2024-700716

結 論 特許第７４２５０９２号の特許請求の範囲を、訂正請求書に添付された訂正特許請求の範囲のとおり、訂正後の請求項〔５～６〕について訂正することを認める。 特許第７４２５０９２号の請求項１～６に係る特許を維持する。

理 由 第１ 主な手続の経緯 本件特許第７４２５０９２号（以下「本件特許」という。）は、令和３年１月１４日（優先権主張 令和２年１月１５日）に国際出願され、令和６年１月２２日に特許権の設定登録がされ、令和６年１月３０日に特許掲載公報が発行された。その後、その特許について、令和６年７月２９日に特許異議申立人 新井誠一（以下「申立人」という。）により特許異議の申立てがされ、当審は、令和６年１０月８日付けで取消理由を通知した。特許権者は、その指定期間内である令和６年１２月９日に意見書の提出及び訂正の請求（以下「本件訂正」という。）を行い、その訂正の請求に対して、申立人は、令和７年３月１４日に意見書を提出した。 第２ 訂正の請求の適否について １ 訂正の内容 本件訂正による訂正の内容は、以下のとおりである。 （１）訂正事項１ 特許請求の範囲の請求項５において、「抗線維化作用を有する細胞外小胞の製造方法。」との記載を「抗線維化作用を有する前記細胞外小胞を有効成分とする抗線維化剤の製造方法。」に訂正する。 （２）訂正事項２ 特許請求の範囲の請求項６において、「細胞外小胞の製造方法」との記載を「抗線維化剤の製造方法」に訂正する。 （３）一群の請求項について 訂正事項１～２に係る訂正前の請求項５及び６について、訂正前の請求項６は訂正前の請求項５を直接的に引用するものであって、訂正事項１によって記載が訂正される請求項５に連動して訂正されるものである。 したがって、本件訂正は、特許法第１２０条の５第４項に規定する一群の請求項〔５～６〕について請求されたものである。 ２ 訂正の適否についての判断 （１）訂正事項１について ア 訂正の目的について 訂正事項１は、物の製造方法である訂正前の請求項５に係る発明おいて、製造される「物」が、用途の特定されない「細胞外小胞」自体であったものを、訂正後の「前記細胞外小胞を有効成分とする抗線維化剤」という特定の用途に使用される「物」に限定するものである。 したがって、当該訂正事項１は、特許法第１２０条の５第２項ただし書第１号に規定する特許請求の範囲の減縮を目的とするものである。 イ 実質上特許請求の範囲の拡張又は変更する訂正ではないことについて 前記アのとおり、訂正事項１は、特許請求の範囲を限定するものであり、発明のカテゴリーや対象、目的を変更するものではないから、実質上特許請求の範囲を拡張し、又は変更するものには該当せず、特許法第１２０条の５第９項で準用する第１２６条第６項に適合するものである。 ウ 願書に添付した明細書、特許請求の範囲又は図面（以下「明細書等」という。）に記載した事項の範囲内であることについて 訂正後の請求項５における「間葉系幹細胞由来の細胞外小胞からＴｉｍタンパク質を用いる方法により」「得」られた「細胞外小胞」が、訂正事項１の「抗線維化剤」の「有効成分」となることについては、本件特許明細書の【００１８】に「本発明が提供する抗線維化剤における有効成分である細胞外小胞（以下、「本発明に係る細胞外小胞」と略記する場合がある。）は、本発明に係るＭＳＣに由来する細胞外小胞からホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質を用いて単離、取得した細胞外小胞（以下、「ＰＳ陽性細胞外小胞」と略記する場合がある）・・・である。」と記載され、【００７６】に、「ＰＳアフィニティー法による細胞外小胞の取得」が説明されるとともに、【００８６】に、「ＰＳアフィニティー法により取得した細胞外小胞を用いることにより抑制されること（抗線維化作用を有すること）が判った。また、ＰＳフィニティー法により取得した細胞外小胞（実施例２－４）は、超遠心法により取得した細胞外小胞（比較例２－４）よりも顕著に高い抗線維化作用（抗線維化効果）を有することが判った。」と記載されていることからみて、本件特許に係る発明は、間葉系幹細胞由来の特定の細胞外小胞が高い抗線維化作用を有することに着目してなされたものであって、間葉系幹細胞に由来する細胞外小胞からホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質を用いて単離、取得した細胞外小胞を抗線維化剤としての用途に使用するという技術的思想に基づくものであることが、本件訂正前の明細書等に記載されていたといえる。 したがって、訂正事項１は、当業者によって本件訂正前の明細書等の記載により導かれる技術的事項との関係において、新たな技術的事項を導入するものではなく、本件訂正前の明細書等に記載した事項の範囲内においてするものである。 よって、訂正事項１は、本件特許明細書等に記載した事項の範囲内の訂正であるので、特許法第１２０条の５第９項で準用する特許法第１２６条第５項に適合するものである。 （２）訂正事項２について ア 訂正の目的について 訂正事項２は、物の製造方法である訂正前の請求項６に係る発明おいて、製造される「物」が、用途の特定されない「細胞外小胞」であったものを、訂正後の「前記細胞外小胞を有効成分とする抗線維化剤」という特定の用途に使用される「物」に限定するものである。 したがって、当該訂正事項２は、特許法第１２０条の５第２項ただし書第１号に規定する特許請求の範囲の減縮を目的とするものである。 イ 実質上特許請求の範囲の拡張又は変更する訂正ではないことについて 前記アのとおり、訂正事項２は、特許請求の範囲を限定するものであり、発明のカテゴリーや対象、目的を変更するものではないから、実質上特許請求の範囲を拡張し、又は変更するものには該当せず、特許法第１２０条の５第９項で準用する第１２６条第６項に適合するものである。 ウ 願書に添付した明細書等に記載した事項の範囲であることについて 訂正後の請求項６において、「Ｔｉｍ４タンパク質、Ｔｉｍ３タンパク質及びＴｉｍ１タンパク質から選択される」「Ｔｉｍタンパク質を用いる方法により」「得」られた「細胞外小胞」が、前記（１）ウで指摘した訂正後の請求項５における「細胞外小胞」と同じく、「抗線維化剤」の「有効成分」となることについては、前記（１）ウで指摘した本件特許明細書の【００１８】、【００７６】及び【００８６】の記載に加え、【００２０】には、「前記ホスファチジルセリンに対する親和性を有する物質（以下、「ＰＳ親和性物質」と略記する場合がある）としては、・・・Ｔｉｍ４タンパク質、Ｔｉｍ３タンパク質、及びＴｉｍ１タンパク質から選択されるものがより好ましく、Ｔｉｍ４タンパク質、Ｔｉｍ１タンパク質がさらに好ましく、Ｔｉｍ４タンパク質が特に好ましい。」と記載されていることから、訂正事項２は、願書に添付した明細書等に記載した事項の範囲内のものである。 したがって、訂正事項２は、本件特許明細書等に記載した事項の範囲内の訂正であるので、特許法第１２０条の５第９項で準用する特許法第１２６条第５項に適合するものである。 （３）独立特許要件について 本件特許異議の申立てにおいては、訂正前の請求項１～６について特許異議の申立てがされているので、訂正事項１及び２による訂正については、特許法第１２０条の５第９項において読み替えて準用する同法第１２６条第７項の独立特許要件は課されない。 （４）小括 以上のとおりであるから、本件訂正の請求による訂正は、特許法第１２０条の５第２項ただし書第１号に規定する事項を目的とするものであり、かつ、同条第９項において準用する同法第１２６条第５項及び第６項の規定に適合する。 したがって、特許請求の範囲を、訂正請求書に添付された特許請求の範囲のとおり、訂正後の請求項〔５、６〕について訂正することを認める。 第３ 本件特許発明 前記第２のとおり本件訂正は認められたので、訂正後の特許請求の範囲の請求項１～６に係る発明（以下、「本件発明１～６」といい、まとめて「本件発明」ということがある。）は、以下のとおりのものである。 【請求項１】 間葉系幹細胞に由来する細胞外小胞であって、ホスファチジルセリンが細胞外小胞の膜表面に露出しており、Ｔｉｍタンパク質が上記ホスファチジルセリンに対して特異的に結合することが可能な細胞外小胞を有効成分とする抗線維化剤。 【請求項２】 前記間葉系幹細胞が、ｉＰＳ細胞に由来するもの、或いは臍帯、臍帯血、骨髄、脂肪、筋肉、神経、皮膚、羊膜及び胎盤からなる群より選択される１種以上の組織に由来するものである、請求項１に記載の抗線維化剤。 【請求項３】 Ｔｉｍタンパク質が、Ｔｉｍ４タンパク質、Ｔｉｍ３タンパク質及びＴｉｍ１タンパク質から選択されるものである、請求項１又は２に記載の抗線維化剤。 【請求項４】 前記抗線維化剤に含まれる前記細胞外小胞は、前記Ｔｉｍタンパク質と結合していない、請求項１に記載の抗線維化剤。 【請求項５】 間葉系幹細胞由来の細胞外小胞からＴｉｍタンパク質を用いる方法により細胞外小胞を得ることを含む、抗線維化作用を有する前記細胞外小胞を有効成分とする抗線維化剤の製造方法。 【請求項６】 Ｔｉｍタンパク質が、Ｔｉｍ４タンパク質、Ｔｉｍ３タンパク質及びＴｉｍ１タンパク質から選択されるものである、請求項５に記載の抗線維化剤の製造方法。 第４ 特許異議の申立ての理由及び取消理由について １ 特許異議の申立ての理由の概要 申立人が、本件訂正前の特許請求の範囲の請求項１～６に係る特許に対して申し立てた特許異議の申立ての理由は、概略、以下の（１）及び（２）のとおりであって、申立人は、特許異議申立書に添付して、証拠方法として、下記（３）の甲第１～２２号証（枝番号を含む。以下、各甲号証については番号に従い、例えば「甲第１号証」については「甲１」、「甲第３号証の２」については「甲３の２」等という。）を提出した。 （１）申立理由１（新規性欠如） 本件訂正前の請求項１～４に係る発明は、甲１～甲１０に記載された発明とそれぞれ区別がつかないから、特許法第２９条第１項第３号に該当し、特許を受けることができないものである。よって、本件訂正前の請求項１～４に係る特許は、同法第１１３条第２号に該当し、取り消されるべきものである。 （２）申立理由２（進歩性欠如） 本件訂正前の請求項１～６に係る発明は、以下の甲号証に記載された事項に基づいて当業者が容易に発明をすることができた発明であり、特許法第２９条第２項の規定に違反するものであるから、本件訂正前の請求項１～６に係る特許は、同法第１１３条第２号に該当し、取り消されるべきものである。 ・請求項１～４に係る発明に対し、甲１及び甲１７～甲２２、甲２及び甲１７～甲２２、甲３及び甲１７～甲２２、甲４及び甲１７～甲２２、甲５及び甲１７～甲２２、甲６及び甲１７～甲２２、甲７及び甲１７～甲２２、甲８及び甲１７～甲２２、甲９及び甲１７～甲２２、甲１０及び甲１７～甲２２、甲１１及び甲１３～甲２２、甲１２及び甲１３～甲２２、甲２０及び甲２２ならびに甲１～甲１９、甲２１及び甲１～甲１９ ・請求項５に係る発明に対し、甲２０及び甲２２並びに甲１～甲１２、甲２１及び甲２２並びに甲１～甲１２ ・請求項６に係る発明に対し、甲２０～甲２２及び甲１～甲１２ （３）甲号証 甲１：Scientific Reports、2017年、7:18052、DOI:10.1038/s41598-017-18288-9 甲２：Scientific Reports、2018年、8:1419、DOI:10.1038/s41598-018-19581-x 甲３：Journal of the American Heart 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甲９の２：甲９の作成者を示すウェブページの印刷物、https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1155/2017/5356760 甲１０：Immunity、2019年、Vol.50、p.992-1006 甲１１：Journal of Cellular physiology、2018年、Vol.223、p.6832-6840 甲１１の２：甲１１の公開日を示すウェブページの印刷物、https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/jcp.26436 甲１２：Journal of Hematology & Oncology、2018年、11:135、https://doi.org/10.1186/s13045-018-0680-7 甲１３：京都大学プレスリリース、https://www.kyoto-u.ac.jp/ja/research-news/2019-10-30-0 甲１３の２：甲１３の発行者を示すウェブページの印刷物、https://www.kyoto-u.ac.jp/ja/research-news/2019-10-30-0（甲１３に同じ） 甲１４：「看護学生のための病理学教室、第１２回炎症論（１１）（原文は丸囲いの「１１」）」、Clinical Study、2013年、Vol.34、No.3、p.5-7 甲１４の２：甲１４の作成者を示すウェブページの印刷物、https://www.kanto-ctr-hsp.com/patient/department/byori_kyoshitsu.html 甲１５：BMC Nephrology、2017年、18:225、DOI 10.1186/s12882-017-0630-6 甲１６：Theranostics、2016年、Vol.6、Issue12、p.2052-2067、doi:10.7150/thno.16180 甲１７：Journal of Trauma and Acute Care Surgery、2019年、Vol.81、No.1、Suppl.1、p.S74-S82、DOI:10.1097/TA.0000000000002225 甲１８：Cells、2019年、8:258、doi:10.3990/cells8030258 甲１９：Drug 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細胞外膜小胞又はウイルスの捕捉用である、請求項１に記載のＴｉｍ担体。 [請求項3] Ｔｉｍタンパク質がＩｇＶドメインを含むものである、請求項１に記載のＴｉｍ担体。 [請求項4] 以下の工程を含むことを特徴とする試料中の細胞外膜小胞又はウイルスを取得する方法； （１）カルシウムイオン存在下、担体に結合したＴｉｍタンパク質と試料中の細胞外膜小胞又はウイルスとの複合体を形成させる工程（複合体形成工程） （２）当該複合体と試料とを分離する工程（複合体分離工程） （３）当該複合体から細胞外膜小胞又はウイルスを分離し、細胞外膜小胞又はウイルスを取得する工程（取得工程）。」 （甲２１－２）［0002］～[0004] 「 細胞外膜小胞は、その粒子内部にタンパク質やｍｉｃｒｏＲＮＡ等の核酸が存在し、細胞間の物質伝達を担っていることが知られている。細胞外膜小胞は、血液等の体液中にも分泌されており、細胞外膜小胞中のタンパク質やｍｉｃｒｏＲＮＡ等が疾患の診断マーカーとして注目されている。また、核酸医薬のデリバリーツールとしての応用も注目されている。 また、ウィルスには表面に膜状のエンベロープをまとったエンベロープウィルスが数多く存在している。エンベロープウィルスは、インフルエンザウィルスやヒト免疫不全ウィルスなど疾患を引き起こすものが多いため、研究対象として注目されている。また、エンベロープウィルスは無毒化してワクチンやベクターなどに利用され、疾患の予防や治療に応用されている。 このように細胞外膜小胞の診断や医薬品への利用、エンベロープウィルスのワクチンやベクターとしての利用、細胞外膜小胞やエンベロープウィルスの機能解析等の基礎研究等を行う上で、細胞外膜小胞やエンベロープウィルスを高純度に取得する工程は必要不可欠であり、簡便に高純度な細胞外膜小胞やエンベロープウィルスを取得できる手法が待ち望まれている。・・・」 （甲２１－３）[0018]～[0020] 「 前記状況に鑑み、本発明者らは、鋭意研究の結果、Ｔｉｍ１タンパク質、Ｔｉｍ３タンパク質及びＴｉｍ４タンパク質から選ばれる少なくとも１種のタンパク質を用いることにより、ホスファチジルセリンを表面に有する細胞外膜小胞又はウィルスを高純度で得られること、当該細胞外膜小胞又はウィルスをインタクトな状態で得られること、当該細胞外膜小胞又はウィルスを効率よく除去すること、これらを高感度に検出することができることを見出し、本発明を発明するに至った。 細胞外膜小胞の表面にはリン脂質のホスファチジルセリンが存在（露出）している。ホスファチジルセリンに対して結合能を有するタンパク質（以下、「ホスファチジルセリン結合タンパク質」「ＰＳタンパク質」と略記する場合がある）としては、例えばＡｎｎｅｘｉｎ Ｖ、ＭＦＧ－Ｅ８、Ｔｉｍ１（Ｔ細胞免疫グロブリン・ムチンドメイン含有分子１、Ｔ－ｃｅｌｌ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ－ｍｕｃｉｎ－ｄｏｍａｉｎ １）、Ｔｉｍ１（Ｔ細胞免疫グロブリン・ムチンドメイン含有分子１、Ｔ－ｃｅｌｌ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ－ｍｕｃｉｎ－ｄｏｍａｉｎ １）タンパク質、Ｔｉｍ３（Ｔ細胞免疫グロブリン・ムチンドメイン含有分子３、Ｔ－ｃｅｌｌ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ－ｍｕｃｉｎ－ｄｏｍａｉｎ ３）タンパク質、Ｔｉｍ４（Ｔ細胞免疫グロブリン・ムチンドメイン含有分子４、Ｔ－ｃｅｌｌ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ－ｍｕｃｉｎ－ｄｏｍａｉｎ ４）タンパク質等が知られている（Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２６５， ４９２３－４９２８ （２５ Ｍａｒｃｈ １９９０）、Ｎａｔｕｒｅ ４１７， １８２－１８７ （９ Ｍａｙ ２００２）、Ｎａｔｕｒｅ ４５０， ４３５－４３９ （１５ Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ２００７）。 しかしながら、これらのＰＳタンパク質のうち、Ｔｉｍ１タンパク質、Ｔｉｍ３タンパク質及びＴｉｍ４タンパク質以外のＰＳタンパク質を用いた場合には、細胞外膜小胞又はウィルスを取得、除去又は検出することは困難であることが判った。 発明の効果 本発明によれば、試料中に存在する細胞外膜小胞又はウイルスを高純度で、またインタクトな状態で簡便且つ効率的に取得、除去でき、高感度に検出できる。」 （甲２１－４）[0022]－[0024] 「＜１．本発明に係る細胞外膜小胞＞ 本発明に係る細胞外膜小胞としては、生体内の細胞又は培養細胞から分泌される、脂質二重膜で構成され、その膜表面にホスファチジルセリンを有する小型膜小胞である。当該小胞の直径は、通常２０ｎｍから１０００ｎｍ、好ましくは５０ｎｍから５００ｎｍ、より好ましくは５０ｎｍから２００ｎｍである。 本発明に係る細胞外膜小胞は、Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ９， ５８１－５９３ （Ａｕｇｕｓｔ ２００９）、「肥満研究」Ｖｏｌ．１３ Ｎｏ．２ ２００７ トピックス 青木直人等に記載の通り、その発生起源及び小型膜小胞の大きさ等により様々に分類されるものが挙げられる。具体的には、エクソソーム（Ｅｘｏｓｏｍｅｓ）、微小胞（ｍｉｃｒｏｖｅｓｉｃｌｅ）、エクトソーム（Ｅｃｔｏｓｏｍｅｓ）、膜粒子（Ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐａｒｔｉｃｌｅｓ）、エクソソーム様小胞（Ｅｘｏｓｏｍｅ－ｌｉｋｅ ｖｅｓｉｃｌｅｓ）、アポトーシス性小胞（Ａｐｐｏｔｏｔｉｃ ｖｅｓｉｃｌｅｓ）、アディボソーム（Ａｄｉｐｏｓｏｍｅ）等が挙げられる。 エクソソームは、後期エンドソームに由来する、脂質二重膜で構成され、その膜表面にホスファチジルセリンを有する小型膜小胞である。当該小胞の直径は、通常５０ｎｍから２００ｎｍ、好ましくは５０ｎｍから１５０ｎｍ、より好ましくは５０ｎｍから１００ｎｍである。エクソソームは、ＣＤ６３やＣＤ９等のテトラスパニン（ｔｅｔｒａｓｐａｎｉｎｓ）、Ａｌｉｘ、ＴＳＧ１０１、Ｌａｍｐ－１、Ｆｌｏｔｉｌｌｉｎ等のタンパク質を含むことが知られている。」 （甲２１－５）［0252］～[0253] 「実施例１－８．本発明のＴｉｍ４担体を用いた細胞外膜小胞の取得（本発明の取得方法） 以下のように本発明のＴｉｍ４担体を調製し、これを用いて本発明に係る細胞外膜小胞の取得を行った。 ＜（１）カルシウムイオン含有培養上清サンプルの調製＞ 細胞外膜小胞を分泌するヒト慢性骨髄性白血病株Ｋ５６２細胞１×１０７細胞を８０ｍＬのＸ－ＶＩＶＯ１５培地（Ｌｏｎｚａ社製）を用いて３７℃、５％ＣＯ２条件下で３日間培養した後、遠心分離処理（３００×ｇ、５分間）して細胞を沈殿させ、上清を除去した。沈殿した細胞を、１０μＭモネンシンナトリウム（ＭＰ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ社製）含有Ｘ－ＶＩＶＯ１５培地６０ｍＬで懸濁後、３７℃、５％ＣＯ２条件下で２４時間培養した。 その後、培養液を遠心分離処理（３００×ｇ、５分間）し、培養上清を回収した。回収した培養上清６０ｍＬをさらに３回遠心分離処理（１回目：３００×ｇ、３分間、２回目：１２００×ｇ、２０分間、３回目：１００００×ｇ、２０分間）して不純物を分離し、上清を得た。得られた上清に対して、Ｖｉｖａｓｐｉｎ（分画分子量３００００、ＧＥ社製）を用いて６ｍＬ以下になるまで限外濾過を行い、濃縮液を得た。得られた濃縮液に１０μＭモネンシンナトリウム（ＭＰ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ社製）含有Ｘ－ＶＩＶＯ１５培地を添加して液量を６ｍＬに合わせ、１０倍に濃縮したＫ５６２細胞培養濃縮液サンプル（以下、「培養上清サンプル」と略記する場合がある）を得た。 また、得られた培養上清サンプルに終濃度が２ｍＭとなるようにＣａＣｌ２を添加し、２ｍＭＣａＣｌ２含有Ｋ５６２細胞培養上清濃縮サンプル（以下、「カルシウムイオン含有培養上清サンプル」と略記する場合がある）を得た。」 （甲２１－６）［0259］～[0263] 「＜（６）本発明の取得方法による細胞外膜小胞の取得＞ 前記で得られた表１に記載の４種類のｍＴｉｍ４担体０．６ｍｇをＰＢＳ５００μＬでそれぞれ３回洗浄操作した後、ペレット状態のそれぞれのｍＴｉｍ４担体に、前記（１）で調製したカルシウムイオン含有培養上清サンプル２００μＬを加え、８℃で３時間反応させた。 反応後のｍＴｉｍ４担体を、２ｍＭ ＣａＣｌ２含有ＴＢＳ－Ｔ（Ｔｒｉｓ ｂｕｆｆｅｒ， ０．０５％ ｔｗｅｅｎ２０， ２ｍＭ ＣａＣｌ２）５００μＬでそれぞれ３回洗浄操作した。３回目の洗浄操作の時に、４種類のｍＴｉｍ４担体をそれぞれ２５０μＬずつ１．５ｍＬチューブ２本に分注した。 ペレット状態の４種類のｍＴｉｍ４担体各０．３ｍｇに溶出液として１％ ＳＤＳ水溶液又は１ｍＭ ＥＤＴＡ水溶液を２０μＬ添加した後、ボルテックスミキサーにより室温で１０秒間混合し、スピンダウンした。１．５ｍＬチューブをそれぞれマグネットスタンドに設置し、磁力を用いて管壁にｍＴｉｍ４担体を集合させ、上清（溶出液）を回収した。 ・・・ 図１より、実施例１－８の何れの場合においても、１００ｋＤａ付近にエクソソームマーカーであるＬａｍｐ－１のバンドが得られたことから、本発明の取得方法によれば、エクソソームを含む細胞外膜小胞を取得可能であることが判った（実施例１－８：レーン１－８）。」 （甲２１－７）図１ 「 ［図：0001424593000001.jpg］ 」 イ 甲２１に記載された発明 前記アの記載事項に基づけば、甲２１には、以下の発明（以下「引用発明２１Ｂ」という。）が記載されているものと認める。 （引用発明２１Ｂ） 「Ｔ細胞免疫グロブリン・ムチンドメイン含有分子４（Ｔｉｍ４）タンパク質、Ｔ細胞免疫グロブリン・ムチンドメイン含有分子３（Ｔｉｍ３）タンパク質、及びＴ細胞免疫グロブリン・ムチンドメイン含有分子１（Ｔｉｍ１）タンパク質から選ばれるタンパク質（Ｔｉｍタンパク質）が結合した担体（Ｔｉｍ担体）を用いて試料中の細胞外膜小胞を取得する方法であって、 以下の工程を含むことを特徴とする方法； （１）カルシウムイオン存在下、担体に結合したＴｉｍタンパク質と試料中の細胞外膜小胞との複合体を形成させる工程（複合体形成工程） （２）当該複合体と試料とを分離する工程（複合体分離工程） （３）当該複合体から細胞外膜小胞を分離し、細胞外膜小胞を取得する工程（取得工程）。」 （２）甲１（Scientific Reports、2017年、7:18052）の記載事項 甲１には、以下の事項が記載されている。なお、甲１は外国語の文献であるため、当審合議体による翻訳文で示す。以下、他の文献についても同様である。 （甲１－１）（要約 １～３行） 「骨髄由来の間葉系幹細胞（ＭＳＣ）は、複数の治療用途で推奨されている。ＭＳＣの多くの有益な効果は、細胞外膜小胞（ＥＶ）に依存する傍分泌（パラクリン）作用による。ＭＳＣ由来のＥＶ（ｍＥＶ）が急性肺損傷や肺線維症に有益である・・・」 （３）甲２（Scientific Reports、2018年、8:1419）の記載事項 甲２には、以下の事項が記載されている。 （甲２－１）（要約 １～２行） 「間葉系幹細胞（ＭＳＣ）由来のエクソソームは、虚血性心傷害、肝線維症、脳血管障害を含む様々な疾患において組織再生を仲介する。」 （４）甲３（Journal of the American Heart Association、2016年、5:e002856）の記載事項 甲３には、以下の事項が記載されている。 （甲３－１）（要約 １～２行） 「背景－間葉系幹細胞（ＭＳＣ）由来のエクソソームは、細胞増殖と血管新生能を高めることが証明された。」 （５）甲４（International Journal of Nanomedicine、2018年、Vol.13、p.5257-5273）の記載事項 甲４には、以下の事項が記載されている。 （甲４－１）（要約 ６～７行） 「方法：本研究では、ヒト臍帯間葉系幹細胞由来のエクソソームを含む新しい抗癒着バクテリアセルロース（ＢＣ）膜を開発した。」 （６）甲５（Biomater.Sci.、2019年、Vol.7、p.2920-2933）の記載事項 甲５には、以下の事項が記載されている。 （甲５－１）（要約 1行） 「幹細胞由来のエクソソームは心血管疾患の潜在的治療法として認識されている。」 （７）甲６（American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine、2018年、Vol.197、No.1、p.104-116）の記載事項 甲６には、以下の事項が記載されている。 （甲６－１）（要約 １～６行） 「根拠：間葉系幹／間質細胞（ＭＳＣ）療法は、気管支肺異形成症（ＢＰＤ）等の新生児医学に関連する病理の前臨床モデルで有望性を示している。ＭＳＣの治療能力はそのセクレトームにあり、ＭＳＣが産生するエクソソーム（ＭＳＣ－ｅｘｏ）が治療ベクターであることを示した。」 （８）甲７（Stem Cells International、2018年、Vol.2018、Article ID6079642）の記載事項 甲７には、以下の事項が記載されている。 （甲７－１）（要約 １～３行） 「間葉系幹細胞（ＭＳＣｓ）の臨床応用が進んでいる。エクソソームは、様々な種類の細胞から放出される小さな（直径３０－１００ｎｍ）膜小胞であり、由来細胞と同様の機能を有している。ヒト臍帯ＭＳＣ由来エクソソーム（ｈｕｃＭＳＣ－Ｅｘ）は、肝臓修復において重要な役割を果たしている。」 （９）甲８（Am J Transl Res、2016年、Vol.8、No.10、p.4289-4299）の記載事項 甲８には、以下の事項が記載されている。 （甲８－１）（要約１～１６行） 「背景：間葉系間質細胞（ＭＳＣｓ）由来の細胞外小胞（ＥＶｓ）は、腎障害修復のための強力な培地とみなされ、血管新生は組織再生の重要なステップとみなされていた。しかし、虚血再灌流による腎障害におけるＭＳＣ－ＥＶｓの血管新生促進効果やその潜在的な機序については、まだ明らかにされていない。・・・ 結論：ヒトＭＳＣ－ＥＶは、ＨＩＦ－１α非依存的に血管新生促進作用を介して虚血／再灌流障害による腎障害を防御することができ、血管新生に関連するＶＥＧＦの送達とＲＮＡの両方がこの過程に関与していた。」 （１０）甲９（BioMed Research International、2017年、Vol.2017、Article ID 5356760）の記載事項 甲９には、以下の事項が記載されている。 （甲９－１）（要約 １～１１行） 「間葉系幹細胞（ＭＳＣｓ）によって分泌されるエクソソームは、いくつかの組織損傷疾患に対して修復効果を示している。本研究では、ヒト臍帯間葉系幹細胞（ｈｕｃＭＳＣｓ）から放出されたエクソソームがデキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）誘発性炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療に及ぼす影響を調査し、その基礎となるメカニズムを探ることを目的とした。・・・我々の発見は、ｈｕｃＭＳＣｓ由来エクソソームがＤＳＳ誘発ＩＢＤの軽減に著明な効果を持ち、その影響をマクロファージにおけるＩＬ－７の発現調節を通じて発揮する可能性があることを示唆している。」 （１１）甲１７（Journal of Trauma and Acute Care Surgery、2019年、Vol.81、No.1、Suppl.1、p.S74-S82）に記載された事項 甲１７には以下の事項が記載されている。 （甲１７－１）概要 ＲＥＳＵＬＴ欄 「ＭＳＣ細胞の種類と培養条件は、ＥＶのサイズ分布に影響を与えなかった。表面にホスファチジルセリンと組織因子を発現している全群の細胞外小胞は機能的に血栓形成性があり、ＥＶを含まない無血清培地の陰性対照と比較して凝固速度を増加させる傾向があった。平均して、ＥＶは、細胞源や培養条件に関係なく、陰性対照よりも有意に大きく強い血栓を形成しなかった。さらに、ＥＶは in vitroフローベースアッセイにおいて血小板の接着を阻害した。」 （甲１７－２）概要 ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ欄 「脂肪由来ＥＶは血栓形成性が高く、ホスファチジルセリンの発現量が多かった。我々の知見は、インタクトなＭＳＣと同様に、ＥＶ間のソースのばらつきが、ＥＶを潜在的な治療目的で考慮する際の重要な因子であることを示唆している。」 （甲１７－３）Ｓ７５頁左欄５～１５行 「ＥＶに関する研究は、主にそのタンパク質やＲＮＡの組成、組織再生を促進する能力に焦点が当てられてきた。このことは、ＭＳＣ由来ＥＶの凝固特性が臨床的に使用できるかどうかに重大な影響を及ぼす可能性があることを考えると、特に重要である。ここでは、単層Ａｄ由来ＥＶｓ（ＭＡｄ－ＥＶｓ）、スフェロイドＡｄ由来ＥＶｓ（ＳＡｄ－ＥＶｓ）、単層ＢＭ由来ＥＶｓ（ＭＢＭ－ＥＶｓ）、スフェロイドＢＭ由来ＥＶｓ（ＳＢＭ－ＥＶｓ）の凝固促進活性に対する影響について述べる。」 （甲１７－４）Ｓ７５頁右欄Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙの項目 「フローサイトメトリー フローサイトメーターの解像度が 200 nm であるため、ＥＶの検出を容易にするために粒子径を大きくするために、ヒトＣＤ８１（Ｅｘｏ膜テトラスパニン）フロー検出（細胞培養由来）Dynabeads（10622D；Invitrogen, Carlsbad, CA）を用いて、小胞からの総タンパク質25μgを磁気ビーズに付着させて、200μLの分離バッファー（0.1％bovine serum albumin in PBS）に懸濁し、小胞の陽性コントロールとして以下の抗体で１時間染色した・・・。その後、サンプルをフローサイトメトリー（BD FACSCANTO II, BD Biosciences, San Jose, CA）にかけた。FlowJo ソフトウェア（FlowJo, Ashland, OR）を用いて解析するため、少なくとも5,000個のビーズ結合小胞イベントをトリプリケートで収集した。」 （甲１７－５）Ｓ７７頁右欄１１行～Ｓ７８頁右欄５行 「ＥＶはその表面にホスファチジルセリンとＴＦを発現する フローサイトメトリーで分析した細胞外小胞は、分析のために４つの異なるグループ（「フローグループ」と呼ぶ）を形成した（図3A）：(1)Dynabeadsに結合していないＥＶ（未結合ＥＶ）、(2)単一Dynabeadsに結合したＥＶ（単一ビーズ）、(3)DynabeadsとＥＶの凝集体（凝集体 1）、(4)DynabeadsとＥＶのより大きな凝集体（凝集体 2）。さらなる分析（図 3B-D）のために、「未結合 ＥＶ」を２つのカテゴリーに分類した：700nm未満のＥＶ（<700 nm）と、700～1,000nmのＥＶ凝集体（>700nm）である。・・・ＰＳのＥＶ発現については、交互作用効果（p > 0.05）は検出されなかった（図 3C）。細胞タイプは、単一ビーズ、凝集体 1、凝集体 2 に結合したＥＶのＡｄ－ＥＶ ＰＳ発現を、同じフローグループのＢＭ－ＥＶと比較して有意に増加させた（それぞれp＜0.01、p＜0.01、p＜0.05）。ＳＡｄ－ＥＶは、単一ビーズ群および凝集体 1 フロー群ではＭＢＭ－ＥＶよりもＰＳを多く発現した（p＜0.05）。ＴＦ発現については、すべてのフロー群で交互作用や成分効果（p > 0.05）は認められず（図 3D）、ＥＶのＴＦ発現はＥＶ群間で有意な差はなかった。全体として、ＴＦはすべてのＥＶに存在するが、ＰＳは特にＡｄ－ＥＶにおいてより多く存在し、Ａｄ－ＥＶにおいてより凝固促進性の表現型があることを示唆している。」 （甲１７－６）図２ 「 ［図：0001424593000002.jpg］ 図2. 全EVの(A)サイズ分布と(B)平均サイズ。(C）（左）エクソソームマーカーCD81（22-26 kDa）と（右）ER タンパク質カルネキシン（90 kDa）のウェスタンブロット。各ゲルのウェルあたり15マイクログラムのタンパク質をロードし、ゲルは非還元条件下（CD81）または還元条件下（カルネキシン）で行った。 ER は、小胞体の意。 」 （甲１７－７）図３の抜粋 「 ［図：0001424593000003.jpg］ ・・・ 図 3. (A)EV が形成するフローグループの代表図：(1)ダイナビーズに結合していない EV（未結合 EV）、(2)ダイナビーズに結合した EV（単一ビーズ）。(3)ダイナビーズと EV の凝集体（凝集体 1）、(4)ダイナビーズと EV の大きな凝集体（凝集体 2）。さらなる分析（B）のために、結合した EV は 2 つのカテゴリーに分類された： 700 nm 未満の EV（<700 nm）と 700～1,000 nm の EV 凝集体（>700 nm）。EV 表面における(B)CD63 発現、(C)PS 発現、(D)TF 発現の二元配置分散分析（n = 3）。棒グラフは、エラーバーは SD を表す。*p <0.05,p<0.01 」 （１２）甲１８（Cells、2019年、8:258、doi:10.3990/cells8030258）に記載された事項 甲１８には以下の事項が記載されている。 （甲１８－１）要旨 「要旨：間葉系幹細胞（MSC）は、免疫疾患を含む多くの疾患の治療において有力な治療手段として浮上している。しかし、MSCが血液凝固に及ぼす望ましくない効果が報告されており、我々は臍帯由来のヒトMSCの血栓形成特性を調査した。回転血栓弾性計測法および血栓動態試験を使用して、ヒト血液および血小板フリー血漿に対するMSCの強力な促進凝固効果を明らかにした。同様の凝固促進は、MSC由来の細胞外小胞（EVs）でも示された。望ましくない効果を回避するためのアプローチとして、我々はヘパリン補助剤がMSCの促進凝固特性に及ぼす影響を調査した。しかし、MSCは治療用量の未分画ヘパリンを受けている子供の血液に対しても促進凝固活性を保持していた。MSC/EVsの促進凝固効果のメカニズムの分析により、組織因子および凝固関連経路に関与する他のタンパク質の存在が明らかになった。また、一部のMSCおよびEVがアネキシンV陽性であり、これにより表面にホスファチジルセリンが存在することが示唆され、凝固形成を促進する可能性があることがわかった。このように、我々はホスファチジルセリンおよび組織因子の存在に関連するMSC/EVsの促進凝固活性を明らかにし、血栓リスクのある患者におけるMSC治療の有害効果を回避するためのさらなる分析が必要であることを示している。」 （甲１８－２）２頁第１段落 「間葉系幹細胞（MSC）は、最小限の免疫原性を伴う免疫応答を調節する高い能力を持つ修復細胞技術の有力な治療手段として浮上している。MSCのこれら特定の免疫調節効果は、敗血症や他の炎症性疾患の治療に有益である可能性があると考えられている。これらおよび他のMSCの治療効果は、パラクリンメカニズムを介して実現され、細胞外小胞（EV）の確立された産生を伴うものであり、これがMSC自体と同様の免疫調節の可能性を促進する。現在、自家および同種ヒトMSCの両方が、世界中で約500件の臨床試験で広く試験されており、重篤な副作用はほとんど報告されていない。認識されている数少ない合併症の一つは、治療による血栓症のリスクであり、数人の患者に報告されている。最近の臨床試験では、同種脂肪由来MSCの静脈内投与が、ヒトエンドトキシン血症中に混合された抗炎症および促進凝固効果を発揮することが明らかにされた。促進凝固活性は、膵島や肝細胞などの他の種類の移植細胞でも観察されている。促進凝固活性は組織因子（TF）の発現と関連している可能性があることが判明している。特に、長期間のMSC培養は、細胞表面におけるTFの著しく高い発現をもたらし、血栓形成のリスクを増加させる可能性がある。TFに加えて、ホスファチジルセリンという他の促進凝固因子があり、これは細胞膜の内葉から外葉への移行後、トロンビン活性化複合体を構築するためのプラットフォームを作り出す。また、MSC条件培地から分離されたEVにはTFおよび/または外部ホスファチジルセリンが含まれ、したがって血液止血に影響を与える可能性があると推定される。」 （甲１８－３）２頁セクション２．１～３頁セクション２．２ 「2.1. MSC の一次培養 健康な 25～30 歳の女性（n = 6）から、V.I. Kulakov 国立産科婦人科学研究センターで帝王切開により健康な正期産児を出産した際に、新鮮なヒト臍帯を取得した。・・・出生後に取得した臍帯は、リン酸緩衝生理食塩水（PBS）（Paneco, Moscow, Russia）で数回洗浄した。血管を取り除いた後、臍帯は 1cm3の断片に細かく刻み、さらに 1 - 2mm3の小片に均質化した。細胞は、7％胎牛血清（Biosera, Nuaille, France）、ペニシリン（100 IU/mL）、ストレプトマイシン（100μg/mL）（Gibco, NY, USA）、および 2mM L-グルタミン（Paneco, Moscow, Russia）を含む Dulbecco改変イーグル培地（DMEM）/F12（Paneco, Moscow, Russia）(1:1)で培養し、37℃で 5％CO2 の湿潤雰囲気でインキュベートした。培養培地は、非付着細胞を除去するために 3～4 日ごとに交換した。細胞の成長と形態は、倒立顕微鏡で毎日観察した。実験には３回継代したＭＳＣを使用した。細胞はトリプシン処理後、遠心分離（1600×gで 3 分間）し、ＰＢＳの10μL に再懸濁して直ちに使用した。細胞の生存率はトリパンブルー排除法で評価され（通常は95％以上）、本研究で使用したＭＳＣは、間葉系幹細胞マーカー（CD73、CD90、CD105）に陽性であり、造血細胞マーカー（CD14、CD20、CD45、CD34）に陰性であった（補足図 S1）。 2.2. 分別遠心法による細胞外小胞の分離 分別遠心法を用いて、条件付き培地からＥＶを分離した[26]。80 - 90％のコンフルエント（～10 × 106細胞）の３回継代ＭＳＣ培養の条件付き培地を24時間後に収集し（DMEM/F12に7％胎牛血清（FBS）、2mM L-グルタミン、100U/mLペニシリン、100μg/mLストレプトマイシンを含む）、108,000×gで1.5時間遠心分離して、ＦＢＳ由来のＥＶの可能性のある汚染を避けるために培地を使用前に遠心分離し、その後、上清を収集し、0.22μmの細孔サイズのボトルトップ真空フィルターシステム（Falcon, Corning, NY, USA）で濾過し、ベシクルフリーの培養培地として使用した。コンフルエント培養の条件付き培地（50mL）を収集し、細胞およびデブリを除去するために連続遠心分離（400×gで10分間、その後10,000×gで4°Cで30分間）した。上清は、108,000×gで1.5時間、4°Cで超遠心分離し（Avanti JXN-30 高速遠心機、Beckman Coulter Inc., Fullerton, CA, USA 使用）、PBSでペレットを洗浄し、タンパク質汚染を最小限に抑えるために再度 108,000×gで1.5時間遠心分離した。最終的なＥＶペレットは、濾過したPBSの10μLに再懸濁した。ベシクルサンプルは、－80°Cで保存した。全ての遠心分離を経た非条件付き培養培地の再懸濁ペレットを追加のコントロールサンプル（ブランクＥＶ）として使用し、観察された効果がＭＳＣ由来のＥＶによるものであり、偶発的なナノ粒子の混入によるものでないことを確認した。」 （甲１８－４）１２頁セクション３．３ 「3.3 ＭＳＣおよびＥＶによる凝固誘導に関与するメカニズムの解明 我々は、血液および血漿におけるＭＳＣおよびＭＳＣ由来ＥＶの促進凝固効果のメカニズムを調査した。多くの研究が、細胞膜の外表面にホスファチジルセリンが出現することが凝固カスケードの誘導に関与している可能性があることを示している(18)。フローサイトメトリーを使用して、ＭＳＣ培養およびＥＶ懸濁液中のホスファチジルセリンを露出した細胞および小胞の存在を評価した。ＥＶの検出には、PKH26色素を用いてＥＶを染色し、全 PKH26陽性粒子のうち約３%がアネキシンＶ陽性であることを明らかにした (図 5A, B)。ＭＳＣ集団では、約４%の細胞がアネキシンＶ陽性であることが示された(図 5C, D)。注目すべきは、ネイティブなＭＳＣにおけるホスファチジルセリンの露出がアポトーシスと関連していないように見えることであり、アポトーシス細胞はより強い蛍光を示す領域に現れた (図 5E)。ＭＳＣおよびＥＶの促進凝固効果へのホスファチジルセリンの寄与を評価するために、アネキシンＶを用いてホスファチジルセリンをマスキングする実験を行った。ＥＶおよびＭＳＣをアネキシンＶと前処理することで、ＣＴ（合議体注：「凝固時間」の略語。）はそれぞれ２５%および３０%増加した(図 5F - I)。さらに、臍帯ＭＳＣおよびそのＥＶが表面に十分な量のＴＦを発現する可能性があると仮定した。ＴＦの存在は、ＭＳＣ条件培地から分離されたＭＳＣおよびＥＶのウエスタンブロッティングによって分析された。ＭＳＣサンプルでは有意な量のＴＦタンパク質が検出されたが、ＥＶサンプルでは検出されなかった (図 5J)。」 ２ 当審の判断 （１）本件発明５について ア 対比 本件発明５と引用発明２１Ｂとを対比する。 本件発明５における「細胞外小胞（以下、「ＥＶ」と略記する場合がある。）」について、本件特許明細書【００１４】を参照すると、「細胞に由来する、脂質二重膜で構成される小型膜小胞であ」り、「具体的には、エクソソーム、微小胞、エクトソーム、膜粒子、エクソソーム様小胞、アポトーシス小体、アディポソーム等が挙げられ、エクソソーム及び微小胞が好ましく、エクソソームがより好ましい。」と説明されているところ、引用発明２１Ｂの「細胞外膜小胞」についても、甲２１（前記１（１）（甲２１－４））には同様の説明がされていることから、引用発明２１Ｂにおける「細胞外膜小胞」は、本件発明５における「細胞外小胞」に相当する。 また、本件発明５の「細胞外小胞の製造方法」の原料として使用される「間葉系幹細胞由来の細胞外小胞」について、本件特許明細書【００２１】には、「ＥＶを含む」「ＭＳＣの細胞培養上清液」を用いることが説明されているところ、引用発明２１Ｂにおける「試料」についても、甲２１（前記１（１）（甲２１－５））には「細胞培養上清サンプル」を用いることが記載されていることから、引用発明２１Ｂにおける「試料中の細胞外膜小胞」と、本件発明５における「間葉系幹細胞由来の細胞外小胞」とは、細胞培養上清液中に含まれる「細胞由来の細胞外小胞」である限りにおいて一致する。 さらに、引用発明２１Ｂにおける「タンパク質（Ｔｉｍタンパク質）が結合した担体（Ｔｉｍ担体）を用いて」「細胞外膜小胞を取得する方法」は、本件発明５における「Ｔｉｍタンパク質を用いる方法により細胞外小胞を得ることを含む」「製造方法」に相当する。 そうすると、本件発明５と引用発明２１Ｂとは、以下の点で一致し、また相違する。 ＜一致点＞ 「細胞由来の細胞外小胞からＴｉｍタンパク質を用いる方法により細胞外小胞を得ることを含む、製造方法。」 ＜相違点１＞ 本件発明５では、「細胞外小胞」の由来が「間葉系幹細胞」に特定され、「抗線維化作用を有する細胞外小胞を有効成分とする抗線維化剤」を製造することが特定されているのに対し、引用発明２１Ｂでは、そのような特定がされていない点。 イ 判断 上記相違点１について検討する。 前記１（１）（甲２１－２）に記載されるように、引用発明２１Ｂは、「細胞外膜小胞は、その粒子内部にタンパク質やｍｉｃｒｏＲＮＡ等の核酸が存在し、細胞間の物質伝達を担って」おり、「核酸医薬のデリバリーツールとしての応用も注目されている」という背景のもと、「細胞外膜小胞の診断や医薬品への利用」のために「必要不可欠」な「簡便に高純度な細胞外膜小胞」「を取得できる手法」として考案された発明である。 一方、甲１～甲９（前記１（２）～（１０））に記載されるように、間葉系幹細胞由来の細胞外小胞であるエクソソームが、線維症に対する治療効果、すなわち抗線維化作用を有することや、組織損傷や組織再生等の治療に使用できることは周知の技術的事項であった。 しかしながら、間葉系幹細胞由来の細胞外小胞がその膜表面にホスファチジルセリン（以下「ＰＳ」という。）を発現していることは甲１７（前記１（１１）（甲１７－５）及び（甲１７－７））に記載のとおりであり、引用発明２１Ｂにおいて、Ｔｉｍタンパク質を用いる方法により細胞外小胞を得ることは、ＰＳ陽性細胞外小胞を濃縮する工程に他ならないところ、甲１７及び甲１８（前記１（１１）及び（１２））に記載されるように、ＰＳを膜表面に露出しているＰＳ陽性細胞外小胞は、医薬としての適用を想定した場合には、有害事象の原因ともなる「血液凝固活性」及び「血栓形成性」があることも知られていたことから、引用発明２１Ｂにおいて、抗線維化剤に係る医薬用途に適用するために、間葉系幹細胞から、わざわざＰＳ陽性の細胞外小胞を濃縮して得たものを有効成分とすること、すなわち、上記相違点１に係る構成を採用することには阻害要因があり、当業者が容易に想到し得たものとはいえない。 また、本件特許明細書の実施例では、本件発明５によって製造された「細胞外小胞を有効成分とする抗線維化剤」が、超遠心法で取得された細胞外小胞よりも、ヒト胎児肺由来線維芽細胞における線維化関連遺伝子（Ｃｏｌｌａｇｅｎ ＩＩＩ、Ｃｏｌｌａｇｅｎ Ｖ及びα－ＳＭＡ）の発現を抑制し、顕著に高い抗線維化作用を有することが確認されており、このような本件発明５の構成により奏される効果は、引用発明２１Ｂ及び甲２１の記載並びに甲１～甲９に記載される周知技術からは予測し得ない顕著な効果であるといえる。 そうすると、本件発明５は、引用発明２１Ｂ及び甲２１の記載並びに、周知技術（甲１～甲９）に基いて当業者が容易に発明をすることができたものではない。 （２）本件発明６について 前記（１）アを踏まえて本件発明６と引用発明２１Ｂとを対比すると、本件発明６と引用発明２１Ｂとは、前記相違点１に加えて新たな相違点を生ずるものではない。 そして、前記相違点１についての判断は、前記（１）イに説示したとおりである。 したがって、本件発明６は本件発明５と同様の理由により、引用発明２１Ｂ及び甲２１の記載並びに、周知技術（甲１～甲９）に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものではない。 （３） 小括 以上のとおりであるから、本件発明５及び６は、甲２１に記載された発明及び甲２１の記載事項並びに周知技術（甲１～甲９）に基づいて、当業者が容易に発明をすることができたものではない。 よって、取消理由１には理由がない。 第６ 取消理由通知において採用しなかった特許異議の申立ての理由１（新規性）及び理由２（進歩性）についての判断 １ 甲号証の記載 （１）甲１（Scientific Reports、2017年、7:18052）に記載された発明 甲１の概要、図１、２頁最終段落～３頁第１段落、６頁最終段落～７頁第４段落、及び７頁最終段落～８頁第１段落に記載された事項に基づけば、甲１には以下の発明（以下「引用発明１」という。）が記載されているものと認める。 「ヒト骨髄由来の間葉系幹細胞（ＭＳＣ）の培養上清を超遠心分離して得られたエクソソームを有効成分とする抗線維化剤。」 （２）甲２（Scientific Reports、2018年、8:1419）に記載された発明 甲２の概要、４頁最終段落、５頁３９～５７行、８頁１０～２２行、及び８頁最終段落～９頁第１段落に記載された事項に基づけば、甲２には以下の発明（以下「引用発明２」という。）が記載されているものと認める。 「ヒト骨髄由来の間葉系幹細胞（ＭＳＣ）の培養上清を遠心分離して得られたエクソソームを有効成分とする抗線維化剤。」 （３）甲３（Journal of the American Heart Association、2016年、5:e002856）に記載された発明 甲３の概要、２頁左欄第３段落～右欄第２段落、８頁左欄８行～右欄１３行、及び図８に記載された事項に基づけば、甲３には以下の発明（以下「引用発明３」という。）が記載されているものと認める。 「ラット骨髄由来の間葉系幹細胞（ＭＳＣ）の培養上清を超遠心分離して得られたエクソソームを有効成分とする抗線維化剤。」 （４）甲４（International Journal of Nanomedicine、2018年、Vol.13、p.5257-5273）に記載された発明 甲４の概要、５２５８頁左欄第２段落、５２５９頁左欄第２段落～右欄第１段落、及び５２７２頁左欄第２段落に記載された事項に基づけば、甲４には以下の発明（以下「引用発明４」という。）が記載されているものと認める。 「ヒト臍帯由来の間葉系幹細胞の培養上清を超遠心分離して得られたエクソソームを有効成分とする抗線維化剤。」 （５）甲５（Biomater.Sci.、2019年、Vol.7、p.2920-2933）に記載された発明 甲５の概要、２９２１頁セクション２．１、２９２９頁セクション３．５、２９３１頁セクション３．８、及び２９３１頁セクション５に記載された事項に基づけば、甲５には以下の発明（以下「引用発明５」という。）が記載されているものと認める。 「ヒト臍帯由来の間葉系幹細胞の培養上清を超遠心分離して得られたエクソソームを有効成分とする抗線維化剤。」 （６）甲６（American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine、2018年、Vol.197、No.1、p.104-116）に記載された発明 甲６の概要、１０５頁左欄下から１８行目～１５行目、１０５頁中央欄下から１４行目～８行目、１０５頁右欄４～１８行、１０８頁右欄最終段落～１０９頁左欄第１段落、及び１１１頁右欄最終段落～１１２頁右欄最終行に記載された事項に基づけば、甲６には以下の発明（以下「引用発明６」という。）が記載されているものと認める。 「ヒト臍帯又は骨髄由来の間葉系幹細胞の培養上清を分画遠心法により得られたエクソソームを有効成分とする抗線維化剤。」 （７）甲７（Stem Cells International、2018年、Vol.2018、Article ID6079642）に記載された発明 甲７の概要、２頁左欄第２段落、２頁セクション２．２、５頁右欄第２段落～６頁左欄第１段落（セクション３．３）、８頁右欄８行～１０頁左欄第２段落、及び１０頁左欄第４段落に記載された事項に基づけば、甲７には以下の発明（以下「引用発明７」という。）が記載されているものと認める。 「ヒト臍帯由来の間葉系幹細胞の培養上清を超遠心分離して得られたエクソソームを有効成分とする抗線維化剤。」 （８）甲８（Am J Transl Res、2016年、Vol.8、No.10、p.4289-4299）に記載された発明 甲８の概要、４２９０頁右欄８～２７行、及び４２９５頁左欄４行～右欄１２行に記載された事項に基づけば、甲８には以下の発明（以下「引用発明８」という。）が記載されているものと認める。 「ヒト臍帯由来の間葉系幹細胞の培養上清を超遠心分離して得られたエクソソームを有効成分とする抗線維化剤。」 （９）甲９（BioMed Research International、2017年、Vol.2017、Article ID 5356760）に記載された発明 甲９の概要、２頁左欄第２段落、及び２頁左欄セクション２．１に記載された事項に基づけば、甲９には以下の発明（以下「引用発明９」という。）が記載されているものと認める。 「ヒト臍帯由来の間葉系幹細胞の培養上清を超遠心分離して得られたエクソソームを有効成分とする抗線維化剤。」 （１０）甲１０（Immunity、2019年、Vol.50、p.992-1006）に記載された発明 甲１０の概要、図１、及び１０００頁右欄２７～４１行に記載された事項に基づけば、甲１０には以下の発明（以下「引用発明１０」という。）が記載されているものと認める。 「抗ＴＮＦなどの線維化発生を遅らせる抗炎症薬。」 （１１）甲１１（Journal of Cellular physiology、2018年、Vol.223、p.6832-6840）に記載された発明 甲１１の概要、６８３４頁段落２．１～２．３、６８３７頁段落３．５及び６８３８頁右欄最終段落～６８３９頁左欄第３段落に記載された事項に基づけば、甲１１には以下の発明（以下「引用発明１１」という。）が記載されているものと認める。 「ヒト臍帯由来の間葉系幹細胞の培養上清を遠心分離して得られたエクソソームを有効成分とするＴｒｅｇ誘導剤。」 （１２）甲１２（Journal of Hematology & Oncology、2018年、11:135）に記載された発明 甲１２の概要に記載された事項に基づけば、甲１２には以下の発明（以下「引用発明１２」という。）が記載されているものと認める。 「骨髄由来の間葉系幹細胞の培養を超遠心法を用いて調製したエクソソームを有効成分とする抗線維化剤。」 （１３）甲１３（京都大学プレスリリース、２０１９年）に記載された事項 甲１３の本文５～６行には、以下の記載がある。 「Tregは免疫を抑える機能を持つＴ細胞です。このTregを人工的に誘導することは、自己免疫疾患や炎症性疾患など免疫系の活性化を原因とする病気の治療に繋がると考えられます。」 （１４）甲１４（Clinical Study、2013年、Vol.34、No.3、p.5-7）に記載された事項 甲１４の５頁左欄６～７行及び図１に記載された事項に基づけば、甲１４には、傷害され炎症を起こした組織は、（１）再生、（２）修復、（３）線維化のどれか１つの道を進むこと、及び組織傷害の持続（慢性炎症）が線維化をもとらすことが開示されている。 （１５）甲１５（BMC Nephrology、2017年、18:225）に記載された事項 甲１５の概要、２頁左欄２～８行、及び７頁右欄最終行～８頁左欄４行に記載された事項に基づけば、甲１５には、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）細胞移植が線維症を減少させること、すなわちＴｒｅｇの抗線維化作用が開示されている。 （１６）甲１６（Theranostics）、2016年、Vol.6、Issue12、p.2052-2067）に記載された事項 甲１６の概要、及び２０６１頁左欄４～７行に記載された事項に基づけば、甲１６には、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）が抗線維化細胞であることが開示されている。 （１７）甲１７（Journal of Trauma and Acute Care Surgery、2019年、Vol.81、No.1、Suppl.1、p.S74-S82）に記載された事項 甲１７には、前記第５の１（１１）に摘記した事項が記載されている。 （１８）甲１８（Cells、2019年、8:258、doi:10.3990/cells8030258）に記載された事項 甲１８には、前記第５の１（１２）に摘記した事項が記載されている。 （１９）甲１９（Drug Delivery、2018年、Vol.25、No.1、p.1-11）に記載された事項 甲１９の概要、５頁左欄２０行～右欄下から１０行目、及び６頁右欄８行～７頁右欄９行に記載された事項に基づけば、甲１９には、クルクミンを含むホスファチジルセリン修飾ナノ構造脂質キャリアが、クルクミンの滞留時間を延長し、クルクミンのバイオアベイラビリティと肝臓への送達効率を高め、肝線維症の治療においてクルクミンの抗線維化活性を有意に増強することが開示されている。 （２０）甲２０（Scientific Reports、2016年、6:33935）に記載された発明 甲２０の概要、３頁第２～３段落、図６Ａ、７頁最終段落～９頁第３段落及び９頁下から２段落目に記載された事項に基づけば、甲２０には以下の発明（以下「引用発明２０Ａ」及び「引用発明２０Ｂ」という。）が記載されているものと認める。 （引用発明２０Ａ） 「細胞由来の細胞外小胞からＴｉｍ４タンパク質を用いる方法により単離された細胞外小胞。」 （引用発明２０Ｂ） 「細胞由来の細胞外小胞からＴｉｍ４タンパク質を用いる方法により細胞外小胞を得ることを含む、細胞外小胞の製造方法。」 （２１）甲２１（国際公開第２０１６／０８８６８９号）に記載された発明 前記第５の１（１）アに示した甲２１に記載された事項に基づけば、甲２１には、以下の発明（以下「引用発明２１Ａ」という。）及び引用発明２１Ｂ（前記第５の１（１）イに記載したものを再掲する。）が記載されているものと認める。 （引用発明２１Ａ） 「Ｔ細胞免疫グロブリン・ムチンドメイン含有分子４（Ｔｉｍ４）タンパク質、Ｔ細胞免疫グロブリン・ムチンドメイン含有分子３（Ｔｉｍ３）タンパク質、及びＴ細胞免疫グロブリン・ムチンドメイン含有分子１（Ｔｉｍ１）タンパク質から選ばれるタンパク質（Ｔｉｍタンパク質）が結合した担体（Ｔｉｍ担体）を用いて得られた細胞外小胞を有効成分とする医薬品。」 （引用発明２１Ｂ） 「Ｔ細胞免疫グロブリン・ムチンドメイン含有分子４（Ｔｉｍ４）タンパク質、Ｔ細胞免疫グロブリン・ムチンドメイン含有分子３（Ｔｉｍ３）タンパク質、及びＴ細胞免疫グロブリン・ムチンドメイン含有分子１（Ｔｉｍ１）タンパク質から選ばれるタンパク質（Ｔｉｍタンパク質）が結合した担体（Ｔｉｍ担体）を用いて試料中の細胞外膜小胞を取得する方法であって、 以下の工程を含むことを特徴とする方法； （１）カルシウムイオン存在下、担体に結合したＴｉｍタンパク質と試料中の細胞外膜小胞との複合体を形成させる工程（複合体形成工程） （２）当該複合体と試料とを分離する工程（複合体分離工程） （３）当該複合体から細胞外膜小胞を分離し、細胞外膜小胞を取得する工程（取得工程）。」 （２２）甲２２（Biol.Pharm.Bull.、2018年、Vol.41、p.835-842）に記載された発明 甲２２の標題、概要、８３５頁セクション２．１、８３７頁セクション３．２、８３８頁表１及び８３８頁セクション３．５に記載された事項に基づけば、甲２２には以下の発明（以下「引用発明２２Ａ」及び「引用発明２２Ｂ」という。）が記載されているものと認める。 （引用発明２２Ａ） 「間葉系幹細胞由来のエクソソームであって、ホスファチジルセリンアフィニティー法を用いて分離されたエクソソームを含む製剤。」 （引用発明２２Ｂ） 「ホスファチジルセリンアフィニテイー法によりエクソソームを分離することを含む、間葉系幹細胞由来のエクソソームを含む製剤の製造方法。」 ２ 甲１を主引用例とした申立理由１（新規性）及び申立理由２（進歩性）についての判断 （１）本件発明１について ア 対比 前記第５の２（１）アの対比を踏まえて、本件発明１と引用発明１とを対比すると、引用発明１における「エクソソーム」は、本件発明１における「細胞外小胞」に相当する。 そうすると、本件発明１と引用発明１とは、「間葉系幹細胞に由来する細胞外小胞を有効成分とする抗線維化剤」である点で一致し、以下の点で相違する。 ＜相違点２＞ 「細胞外小胞」について、本件発明１では、「ＰＳが細胞外小胞の膜表面に露出しており、Ｔｉｍタンパク質が上記ＰＳに対して特異的に結合することが可能な細胞外小胞」であるのに対し、引用発明１では、「間葉系幹細胞（ＭＳＣ）の培養上清を超遠心分離して得られたエクソソーム」である点。 イ 新規性の判断 上記相違点２について検討する。 本件発明の技術的意義について、本件特許明細書の発明の詳細な説明を参照すると、「間葉系幹細胞に由来する細胞外小胞から超遠心法により取得された細胞外小胞が、抗線維化作用（抗線維化効果）を有することが報告されている」（【０００４】）という背景技術のもと、「本発明者が間葉系幹細胞に由来する細胞外小胞から超遠心法により取得された細胞外小胞の抗線維化作用について検証したところ、当該作用は弱く、産業利用するには不十分であることが判った」（【０００７】）ことから、本件発明は「より治療効果が高い細胞外小胞の集団により構成された治療用製剤、特に抗線維化剤を提供すること」を解決しようとする課題として、「鋭意検討した結果、ホスファチジルセリン（ＰＳ）に対する親和性を有する物質を利用した方法（ＰＳアフィニティー法）により取得されたＰＳ陽性という特長を有する細胞外小胞の集団」「が、抗線維化剤として高い効果を有することを見出し、本発明を完成させるに至った」（【０００８】）ことが説明されている。 そして、本件発明の「細胞外小胞」については、「本発明が提供する抗線維化剤における有効成分である細胞外小胞（・・・）は、本発明に係るＭＳＣに由来する細胞外小胞からホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質を用いて単離、取得した細胞外小胞（以下、「ＰＳ陽性細胞外小胞」と略記する場合がある）・・・である」（【００１８】；下線は合議体が付したものである。以下同様。）、及び「ＰＳ陽性細胞外小胞は、ＥＶを含む本発明に係るＭＳＣの細胞培養上清液（・・・）から、ホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質を用いて単離すること、又はＥＶを含む本発明に係るＭＳＣの細胞培養上清液から例えば超遠心法等のこの分野の常法によりＥＶを取得した後、得られたＥＶからホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質を用いて単離することにより得られる。なかでも、ＥＶを含む本発明に係るＭＳＣの細胞培養上清液からホスファチジルセリンに対して親和性を有する物質を用いて直接単離するのが好ましい。」（【００２１】）と説明され、実施例（【００７５】～【００９７】）においては、ＰＳアフィニティー法によって単離された細胞外小胞は、超遠心法により取得された細胞外小胞（比較例）とは、マーカータンパク質（ＣＤ９とＣＤ６３）の発現量が異なり（【００８２】）、細胞外小胞の由来する間葉系幹細胞の種類によらず、顕著に高い抗線維化作用を有すること（【００９７】）が示されている。 さらに、本件発明の「抗線維化剤」については、「本発明が提供する抗線維化剤は、基本的には、ＭＳＣ由来の細胞外小胞から単離して得られた本発明に係る細胞外小胞を有効成分とするものであり、・・・製剤化されたものである」（【００６６】）ことが説明されている。 以上のような、本件特許明細書に開示される本件発明の技術的意義を踏まえれば、本件発明１の「抗線維化剤」において、その「有効成分」となる「ＰＳが細胞外小胞の膜表面に露出しており、Ｔｉｍタンパク質が上記ＰＳに対して特異的に結合することが可能な細胞外小胞」とは、「ＰＳに対して親和性を有する物質を用いて単離」された細胞外小胞の集団であって、従来の「超遠心法により取得された細胞外小胞」とは異なる特性及び構造を有する細胞外小胞の集団を意味するものであることは明らかである。 したがって、上記相違点２は実質的な相違点であり、本件発明１は甲１に記載された発明とはいえず、新規性を有する。 ウ 進歩性の判断 Ｔｉｍ４タンパク質などのＰＳに対する親和性を用いて、間葉系幹細胞等の細胞外小胞を単離する方法は、甲２０～甲２２（前記１（２０）～（２２））に記載されるように本件特許の優先日当時に公知の技術であった。 しかしながら、甲１には、「超遠心分離して得られたエクソソーム」に換えて、「ＰＳに対する親和性を用いて」単離した「ＰＳ陽性のエクソソーム」を用いることを示唆する記載はない。 かえって、甲１７及び甲１８（前記１（１７）及び（１８））に記載されるように、ＰＳ陽性の細胞外小胞には、医薬としての適用を想定した場合には有害事象の原因ともなる「血液凝固活性」及び「血栓形成性」があることも知られていた。 そうすると、積極的な動機付けのない甲１に記載される引用発明１において、有効成分となる「遠心分離して得られたエクソソーム」を、医薬としては有害事象の懸念がある「ＰＳに対する親和性を用いて」単離した「ＰＳ陽性のエクソソーム」に敢えて置換することは、当業者が容易に想到し得ないものである。 さらに、本件発明１は上記相違点２に係る構成を採用することにより、超遠心法により取得される引用発明１のエクソソームに比べて、顕著に高い抗線維化作用を発揮するものであり、このような本件発明１の構成により奏される効果は、甲１～甲２２のいずれからも予測し得ない顕著な効果である。 エ 申立人の主張について 申立人は、異議申立書（７１頁最終行～７２頁１５行）及び意見書（４頁５行～６頁５行）において、甲１７に示されるように、骨髄由来の細胞外小胞は、Ｔｉｍタンパク質を用いて濃縮するまでもなく、ＰＳを表出していることから、本件発明１において、細胞外小胞をＰＳアフィニティー法により得られたものに限定しない限り、本件発明１には、超遠心法により得られる細胞外小胞を含む抗線維化剤も含まれる旨の主張をしている。 しかしながら、前記１（１７）（甲１７－７）のグラフから明らかなとおり、全ての間葉系幹細胞由来の細胞外小胞がＰＳ膜表面に表出するものではなく、間葉系幹細胞の種類によって、ＰＳ陽性の細胞外小胞の割合も異なるものであるところ、たとえ、同じ間葉系幹細胞に由来する細胞外小胞であっても、ＰＳアフィニティー法により取得された集団と、超遠心法により取得された集団とは、別異の集団であって、甲１には、ＰＳ陽性細胞外小胞の割合の高い集団を使用することを動機づける記載乃至示唆はない。 他方、前記イにおいて説示したとおり、「従来の超遠心法により取得された細胞外小胞」は、「抗線維化作用」が「弱く、産業利用するには不十分である」という課題を解決するために、「より治療効果が高い細胞外小胞の集団」として、「ＰＳに対する親和性を有する物質を利用した方法（ＰＳアフィニティー法）により取得されたＰＳ陽性という特長を有する細胞外小胞の集団」を利用するという本件発明の技術的思想、並びに本件発明の「抗線維化剤」において「有効成分」となる「細胞外小胞」としては、ＰＳに対して親和性を有する物質を用いて「単離」されたものを用いることが、本件特許明細書全体において一貫して説明されていることを踏まえれば、本件発明１において、従来技術に相当する「超遠心法により得られる細胞外小胞を含む抗線維化剤も含まれる」と解釈される余地はない。 したがって、申立人の主張を採用することはできない。 オ 小括 以上のとおりであるから、本件発明１は、甲１に記載された発明ではなく、また、引用発明１並びに甲１～甲２２の記載に基づき、当業者が容易に発明をすることができたものではない。 （２）本件発明２～４について 本件発明２～４は、本件発明１の下位概念となる発明であり、少なくとも前記相違点２において引用発明１と相違するものである。 そして、相違点２についての判断は、前記（１）において説示したとおりである。 よって、本件発明２～４は、甲１に記載された発明ではなく、また、引用発明１並びに甲１～甲２２の記載に基づき、当業者が容易に発明をすることができたものではない。 ３ 甲２～甲１２を主引用例とした申立理由１（新規性）及び申立理由２（進歩性）についての判断 前記２（１）アにおける対比を踏まえて、本件発明１と引用発明２～１２を対比すると、本件発明１と引用発明２～１２とは、少なくとも前記相違点２において相違するものである。 また、本件発明１の下位概念となる本件発明２～４についても同様である。 そして、相違点２についての判断は、前記２（１）イ～オにおいて説示したとおりである。 したがって、本件発明１～４は、甲２～甲１０に記載された発明ではなく、また、引用発明２～９又は１０、並びに甲１～甲２２の記載に基づき、当業者が容易に発明をすることができたものではない。 また、本件発明１～４は、引用発明１１又は１２、並びに甲１～甲２２の記載に基づき、当業者が容易に発明をすることができたものではない。 ４ 甲２０を主引用例とした申立理由２（進歩性）についての判断 （１）本件発明１～４について ア 対比 本件発明１と引用発明２０Ａとを対比する。 本件発明１における「ＰＳが細胞外小胞の膜表面に露出しており、Ｔｉｍタンパク質が上記ＰＳに対して特異的に結合することが可能な細胞外小胞」とは、本件特許明細書【００２０】～【００２２】に説明されるように、Ｔｉｍ４タンパク質等を用いて単離することで取得される細胞外小胞であるから、引用発明２０Ａにおける「細胞由来の細胞外小胞からＴｉｍ４タンパク質を用いる方法により単離された細胞外小胞」は、本件発明１における上記「細胞外小胞」に相当する。 そうすると、本件発明１と引用発明２０Ａとは、「ＰＳが細胞外小胞の膜表面に露出しており、Ｔｉｍタンパク質が上記ＰＳに対して特異的に結合することが可能な細胞外小胞」である点で一致し、以下の点で相違する。 ＜相違点４Ａ＞ 「細胞外小胞」について、本件発明１では、その由来が「間葉系幹細胞」に特定され、その用途が「抗線維化剤」に特定されるものであるのに対し、引用発明２０Ａは、細胞外小胞の由来及び用途が特定されていない点。 イ 判断 上記相違点４Ａについて検討すると、遠心分離して得られた間葉系幹細胞由来の細胞外小胞を抗線維化剤とすることは、甲１～甲９（前記１（１）～（９））に記載されるように、本件特許の優先日当時における周知技術であった。 しかしながら、上記２（１）エで説示したとおり、たとえ、同じ間葉系幹細胞に由来する細胞外小胞であっても、ＰＳアフィニティー法により取得された集団と、超遠心法により取得された集団とは、別異の集団であり、甲１７及び甲１８（前記１（１７）及び（１８））に記載されるように、ＰＳ陽性の細胞外小胞には、医薬としての適用を想定した場合には有害事象の原因ともなる「血液凝固活性」及び「血栓形成性」があることが知られていたことから、引用発明２０Ａにおいて、上記相違点４Ａに係る構成を採用することには阻害要因があり、当業者が容易に想到し得たものとはいえない。 そして、本件発明１は、上記相違点４Ａに係る構成を採用することで、従来周知の超遠心法により得られた間葉系幹細胞由来の細胞外小胞を有効成分とする抗線維化剤に比べて、抗線維化活性が高まるという、引用発明２０Ａ及び甲１～甲２２の記載からは予測し得ない顕著な効果を奏するものである。 本件発明１の下位概念に当たる本件発明２～４についても、少なくとも前記相違点４Ａにおいて引用発明２０Ａと相違するものであり、その判断についても上述のとおりである。 ウ 小括 したがって、本件発明１～４は、引用発明２０Ａ、並びに甲１～甲２２の記載に基づき、当業者が容易に発明をすることができたものではない。 （２）本件発明５及び６について ア 対比 本件発明５と引用発明２０Ｂとを対比すると、引用発明２０Ｂにおける「Ｔｉｍ４タンパク質」は、本件発明５における「Ｔｉｍタンパク質」に相当する。 そうすると、両発明は、「細胞由来の細胞外小胞からＴｉｍタンパク質を用いる方法により細胞外小胞を得ることを含む、製造方法」である点で一致し、以下の点で相違する。 ＜相違点４Ｂ＞ 本件発明５では、「細胞外小胞」の由来が「間葉系幹細胞」に特定され、「抗線維化作用を有する細胞外小胞を有効成分とする抗線維化剤」を製造することが特定されているのに対し、引用発明２０Ｂでは、そのような特定がされていない点。 イ 判断 そして、上記相違点４Ｂは、前記第５の２（１）アで示した相違点１と同一の相違点であるから、その判断についても前記第５の２（１）イで説示したとおりである。 本件発明５の下位概念に当たる本件発明６についても、少なくとも前記相違点４Ｂにおいて引用発明２０Ｂと相違するものであり、その判断についても上述のとおりである。 ウ 小括 したがって、本件発明５及び６は、引用発明２０Ｂ及び甲１～甲２２の記載に基いて当業者が容易に発明をすることができたものではない。 ５ 甲２１を主引用例とした本件発明１～４に対する申立理由２（進歩性）についての判断 （１） 対比 本件発明１と引用発明２１Ａとを対比する。 本件発明１における「ＰＳが細胞外小胞の膜表面に露出しており、Ｔｉｍタンパク質が上記ＰＳに対して特異的に結合することが可能な細胞外小胞」とは、本件特許明細書【００２０】～【００２２】に説明されるように、Ｔｉｍ４タンパク質等を用いて単離することで取得される細胞外小胞であるから、引用発明２１Ａにおける「Ｔ細胞免疫グロブリン・ムチンドメイン含有分子４（Ｔｉｍ４）タンパク質、Ｔ細胞免疫グロブリン・ムチンドメイン含有分子３（Ｔｉｍ３）タンパク質、及びＴ細胞免疫グロブリン・ムチンドメイン含有分子１（Ｔｉｍ１）タンパク質から選ばれるタンパク質（Ｔｉｍタンパク質）が結合した担体（Ｔｉｍ担体）を用いて得られた細胞外小胞」は、本件発明１における上記「細胞外小胞」に相当する。 そうすると、本件発明１と引用発明２１Ａとは、「ＰＳが細胞外小胞の膜表面に露出しており、Ｔｉｍタンパク質が上記ＰＳに対して特異的に結合することが可能な細胞外小胞」である点で一致し、以下の点で相違する。 ＜相違点５＞ 本件発明１では、細胞外小胞の由来が「間葉系幹細胞」に特定され、「抗線維化剤」という医薬用途が特定されているのに対し、引用発明２１Ａは、細胞外小胞の由来及び医薬用途について特定がない点。 （２）判断 上記相違点５について検討すると、遠心分離して得られた間葉系幹細胞由来の細胞外小胞を抗線維化剤とすることは、甲１～甲９（前記１（１）～（９））に記載されるように、本件特許の優先日当時における周知技術であった。 しかしながら、上記２（１）エで説示したとおり、たとえ、同じ間葉系幹細胞に由来する細胞外小胞であっても、ＰＳアフィニティー法により取得された集団と、超遠心法により取得された集団とは、別異の集団であり、甲１７及び甲１８（前記１（１７）及び（１８））に記載されるように、ＰＳ陽性の細胞外小胞には、医薬としての適用を想定した場合には有害事象の原因ともなる「血液凝固活性」及び「血栓形成性」があることが知られていたことから、引用発明２１Ａにおいて、上記相違点５に係る構成を採用することには阻害要因があり、当業者が容易に想到し得たものとはいえない。 そして、本件発明１は、上記相違点５に係る構成を採用することで、従来周知の超遠心法により得られた間葉系幹細胞由来の細胞外小胞を有効成分とする抗線維化剤に比べて、抗線維化活性が高まるという、引用発明２１Ａ及び甲１～甲２２の記載からは予測し得ない顕著な効果を奏するものである。 本件発明１の下位概念に当たる本件発明２～４についても、少なくとも前記相違点５において引用発明２１Ａと相違するものであり、その判断についても上述のとおりである。 （３）小括 したがって、本件発明１～４は、引用発明２１Ａ、並びに甲１～甲２２の記載に基づき、当業者が容易に発明をすることができたものではない。 ６ 甲２２を主引用例とした申立理由２（進歩性）についての判断 （１）本件発明１～４について ア 対比 前記第５の２（１）アの対比を踏まえて、本件発明１と引用発明２２Ａとを対比すると、引用発明２２Ａにおける「間葉系幹細胞由来のエクソソーム」は、本件発明１における「間葉系幹細胞に由来する細胞外小胞」に相当する。 また、前記４（１）の対比を踏まえると、引用発明２２Ａにおける「ＰＳアフィニティー法を用いて分離されたエクソソーム」は、本件発明１における「ＰＳが細胞外小胞の膜表面に露出しており、Ｔｉｍタンパク質が上記ＰＳに対して特異的に結合することが可能な細胞外小胞」に相当する。 よって、本件発明１と引用発明２２Ａとは、「間葉系幹細胞に由来する細胞外小胞であって、ＰＳが細胞外小胞の膜表面に露出しており、Ｔｉｍタンパク質が上記ＰＳに対して特異的に結合することが可能な細胞外小胞を有効成分とする製剤」において一致し、以下の点で相違する。 ＜相違点６Ａ＞ 本件発明１では、「抗線維化剤」であるのに対し、引用発明２２Ａでは、「製剤」の用途が特定されていない点。 イ 判断 上記相違点６Ａについて検討すると、甲１７及び甲１８（前記１（１７）及び（１８））に記載されるように、ＰＳ陽性の細胞外小胞には、医薬としては有害事象の原因ともなる「血液凝固活性」及び「血栓形成性」があることが知られていたことから、引用発明２２Ａにおいて、上記相違点６Ａに係る構成を採用することには阻害要因があり、当業者が容易に想到し得たものとはいえない。 そして、本件発明１は、「ＰＳが細胞外小胞の膜表面に露出しており、Ｔｉｍタンパク質が上記ＰＳに対して特異的に結合することが可能な細胞外小胞」を「抗線維化剤」として用いた場合に、従来周知の超遠心法により得られた間葉系幹細胞由来の細胞外小胞に比べて抗線維化活性が高まるという、引用発明２２Ａ及び甲１～甲２２の記載からは予測し得ない顕著な効果を奏するものである。 本件発明１の下位概念に当たる本件発明２～４についても、少なくとも前記相違点６Ａにおいて引用発明２２Ａと相違するものであり、その判断についても上述のとおりである。 ウ 小括 したがって、本件発明１～４は、引用発明２２Ａ、並びに甲１～甲２２の記載に基づき、当業者が容易に発明をすることができたものではない。 （２）本件発明５及び６について ア 対比 前記第５の２（１）アの対比を踏まえて、本件発明５と引用発明２２Ｂとを対比すると、引用発明２２Ｂにおける「間葉系幹細胞由来のエクソソーム」は、本件発明５における「間葉系幹細胞に由来する細胞外小胞」に相当する。 また、本件特許明細書【００２０】～【００２２】には、「Ｔｉｍタンパク質」は「ＰＳに対する親和性を有する物質」としてＰＳアフィニティー法に使用できることが説明されているから、引用発明２２Ｂにおける「ＰＳアフィニテイー法によりエクソソームを分離すること」と、本件発明５における「Ｔｉｍタンパク質を用いる方法により細胞外小胞を得ること」とは、いずれも「ＰＳアフィニテイー法」で「細胞外小胞を得る」限りにおいて一致する。 そうすると、本件発明５と引用発明２２Ｂとは、「間葉系幹細胞由来の細胞外小胞からＰＳアフィニテイー法により細胞外小胞を得ることを含む、細胞外小胞を含む製剤の製造方法」で一致し、以下の点で相違する。 ＜相違点６Ｂ＞ 本件発明５では、「抗線維化作用を有する」「細胞外小胞を有効成分とする抗線維化剤」を製造するのに対し、引用発明２２Ｂではそのように特定されていない点。 ＜相違点６Ｃ＞ 本件発明５では、ＰＳに対する親和性を有する物質として、「Ｔｉｍタンパク質」を用いることが特定されているのに対し、引用発明２２Ｂではそのように特定されていない点。 イ 判断 上記相違点について検討すると、相違点６Ｂについては、前記（１）イにおいて相違点６Ａについて説示したと同様の理由により、引用発明２２Ｂにおいて、上記相違点６Ｂに係る構成を採用することには阻害要因があるから、相違点６Ｃについて検討するまでもなく、本件発明５は、当業者が容易に想到し得たものとはいえない。 そして、本件発明５の製造方法により製造された「抗線維化剤」は、従来周知の遠心分離して得られた間葉系幹細胞由来の細胞外小胞を有効成分とする抗線維化剤に比べて抗線維化活性が高まるという、引用発明２２Ｂ及び甲１～甲２２の記載からは予測し得ない顕著な効果を奏するものである。 本件発明５の下位概念に当たる本件発明６についても、少なくとも前記相違点６Ｂにおいて引用発明２２Ｂと相違するものであり、その判断についても上述のとおりである。 ウ 小括 したがって、本件発明５及び６は、引用発明２２Ｂ、並びに甲１～甲２２の記載に基づき、当業者が容易に発明をすることができたものではない。 第７ むすび 以上のとおりであるから、取消理由通知書で通知された取消理由及び特許異議申立書に記載された特許異議の申立ての理由によって、本件訂正後の請求項１～６に係る特許を取り消すことはできない。 よって、結論のとおり決定する。