、実例となる実施例は、１－（３－（４－アミノ－３－（４－フェノキシフェニル）－１Ｈ－ピラゾロ[３，４－ｄ]ピリミジン－１－イル）ピペリジン－１－イル）プロパ－２－エン－１－オン（化合物４）の合成のために記載されている。 【０３９４】 ４－アミノ－３－（４－フェノキシフェニル）－１Ｈ－ピラゾロ[３，４－ｄ]ピリミジン（１０１ｍｇ）、および重合体に結合したトリフェニルホスフィン（ＴＰＰ）（ポリマーラブ（polymerlab））（３３０ｍｇ）を、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（５ｍｌ）と一緒に混合した。３－ヒドロキシピペリジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（２００mg；２.０当量）を混合物に加え、続いてジアゾジカルボン酸ジイソプロピル（０.０９９ｍｌ）を加えた。その反応混合物を、室温で一晩攪拌した。その反応混合物をフィルター処理して残基を取り除き、反応混合物を濃縮し、そしてフラッシュクロマトグラフィー（ペンタン／酢酸エチル＝１／１）によって精製して、中間体３（５５mｇ）を得た。 【０３９５】 中間体３（４８.３mｇ）をジオキサンの中で、の４ＮＨＣｌ（１ｍｌ）により１時間処理して、次に濃縮乾固した。その残基をジクロロメタンに溶解して、トリエチルアミン（０.０４２ｍｌ）を加え、続いて塩化アクリル（０.０１０ｍｌ）を加えた。その反応を２時間して、とめた。反応混合物を５％重量含水クエン酸で、次いで食塩水で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ＝２５／１による）で、化合物４（２２ｍｇ）を白色固形物として得た。MS(M+1): 441.2; 1H-NMR (400MHz): 8.26, s, 1H; 7.65, m, 2H; 7.42, m, 2H; 7.1-7.2, m, 5H; 6.7-6.9, m, 1H; 6.1, m, 1H; 5.5-5.7, m, 1H; 4.7, m, 1H; 4.54, m, 0.5H; 4.2, m, 1H; 4.1, m, 0.5H; 3.7, m, 0.5H; 3.2, m, 1H; 3.0, m, 0.5H; 2.3, m, 1H; 2.1, m, 1H; 1.9, m, 1H; 1.6, m, 1H. 【０３９６】 実施例１ｂ：１－（（Ｒ）－３－（４－アミノ－３－（４－フェノキシフェニル）－１Ｈ －ピラゾロ[３，４－ｄ]ピリミジン－１－イル）ピペリジン－１－イル）プロパ－２－エン－１－オン（化合物１３）の合成 【化２３】 ［図：0001399818000003.jpg］ 化合物１３の合成は、実施例１ａで記載されているのと類似した手順により達成した。EM (calc.): 440.2; MS (ESI) m/e (M+1H)+: 441.1, (M-1H)-: 439.2.」 （１ｅ）「【０４０４】 実施例２：インビトロのＢｔｋ阻害活性 本明細書で開示されている化合物のＢｔｋのＩＣ５０は、下記に記載されていようにＢＣＲ誘導性のカルシウム流出を、無細胞キナーゼアッセイ、および細胞機能アッセイの両方を用いて測定した。 【０４０５】 Ｂｔｋキナーゼ活性は時間分解蛍光共鳴エネルギー転移（ＴＲ－ＦＲＥＴ）方法論を用いて測定した。測定は、９６ウェルのアッセイプレートを用いて、反応体積５０μｌについて行った。キナーゼ酵素、阻害剤、ＡＴＰ（キナーゼのＫｍで）、および１μＭのペプチド基質（ビオチン－ＡＶＬＥＳＥＥＥＬＹＳＳＡＲＱ－ＮＨ２）を、Ｔｒｉｓ（２０ｍＭ）、ＮａＣｌ（５０ｍＭ）、ＭｇＣｌ２（キナーゼに依存して、５から２５ｍＭ）、ＭｎＣｌ２（０から１０ｍＭ）、ＤＴＴ（１ｍＭ）、ＥＤＴＡ（０.１ｍＭ）、０.０１％のウシ血清アルブミン、０.００５％のツウィーン－２０、および１０％のＤＭＳＯから構成される反応緩衝液の中で、１時間ほどｐＨ７.４でインキュベートした。その反応を、１.２当量のＥＤＴＡ（二価陽イオンと比べて）の１ｘランス緩衝液（Lance buffer）（２５μｌ）（パーキンエルマー）を加えて、クエンチした。ストレプトアビジン－ＡＰＣ（パーキンエルマー）、およびＥｕで標識されたｐ－Ｔｙｒ１００抗体（パーキンエルマー）の１ｘランス緩衝液（Lance buffer）を体積で２５μｌ加えて、それぞれの最終濃度を１００ｎＭ、および２.５ｎＭとし、そしてその混合物を１時間培養することが可能となった。３３０ｎｍの励起波長（λＥｘ）、並びに６１５および６６５ｎｍの検出波長（λＥｍ）で、マルチモードプレートリーダーを用いて、ＴＲ－ＦＲＥＴシグナルを測定した。６６５ｎｍおよび６１５ｎｍの蛍光の割合により、活性を決定した。それぞれ化合物に関して、化合物の多様な濃度で酵素活性を測定した。負の制御反応を阻害剤のない６つの複製で行い、そして２つの酵素のない対照を蛍光ベースラインレベル決定するために用いた。阻害定数であるＫｉ（ａｐｐ）は、プログラムバッチ（program Batch）Ｋｉを用いて得た（Kuzmic et al. (2000), Anal. Biochem. 286:45-50）。ＩＣ５０は、次の方程式によって得た。 【０４０６】 ＩＣ５０＝｛Ｋｉ（ａｐｐ）／（１＋[ＡＴＰ]／ＫｍＡＴＰ）｝＋[Ｅ]total／２ 【０４０７】 全てのキナーゼにおいて、[ＡＴＰ]＝ＫｍＡＴＰ、[Ｂｔｋ]total＝０.５ｎＭ、および[Ｌｃｋ]total＝６ｎＭ 【０４０８】 製造者の使用説明書に従って、フレックスステーション（FlexStation）ＩＩ３８４蛍光イメージングプレートリーダー（モレキュラーデバイシス（Molecular Devices））を用いて、カルシウム流出蛍光アッセイを行った。簡潔に、１０％ＦＢＳ（インビトロジェン）を追加したＲＰＭ１培地で活発に成長するラモス細胞（ＡＴＣＣ）を洗浄して、約１００μｌあたり５×１０５細胞が、９６ウェルプレートの一つのウェルの低血清培地に、再プレートした。アッセイする化合物をＤＭＳＯに溶解して、次いで低血清培地で希釈して、最終濃度が０から１０μＭの範囲内（希釈係数が０.３）にあるようにした。次に、希釈した化合物をそれぞれのウェル（最終ＤＭＳＯ濃度は０.０１％だった）に加えて、そしてＣＯ２５％のインキュベーターに１時間、３７度でインキュベートした。後に、１００μｌのカルシウム感受性色素（カルシウム３アッセイキットにより、モレキュラーデバイシス（Molecular Devices））を、それぞれのウェルに加え、さらに１時間インキュベートした。その化合物で処理された細胞をゴートアンチヒューマン（goat anti-human）ＩｇＭ抗体（８０μｇ／ｍｌ；ジャクソンイミューノリサーチ（Jackson ImmunoResearch））で刺激して、フレックスステーション（FlexStation）ＩＩ３８４で、λＥｘ＝４８５ｎｍ、およびλＥｍ＝５３８ｎｍを用いて２００秒、読まれた。相対蛍光ユニット（ＲＦＵ）、およびＩＣ５０を、内蔵ソフトマックスプログラム（SoftMax program）（モレキュラーデバイシス（Molecular Devices））で記録し、分析した。 表２：代表的な化合物のアッセイデータ 【化３１】 ［図：0001399818000004.jpg］ 【表２－１】 ［図：0001399818000005.jpg］ 【表２－２】 ［図：0001399818000006.jpg］ 【０４０９】 これらの化合物による、Ｂｔｋの不可逆的な阻害を、二つの証拠が示した。一つ目は、組換え型Ｂｔｋを化合物で前処理した後では、その活性を、阻害剤のない培地で繰り返し洗浄しても回復しなかった（例えば、J. B. Smaill, et al., J. Med. Chem. 1999, 42, 1803を参照)。二つ目は、質量分析により、大きな質量スペクトルピークを観測し、それは化合物４とＢｔｋの１：１共有結合複合体の分子量に対応していた（化合物４：４４０Ｄａ、組換え型Ｂｔｋキナーゼドメイン：３３，４８７Ｄａ；複合体：予想値３３、９２７Ｄａ、観測値３３、９２７Ｄａ）。 【０４１０】 これらの化合物は、Ｂｔｋキナーゼ活性の高度で強力な阻害剤であり、インビトロのキナーゼ活性はＩＣ５０がサブナノモルから１桁のナノモル範囲にある。（ラモス細胞）カルシウム流束アッセイにおけるこれらのＩＣ５０は、３から９２ｎＭにわたる。 【０４１１】 注目すべきは、マイケル受容体の３種類、アクリルアミド、ビニルスルホンアミド、およびプロパギルアミドがＢｔｋと強い相互作用を示したことを発見したことである。トランス向きのメチル基をビニル基に加えることで、化合物５で示されるように効力が減少し、それは化合物４よりも２８倍、強力性が劣った。これはおそらく、より多くの置換オレフィンの求電子性の減少に関連する。三級アミン基を有する化合物１５は、化合物５と比較していくらか効力を取り戻したものの、それでもそれは化合物１３と比べて効力の低下を受けた。化合物１０は化合物９よりも約６倍強力な効果があり、それはおそらく求電子試薬剤の配向の違いに起因している。最後にＲ立体配置は、二組のエナンチオマー（化合物１１対化合物１２、および化合物１３対化合物１４）による、わずかに望まれる、絶対的な立体化学配置として決定した。」 （２）引用文献２：平山令明編著、有機化合物結晶作製ハンドブック－原理とノウハウ－、平成２０年７月２５日）丸善株式会社、ｐ．５８～８４ 原査定で引用された本願優先日前に頒布された刊行物である引用文献３には、次の記載がある。 （２ａ）「医薬品結晶化法 ４．１ はじめに 医薬品の大半は化学合成あるいは天然物由来の有機化合物であり，それらは製造の最終工程で晶析により結晶性粉末として調製されることが多い． 結晶は晶析条件に依存してさまざまな構造，形状，大きさ，凝集状態などを示すが，それら固体物性あるいは粉体物性は，医薬品の生物学的有効性，安定性，製剤化などに重要な影響を与える． ・・・ 結晶多形の密度や融点，格子エネルギ－などは異なり，結果として熱や温度，光といったストレスに対する結晶の物理的あるいは化学的な安定性に相違が生じる．このような理由から保存条件によっては準安定形から安定形への結晶転移が生じ，医薬品の生物学的有効性が変わることもあり得る．したがって，安定性の観点からは，一般に常温で安定な結晶形が選択されることが多い．」（５７頁１行～５８頁１行） （２ｂ）「４．２ 結晶多形（ｐｏｌｙｍｏｒｐｈ） ４．２．１ 結晶多形の検索 複数の結晶相が存在する結晶多形は，医薬品においてもしばしば認められる現象である．しかし，結晶構造と晶析条件との相関はいまだ解明されておらず，結晶多形の有無は試行錯誤を繰り返しつつ求めざるを得ないのが現状である．したがって，偶然に見いだされる場合も少なくないが，結晶多形の検索に重要な影響を与えると思われる各因子を適宜組み合わせ，比較的簡便な方法で検索しているいくつかの報告もある４，５）． 表４．１はその例の一つで，抗高血圧剤あるいは利尿剤として広く用いられているFurosemide（フロセミド）［図４．１（ａ）］での析出条件と，各結晶形の析出挙動をまとめたものである４）．医薬品における結晶多形の制御は溶媒の選択によってなされることが多いが，ここでも水を含めて１８種類の溶媒が検討に用いられた．これら溶媒に対して，さまざまな冷却法や溶媒の蒸発法を組み合わせることにより温度や過飽和度の異なる条件を発生させた．その結果，従来はＩ形とＩＩ形の２種の多形についてだけ報告されていたが，新たに多形１種（ＩＩＩ形）と，Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミドおよび１，４－ジオキサンを含有した２種の溶媒和物（ＩＶ形およびＶ形）が見いだされた．表４．１（１）の加温溶解し徐冷する方法においてはメタノールやエタノールのような低沸点の溶媒からＩ形が，ブタノールなどのより高沸点の溶媒からＩＩ形が析出する傾向がみられた．（３）の有機溶媒に加温溶解し水を添加する方法でも，また（４）のＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドに加温溶解し他の溶媒を添加する方法においても，同様の傾向がみられた．」（５９頁１行～６０頁最終行） （２ｃ）「 ［図：0001399818000007.jpg］ ［図：0001399818000008.jpg］ 」（５９～６０頁表４．１） （２ｄ）「４．５ 医薬品の結晶化例 ４．５．１ 一般的な結晶化条件 医薬品を開発するうえで，初期段階においては種々の条件下における結晶多形の検索を行い，製剤化検討の結果なども考慮して開発の基本形となる結晶形を選択する．その後，工業化に向けたスケールアップの検討を行い，工場での生産が安定に行えるように準備する必要がある．したがって，開発初期段階における結晶多形の有無などを含めた結晶状態の検討は，医薬品の開発を効率的に進めるうえで非常に重要である．ここでは，医薬品を結晶化する一般的な条件を示し，さらに医薬品の結晶化の実例を記述する． 一般に使用される晶析溶媒としては，水，メタノール，エタノール，１－プロパノール，２－プロパノール，・・・，酢酸エチル，アセトン，・・・，トルエン，・・・ジメチルホルムアミドなどである． 結晶化はおよそ以下のような方法を用いる． （１）試料を水浴上で加温した溶媒に加え，飽和溶液を調製する．熱時炉過し，残留試料を除いた後，室温付近まで徐々に冷却する． （２）試料を水浴上で加温した溶媒に加え，飽和溶液を調製する．熱時炉過し，残留試料を除いた後，氷などにより急冷する． （３）試料を適当な溶媒に溶かした液に，試料が溶けにくい溶媒を滴下する． （４）試料を適当な溶媒に溶かした液をエバポレータなどを用いて脱溶媒する． ・・・」（７８頁１４行～７９頁６行） （３）引用文献３： ＰＨＡＲＭ ＳＴＡＧＥ、Ｖｏｌ．６、Ｎｏ．１０、２００７年、ｐ．２０～２５ 原査定で引用された本願優先日前に頒布された刊行物である引用文献３には、次の記載がある。 （３ａ）「同一の医薬品化合物であってもその固体状態，すなわち原薬のForm毎にその物理化学的性質は異なる。・・・ 個々のFormは，異なる溶解性，吸収性，化学的安定性，吸湿性，融点，製造適性等の物理化学的性質を有し，これらの性質は最終的に製剤の安全性，有効性及び品質を左右する１）。・・・一方，構成分子が同一であっても多くの場合，結晶多形が存在し，熱安定的準安定形は最安定形へ転移する性質を有する。」（２０頁左欄２行～下から２行） （３ｂ）「３ 原薬Ｆｏｒｍスクリーニング及び選択 ・・・ Ｆｏｒｍスクリーニングの目的は，原薬Ｆｏｒｍの候補となり得るＦｏｒｍを見出すこと，すなわち非溶媒和結晶の熱力学的最安定形と，通常の温湿度環境で物理的に安定に存在しうる水和結晶を，Ｆｒｅｅ体，各塩及びＣｏｃｒｙｓｔａｌについて見出すことにある。」（２１頁左欄９～２１行） （３ｃ）「３．１ 結晶化法と結晶化溶媒 Ｆｏｒｍ及び結晶多形スクリーニングで主に用いられる結晶法には，冷却法，貧溶媒法（Ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ），蒸発法，スラリーコンバージョン法（溶媒媒介転移法）がある。」（２２頁左欄１０～１７行） （３ｄ）「３．２ 熱力学的最安定形の決定 Ｆｏｒｍスクリーニング及び結晶多形スクリーニングで最も重要な項目の一つは，最安定系の決定である。結晶多形が存在する場合には，個々のＦｏｒｍの固体状態をキャラクタリゼーションすることに加え，二次分析の検討項目として，それらの熱力学的関係を明らかにし，室温における最安定形を決定する必要がある。」（２２頁右欄１３～１９行） （４）引用文献４：岡野定舗編著、新・薬剤学総論（改訂第３版）、株式会社南江堂、１９８７年４月１０日、ｐ．２６，１１１，２５６，２５７ 本願優先日前に頒布された刊行物である上記「引用文献４」には、次の記載がある。 （４ａ）「１．２．３ 化学構造と溶解性 ・・・ ix．結晶多形では準安定形（低融点）のものの方が安定形（高融点）のものより溶けやすい（例．インドメタシン）．＊ ｘ．同種薬品で無晶性のものは結晶より溶けやすい（例．novobiocin）＊＊．」（２６頁１０～２７行） （４ｂ）「多形polymorphism：同一化合物が異なる結晶構造，結晶形をもつ現象を多形という．多形の結晶はＸ線回折像，融点，屈折率，溶解度などが異なる．多くの化合物は多形で，医薬品でも，アスピリン，インドメタシン，カカオ脂，グリセリド，脂肪酸，スルホンアミド類，セファロリジン，バルビタール類，chloramphenicol palmitate，ステロイドホルモン（プレドニゾロン，エストロンなど），リボフラビンなど多くのものについて結晶多形が報告されている．３） プロゲステロンには５種の結晶形が知られている． 結晶多形によって溶解度が異なる事実は製剤学的に重要で，多くの場合，結晶の溶解度（または溶解速度）は消化管吸収を律速するが，溶解度の大きい方が吸収が速い．多形のうち安定性の低い結晶（準安定形meta-stable form）の方が安定形stable formより融点が低く，溶解度も大きい．Ostwaldによれば，溶液から結晶が析出するさいには，準安定形の方がさきに結晶化する（逐次転移の法則law of successive transformation）．結晶形の移行は，再結溶媒，結晶化の速さ（冷却温度）および保存の温度条件，粉砕などによって起きる．たとえばアスピリンを９５％エタノールから再結したものと，ｎ－ヘキサンから再結したものは結晶形が異なるが，後者の方がはるかに速やかに水に溶解する．」（１１１頁３～１８行） （４ｃ）「ｃ）結晶形crystal form すでに述べたように，多くの薬物は結晶多形＊ を示し，多形のうち準安定形の方が安定形より溶解度が大きい． Chloramphenicol palmitateの結晶には少なくともＡ，Ｂ２種の多形があり，Ｂ型の方が易溶性である．懸濁液を経口投与するとき，Ｂ型のＣmax はＡ型の７倍であることが報告されている．５） また，インドメタシンには３種の結晶多形があるが，このうちα，γ両型が実用される．坐剤にした場合，α型の溶出性はγ型の約２倍とすぐれており・・・血中濃度もα型の坐剤の方が高い・・・． 結晶多形のうち，溶解度の大きい準安定形は安定形より熱力学的に不安定で，時間がたつにつれて前者は後者に転移する．したがって準安定形の薬物を用いて製剤をつくる場合は，そのバイオアベイラビリティが保存中に低下することに留意する必要がある． 薬物の無晶形のものは溶解時に結晶の格子エネルギーに打ち勝つ必要がないので，結晶性のものに比べて溶解しやすい．インスリン－亜鉛錯体には結晶性のものと無晶性のものがあるが，後者の方が吸収が速やかである・・・．」（２５６頁下から３行～２５７頁下から８行） （５）引用文献５： C. G. WERMUTH編、長瀬博監訳、最新 創薬化学 下巻、株式会社テクノミック、１９９９年９月２５日、ｐ．４５２～４５３ 本願優先日前に頒布された刊行物である上記「引用文献５」には、次の記載がある。 （５ａ）「ＩＶ．メソモルフィック結晶（mesomorphic crystalline）〔訳註５〕 の取扱い□ ある種の物質は結晶となるときに複数の結晶状態をとりうることが知られている．その結晶状態に決定する要因には，結晶化溶媒の物性，結晶化するときの温度，不純物の有無などがある．このような性質を結晶多形または単に多形（polymorphism）という．可能な結晶状態のなかには準安定な結晶がある．準安定状態（metastable state）の結晶はより安定な状態に変化して異なる物理化学性質を示すことになる．この変化は２つのタイプに分けられる．可逆的転移である互変（enantiotropy）と不可逆的転移の単変（monotropy）である．前者は文字どおり多形のそれぞれの状態が相互変換可能な場合である．後者は，熱力学的に不安定な状態からより安定な状態へ変化する現象であり，一般的にはこの種の転移が多い．ある薬物が異なる結晶形を示すときに，それぞれの結晶形を識別する方法には，融点測定，溶解度測定，示差走査熱量測定，熱重量分析，赤外分光，Ｘ線回折，走査電子顕微鏡による形態観察などがある． 一般論として，準安定状態の物質には安定状態に比べてその溶解度および溶解速度が大きいという特徴がある．極端な場合，両状態の溶解度の差が４倍以上にもなることがあるが２１，２２，通常よく観察されるのは溶解度が５０～１００％程度上昇する現象である２３．一例としてここではリボフラビン（riboflavin）を挙げる．この薬物には３種の多形があり，その溶解度はそれぞれ６０mg/L，８１０mg/L，１２００mg/Lと大きな開きがみられる２４．また，準安定状態の結晶を溶媒と接触できるようにしておくと，この結晶は最も安定な状態に徐々に変化し，これに伴って溶解度が低下することがある．たとえば，ノボビオシン（novobiocin）は酸性のアモルファス固体（無定形または非晶質固体）であるが，溶解度の非常に低い結晶に変化しやすい２５．このためにノボビオシンを懸濁液として投与することは困難である．薬物を噴霧乾燥（spray drying）によって溶解度の高いアモルファス固体とすることがある．この場合，純粋な薬物を噴霧しても良いが，実際には均質な分散薬物を得るために添加剤を加えることが多い２６． ある結晶状態が他の状態に変化する現象すなわち転移は，工業的な製造プロセスにおいても起こりうる．たとえば，クロロキン二リン酸（chloroquine diphosphate）の一水和物の結晶を高温で保存しておくと無水物となることがある．この脱水反応は薬物を粉砕する際にも起こりやすい．さらにクロロキン二リン酸無水物を湿度の高い状態で保存していると他の水和物に転移することもある．また，薬物の原末を圧縮する際にも結晶形の変化が起こりうる２７．クロラムフェニコール（chloramphenicol）のステアリン酸塩の場合は，Ａ結晶（form A）をコロイドシリカ（colloidal silica）の存在下で粉砕するとＢ結晶（form B）に変化することが知られている２８．以上の事例から明らかなことではあるが，固体の薬物を製造する場合は，プロセスを標準化するのと同時に，品質管理の一環として固体薬物の結晶状態に関するより精密な検査を行うことが特に重要であることをここで強調しておきたい．」（４５２頁下から１２行～４５３頁２０行） （６）引用文献６：社団法人日本化学会編、化学便覧 応用化学編 第６版、丸善株式会社、２００３年１月３０日）、ｐ．１７８ 本願優先日前に頒布された刊行物である上記「引用文献６」には、次の記載がある。 （６ａ）「４．３．３ 晶析 ａ．晶析とその役割 晶析は，目的の特性を有する結晶を，再現性よく，確実に製造する技術である．晶析は，化学物質の製造全般に広く用いられており，分離精製のみならず，機能性固体（結晶）の生産という観点からも重要である．たとえば，糖・アミノ酸などの食品の製造，記録媒体としてのα-鉄（α-Ｆｅ）・マグへマイト（γ-Ｆｅ2Ｏ3）などの電子材料の製造，ナノ粒子の製造，さらにその90％が結晶である医薬品（原薬）とその中間体の製造などであり，いずれも結晶特性の制御が高度に要求されている． 1998年の調査（化学工学会晶析技術特別研究会）によれば，わが国で行われている晶析は，80％が溶液からの晶析である．また，75％が回分法で行われている．次に融液からの晶析が多く，大規模の精製晶析についても優れた技術，たとえばKCP法（呉羽テクノエンジ）が開発されている． ｂ．結晶特性 おもな結晶特性は，晶癖・粒径・粒径分布・純度・多形・結晶化度である．これらの特性が異なれば，溶解度・溶解速度・安定性・比容・操作性（ろ過性（注：ろ過の「ろ」は原文ではさんずいに戸であるが、ひらがなで記す。以下も同じ。）・粉じん爆発性・打錠性・計量性）などが異なり，医薬品ではとくにバイオアベイラビリティ（生物学的利用率）が異なることから，結晶特性の制御は非常に重要である． （ｉ） 晶癖 ・・・ （ii） 粒径・粒径分布・・・ （iii） 純度 結晶への不純物の取込みについては，二つのメカニズムがある．母液の結晶への取込み，あるいは結晶表面への付着によるものと，結晶構造への組込みによるものである．前者は，結晶成長の粗さ，凝集などによって引き起こされるものであり，晶析速度の調整，洗浄などで解決する可能性がある．後者は，溶媒の変更，多形の選択など根本的な変更が必要である．結晶溶媒（結晶構造に組み込まれた溶媒）も不純物と見なすことができる． （iv） 多形 化合物は同じで，結晶構造が異なるものである．結晶溶媒の有無で溶媒和結晶は擬多形とよばれている．多形結晶は，外観のみでは判断できない．粉末あるいは単結晶Ｘ線回折・赤外吸収（ＩＲ）・示差走査熱量測定（ＤＳＣ）などで同定する必要がある．多形は，溶媒の種類・温度・冷却速度・過飽和度・かくはん速度・不純物などに影響を受ける．溶媒によって異なる多形が析出する場合が多く，重要な溶媒については混合溶媒も含めて，どのような結晶が析出するか，点検することが必要である．溶媒を選択することによって，目的の結晶多形が唯一選択的に得られる場合と，いったん析出した結晶多形（準安定結晶）が経時的に他の多形（安定結晶）に転移する，いわゆる溶媒媒介転移が起こる場合がある．溶媒媒介転移が起こるのは，準安定結晶と安定結晶の溶解度が異なるためである．どの多形が析出するかはオストワルドの段階則（Ostwald's step rule；状態の移行は，エネルギー的にもっとも近い状態を経由して順次に進行するという法則）に従うとされており，通常，溶解度が大きいほうの結晶が先に析出する．しかし，オストワルドの段階則に従わない場合もあり，多形を制御するためには，平衡論（オストワルドの段階則）のみではなく，速度論的な検討を行う必要がある． ｃ．晶析操作 晶析操作としては，冷却晶析，濃縮晶析，反応晶析，貧溶媒晶析が多い．・・・」（１７８頁左欄５行～右欄下から７行） （７）引用文献７ 松岡正邦監修、結晶多形の基礎と応用 普及版、株式会社シーエムシー出版、２０１０年１０月２２日、ｐ．１０５ 本願優先日前に頒布された刊行物である上記「引用文献７」には、次の記載がある。 （７ａ）「１ 医薬品研究開発における結晶多形スクリーニングの重要性 同一化合物であっても，それぞれの結晶多形の間で溶解性，物理化学的安定性は異なる１）。医薬品の吸収性に影響する溶解性，貯法・使用期限に影響する物理化学的安定性は重要な物性であり，最終的に医薬品の有効性，安全性をも左右する。 結晶多形は，溶解性，物理化学的安定性が異なるばかりでなく，多形間で準安定形は再安定形へ転移する。・・・結晶多形スクリーニングを適切に実施し，存在し得る結晶多形を見出し，熱力学的に安定な結晶形を明らかにしなければならない。」（１０５頁８～１７行） （８）引用文献８：浅原照三 外４名編、溶剤ハンドブック、株式会社講談社、１９８５年９月１日、ｐ．４７～５１ 本願優先日前に頒布された刊行物である「引用文献８」には、以下の記載がある。 （８ａ）「３．２ 再結晶 再結晶の目的達成には，その技術的操作法とともに適当な溶媒の使用が重要な要素となる．この適合した溶媒選びはもちろん少量の予備実験においてなされるわけであるが，なるべく早く最適の溶媒を見つけるにはいくつかのルール，または経験則がある． ３．２．１ 溶媒の選び方 ・・・ ３．２．２ 溶媒選択上の注意 ・・・ ３．２．３ 再結晶溶媒の種類と特徴 再結晶溶媒として普通使用されるものを表３．３と表３．４にあげる．表３．３は最も一般的に使用される溶媒で，これらのもので成功しない場合に表３．４にあげられている少し特殊なものの使用が推奨される．なお表３．３の溶媒名においては，厳密な順序ではないが，上部から下部に向かって非極性溶媒→極性溶媒になるように配列されている．表３．５（ｐ．５１）は 普遍的に用いられる混合溶媒である。 ・・・ ［図：0001399818000009.jpg］ ［図：0001399818000010.jpg］ ［図：0001399818000011.jpg］ 」 （４７頁右欄２０行～５１頁左欄上の表） ２ 引用文献１に記載された発明について 引用文献１は、摘記（１ａ）によれば、癌等の治療に用いられるブルートンチロシンキナーゼ阻害剤に関する文献であり、摘記（１ｄ）及び摘記（１ｅ）から、引用文献１には、１－（（Ｒ）－３－（４－アミノ－３－（４－フェノキシフェニル）－１Ｈ－ピラゾロ［３，４－ｄ］ピリミジン－１－イル）ピペリジン－１－イル）プロパ－２－エン－１－オン（化合物１３）が具体的な製造法や阻害活性（薬理活性）などを伴って記載され、具体的には、化合物１３の合成は、実施例１ａで記載されているのと類似した手順により達成され、その同定データとして、MS (ESI) m/e (M+1H)+: 441.1, (M-1H)-: 439.2が記載されるとともに、Ｂｔｋキナーゼ活性について IC50＜０．５ｎＭ ラモス細胞を用いたカルシウム流出蛍光アッセイによるIC50 １０ｎＭの活性を測定した結果が記載されていることが認められる。 そうすると、引用文献１には、 「１－（（Ｒ）－３－（４－アミノ－３－（４－フェノキシフェニル）－１Ｈ－ピラゾロ［３，４－ｄ］ピリミジン－１－イル）ピペリジン－１－イル）プロパ－２－エン－１－オン（化合物１３）」 の発明（以下「引用発明」といい、その化合物を「引用化合物」という。）が記載されているということができる。 ３ 対比・判断 （１）対比 本願発明と引用発明とを対比する。 引用化合物である「１－（（Ｒ）－３－（４－アミノ－３－（４－フェノキシフェニル）－１Ｈ－ピラゾロ［３，４－ｄ］ピリミジン－１－イル）ピペリジン－１－イル）プロパ－２－エン－１－オン（化合物１３）」とは、本願発明の「１－（（Ｒ）－３－（４－アミノ－３－（４－フェノキシフェニル）－１Ｈ－ピラゾロ［３，４－ｄ］ピリミジン－１－イル）ピペリジン－１－イル）プロプ－２－エン－１－オン」であるから、本願発明と引用発明とは、 「１－（（Ｒ）－３－（４－アミノ－３－（４－フェノキシフェニル）－１Ｈ－ピラゾロ［３，４－ｄ］ピリミジン－１－イル）ピペリジン－１－イル）プロプ－２－エン－１－オン」に関する発明である点で一致し、以下の点で相違する。 相違点： 本願発明においては、１－（（Ｒ）－３－（４－アミノ－３－（４－フェノキシフェニル）－１Ｈ－ピラゾロ［３，４－ｄ］ピリミジン－１－イル）ピペリジン－１－イル）プロプ－２－エン－１－オンが、「結晶形であって、該結晶形は、７．０±０．１°２－シータ、１４．０±０．１°２－シータ、１５．７±０．１°２－シータ、１８．２±０．１°２－シータ、１９．１±０．１°２－シータ、１９．５±０．１°２－シータ、２０．３±０．１°２－シータ、２２．１±０．１°２－シータ、及び２２．９±０．１°２－シータに特徴的なピークを伴うＸＲＰＤパターンを有する、結晶形。」と特定されているのに対し、引用発明においてそのように特定されていない点。 （２）相違点についての判断 なお、下記相違点の判断において、本願発明の結晶形は、本願明細書の【０４５３】の記載等を参照すると「形態Ｃ」の結晶形のことを指しているものと解されるから、記載を省略するため、「結晶形態Ｃ」、「形態Ｃ」などと称する場合もある。 ア 本願優先日における医薬化合物の結晶に関する技術常識について 本願優先日当時、一般に、医薬化合物については、安定性、純度、扱いやすさ等の観点において結晶性の物質が優れているとの技術常識があったと認められる（摘記（２ａ）、摘記（３ａ）、摘記（３ｂ）、摘記（３ｄ）、摘記（６ａ）、摘記（７ａ））。 また、医薬化合物として結晶の多形体が、結晶化の条件により得られる結晶が異なることによって存在することから（摘記（２ａ）、摘記（４ａ）～（４ｃ）、摘記（５ａ）、摘記（６ａ））、医薬化合物が結晶で得られる条件を検討したり、結晶多形体を調べたりすることは、当業者がごく普通に行うことであり（摘記（２ｃ）、摘記（２ｄ）、摘記（３ｂ）、摘記（７ａ））、結晶を同定する方法として、粉末Ｘ線回折があるとの技術常識があったものと認められる（摘記（１ｃ）、摘記（５ａ）、摘記（６ａ））。 そして、結晶を得る方法に関し、摘記（２ｄ）、摘記（８ａ）に記載されるとおり、一般に使用される晶析溶媒は、水、メタノール、エタノールなどであり、摘記（２ｂ）～（２ｄ）、摘記（３ｃ）、摘記（６ａ）に見られるように、晶析方法としては、化合物を結晶析出溶媒に温度を上げて溶解し冷却によって析出させる冷却法がよく用いられるとの技術常識が本願優先日にあったものと認められる。 イ 相違点の容易想到性について （ア）引用文献１の引用化合物は、医薬化合物であり、また、引用文献１には、結晶の多形体の存在も少なくとも示唆されているといえる（摘記（１ｂ）、摘記（１ｃ））。 また、上記アの本願優先日時点の技術常識に照らすと、引用文献１に接した当業者には、医薬化合物である引用化合物について、結晶で得られる条件を検討したり、結晶多形を調べたりすることについては強い動機付けがあったものと認められる。 そして、引用化合物の結晶を得るにあたり、当業者は、上記アに記載されたような、結晶を得るためのによく用いられる手法を試すことにより、一般に使用される晶析溶媒であるメタノールを用い、よく用いられる晶析方法である冷却法による結晶化を行って、粉末Ｘ線回折によって結晶を同定し、安定性に優れた結晶を選ぶことは、当業者が通常行うことであると認められる。 （イ）上記の本願発明の形態Ｃの結晶を得るための結晶製造方法及び粉末Ｘ線回折による同定に関し、本願明細書の具体的記載に基づき確認してみると以下のとおりである。 ａ 本願明細書には、形態Ｃの結晶の製造方法として、【０２６８】に、「【０２６８】 幾つかの実施形態において、形態Ｃはメタノールと水の混合物から得られた。幾つかの実施形態において、形態Ｃはメタノールから得られた。」と記載され、【０４３９】に、メタノールから得られた実施例として、「【０４３９】 ＜形態Ｃ：＞ 清潔な丸底フラスコ中、２．０グラムの化合物１を、２５ｍｌのメタノール中で懸濁し、５０℃に加熱した。溶解した化合物１の暖かい溶液を濾過し、清潔な丸底フラスコに入れた。綺麗にした溶液を、磁気撹拌で室温にまで冷却した。溶液はゆっくりとスラリーになり、それを１４時間撹拌した。固形物を濾過し、５ｍＬのメタノールで洗浄し、２０時間フィルター上で乾燥し、その後８時間、真空オーブン中で５０℃で乾燥した。１．４グラムの形態Ｃを得た（融点＝～１３２℃）。」と記載されている。 ｂ 本願明細書の【０４３９】に記載された結晶化のための溶媒は、最も一般的に使用される溶媒であるメタノールである（摘記（８ａ））。 また、その結晶析出の方法も、摘記（２ｂ）、摘記（３ｃ）、摘記（６ａ）にいずれも最初に記載されるように基本的な手法である、化合物を結晶析出溶媒に温度を上げて溶解し冷却によって析出させる冷却法であるといえる。 ｃ 結晶形態Ｃを「７．０±０．１°２－シータ、１４．０±０．１°２－シータ、１５．７±０．１°２－シータ、１８．２±０．１°２－シータ、１９．１±０．１°２－シータ、１９．５±０．１°２－シータ、２０．３±０．１°２－シータ、２２．１±０．１°２－シータ、及び２２．９±０．１°２－シータに特徴的なピークを伴うＸＲＰＤパターンを有する」と特定していることについては、本願発明の結晶形は、当業者であればまず試してみる結晶製造方法によって得られた結晶を、結晶の同定方法として周知慣用の方法として採用されている粉末Ｘ線回折スペクトル分析を行った結果を提示したものにすぎないから（摘記（１ｃ）【０２４３】、摘記（５ａ）、摘記（６ａ））、上記の得られたＸＲＰＤパターンの２－シータピークを特定することは、引用文献１の記載及び技術常識から、当業者が容易になし得たことにすぎない。 （ウ）そうすると、当業者は、通常なし得る試行錯誤の範囲で、引用化合物について、結晶探索を行い、結晶形態Ｃを得ることができたものと認められる。 ウ 以上によれば、引用発明において、引用化合物の結晶を得ることを試み、その際に結晶化条件を検討したり、得られた結晶について分析することにより、相違点に係る本願発明の構成を備えたものとすることは、当業者が容易に想到し得ることである。 エ 本願発明の効果について 本願明細書には、本願発明である形態Ｃの結晶形について、【０４５４】に１週間後の加温又多湿状態での安定性の効果について、定性的な記載があるが、結晶自体が基本的に安定性が高い固体であることは技術常識であり（摘記（２ａ）、摘記（３ａ）、摘記（３ｂ）、摘記（３ｄ）、摘記（５ａ）、摘記（７ａ））、形態Ａ及び形態Ｂの結晶との比較においても差がない旨の記載だけであるとともに（【０４５０】【０４５２】）、仮に何らかの差があったとしても、多形体間でそれらの特性に相違があることは技術常識である（摘記（１ｃ）、摘記（３ａ）、摘記（３ｂ）、摘記（３ｄ））ことも考慮すると、本願発明の効果が当業者の予測を超える顕著な効果であるとはいえない。 また、本願明細書においては、【０４９５】に、ＨＰＬＣ分析によって、高純度である旨の記載があるが、結晶化によって高純度のものが得られることは精製技術として技術常識であり、結晶化によって純粋な結晶が得られたからといって当業者の予測を超える顕著な効果であるとはいえない。 ４ 審判請求人の主張の検討 （１）令和３年２月１５日に提出された意見書、及び審判請求書における効果の主張について ア 審判請求人は、上記意見書１３頁３４～４４行及び審判請求書の手続補正書（方式）１４頁９～１３行において、本願発明の結晶形（結晶形態Ｃ）の優れた貯蔵安定性について、結晶度及びＸＲＰＤパターンが、４５℃／７５％ＲＨ又は２５℃／９７％ＲＨでの1週間貯蔵後の影響を受けなかったことを指摘し、他の結晶形と比較して予想外な顕著な効果を有する旨主張している。 イ しかしながら、本願発明は、医薬化合物の結晶多形体の発明であり、結晶形態Ｃの結晶度及びＸＲＰＤパターンが、４５℃／７５％ＲＨ又は２５℃／９７％ＲＨでの1週間貯蔵後の影響を受けなかったという貯蔵安定性の効果は、単に影響を受けなかったということが簡単な結論として記載されているだけで貯蔵安定性の効果の量的な効果の裏付けをもった内容は記載されてない上に、結晶化によって、そもそも医薬化合物が固体として安定化することは通常のことであり、結晶の多形体間で安定性に差があることも技術常識であることを考慮すると、上記本願発明の結晶形態Ｃの貯蔵安定化の効果は、当業者の予測を超える顕著な効果とはいえず、上記審判請求人の主張を採用することはできない。 （２）審判請求書における結晶化条件に関する主張について ア 審判請求人は、審判請求書の手続補正書（方式）１３頁２９行～１４頁９行において、引用文献１には、白色固形物が得られたことが記載されているだけで、結晶形態Ｃが得られたことの教示や示唆がないことや本願明細書には、結晶形ごとの結晶化条件を記載していることを指摘し、引用文献１～３は、必要な結晶化条件を教示又は示唆していない旨主張している。 イ しかしながら、上記主張は、引用文献１～３に本願発明が記載も示唆もない旨の主張をしているだけであり、引用文献１にも結晶の多形体の存在は少なくとも示唆されている上に、医薬化合物については、安定性、純度、扱いやすさ等の観点において結晶性の物質が優れていることから、その物質を結晶化することについては強い動機付けがあり、医薬化合物が結晶で得られる条件を検討したり、結晶多形体を調べたりすることは、当業者がごく普通に行うことであることは、上述のとおりである。 そして、本願発明の結晶形態Ｃの多形体は、当業者が、引用発明から前記強い動機付けに基づき、通常の結晶の製造方法によって得たものであり、得られた結晶多形体の特性を、結晶の周知慣用の分析手法で得た結果を提示したものにすぎず、容易になし得る技術的事項であることも上述のとおりである。 よって、審判請求人の上記主張は採用できない。 （３）したがって、上記審判請求人の主張はいずれも採用できない。 ５ まとめ 以上のとおり、本願発明は、引用文献１に記載された発明、引用文献１に記載された技術的事項及び本願優先日時点の技術常識に基いて、本願優先日前に当業者が容易に発明することができたものであるから、特許法第２９条第２項の規定により特許を受けることができない。 第５ むすび 請求項６に係る発明は、引用文献１に記載された発明に基いて、本願優先日前に当業者が容易に発明することができたものであるから、その余の請求項について検討するまでもなく、特許法第２９条第２項の規定により特許を受けることができない。 よって、結論のとおり審決する。