2022-020770

特願２０２０－１６６０１０「癌の免疫療法」拒絶査定不服審判事件〔令和 ３年 ２月１８日出願公開、特開２０２１－ １９６０８〕について、次のとおり審決する。

結 論 本件審判の請求は、成り立たない。

理 由 第１ 手続の経緯 本願は、平成２６年１２月２日（パリ条約による優先権主張 ２０１３年１２月２日 （ＵＳ）アメリカ合衆国）を国際出願日とする特願２０１６－５３６７６９号の出願の一部を、令和２年９月３０日に新たな特許出願したものであって、その主な手続の経緯は以下のとおりである。 令和 ４年 ８月１８日付け：拒絶査定 同年１２月２２日 ：審判請求書及び手続補正書の提出 令和 ５年 ２月 ６日 ：審判請求書の手続補正書（方式）の提出 令和 ６年 ８月２７日付け：拒絶理由通知 令和 ７年 ２月２７日 ：意見書及び手続補正書の提出 第２ 本願発明 本願の請求項に係る発明は、令和７年２月２７日提出の手続補正によって補正された特許請求の範囲における請求項１～２２に記載された事項により特定されるものと認められるところ、その請求項１に係る発明（以下、「本願発明」という。）は、以下のとおりのものである。 「 【請求項１】 ＨＡＶＣＲ２の発現を抑制することができるｓｄＲＮＡを含む免疫調節因子であって、ここで該ｓｄＲＮＡが、ガイド鎖およびパッセンジャー鎖を含み、ここで該ガイド鎖が、１９～２５ヌクレオチド長であり、および該パッセンジャー鎖が、１０～１９ヌクレオチド長であり、ここで該ｓｄＲＮＡが、二本鎖領域および一本鎖領域を含み、ここで該一本鎖領域が、５～９ホスホロチオエート修飾を含み、ここで該ｓｄＲＮＡが、化学修飾されており、少なくとも１つの２’－Ｏ－メチル修飾、または少なくとも１つの２’－Ｏ－フルオロ修飾を含み、ここで該ｓｄＲＮＡが、ＨＡＶＣＲ２の発現を抑制することができ、およびここで該ｓｄＲＮＡが、配列番号３６３を標的とする、前記免疫調節因子。」 （下線は、令和７年２月２７日の手続補正において、補正箇所として請求人が付したものである。） 第３ 拒絶の理由の概要 令和６年８月２７日付けの拒絶理由通知書で当審が通知した拒絶理由は、概略、次のとおりのものである。 理由１．（サポート要件） 本願明細書の発明の詳細な説明において、配列番号３６３を標的配列とするｓｄＲＮＡが送達作用物質を必要とせずにＴ細胞等の免疫療法用細胞に取り込まれてＨＡＶＣＲ２遺伝子の発現を抑制することについて、当業者が理解できるように記載されているとはいえないから、請求項１～２３に係る発明は、発明の詳細な説明に記載されたものであるとはいえず、特許法第３６条第６項第１号に規定する要件を満たしていない。 理由２．（実施可能要件） 過度の試行錯誤を要することなく、配列番号３６３を標的配列とするｓｄＲＮＡについて、送達作用物質必要とせずにＴ細胞等の免疫療法用細胞に取り込まれてＨＡＶＣＲ２遺伝子の発現を抑制するように当業者が使用できる程度に、発明の詳細な説明が明確かつ十分に記載されているとはいえないから、この出願は、発明の詳細な説明の記載が、特許法第３６条第４項第１号に規定する要件を満たしていない。 第４ 本願明細書等の記載 願書に添付した明細書及び図面（以下「本願明細書等」という。）には、以下の記載がある（下線は当審が付与した。）。 本ア 【００１９】～【００２１】 「【００１９】 上記の観点から、チェックポイント阻害剤におけるこれまでに報告されている多臓器系の有害な炎症事象の危険がなく、チェックポイント阻害剤及び他のクラスの腫瘍崩壊剤と組み合わせて使用することができる新たな癌治療剤が必要とされている。腫瘍又は感染疾患耐性機構と関連した遺伝子を標的とするオリゴヌクレオチド作用物質を組み合わせて細胞を処理することによって調製された本発明の免疫療法用細胞、このような治療用細胞を作製する方法、及び作製された治療用細胞を用いて疾患を治療する方法は、この長い間望まれていた必要性を満たすものである。 【先行技術文献】 ・・・ 【発明が解決しようとする課題】 【００２１】 細胞増殖性障害及び感染性疾患に対する免疫療法アプローチの有効性を、これらのアプローチと免疫チェックポイントの遮断剤とを組み合わせることにより増大させることができる。癌ワクチンと他の免疫治療剤とチェックポイント阻害剤との間の多くの相乗効果により、併用アプローチが細胞増殖性障害及び免疫疾患における臨床転帰を有意に改善させることができる機会が得られる。」 本イ 【００２５】 「修飾のための本明細書にて同定される標的遺伝子としては、細胞傷害性Ｔ細胞抗原４（ＣＴＬＡ４）、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ１）、腫瘍成長因子受容体ベータ（ＴＧＦＲ－ベータ）、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３及びアデノシンＡ２ａ受容体；・・・（略）・・・、及び同様の遺伝子、並びにそれらの組合せが挙げられる。代表的な標的配列を表１に挙げる。」 本ウ 【００３８】 「最も好ましくは、オリゴヌクレオチド作用物質は自己送達性ＲＮＡｉ作用物質であり、これは疎水性に修飾されたｓｉＲＮＡ－アンチセンスハイブリッド分子であり、該分子はセンス及びアンチセンス鎖のそれぞれの３’末端にオーバーハングを含む又は含まない、約１３塩基対～２２塩基対の二本鎖領域と、約２ヌクレオチド～９ヌクレオチドのアンチセンス鎖の３’末端に一本鎖の尾部とを含む。オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの２’－Ｏ－メチル修飾物、少なくとも１つの２’－Ｏ－フルオロ修飾物、及び少なくとも１つのホスホロチオエート修飾物、並びにステロール、コレステロール、ビタミンＤ、ナフチル、イソブチル、ベンジル、インドール、トリプトファン、フェニル等の疎水性調節因子（図１を参照）から選択される少なくとも１つの疎水性修飾物を含有する。オリゴヌクレオチドは複数のこのような修飾物を含有することができる。」 本エ 【００４３】 「本明細書において使用される場合、腫瘍関連免疫耐性遺伝子は免疫応答のチェックポイント阻害に関与する遺伝子、例えばＣＴＬＡ－４及びＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１；ＴＧＦ－ベータ、ＬＡＧ３、Ｔｉｍ３、アデノシンＡ２ａ受容体を含む。」 本オ 【００５９】 「本明細書において使用される場合、標的遺伝子は、免疫耐性機構に関与する遺伝子の発現を調節するとして知られる又は同定される遺伝子を含み、抑制性受容体等の遺伝子のいくつかのグループ、例えば、ＣＴＬＡ４及びＰＤ１；免疫細胞を不活性化させるサイトカイン受容体、例えばＴＧＦ－ベータ受容体、ＬＡＧ３、Ｔｉｍ３、アデノシンＡ２ａ受容体、及びＩＬ１０受容体；調節遺伝子、例えばＳＴＡＴ３、ｐ３８、ｍｉｒ１５５、及びｍｉｒ１４６ａ；並びに細胞死につながるカスケードに関与するアポトーシス因子、例えばＰ５３、Ｃａｓｐ８、ＢＡＸ、ＢＡＣ、及びそれらの組合せの１つであってよい。表１に挙げた好ましい標的遺伝子も参照されたい。」 本カ 【００６１】 「本明細書において使用される場合、ｓｄＲＮＡは、非対称な二本鎖ＲＮＡ－アンチセンスオリゴヌクレオチドハイブリッドとして形成される「自己送達性」ＲＮＡｉ作用物質を指す。二本鎖ＲＮＡは、約１９ヌクレオチド～２５ヌクレオチドのガイド（センス）鎖及び約１０ヌクレオチド～１９ヌクレオチドのパッセンジャー（アンチセンス）鎖を含み、この二本鎖形成により約５ヌクレオチド～９ヌクレオチドの一本鎖のホスホロチオエート化された尾部が生じる。」 本キ 【００６６】 「ｓｄＲＮＡ（自己送達性）は、細胞に取り込ませるための送達ビークルを必要とせず、従来のｓｉＲＮＡと比べ薬理学的に改良された、新しいクラスの共有結合により修飾したＲＮＡｉ化合物である。「自己送達性ＲＮＡ」、すなわちｓｄＲＮＡは疎水性に修飾されたＲＮＡ干渉－アンチセンスハイブリッドであり、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの初代細胞において、及びｉｎ ｖｉｖｏでの局所投与時に高い効果を示している。毒性のない堅固な取り込み及び／又はサイレンシングが、真膚、筋肉、腫瘍、肺胞マクロファージ、脊髄、並びに網膜細胞及び網膜組織を含むいくつかの組織において明示されている。真膚層及び網膜において、ｓｄＲＮＡのｍｇ用量での皮内及び硝子体内注射は強力な長時間のサイレンシングを誘導した。」 本ク 【００６７】～【００６９】 「【００６７】 ｓｄＲＮＡは優れた機能的ゲノミクスツールであり、初代細胞及びｉｎ ｖｉｖｏでのＲＮＡｉを可能にするが、従来のｓｉＲＮＡに比べ比較的ヒット率が低い。１つの遺伝子に対して多くの配列をスクリーニングする必要があり、これが治療用途に対する制限因子とはならないが、ｓｄＲＮＡ技術の機能的ゲノミクスへの応用に対してかなりの制約となり、何千の遺伝子に対する費用効率のよい化合物選択が必要となる。ｓｄＲＮＡ構造、化学特性、標的位置、配列選択等を最適化するため、独自のアルゴリズムを開発し、ｓｄＲＮＡ潜在性の予測に利用している。ｅｘ ｖｉｖｏ及びｉｎ ｖｉｖｏにて全ての細胞型に活性であるｓｄＲＮＡ試薬の利用可能性が、機能的ゲノミクス及び標的層化／検証研究を可能にする。 【００６８】 独自のアルゴリズム ｓｄＲＮＡ配列を、ＨｅＬａ細胞のルシフェラーゼレポーターアッセイにおける５００個を超えるｓｄＲＮＡ配列の機能的スクリーニングに基づき設計された独自の選択アルゴリズムを元に選択した。その回帰分析を使用し、遺伝子抑制アッセイにおいて、ｓｄＲＮＡ二本鎖の特異的ヌクレオチドの発生頻度と任意の特定位置での修飾との相関及びその機能性について確立した。このアルゴリズムにより機能的ｓｄＲＮＡ配列の予測が可能になり、４０％を超える確率で１μＭ濃度にて７０％を超えるノックダウンと規定される。 【００６９】 表１は独自のアルゴリズムを用いて同定され、細胞免疫療法の組成物及び本明細書に記載の方法に有用である予測遺伝子標的を示す。」 本ケ 【００７２】～【００７３】及び図１ 「【００７２】 ｓｄＲＮＡ分子の一般的な構造を図１に示す。ｓｄＲＮＡは疎水性に修飾されたｓｉＲＮＡ－アンチセンスオリゴヌクレオチドハイブリッド構造体として形成され、例えばByrne他、Dec. 2013, J. Ocular Pharmacology and Therapeutics, 29(10): 855-864に開示されている。 【００７３】 オリゴヌクレオチド修飾物：２’－Ｏ－メチル、２’－Ｏ－フルオロ、ホスホロチオエート オリゴヌクレオチド作用物質は、治療剤の安定性及び／又は有効性を増大させ、治療する細胞又は組織へのオリゴヌクレオチドの効率的な送達を行うために１つ又は複数の修飾物を含むことが好ましい。このような修飾物は少なくとも１つのＢＴＬＡ（Ｂ及びＴリンパ球アテニュエーター）、ＫＩＲ（キラー免疫グロブリン様受容体）、Ｂ７－Ｈ３受容体及びＢ７－Ｈ４受容体並びにＴＧＦ－ベータ２型受容体；ＢＴＬＡ（Ｂ及びＴリンパ球アテニュエーター）、ＫＩＲ（キラー免疫グロブリン様受容体）、Ｂ７－Ｈ３受容体及びＢ７－Ｈ４受容体並びにＴＧＦ－ベータ２型受容体；２’－Ｏ－メチル修飾物、少なくとも１つの２’－Ｏ－フルオロ修飾物及び少なくとも１つのジホスホロチオエート修飾物を含む。さらに、オリゴヌクレオチドをステロール、コレステロール、ビタミンＤ、ナフチル、イソブチル、ベンジル、インドール、トリプトファン、及びフェニルから選択される１つ又は複数の疎水性修飾物を含むよう修飾する。疎水性修飾物はステロールが好ましい。」 「 ［図：0001427071000001.jpg］ 」 本コ 【００７４】 「オリゴヌクレオチド作用物質の細胞への送達 オリゴヌクレオチドを好ましくは脂質、ウイルスベクター等を含む膜貫通送達系と組み合わせて細胞に送達することができる。最も好ましくは、オリゴヌクレオチド作用物質は自己送達ＲＮＡｉ作用物質であり、いかなる送達作用物質も必要としない。」 本サ 【００７５】～【００７６】 「【００７５】 併用療法 本発明において、例えば特定の要件のための要素及び／又は代替物の特定の組合せが最も好ましい。この目的は、免疫抑制遺伝子をサイレンシングするためにオリゴヌクレオチドの標的とするのに適切な遺伝子を決定し、独自のアルゴリズムを使用し、最も適切な標的配列を選択することにより実現される。 【００７６】 免疫療法用細胞は、免疫抑制に関与し、選択された標的疾患及び遺伝子に適切な種々の遺伝子を標的とする多数のオリゴヌクレオチド作用物質を含むよう修飾されることが好ましい。例えば、好ましい免疫療法の細胞はＣＴＬＡ－４とＰＤ－１との両方をノックダウンするよう修飾されたＴ細胞である。」 本シ 【００８２】～【００８４】（実施例１） 「【００８２】 実施例１ 自己送達性ＲＮＡｉ免疫治療剤 本明細書に記載の免疫治療剤を、免疫抑制機構に関与する特定の遺伝子を標的とし、ノックダウンするよう設計された特定のｓｄＲＮＡ作用物質で細胞を処理することにより作製した。特に、以下の細胞及び細胞株をｓｄＲＮＡで処理することに成功し、特定のヒト細胞の標的となる遺伝子発現の少なくとも７０％をノックダウンすることが示された。 【００８３】 これらの試験は、これらの免疫原性作用物質をトランスフェクションに対して正常なかなり耐性の高い細胞の標的遺伝子の発現を抑制することに利用されることを明示し、作用物質が任意の細胞型の標的細胞の発現を減少させることができることを示唆する。 【００８４】 【表１】 ［図：0001427071000002.jpg］ 」 本ス 【００８５】～【００８６】（実施例２） 「【００８５】 実施例２ 標的遺伝子の発現を阻害するオリゴヌクレオチド配列 以下の遺伝子を含む多くのヒト遺伝子を免疫抑制機構に関与することから、候補標的遺伝子として選択した。ＢＡＸ（ＮＭ＿００４３２４） ＢＡＫ１（ＮＭ＿００１ １８８） ＣＡＳＰ８（ＮＭ＿００１２２８） ＡＤＯＲＡ２Ａ（ＮＭ＿０００６７５） ＣＴＬＡ４（ＮＭ＿００５２１４） ＬＡＧ３（ＮＭ００２２８６） ＰＤＣＤ１（ＮＭ＿ＮＭ００５０１８） ＴＧＦＢＲ１（ＮＭ－００４６１２） ＨＡＶＣＲ２（ＮＭ＿０３２７８２） ＣＣＬ１７（ＮＭ＿００２９８７） ＣＣＬ２２（ＮＭ＿００２９９０） ＤＬＬ２（ＮＭ＿００５６１８） ＦＡＳＬＧ（ＮＭ＿０００６３９） ＣＤ２７４（ＮＭ＿００１２６７７０６） ＩＤＯ１（ＮＭ＿００２１６４） ＩＬ１０ＲＡ（ＮＭ＿００１５５８） ＪＡＧ １（ＮＭ＿０００２１４） ＪＡＧ２（ＮＭ＿００２２２６） ＭＡＰＫ１４（ＮＭ＿００１３１５） ＳＯＣＳ１（ＮＭ＿００３７４５） ＳＴＡＴ３（ＮＭ＿００３１５０） ＴＮＦＡ１Ｐ３（ＮＭ ００６２９０） ＴＮＦＳＦ４（ＮＭ ００３３２６） ＴＹＲ０２（ＮＭ＿００６２９３） ＴＰ５３（ＮＭ＿０００５４６） 【００８６】 上記に挙げた遺伝子のそれぞれを独自のアルゴリズムを用いて分析し、抗原提示細胞及びＴ細胞の免疫抑制を阻止する各遺伝子の配列及び標的領域を標的とする好ましいｓｄＲＮＡを同定した。結果を表１に示す。」 本セ 【００８７】～【００９４】及び図２（実施例３） 「【００８７】 実施例３ ＨｅＬａ細胞のｓｄＲＮＡによる標的遺伝子（ＧＡＰＤＨ）のノックダウン ＨｅＬａ細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＭ－ＣＣＬ－２）を２４時間、継代培養した後にトランスフェクションし、対数増殖期を維持した。表１に挙げるＧ１３のｓｄＲＮＡを含む数種のＧＡＰＤＨのｓｄＲＮＡの有効性をｑＲＴ－ＰＣＲにより試験した。 【００８８】 必要とする濃度の２倍のＧＡＰＤＨ、ＭＡＰ４Ｋ４（陽性対照）及びＮＴＣ（非標的対照）のｓｄＲＮＡの溶液を血清非含有ＥＭＥＭ培地において、１００μＭのオリゴヌクレオチドを０．２μＭ～４μＭに希釈することにより調製した。 ・・・ 【００９４】 ＧＡＰＤＨ遺伝子発現をｑＰＣＲにより測定し、ＭＡＰ４Ｋ４に対して正規化し、非標的ｓｄＲＮＡの存在下において発現の割合としてプロットした。その結果を標準曲線に従い正規化したものと比較した。図２に示されるように、ＧＡＰＤＨ又はＭＡＰ４Ｋ４を標的とするいくつかのｓｄＲＮＡ作用物質は有意にｍＲＮＡレベルを減少させ、１μＭのｓｄＲＮＡにおいて８０％～９０％超のノックダウンを生じた（図２を参照のこと）。」 「 ［図：0001427071000003.jpg］ 」 本ソ 【００９５】～【０１００】及び図３（実施例４） 「【００９５】 実施例４ ＮＫ－９２細胞のｓｄＲＮＡによる多重標的のサイレンシング ・・・ 【００９６】 ＭＡＰ４Ｋ４、ＰＰＩＢ又はＧＡＤＰＨを標的とする多数のｓｄＲＮＡ作用物質を血清非含有ＲＰＭＩ培地において個別に４μＭに希釈し、５０μｌ／ウェルにて個々に９６ウェルプレートに分取した。次いで調製された細胞を５０μｌの細胞／ウェルにてＭＡＰ４Ｋ４、ＰＰＩＢ又はＧＡＰＤＨのｓｄＲＮＡのいずれかを含むウェルに添加した。細胞を２４時間、４８時間、又は７２時間インキュベーションした。 ・・・ 【０１００】 図３に示す結果は、ＮＫ－９２細胞にトランスフェクションさせたｓｄＲＮＡ作用物質による、多重標的であるＭＡＰ４Ｋ４、ＰＰＩＢ、及びＧＡＤＰＨのそれぞれの、２４時間～７２時間のインキュベーションにおいて各標的の発現の７５％を超える阻害を含む有意なサイレンシングを明示している。」 「 ［図：0001427071000004.jpg］ 」 本タ 【０１０１】～【０１０４】及び図４（実施例５） 「【０１０１】 実施例５ ヒト初代Ｔ細胞のｓｄＲＮＡによるＴＰ５３及びＭＡＰ４Ｋ４のサイレンシング ・・・ 【０１０２】 ＴＰ５３又はＭＡＰ４Ｋ４を標的とするｓｄＲＮＡ作用物質を１サンプル（ウェル）当たり血清非含有ＲＰＭＩにおいて、ｓｄＲＮＡを０．２μＭ～４μＭに個別に希釈することにより調製して、１００μｌ／ウェルにて９６ウェルプレートに個々に分取した。細胞を４％ＦＢＳ及び２０００Ｕ／ｍｌのＩＬ２を含有するＲＰＭＩ培地において１００００００細胞／ｍｌにて調製し、１００μｌ／ウェルにて予め希釈したｓｄＲＮＡを含む９６ウェルプレートに播種した。 ・・・ 【０１０４】 図４に示す結果は、Ｔ細胞にトランスフェクションさせたｓｄＲＮＡ作用物質による、ＭＡＰ４Ｋ４及びＴＰ５３の両方の、１μＭ～２μＭのｓｄＲＮＡによる遺伝子発現の７０％～８０％の阻害に達する有意なサイレンシングを明示している。」 「 ［図：0001427071000005.jpg］ 」 本チ 【０１０５】～【０１１０】（実施例６～８） 「 【０１０５】 実施例６ 黒色腫を治療するためのｓｄＲＮＡの免疫治療剤の併用 黒色腫はＴ細胞の免疫機能を抑制するため少なくとも２つの特定の経路を利用し、そのそれぞれがＰＤ１及びＣＴＬＡ４の両方を含む。ＰＤ１リガンドであるＰＤ１Ｌを発現する黒色腫腫瘍は、ＰＤ１を標的とするよう特異的に設計され、ＰＤ１発現を干渉するｓｄ－ＲＮＡｉ作用物質を用いてｅｘ－ｖｉｖｏにて前処理されたＴ細胞の標的とすることができる。ＰＤ１はＰＤＣＤ１としても知られ、ｓｄＲＮＡ介在性抑制において特に機能されると同定され、予測される特定の標的配列及び遺伝子領域をＰＤＣＤ１（ＮＭ＿００５０１８）及びＣＴＬＡ４（ＮＭ００５２１４）として表１に示す。 【０１０６】 黒色腫腫瘍の治療は、黒色腫細胞に、Ｔ細胞、例えばＰＤ１／ＰＤＣＤ１及びＣＴＬＡ４を標的とし、例えばＰＤ１／ＰＤＣＤ１及び／又はＣＴＬＡ４として挙げた２０個の標的配列の１つ又は複数を標的とするｓｄＲＮＡを組み合わせてｅｘ－ｖｉｖｏにて前処理した腫瘍浸潤リンパ球を投入することによって行うことができる。ＰＤ１／ＰＤＣＤ１及びＦＡＳＬＧ（ＮＭ＿０００６３９）及び／又はＣＴＬＡ４を標的とするｓｄＲＮＡの組合せは、ＰＤ１Ｌ及びＦＡＳの両方を発現する腫瘍内のＴ細胞傷害性を増大させ得る。 【０１０７】 抗ＣＴＬＡ－４及び抗ＰＤ１のｓｄＲＮＡに加えて、及びそれらと組み合わせて、黒色腫の免疫療法に使用するＴ細胞を腫瘍による免疫抑制を示す他の遺伝子を標的とするｓｄＲＮＡで処理することもできる。これらの受容体は、ＴＧＦ－ベータ１型及び２型受容体、ＢＴＬＡ（黒色腫細胞で発現されるヘルペスウイルスエントリインディケーター（ＨＶＥＭ）の結合因子）、並びに骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）により発現するインテグリンの受容体、例えばＣＤ１１ｂ、ＣＤ１８、及びＣＤ２９を含むが、それらに限定されない。 【０１０８】 発現した抑制タンパク質のプロファイルが未知である腫瘍に対して、ＰＤ１／ＰＤＣＤ１を標的とするｓｄＲＮＡと既知の抑制性受容体のいずれか１つとの任意の組合せは、免疫抑制の減少及び治療有効性の増大に役立てることができる。 【０１０９】 実施例７ 免疫細胞抑制を緩和するｓｄＲＮＡの組合せ Ｔ細胞又は樹状細胞抑制を、種々のサイトカイン、例えばＩＬ１０及び／又はＴＧＦ－ベータにより調節することができる。Ｔ細胞及び樹状細胞の対応する受容体の抑制は、サイトカインの活性に利点を有し得る。例えば、抗ＰＤ１と抗ＩＬ１０ＲのｓｄＲＮＡとを組み合わせることは、抗ＰＤ１のみと比べ、サイトカインにより誘導されるＴ細胞及び樹状細胞の抑制を緩和することが期待される。 【０１１０】 実施例８ 免疫細胞抑制を緩和するｓｄＲＮＡの組合せ 免疫細胞の腫瘍抑制の機構が知られていない可能性があるとき、アポトーシス（プログラム細胞死）に関与する遺伝子、例えばｐ５３、Ｃａｓｐ８、又はアポトーシスを活性化させる他の遺伝子を抑制するためにｓｄＲＮＡ作用物質を使用することは、免疫細胞の活性を増大させる利点を有し得る。抗受容体ｓｄＲＮＡとアポトーシス促進遺伝子に対するｓｄＲＮＡとの組合せは、更に免疫細胞の死を減少させるため、それらの活性を増大させることができる。例えば、抗ＰＤ１と抗ｐ５３のｓｄＲＮＡとの組合せは更に、アポトーシスの活性を阻害することによって抑制からＴ細胞を保護することができる。」 本ツ 【０１１１】～【０１１３】及び図５（実施例９） 「【０１１１】 実施例９ ヒト初代Ｔ細胞のｓｄＲＮＡによるＣＴＬＡ－４及びＰＤＣＤ１のサイレンシング 本質的に実施例５に記載のように、初代ヒトＴ細胞を培養し、活性化させた。ＰＤＣＤ１及びＣＴＬＡ－４を標的とするｓｄＲＮＡ作用物質を１サンプル（ウェル）当たり血清非含有ＲＰＭＩにおいて、ｓｄＲＮＡを０．４μＭ～４μＭに個別に希釈することにより調製して、１００μｌ／ウェルにて９６ウェルプレートに個々に分取した。細胞を４％ＦＢＳ及び２０００Ｕ／ｍｌのＩＬ２を含有するＲＰＭＩ培地において１００００００細胞／ｍｌにて調製し、１００μｌ／ウェルにて予め希釈したｓｄＲＮＡを含む９６ウェルプレートに播種した。 ・・・ 【０１１３】 図５に示す結果は、Ｔ細胞に送達されたｓｄＲＮＡ作用物質の組合せを使用することにより２μＭのｓｄＲＮＡで遺伝子発現の６０％～７０％を超える阻害が得られ、ＰＤＣＤ１及びＣＴＬＡ－４の有意なサイレンシングを明示している。」 「 ［図：0001427071000006.jpg］ 」 本テ 【０１１４】～【０１１９】及び図６（実施例１０） 「【０１１４】 実施例１０ ヒト初代Ｔ細胞のｓｄＲＮＡによるＣＴＬＡ－４及びＰＤＣＤ１表面の発現の減少 本質的に実施例５に記載のように、初代ヒトＴ細胞を培養し、活性化させた。 【０１１５】 ＣＴＬＡ－４又はＰＤ１を標的とするｓｄＲＮＡ作用物質を１サンプル（ウェル）当たり血清非含有ＲＰＭＩにおいて、５μＭに個別に希釈し、２５０μｌ／ウェルにて２４ウェルプレートに分取した。磁性ビーズと混合させた細胞を回収し、４％ＦＢＳ及び２０００ＩＵ／ｍｌのＩＬ２を含有する２５０μｌのＲＰＭＩ培地において５０００００個の細胞に調節した。予め希釈したｓｄＲＮＡを含有して調製したプレートに細胞を２５０μｌ／ウェルにて播種した。２４時間後、ＦＢＳを細胞に添加し、１０％の最終濃度を得た。 ・・・ 【０１１９】 図６に示されるように、ｓｄＲＮＡは、活性化したヒト初代Ｔ細胞におけるＣＴＬＡ－４及びＰＤ１の表面発現を効率的に減少させた。」 「 ［図：0001427071000007.jpg］ 」 本ト 【０１２０】～【０１２４】及び図７（実施例１１） 「【０１２０】 実施例１１ ＭＡＰ４Ｋ４のｓｄＲＮＡのヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）のＣＤ３－及びＣＤ１９－陽性部分集合体への送達 ・・・ 【０１２１】 ｃｙ３を用いて標識したＭＡＰ４Ｋ４のｓｄＲＮＡを０．１μＭの最終濃度となるように細胞に添加した。７２時間のインキュベーション後、トランスフェクションさせた細胞を回収し、ＰＢＳを用いて洗浄し、遠沈し、ブロック緩衝液（３％ＢＳＡを含むＰＢＳ）に２０００００細胞／５０μｌ／サンプルにて希釈した。 ・・・ 【０１２４】 図７は、ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）におけるＣＤ３陽性（ｔ細胞）の９７％超及びＣＤ１９陽性（Ｂ細胞）の９８％超の部分集合体の効率的なトランスフェクションを示す。」 「 ［図：0001427071000008.jpg］ 」 本ナ 【０１３３】（表１の一部） 「 ［図：0001427071000009.jpg］ 」 本ニ 【０１４９】（表１の一部） 「 ［図：0001427071000010.jpg］ 」 第５ 当審の判断 １．理由１（サポート要件）について （１）本願発明が解決しようとする課題 本願明細書の発明の詳細な説明の記載（特に、本ア）によれば、本願発明は、「細胞増殖性障害及び感染性疾患に対する免疫療法アプローチの有効性を、これらのアプローチと免疫チェックポイントの遮断剤とを組み合わせることにより増大させることがきる」ような「腫瘍又は感染疾患耐性機構と関連した遺伝子を標的とするオリゴヌクレオチド作用物質」を提供することを課題とするものである。 本願発明は、「ＨＡＶＣＲ２の発現を抑制することができるｓｄＲＮＡ」を含む「免疫調節因子」であるが、「ＨＡＶＣＲ２」（別名ＴＩＭ３、Ｔｉｍ３）は、免疫応答のチェックポイント阻害、すなわち、免疫抑制機構に関与する遺伝子であって（本イ、本エ、本オ、本シ）、アクセッション番号がＮＭ＿０３２７８２（本ス、本ナ）であることに照らすと、そのｍＲＮＡは２２３７ヌクレオチド長である。発明の詳細な説明（本サ）の記載に照らせば、免疫療法アプローチに用いるＴ細胞等の免疫療法用細胞においてＨＡＶＣＲ２遺伝子の発現を抑制することが、上記課題における「免疫療法アプローチ」と「免疫チェックポイントの遮断剤」とを組み合わせることに相当する。そして、「ｓｄＲＮＡ」とは、送達作用物質を必要とせずに細胞に取り込まれる、自己送達性ＲＮＡｉ作用物質（本カ、本キ、本コ）であって、上記課題との関係においては、Ｔ細胞等の免疫療法用細胞において標的遺伝子のｍＲＮＡに作用して、その発現を抑制するために用いられるものであり、本願発明の「ｓｄＲＮＡ」が標的とする「配列番号３６３」は、ＨＡＶＣＲ２のｍＲＮＡに含まれる２０ヌクレオチド長からなるものである。 また、本願発明の「 ガイド鎖およびパッセンジャー鎖を含み、ここで該ガイド鎖が、１９～２５ヌクレオチド長であり、および該パッセンジャー鎖が、１０～１９ヌクレオチド長であり、ここで該ｓｄＲＮＡが、二本鎖領域および一本鎖領域を含み、ここで該一本鎖領域が、５～９ホスホロチオエート修飾を含み、ここで該ｓｄＲＮＡが、化学修飾されており、少なくとも１つの２’－Ｏ－メチル修飾、または少なくとも１つの２’－Ｏ－フルオロ修飾を含み」は、「ｓｄＲＮＡ」の一般的な化学構造にすぎない（本ウ、本カ、本ケ）。 したがって、本願発明がサポート要件を満たすためには、発明の詳細な説明において、２２３７ヌクレオチド長の「ＨＡＶＣＲ２」のｍＲＮＡのうち２０ヌクレオチド長の「配列番号３６３」を標的とする「ｓｄＲＮＡ」が、送達作用物質を必要とせずにＴ細胞等の免疫療法用細胞に取り込まれ、「ＨＡＶＣＲ２の発現を抑制する」ことにより、上記課題を解決することができるものであると当業者が認識できるように記載されている必要がある。 （２）本願の遡及出願日の技術常識 ア 参考文献の記載 本願の遡及出願日、すなわち、本願の原出願の出願日である平成２６年（２０１４年）１２月２日当時の技術常識を検討するために、遡及出願日より後の２０１８年に公開されたNucleic Acids Research, ２０１８年，Vol.46，No.20，pp.10905-10916（以下、「参考文献１」という。）をみると、以下の記載がある（原文は英文のため、訳文を示す。）。 参１ア 第１０９０５頁左欄 「要約 オリゴヌクレオチド化学の進歩により、使用されるsiRNAの種類は、処方化された最小限の修飾を施されたsiRNAから、処方化されていない高度の修飾を施されたsiRNAコンジュゲートへと変化してきた。コンジュゲートを介したデリバリーには、広範な化学修飾の導入が不可欠である。修飾は、RNAi酵素装置による認識やプロセッシングを阻害することにより、siRNAの有効性に大きな影響を与え、siRNAの設計に利用可能な配列空間を著しく制限する。公開されている多くのアルゴリズムは、非修飾siRNAの活性をうまく予測することができるが、高度に修飾されたsiRNAを設計するためのアルゴリズムの有効性は、これまで体系的に実験的に評価されたことはない。ここでは、広範な化学修飾を有する356個のコレステロール結合siRNAをスクリーニングし、2つの独立したデータセットを用いて、siRNA活性を効果的に予測する線形回帰ベースのアルゴリズムを開発した。さらに、修飾されたsiRNAと修飾されていないsiRNAでは、予測決定因子が大きく異なることを実証した。非修飾 siRNA のデータセットから開発されたアルゴリズムは、修飾siRNAに対しては予測力がなく、逆も同様である。高度に修飾されたsiRNAとの関連では、化学的非対称性の導入は、非修飾siRNAの有効性の主要な決定要因である熱力学的バイアスの必要性を完全に排除する。最後に、標的部位の配列に加えて、隣接する3’領域のアクセシビリティがsiRNAの有効性に大きく寄与することを実証した。」 参１イ 第１０９０８頁左欄第３段落～同頁右欄第３段落、及び、図１ 「結果 356種類の化学修飾自己送達siRNAのパネルの有効性の評価 sdRNAは、大幅に化学修飾され、コレステロールと結合した非対称siRNAであり、補助なしで細胞内に取り込まれることができる（33-35）。sdRNAは、20塩基のアンチセンス鎖が15塩基のセンス鎖と二重らせん構造を形成している（図1A）。アンチセンス鎖の6つの3'ヌクレオチドとセンス鎖の2つの3'ヌクレオチドはホスホロチオエート化されている。すべてのピリミジンは、アンチセンス鎖とセンス鎖でそれぞれ2′-フルオロと2′-O-メチルで修飾されている。さらに、両方の鎖にあるいくつかのプリンは、修飾されていないリボースの伸長部分の存在を排除するために、2′-O-メチルで修飾されている。アンチセンス鎖の5′末端は化学的に一リン酸化され、2′-O-メチルウリジン（U）として固定される。さらに、センス鎖の1番目と2番目の位置は常に2′-O-メチル修飾されており（20）、センス鎖の長さが短いことも相まって、化学的不斉が生じ、センス鎖がRISC複合体にロードされるのを妨げる。コレステロールと結合すると、これらの化合物はEEA1に関連するエンドサイトーシス機構の一部によって輸送ビークルを必要とせずに、あらゆる種類の細胞に効率的に侵入する（35）。sdRNAの一般的な化学構造は図1Aに示されている。 アルゴリズム開発に使用されたトレーニングデータセットは、17種類の異なる遺伝子（各遺伝子につき約20のsdRNA）にわたる356のsdRNA標的領域で構成されている。機能評価では、各標的遺伝子につき、50塩基のsdRNA標的領域（20塩基のsiRNA標的部位と15塩基の隣接領域を含む）を融合し、psiCHECK-2ベクターの3'UTRにクローニングした（方法参照）。17のレポーターすべてに、交差アッセイデータの比較と検証のための汎用ポジティブコントロール配列が組み込まれていた。対応する標的配列と、すべての試験化合物の効力は、補足表S1に示されている。 ・・・ 図1Bは、356のsdRNAデータセットの有効性分布を示している。化合物の有効性は、対応する非標的コントロールに対して正規化されている。設計はもともと低GC含有量に偏っていたが、これはsiRNAの有効性を高める要因として広く認められている（37）。しかし、非常に活性の高い配列の割合は、修飾されていないsiRNAの場合よりも大幅に低いようである（5,37）。90%以上のサイレンシングを誘導した配列は、試験した配列のわずか3%であった。Huesken et al. (5)がランダムに選択した非修飾siRNAのデータセットでは、試験した化合物の16%が同様の活性を示した（補足図S1C）。実験条件が異なるため、これらのデータセットの直接的な定量的比較は不可能であるが、この結果は、広範囲にわたる化学修飾は多くのsiRNA配列に耐容されないという既知の観察結果と一致しており（27,38,23）、適切な予測手順の開発の必要性を強調している。 アルゴリズムの開発にあたり、sdRNAデータセットは、機能しないもの（157のsdRNA、標的遺伝子発現が44%以上残っているもの）と機能するもののサブセットに細分化された。機能性のカットオフ値として、厳格性を高めて3つの値を使用した：標的遺伝子発現の残存率が35%未満（138のsdRNA）、24%未満（91のsdRNA）、17%未満（41のsdRNA）（図1B）。複数の機能性カットオフ値を選択することで、トレーニング用データセットのサイズを大きくすることと偽陽性率を最小限に抑えることの最適なバランスを特定することができる。」 「 ［図：0001427071000011.jpg］ ［図：0001427071000012.jpg］ 図1. 化学修飾された非対称型自己送達siRNA（sdRNA）パネルの有効性分布。 (A) sdRNAは非対称型siRNAであり、20ヌクレオチドのアンチセンス鎖と15ヌクレオチドのセンス鎖から構成され、すべてのピリミジンは2'-フルオロ（アンチセンス）および2'-O-メチル（センス）修飾されている。3'末端のバックボーンはホスホロチオエート化されている（アンチセンス鎖では6つの結合、センス鎖では2つの結合）。センス鎖の3'末端はコレステロールと結合している。（B）17の遺伝子を標的とする356のsdRNAの有効性は、HeLa細胞におけるデュアルルシフェラーゼレポーターを用いて、1μM（受動的取り込み）で48時間後に評価した（n = 3、平均値±SD）。」 参１ウ 第１０９１１頁左欄第３段落～同頁右欄第１段落、及び、図４ 「未修飾siRNAベースのアルゴリズムは、大幅に修飾されたsiRNAの予測能力を持たない 非修飾siRNAの有効性を決定する主な要因のひとつは、RISCに導入される鎖の性質を定義する熱力学的バイアスである（32,38）。sdRNAの非対称性は化学修飾と組み合わさって、センス鎖がRISCに導入されるのを効果的に妨げるため、理論的にはこのパラメータの影響は排除されるはずである。したがって、非修飾siRNAの有効性を予測するために開発された位置に基づくアルゴリズムは、高度に修飾されたsdRNAの予測には適していない可能性がある。この仮説を検証するために、Huesken et al. (5) の2384のsiRNAのデータセットに対して、同じ方法論を用いて位置スコア行列を生成し（補足図S1BおよびC）、sdRNAの位置行列と比較した。この比較では、Huesken et al. のデータセットではレポーター構築物に隣接領域が含まれていなかったため、解析は20塩基の標的領域のみに限定した。図4Aは、非修飾および修飾siRNAの塩基優先性マトリックスが大幅に異なることを示している。予想通り、非修飾siRNAのデータセットで観察された最も顕著な位置特異的塩基優先性は、アンチセンス鎖の5'末端に対応する位置でAとUに強い優先性があるという、熱力学的バイアスの導入に関連している。これらの特徴は、sdRNAマトリックスでは完全に欠如していた（図4B）。同時に、切断部位付近（7、8、11番目の位置）で観察された特定のヌクレオチドの好みは、両方のデータセットで類似しており、これはおそらくRISC複合体によって課された一般的なヌクレオチドの好みを反映したものであり、切断時の産物の解離に関連している可能性がある（38,40）。これ以外に顕著な類似点は観察されなかった。 これらの違いを考慮すると、非修飾 siRNA から導き出された線形回帰ベースのアルゴリズムは、それ自体を適切に説明したが、修飾 siRNA データセットの有効性を予測できず、逆もまた同様であったことは驚くべきことではない（図4C）。その結果、非修飾 siRNA の選択アルゴリズムには、化学修飾の多い siRNA の選択に対する予測力はなかった。」 「 ［図：0001427071000013.jpg］ ［図：0001427071000014.jpg］ 図4. ネイキッドsiRNAから導き出されたアルゴリズムは、修飾された（sdRNA）ものに対して予測能力を持たず、その逆も同様である。（A）非修飾（オレンジ）（5）および化学修飾された（緑）sdRNAから生成された位置特異的塩基配列の嗜好性マトリックス。アンチセンス鎖の5'末端に基づいて配列を整列させた。マトリックスの重み値は、マトリックスの下の影付きバーで示された値に従って色分けされている。siRNA標的領域（網掛け）に対応する解析されたmRNAの位置は上部に示されている。黒い矢印は、10番目と11番目の位置間の切断部位の位置を示している。（B）非修飾および修飾sdRNAデータセットから導出されたアルゴリズムの、非修飾および修飾siRNAの有効性を予測する能力は、PPP対感度プロットを用いて計算された。(C) 非修飾および化学修飾siRNAの熱力学的柔軟性は、4塩基のスライディングウィンドウにおけるGC含量の平均化により推定した。熱力学的バイアスは、siRNA二重鎖の5'末端と3'末端における相対的な熱力学的柔軟性の差として示される。化学修飾siRNAは、従来の熱力学的バイアスを示さない。」 イ 本願の遡及出願日における技術常識 （ア）本願の遡及出願日より４年程後に発行された参考文献１において、「高度に修飾されたsiRNAを設計するためのアルゴリズムの有効性は、これまで体系的に実験的に評価されたことはない」（参１ア）との記載があることからみて、参考文献１の発行より前の本願の遡及出願日当時においても、「高度に修飾されたsiRNAを設計するためのアルゴリズムの有効性は、これまで体系的に実験的に評価されたことはない」との事実は当てはまる。 （イ）また、参考文献１において「広範な化学修飾を有する356個のコレステロール結合siRNAをスクリーニングし、2つの独立したデータセットを用いて、siRNA活性を効果的に予測する線形回帰ベースのアルゴリズムを開発した」とした上で、「修飾されたsiRNAと修飾されていないsiRNAでは、予測決定因子が大きく異なることを実証した。非修飾siRNAのデータセットから開発されたアルゴリズムは、修飾siRNAに対しては予測力がなく、逆も同様である。」との記載がみられることから（参１ア）、本願の遡及出願日当時に知られていたアルゴリズムは「修飾siRNA」すなわち本願で言う「ｓｄＲＮＡ」に対して予測力を有するかどうかは、当業者にとって不明であったというのが本願の遡及出願日当時の技術常識であるといえる。また、むしろ、当業者であれば、そのようなアルゴリズムでｓｄＲＮＡの有効性を予測しても予測どおりにならないと感じていた可能性が高いことが伺える。 （ウ）上述の参１アで述べられた事項は、参１イ及び参１ウの記載をみれば、本願発明におけるｓｄＲＮＡの化学構造に関する発明特定事項である「ここで該ｓｄＲＮＡが、ガイド鎖およびパッセンジャー鎖を含み、ここで該ガイド鎖が、１９～２５ヌクレオチド長であり、および該パッセンジャー鎖が、１０～１９ヌクレオチド長であり、ここで該ｓｄＲＮＡが、二本鎖領域および一本鎖領域を含み、ここで該一本鎖領域が、５～９ホスホロチオエート修飾を含み、ここで該ｓｄＲＮＡが、化学修飾されており、少なくとも１つの２’－Ｏ－メチル修飾、または少なくとも１つの２’－Ｏ－フルオロ修飾を含み、」との構成を満足する条件で検証されたものであることが理解できる。そうすると、（ア）及び（イ）で認定した技術常識は、本願発明に対しても参照することが妥当なものである。 （エ）そして、これら（ア）及び（イ）で認定した技術常識は、本願の発明の詳細な説明【００６７】（本ク）において、「ｓｄＲＮＡ」に関し、「従来のｓｉＲＮＡに比べ比較的ヒット率が低い。」と記載されることや、「１つの遺伝子に対して多くの配列をスクリーニングする必要があ（る）」と記載されることとも符合する。 （オ）これらを踏まえると、ｓｄＲＮＡについては、標的とする遺伝子が決まっても、その遺伝子のうちどのような部分を標的配列とすればその遺伝子発現を有効に抑制できるかについて、実際にｓｄＲＮＡを作成してそれを用いて遺伝子発現を抑制できることを直接確認しなくては判断できなかったというのが、本願の遡及出願日当時における技術常識であったということができる。 （３）本願発明のサポート要件の判断 ア 配列番号３６３及びＨＡＶＣＲ２についての直接的な記載について 発明の詳細な説明においては、実施例２には、「標的遺伝子の発現を阻害するオリゴヌクレオチド配列」を有する好ましいｓｄＲＮＡを同定した方法について記載されており（本ス）、具体的には、ＨＡＶＣＲ２を含む２５の遺伝子を候補標的遺伝子として選択したこと、及び、ＨＡＶＣＲ２遺伝子を含む２５の候補標的遺伝子について、「独自のアルゴリズム」を用いて分析し、その結果として表１を示したことが記載され、明細書段落【０１２５】～【０１４９】にわたって示される表１には、２５の候補標的遺伝子のそれぞれについて、標的となる遺伝子領域及び標的配列が２０ずつ記載されている（１つの段落に１つの遺伝子が対応している）。そして、ＨＡＶＣＲ２については、表１の一部である段落【０１３３】（本ナ）においてその標的配列が記載され、その３番目として、配列番号３６３の塩基配列が記載されている。そして、上記本イ、本エ及び本オの記載は、この実施例２の記載と同趣旨であると認められる。 しかしながら、上記のいずれの記載も、「独自のアルゴリズム」を用いて選択した標的配列のｓｄＲＮＡの有効性を推定したことを記載しているに過ぎず、その確からしさが合理的に説明されているわけではないし、配列番号３６３を標的配列とするｓｄＲＮＡを実際に使用して、送達作用物質を必要とせずに免疫療法用細胞に取り込まれ、ＨＡＶＣＲ２遺伝子の発現が抑制されたことを確認した実験結果も記載されていない。 イ 「独自のアルゴリズム」についての記載からの間接的な理解について （ア）実施例２においては、「独自のアルゴリズム」を用いて分析して、好ましいｓｄＲＮＡを同定したと記載している（本ス）ので、「独自のアルゴリズム」についての記載を検討する。 （イ）発明の詳細な説明では、「独自のアルゴリズム」について、「ＨｅＬａ細胞のルシフェラーゼレポーターアッセイにおける５００個を超えるｓｄＲＮＡ配列の機能的スクリーニングに基づき設計された」こと、及び、「その回帰分析を使用し、遺伝子抑制アッセイにおいて、ｓｄＲＮＡ二本鎖の特異的ヌクレオチドの発生頻度と任意の特定位置での修飾との相関及びその機能性について確立した」ことが記載されている（本ク）。 しかしながら、「ｓｄＲＮＡ二本鎖の特異的ヌクレオチドの発生頻度と任意の特定位置での修飾との相関及びその機能性」の具体的な内容は記載されていないから、配列番号３６３の配列を標的配列とするｓｄＲＮＡのＨＡＶＣＲ２に対して実際に遺伝子発現抑制の試験をせずとも有効であると理解できる理論が記載されていることにはならない。また、「ＨｅＬａ細胞のルシフェラーゼレポーターアッセイにおける５００個を超えるｓｄＲＮＡ配列の機能的スクリーニング」で具体的にどのようなデータを得て分析対象としたのか、また、回帰分析で具体的にどのようなデータ処理を行ったのか何ら明らかにされていないから、「ｓｄＲＮＡ二本鎖の特異的ヌクレオチドの発生頻度と任意の特定位置での修飾との相関及びその機能性」を再現することもできない。そして、明細書段落【００６８】（本ク）の記載によれば、そのようにして得た「独自のアルゴリズム」は、それを用いて予測した結果が「４０％を超える確率で１μＭ濃度にて７０％を超えるノックダウン」という程度の確率を示すものに過ぎないから、実際に遺伝子発現抑制の試験をせずとも遺伝子発現の抑制を推認できる程度の精度で予測できるものではない。 （ウ）そうすると、「独自のアルゴリズム」についての記載から、そのアルゴリズムにより候補に挙げられたいずれの標的配列であっても、送達作用物質を必要とせずにＴ細胞等の免疫療法用細胞に取り込まれ、標的遺伝子の発現を抑制することができることを、演繹的に理解できるものとは認められない。 したがって、「独自のアルゴリズム」についての記載を考慮しても、２２３７ヌクレオチド長にわたるＨＡＶＣＲ２のｍＲＮＡにおいて配列番号３６３という２０ヌクレオチド長の配列を標的配列とするｓｄＲＮＡのＨＡＶＣＲ２に対する有効性を理解できるものではない。 ウ 他の実施例の記載からの間接的な理解について （ア）発明の詳細な説明には、実施例１、３～５、９、１０（本シ、本セ～本タ、本ツ、本テ）として、ＨＡＶＣＲ２とは別のいくつかの候補標的遺伝子を標的とするｓｄＲＮＡを用いてそれらの遺伝子の発現を抑制した実験結果が記載されているので、当該記載について検討する。 （イ）実施例１では、標的遺伝子の名称と、そのｓｄＲＮＡ標的配列、及び、遺伝子発現のノックアウトを試験した結果が記載されている。 しかしながら、ここで示される標的遺伝子のうちＭＡＰ４Ｋ４については、明細書段落【００８８】（本セ）の記載から見て、陽性対照であって、免疫抑制に関する遺伝子を標的とするものではないし、ＧＡＤＰＨ及びＰＰＩＢについては、上述の２５の候補標的遺伝子に含まれるものではない。そうすると、２５の候補標的遺伝子に含まれるものは実施例１の記載の中ではＴＰ５３の１つだけであり、当該候補標的遺伝子について、遺伝子発現のノックアウトが確認された標的配列は、配列番号１００１の１つに限られる。 そして、上記（２）イで述べた技術常識を踏まえると、この１つの配列の試験例だけでは、実施例２に記載の同定方法により同定した好ましいｓｄＲＮＡであれば、いずれのものであっても、送達作用物質を必要とせずにＴ細胞等の免疫療法用細胞に取り込まれ、標的遺伝子の発現を抑制することができるとは、当業者といえども理解できない。 また、ＧＡＤＰＨ、ＰＰＩＢ、及び、陽性対照のＭＡＰ４Ｋ４を含めて実施例１に記載されるｓｄＲＮＡ標的配列（配列番号１００１～１００７）を全て考慮しても、ＧＡＤＰＨ、ＰＰＩＢ及びＭＡＰ４Ｋ４の標的配列の同定方法については、発明の詳細な説明には何ら記載されていないから、上述のＴＰ５３の例を補足するものではない。仮に、これらの遺伝子に対する標的配列がいずれも実施例２に記載された好ましいｓｄＲＮＡの同定方法により同定された配列であるとしても、７０％以上のノックダウンを示した例が、高々７つあったことを示すにとどまり、結局、上記（２）イで述べた技術常識を踏まえると、同じ方法により同定された標的配列であればいずれのものであっても、送達作用物質を必要とせずにＴ細胞等の免疫療法用細胞に取り込まれ、標的遺伝子の発現を抑制することができるとまでは、当業者といえども理解できない。 （ウ）実施例３～５、９、１０においては、上述の２５の候補標的遺伝子のうち３つの遺伝子（実施例５のＴＰ５３、実施例９及び１０のＣＴＬＡ－４、ＰＤＣＤ１）に限って、細胞を用いた標的遺伝子のサイレンシング（抑制）試験の結果が記載されている。 しかしながら、試験で用いられた標的配列は明らかにされておらず、各遺伝子について、表１に示された２０の標的配列を用いたのか、用いたとしてもどの配列番号を用いたのか、いずれも明らかにされていない。すなわち、まず、実施例５の試験結果である図４（本タ）をみれば、ＴＰ５３に対するｓｄＲＮＡとしては、「Ｔ１９０」の１つの系列しか示されておらず（ＭＡＰ４Ｋ４を標的とするｓｄＲＮＡは陽性対照である）、表１に示された２０の標的配列の候補を数的にカバーするものではないことは明らかであるし、当該「Ｔ１９０」の番号「１９０」は、表１（本ニ）に示される配列番号等と対応するものではないから、当該「Ｔ１９０」がどのような標的配列を有するｓｄＲＮＡであるのかについても不明である。同様に、実施例９の試験結果である図５（本ツ）をみれば、ＰＤＣＤ１とＣＴＬＡ－４のそれぞれについて、試験されたｓｄＲＮＡは５つの系列が見て取れるが、これらも表１に示された２０の標的配列の候補を数的にカバーするものではないことは明らかであるし、どのような標的配列を有するｓｄＲＮＡであるのかについても不明である。また、実施例１０の試験結果である図６（本テ）をみれば、ＰＤＣＤ１とＣＴＬＡ－４のそれぞれについて、試験されたｓｄＲＮＡは１つの系列にとどまることが見て取れ、表１に示された２０の標的配列の候補を数的にカバーするものではないことは明らかであるし、どのような標的配列を有するｓｄＲＮＡであるのかについても不明である。 また、実施例３、４で用いられているＭＡＰ４Ｋ４に対するｄＲＮＡは、明細書段落【００８８】の記載（本セ）からみて陽性対照であるし、実施例３及び４に記載されるＧＡＰＤＨ、並びに、実施例４に記載されるＰＰＩＢ（本ソ）は、２５の候補標的遺伝子に含まれるものではないから、これらはいずれも本願発明と関連性がないことが明らかである。 そして、実施例６～８（本チ）は、いずれも仮想実施例であり、試験結果が示されるものではないし、実施例１１（本ト）は、上述の実施例で陽性対照に用いられたＭＡＰ４Ｋ４に関するものであって、しかも、試験内容はトランスフェクション効率についてのものであるから、実施例６～８及び１１は、いずれも、本願発明と関連性がないことが明らかである。 （エ）そうすると、実施例１、３～１１の記載から、実施例２に記載の同定方法により同定した好ましいｓｄＲＮＡであれば、いずれのものであっても、送達作用物質を必要とせずにＴ細胞等の免疫療法用細胞に取り込まれ、標的遺伝子の発現を抑制することができることを、帰納的に理解できるものとは認められない。 したがって、実施例１、３～１１の記載を考慮しても、２２３７ヌクレオチド長にわたるＨＡＶＣＲ２のｍＲＮＡにおいて配列番号３６３という２０ヌクレオチド長の配列を標的配列とするｓｄＲＮＡのＨＡＶＣＲ２に対する有効性を理解できるものではない。 （４）小括 以上のとおりであるから、本願明細書の発明の詳細な説明は、２２３７ヌクレオチド長にわたるＨＡＶＣＲ２のｍＲＮＡにおいて配列番号３６３という２０ヌクレオチド長の配列を標的配列とするｓｄＲＮＡが送達作用物質を必要とせずにＴ細胞等の免疫療法用細胞に取り込まれてＨＡＶＣＲ２遺伝子の発現を抑制することについて、当業者が理解できるように記載されているとはいえない。 よって、本願発明は、発明の詳細な説明に記載されたものであるとはいえず、特許法第３６条第６項第１号に規定する要件を満たしていない。 ２．理由２（実施可能要件）について 上述のとおり、本願明細書の発明の詳細な説明は、配列番号３６３を標的配列とするｓｄＲＮＡが送達作用物質を必要とせずにＴ細胞等の免疫療法用細胞に取り込まれてＨＡＶＣＲ２遺伝子の発現を抑制することについて、当業者が理解できるように記載されているとはいえないのであるから、「配列番号３６３を標的配列とするｓｄＲＮＡ」を含む本願発明について、当業者が、当該ｓｄＲＮＡが「ＨＡＶＣＲ２の発現を抑制する」ように使用することができる程度に、明確かつ十分に記載したものとは認められない。 したがって、本願は、特許法第３６条第４項第１号に規定する要件を満たしていない。 ３．請求人の主張について 請求人は、令和５年２月６日提出の手続補正により補正された審判請求書及び令和７年２月２７日提出の意見書において、以下の２点を主張する。 （主張１）本願発明のｓｄＲＮＡは、その構造的特徴で限定されており、配列番号３６３の標的配列に基づいて設計され、特定の構造的特徴の組み合わせを有している。本願明細書は、実施例等において、ｓｄＲＮＡを設計する方法と、ＨＡＶＣＲ２内の標的配列であるところの配列番号３６３について十分な記述を提供しており、当業者が、過度の試行錯誤をすることなく、本願発明を作成し、使用することができる。 （主張２）審判請求書中において記載した出願後のデータは、配列番号３６３を標的とするｓｄＲＮＡが、ＨＡＶＣＲ２の発現を抑制するのに効果的であったことを確認している。 しかしながら、主張１については、１．（２）イ（ウ）において述べたとおり、参考文献１から認定した本願の遡及出願日における技術常識は、請求人のいう「特定の構造的特徴」を含めてもなお該当するものである。したがって、ｓｄＲＮＡの化学構造が特定されても、１．（３）で述べたとおり、依然として、配列番号３６３を標的配列とするｓｄＲＮＡが送達作用物質を必要とせずにＴ細胞等の免疫療法用細胞に取り込まれてＨＡＶＣＲ２遺伝子の発現を抑制することについて当業者が理解できることにはならない。 よって、主張１は採用できない。 また、主張２については、上述のとおり、発明の詳細な説明には、配列番号３６３を標的配列とするｓｄＲＮＡが、ＨＡＶＣＲ２遺伝子を発現を抑制することを示すデータは記載されておらず、本願の遡及出願日当時の技術常識を考慮しても、発明の詳細な説明に記載された内容から、配列番号３６３を標的配列とするｓｄＲＮＡが、ＨＡＶＣＲ２遺伝子を発現を抑制することが当業者に理解できないことは、１．（３）で述べたとおりである。それにもかかわらず、特許出願後に実験データを提出して発明の詳細な説明の記載内容を記載外で補足することによって、サポート要件及び実施可能要件に適合させることは、発明の公開を前提に特許を与するという特許制度の趣旨に反し許されないというべきである。 したがって、請求人が、令和５年２月６日提出の手続補正により補正された審判請求書の中で記載した実験データは、発明の詳細な説明の記載内容を記載外で補足するものとして参酌することはできない。 念のため、当該実験データの内容について検討してみても、「配列番号３６３を標的とするｓｄＲＮＡ」の化学構造が明らかにされておらず、本願発明に該当するものかどうか不明であり、試験条件については、使用した活性化Ｔ細胞の取得方法、及び、ｓｄＲＮＡのトランスフェクトの条件等が不明であって、再現できる程度に記載されていないし、グラフで示されたデータについては、「ＨＡＶＣＲ２の相対的なｍＲＮＡレベル」を決定してその結果を示した旨が一応記載されるが、グラフの縦軸は、非標的化対照と比較した相対的レベルであるのか、非標的化対照と比較したＨＡＶＣＲ２の相対的なレベルを、さらにｓｄＲＮＡが添加されていない場合に対する比率として表したものであるのか不明であり、グラフの縦軸の数値を解釈することができないものであるから、配列番号３６３を標的配列とし所定の化学構造を有するｓｄＲＮＡがＨＡＶＣＲ２遺伝子を発現を抑制することを裏付けるものとはいえない。したがって、仮に当該実験データの内容を参酌したとしても、本願がサポート要件及び実施可能要件を満たすものと認めることはできない。 よって、主張２についても採用できない。 第６ むすび 以上のとおり、本願は、請求項１に係る発明について、特許法第３６条第６項第１号及び同法第３６条第４項第１号に規定する要件を満たしておらず、特許を受けることができないものである。 したがって、他の請求項に係る発明について検討するまでもなく、本願は拒絶すべきものである。 よって、結論のとおり審決する。