2022-010058

ア 引用文献１の記載事項

原査定の拒絶の理由で引用文献１として引用された、本願の優先日前の２０１５年１２月２１日に頒布された刊行物である、特表２０１５－５３６３１５号公報（以下、「引用文献１」という。）には、以下の事項が記載されている。下線は当審にて付加した。

（ア）

「【特許請求の範囲】

【請求項１】

配列番号１～５のいずれか１つから選択された配列を含むペプチド又は疑似ペプチド。

【請求項２】

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以下の式（Ａ）：

Ｐｈ－Ｍ－Ｐｉ （Ａ）

（式中、

各Ｐは、アミノ酸配列：Ａ１－Ｍｅｔ－Ａ２－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ａ３－Ａ４を含む同じ又は異なるペプチド又は疑似ペプチドを示し、Ａ１及びＡ４は、独立して、システイン又はその類似体又はそのアイソスターを示し、Ａ２はプロリン又はその類似体又はそのアイソスターを示し、Ａ３はグリシン又はその類似体又はそのアイソスターを示し；

Ｍは分子プラットフォームであり、

ｈ及びｉは、互いに独立して、１、２、３、４又は５から選択された整数である）

を有する多量体物質。

【請求項３】

Ａ１及びＡ４が、独立して、（Ｄ）－ｃｙｓ、ペニシラミン（Ｐｅｎ）及び（Ｄ）－ペニシラミン（（Ｄ）－Ｐｅｎ）から選択されたＣｙｓ又はその類似体を示し、並びに／又は、Ａ２が、ピペコリン酸（Ｐｉｐ）及びチアゾリジン－４－カルボン酸（Ｔｈｚ）から選択されたＰｒｏ類似体を示し、並びに／又はＡ３がＧｌｙもしくはサルコシン（Ｓａｒ）を示す、請求項２の多量体物質。

【請求項４】

ｈ及びｉが、互いに独立して、１又は２であり、好ましくはｈ＝ｉ＝１である、請求項２又は３の多量体物質。

【請求項５】

Ｐが以下の一般式（Ｉ’）：

（Ｄ）－Ｃｙｓ－Ｍｅｔ－Ａ２－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ａ３－Ａ４（Ｉ’）

（式中、

Ａ２は、Ｐｒｏ、Ｐｉｐ又はＴｈｚを示し、Ａ３はＧｌｙ又はＳａｒを示し、Ａ４はＣｙｓ、（Ｄ）－Ｃｙｓ、Ｐｅｎ又は（Ｄ）－Ｐｅｎを示す）

で示されるペプチドである、請求項２～４のいずれか一項の多量体物質。

【請求項６】

Ｐが、配列番号１～５のいずれか１つから選択された配列を含むペプチドである、請求項２～５のいずれか一項の多量体物質。

【請求項７】

Ｍが、少なくとも２つの反応性官能基、好ましくは少なくとも３つの反応性官能基を有する多官能基有機化合物である、請求項２～６のいずれか一項の多量体物質。

【請求項８】

Ｍがポリリジン又はトリス（２－アミノエチル）アミン基である、請求項２～７のいずれか一項の多量体物質。

【請求項９】

ホモ二量体である、請求項２～８のいずれか一項の多量体物質。

【請求項１０】

前記ペプチド又は疑似ペプチドが、メチレン（－ＣＨ２－）又はリン酸（－ＰＯ２－）基、第２級アミン（－ＮＨ－）又は酸素（－Ｏ－）、アルファ－アザペプチド、アルファ－アルキルペプチド、Ｎ－アルキルペプチド、ホスホンアミデート、デプシペプチド、ヒドロキシメチレン、ヒドロキシエチレン、ジヒドロキシエチレン、ヒドロキシエチルアミン、レトロインベルソ型ペプチド、メチレンオキシ、セトメチレン、エステル、ホスフィネート、ホスフィン酸、ホスホンアミド又はカルバ類似体の挿入から選択された少なくとも１つのペプチド模倣結合を含む、請求項１～９のいずれか一項のペプチド、疑似ペプチド又は多量体物質。

【請求項１１】

前記ペプチドもしくは疑似ペプチドのＮ末端（Ｎ末）官能基がアシル化によって保護され、及び／又は前記ペプチドもしくは疑似ペプチドのＣ末端（Ｃ末）がアミド化もしくはエステル化によって保護される、請求項１～１０のいずれか一項のペプチド、疑似ペプチド又は多量体物質。

【請求項１２】

以下の式（ＩＩＩ）：

ＶｘＳｚＤｙ （ＩＩＩ）

（式中、

Ｖは、請求項１～１１のいずれか一項のペプチド又は疑似ペプチド又は多量体物質を示し、Ｓはスペーサーを示し、Ｄは、活性物質又は対象の物質を示し、ｘは１～５の整数であり、ｙ及びｚは１～１０の整数である）

で示されるコンジュゲート化合物。

【請求項１３】

ｘ＝ｚ＝ｙ＝１；ｘ＝ｚ＞ｙ、ｙ＝ｚ＞ｘ又はｚ＞ｘ＞ｙであるか；あるいは、ｚ＝０であり、ｘ及びｙ＝１であるか、又はｙはｘより大きいことを特徴とする、請求項１１のコンジュゲート化合物。

【請求項１４】

活性物質又は対象の物質が、治療上関心のある分子、診断剤又は医療用イメージング剤、分子プローブ、化学的低分子、ペプチド又はポリペプチド、タンパク質、抗原、抗体又は抗体の一部、核酸又はオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、リボザイム、マーカー又はトレーサーであることを特徴とする、請求項１１のコンジュゲート化合物。

【請求項１５】

ＶとＤの間のカップリング、又は一方でＶとＳの間及び他方でＳとＤの間のカップリングが、生理的培地中で又は細胞内で切断可能な又は切断不能な１つ以上の共有結合、イオン結合、水素結合、疎水性結合又はファンデルワールス結合によって行なわれることを特徴とする、請求項１１のコンジュゲート化合物。

【請求項１６】

Ｄが、Ｖと、必要な場合にはＳを介して、ＶのＮ末端及び／もしくはＣ末端の一方もしくは両方において、並びに／又はＶを構成する天然もしくは非天然アミノ酸側鎖によって担持されている１つ以上の反応性基においてカップリングしている、請求項１１のコンジュゲート化合物。

【請求項１７】

請求項１～１０のいずれか一項のペプチド又は疑似ペプチド又は多量体と物質Ｄの間の、必要な場合にはスペーサーＳを介しての、化学的、生化学的もしくは酵素的経路による又は遺伝子工学によるカップリングの工程を含むことを特徴とする、コンジュゲート化合物を調製するための方法。

【請求項１８】

請求項１１の少なくとも１つのコンジュゲート化合物及び１つ又はいくつかの薬学的に許容される賦形剤を含む薬学的組成物。

【請求項１９】

請求項１１のコンジュゲート化合物から構成される診断剤又は医療用イメージング剤を含む診断用組成物。

【請求項２０】

被験体に、請求項１～１０のいずれか一項のペプチド又は疑似ペプチド又は多量体にカップリングさせた分子を投与することを含む、被験体に前記分子を送達するための方法。」

（イ）

「【００３１】

発明の要約

本発明は、ＬＤＬＲ発現組織の細胞膜、特にＣＮＳ又は網膜の生理学的関門（ＢＢＢ／ＢＳＣＢ及びＢＲＢ）を通過して、対象の分子を輸送することのできる、新規ペプチド又は疑似ペプチドを提供する。従って、本発明は、改善された体内分布又はバイオアベイラビリティを有し、特に、ＣＮＳ及び／又は眼及び／又はＬＤＬＲの豊富な他の器官、例えば肝臓、副腎及び腸への、及び／又はＬＤＬＲの豊富な種々の癌細胞への、及び／又は細胞のリソソーム区画への改善されたアクセス（ターゲティング）を有する、新規治療剤又は診断剤を設計することを可能とする。

【００３２】

ＷＯ２０１０/０４６５８８及びＷＯ２０１１/１３１８９６において、本発明者らは、ＬＤＬＲに結合することができ、かつ、分子（治療上又は診断上関心のある分子を含む）を脳に伝達することのできる、ペプチド誘導体を開発した。

【００３３】

本発明者らは、今回、分子の輸送にとって有利な特性を示す新規なペプチドを設計し検証した。本発明者らはまた、あらゆる薬剤を動物に送達するための改善された親和性及び高い輸送能を示す、新規なこのようなペプチドの多量体を設計した。これらの新規ペプチド及び多量体は、天然リガンドと競合することなく、従って、内因性ＬＤＬの輸送を干渉することなく、ＬＤＬＲに結合することができ、かつ、治療又は診断（イメージングを含む）薬物又は薬剤を送達、ターゲティング又はベクター化して、特にＣＮＳ及び／又は眼及び／又はＬＤＬＲの豊富な他の器官（例えば肝臓、副腎、腸）に、及び／又はＬＤＬＲの豊富な癌細胞に、及び／又は細胞のリソソーム区画に到達するために、特に有利である新規製品を示す。

【００３４】

本発明の１つの目的は、特に、配列番号１～５から選択された配列を含むペプチド又は疑似ペプチドに関する。」

（ウ）

「【００５９】

本発明の目的は、より特定すると、配列番号１～５から選択された配列を含むペプチド又は疑似ペプチドに関する：

【化１】

［図：0001410645000001.jpg］

」

（エ）

「【０１０４】

本発明はまた、脳腫瘍又は他の種類の癌細胞を処置、イメージング及び／又は診断するための上記に定義されているようなコンジュゲート又は組成物の使用に関する。研究により、実際に、特定の癌を有する患者は低コレステロール血症を有することが示された。この低コレステロール血症は、癌細胞によるコレステロールの過剰使用の結果である。癌細胞は生存するために、腫瘍を有する器官内のＬＤＬＲ発現レベルの増加を誘導する（Henricksson et al., 1989, Lancet, 2(8673), 1178-1180）。従って、細胞によるＬＤＬＲ発現レベルの増加と及び特定の癌との間には相関がある。また、近年、ＬＤＬＲの数は、癌細胞などの特定の病的細胞の表面上で非常に高いことが示された。一般的に、１，０００～３，０００個のＬＤＬＲが、病的ではない細胞の表面に存在していることが認められている。同様に、皮質の灰白質の細胞には僅かなＬＤＬＲしか存在していない（Pitas et al., 1987, J. Biol. Chem., 262, 14352-14360）。神経膠芽腫の場合、ＬＤＬＲの過剰発現が示されている。従って、脳腫瘍細胞の表面上に、１２５，０００（Ｕ－２５１細胞について）から９００，０００個（ＳＦ－７６７細胞について）のＬＤＬＲが計測されている（Malentiska et al., 2000, Cancer Res., 60, 2300-2303; Nikanjam et al., 2007, Int. J. Pharm., 328, 86-94）。また、多くの腫瘍細胞がＬＤＬＲを、例えば、前立腺癌（Chen et al., 2001, Int. J. Cancer, 91, 41-45）、大腸癌（Niendorf et al., 1995, Int. J. Cancer, 61, 461-464）、白血病（Tatidis et al., 2002, Biochem. Pharmacol., 63, 2169-2180）、結腸直腸癌（Caruso et al., 2001, Anticancer Res., 21, 429-433）、乳癌（Graziani et al., 2002, Gynecol. Oncol., 85, 493-497）、並びに、肝臓、副腎、膵臓、卵巣、肺などの癌のＬＤＬＲを過剰発現することが注記されるべきである。」

（オ）

「【０１３２】

実施例ＩＩ

ペプチドベクターの設計

ペプチドがｈＬＤＬＲに結合する能力を決定した。この目的を達成するために、接着及びコンフルエントなＣＨＯ－ｈＬＤＬＲ－ＲＦＰ細胞を、６ウェルプレート中で培養した。１つの条件につき３つの細胞のウェルを使用する。

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【０１３３】

Ｓｔａｇに付着させた１０μMの参照ペプチド１（「配列番号１７」と呼ばれる、そのアミノ酸配列は、ＷＯ２０１１/１３１８９６において配列番号１７として開示されている）（「配列番号１７－Ｓｔａｇ」）を含む溶液を、ＨａｍＦ１２－１％ＢＳＡ培養培地中で調製した。この溶液に、評価すべき１０μMのペプチドを加えた（競合）。

【０１３４】

いくつかの対照溶液も調製する：（ｉ）ＨａｍＦ１２－１％ＢＳＡ培地。（ｉｉ）ＨａｍＦ１２－１％ＢＳＡ培地＋１０μMの対照ペプチドＣＴＲＬ－ＳＴａｇ（ＳＴａｇを含む任意のペプチドの非特異的結合の評価）。（ｉｉｉ）ＨａｍＦ１２－１％ＢＳＡ培地＋１０μMのペプチド配列番号１７－ＳＴａｇ＋１０μMの対照ペプチドＣＴＲＬ（対象のペプチドと対照ペプチドＣＴＲＬの間の「非特異的」競合の評価）。

【０１３５】

使用されるＦＲＥＴアプローチは、実施例ＩＩＩに記載のものである。

【０１３６】

得られた結果を以下の表１に提示する。表は、本発明のペプチドによって置換された、ｈＬＤＬＲに対する親和性である、参照ペプチドベクター（配列番号１７－ＳＴａｇ）に対する競合％の結果を示す。置換値が大きくなればなるほど、ｈＬＤＬＲに対するペプチドの親和性は高くなる。この数値が５０％を超えると、ペプチドは、参照ペプチド１よりも高い親和性を有する。

【０１３７】

【表１】

［図：0001410645000002.jpg］

【０１３８】

提示された結果は、配列番号１～５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む本発明のペプチドが、参照ペプチド１よりもヒトＬＤＬＲに対して高度に優れた親和性を有することを示す。これらの結果は、特に、ペプチドのサイズが小さいことを考えると興味深い。

【０１３９】

さらに、表面プラズモン共鳴（Biacore（登録商標））を使用して測定された本発明のペプチドの結合親和性ＫＤもまた顕著な結果を示す。例えば、配列番号１のペプチドは、２２nMという低いＫＤ値を示す。

【０１４０】

【表２】

［図：0001410645000003.jpg］

【０１４１】

本発明のペプチドのインビトロにおける血漿中の安定性（すなわち半減期又はｔ１/２）もまた評価された。簡潔に言えば、各ペプチドを、３７℃で８時間まで新しく回収されたスイス（ＣＤ－１）マウス血液中でインキュベーションし、血漿画分中の分析物を、液体クロマトグラフィー－タンデム型質量分析計（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）分析法を使用していくつかの時点で定量した。結果は、本発明の全てのペプチドが、少なくとも３．９時間及び９．２時間以下のインビトロにおける半減期の値を示すことを示す。

【０１４２】

【表３】

［図：0001410645000004.jpg］

【０１４３】

従って、本発明のペプチド又は疑似ペプチドは、以下の顕著な薬理学的特性を有する：（ｉ）１００nMの範囲のｈＬＤＬＲに対する見かけの親和性（Ｋｍ）及び１０nMの範囲の親和性（ＫＤ）、これは以前のペプチドより非常に優れており、かつ、ペプチドの結合、エンドサイトーシス、細胞内放出又は経細胞輸送／排出後の放出に適合している（Yu et al., 2011, Sci Transl Med., May 25;3(84):84ra44）；（ｉｉ）ｈＬＤＬＲに対するその特異性を支持する物理化学的な特徴（ジスルフィド架橋の環化を介した拘束されたコンフォメーション）；８アミノ酸までに低減されたサイズ；この受容体に対するその特異性を促進するために非天然アミノ酸は４つ以下；（ｉｉｉ）酵素的タンパク質分解に対するより大きな抵抗性：内因性ペプチド及び一般的には天然アミノ酸のみを含む小さな鎖状ペプチドは、血液中で非常に短いインビトロにおける半減期（ｔ１/２）を有し、典型的には分単位の範囲を有するが（Foltz et al., 2010, J Nutr., Jan;140(1):117-8）、本発明のペプチドのｔ１/２は、１．５時間から９．２時間までの範囲である。（ｉｖ）小さなサイズ及び１ｋＤａに近い分子量により、合成費用及び工業規模での将来的な生産量を減少させることが可能となる。」

（カ）

「【０１４８】

実施例ＩＶ

ＢＢＢのインビトロモデルにおける内皮細胞上のＬＤＬＲに対して親和性を有する合成ペプチドの毒性、エンドサイトーシス及び経細胞輸送

内皮細胞に対するペプチドの可能性ある毒性作用、これらの細胞におけるペプチドの結合／蓄積、及びペプチドの経細胞輸送による通過を、インビトロのＢＢＢモデルにおいて評価する。共培養モデルを組み立てるのに必要とされる細胞は、ラット又はマウス脳毛細血管内皮細胞（ＢＣＥＣ）及びラット又はマウス星状膠細胞である。このタイプのインビトロのＢＢＢモデルを使用して、数多くの分子、特に薬理学的薬剤の、ＢＣＥＣを通過する受動通過又は能動輸送を、及び従って、インビボにおいてＣＮＳ組織に到達するその能力を推定することによって評価する。現在までに開発された種々のモデル（ウシ、ブタ、マウス、ヒト）は、脳内皮、特にタイトジャンクション、開窓がないこと、経内皮チャネルがないこと、疎水性分子に対する低い透過性、及び高い電気抵抗を特徴とする、超微細構造的な特性を有する。さらに、これらのモデルは、ＢＢＢを通過するその特性についてインビトロ及びインビボで評価された様々な分子について行なわれた測定の結果間に確かな相関を示した。現在までに得られた全てのデータは、これらのインビトロのＢＢＢモデルが、細胞培養実験に伴う利点を保持しつつ、インビボで存在する細胞環境の幾分の複雑さを再現することによって、インビボの状況を厳密に擬態することを示す。

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【０１４９】

例えば、インビトロのラットＢＢＢモデルは、ＢＣＥＣと星状膠細胞の共培養を利用する。細胞培養前に、膜インサート（Millicell１．０μmの多孔度；６ウェル又は１２ウェルのプレートについて）の上の部分を、ＩＶ型コラーゲン及びフィブロネクチンで処理して、ＢＣＥＣの最適な接着を可能とし、基底層の状態を作る。混合星状膠細胞の一次培養液を、新生児ラット大脳皮質から確立する（Dehouck et al., 1990, J. Neurochem., 54, 1798-1801）。簡潔に言えば、髄膜を除去した後、脳組織を８２μmのナイロンふるいに通過させる。星状膠細胞を、１．２×１０５個の細胞/mlの濃度で、１０％の加熱により失活させたウシ胎児血清を補充した２mlの最適な培養培地（ＤＭＥＭ）と共に、マイクロプレートウェル中に分布する。培地を１週間に２回交換する。ＢＣＥＣを、２日間毎に添加された、２０％（ｖ/ｖ）ウシ乏血小板血漿由来血清、２mmのグルタミン、５０μg/mlのゲンタマイシン、及び１ng/mlの塩基性線維芽細胞増殖因子を補充した、ＤＭＥＭ/Ｆ１２培地の存在下で増殖させる。その後、ＢＣＥＣを、２mlの共培養液中のフィルターの上表面に分配する。このＢＣＥＣ培地を１週間に３回交換する。これらの条件下、分化ＢＣＥＣは、７日後にコンフルエントな単層細胞を形成する。

【０１５０】

その毒性を試験するために、ＩｇＧ１抗体のヒトＦｃフラグメントに化学的にコンジュゲート又は融合させた本発明のペプチドを、培養システムの上のチャンバーで、内皮細胞と３０分間又は２時間接触させてインキュベーションする。下のチャンバーの培養培地を、様々な時点で回収し、ＦｃフラグメントをサンドイッチＥＬＩＳＡによって定量する。ＢＢＢを通過しない蛍光小分子であるルシファーイエロー（ＬＹ）を、まず、インビトロにおいて分析した全てのウェルにおいてＢＢＢの完全性を評価するために、第二に、ペプチドを共インキュベーションして、このＢＢＢを形成する内皮細胞に対してペプチドの毒性がないことを評価するために使用する。培養培地を種々の時点で回収し、蛍光を蛍光定量法によって定量する。結果を、内皮表面透過度（すなわちＰｅ）として１０－３cm/分で表現する。インビトロのバリアは、ＬＹのＰｅ値が０．６×１０－３cm/分よりも大きい場合に、「透過性」又は「開放」と考える。電気抵抗器を用いて測定されΩ.cm２で表現される、経内皮電気抵抗（ＴＥＥＲ）もまた、ＢＢＢを通過する試験中にインビトロにおけるＢＢＢの完全性を測定することを可能とする。品質閾値は＞５００Ω.cm２に設定される。

【０１５１】

実施された実験は、使用された対照ペプチドだけでなく、前記ペプチドの毒性もないこと、及び、ＢＢＢの透過特性に対する有害な作用がないことを示す。

【０１５２】

対照として、ＤｉＩ－ＬＤＬを、インビトロのＢＢＢモデルの下の区画において定量した（図５－Ｊ ＷＴ曲線）。グラフは、１つのインサートあたり４μgで輸送の飽和を示す。ＤｉＩ－ＬＤＬを用いて定量されたシグナルのＬＤＬＲ特異性を確認するために、この実験を、ＬＤＬＲ－／－ラット（ＫＯ）からのＢＣＥＣに基づいたインビトロのＢＢＢモデルを用いて繰り返した。図５－Ｊのグラフは、ＬＤＬＲ－/－ラットから調製された場合、下の区画へのＢＣＥＣ単層を通過するＤｉＩ－ＬＤＬの輸送が全くないことを示す（ＷＴ及びＬＤＬＲ－/－ラットＢＣＥＣを用いての実験間の有意な差）。

【０１５３】

ヒトＦｃフラグメントにコンジュゲートさせた本発明のペプチド（Ｆｃ－配列番号４３及びＦｃ－配列番号１）のインビトロでのＢＢＢにおけるＬＤＬＲへの結合／取り込みを、インビトロにおいて上記のようなラットモデルで確認する（図７）。この分析は、様々な時点（３０分間から２時間）及び濃度（０．１から０．４μM）で内皮細胞及びレシーバーウェルに蓄積した、Ｆｃフラグメント又は本発明のペプチドにコンジュゲートさせたＦｃフラグメントの品質を、サンドイッチＥＬＩＳＡによって測定することによって行なわれる。毒性がないことは、時間の関数として一方の区画から別の区画へと通過するＬＹレベルの同時測定によって分析された様々なウェルにおけるＢＢＢの完全性を測定することによって評価される。

【０１５４】

実施例Ｖ

参照ペプチド２の生体分子融合、並びに、参照ペプチド１及び配列番号１の、ヒトＩｇＧ１抗体の定常フラグメント（Ｆｃフラグメント）への生化学的カップリング、並びに、ＣＨＯ ｈＬＤＬＲ細胞系及びインビトロラットＢＢＢモデルにおける結合、エンドサイトーシス及びＲＭＴの評価

ｈＬＤＬＲに対する親和性を有するいくつかのペプチドを、細胞系又は一次内皮細胞において発現されるｈＬＤＬＲへの、共有結合的に連結されたＦｃフラグメントの結合及び／又はエンドサイトーシス及び／又は経細胞輸送を促進するその能力について試験した。この目的のために、本発明らは、Ｆｃフラグメントと融合したペプチド配列番号４３をコードする配列、又は、同じＦｃフラグメントに化学的にカップリングさせたペプチド配列番号１７及び配列番号１をクローニングした。

【０１５５】

ペプチド配列番号４３に融合したＦｃフラグメントを産生するために、プラスミド－ｐＩＮＦＵＳＥ ｈＩｇＧ１－Ｆｃ２（InvivoGen）に基づいてプラスミド構築物を作成し、これを鋳型として使用した。Ｆｃ－配列番号４３をコードするメガプライマーを、ＷＯ２０１１/１３１８９６に記載のようにＰＣＲによって合成した。ＰＣＲ反応の産物（Ｆｃ－配列番号４３）を精製し、ＤｐｎＩ（親メチル化ＤＮＡを消化する酵素）で消化し、QuickChange II 部位特異的突然変異誘発キット（Agilent）を使用してマトリックスとして使用されたｐＩＮＦＵＳＥ ｈＩｇＧ１－Ｆｃ２プラスミドを用いて実施された第２のＰＣＲ反応においてメガプライマーとして使用した。コンピテントな細菌の形質転換後、単離されたコロニーを得、プラスミドＤＮＡを調製し、ｃＤＮＡ構築物を確認のために両方の鎖についてシークエンスした。このベクターはｐＦｃ－配列番号４３と呼ばれるが、これは哺乳動物細胞のトランスフェクション後、そのＮ末端又はＣ末端においてペプチド配列番号４３に融合したＦｃフラグメントの発現を可能とする。ヒト胚腎臓細胞（ＨＥＫ２９３）を、リポフェクタミン２０００（Invitrogen）を使用してプラスミドｐＦｃ－配列番号４３を用いてトランスフェクションした。トランスフェクションから７２時間後、培養上清に含まれるタンパク質Ｆｃ－配列番号４３を、ProsepプロテインＡ精製キット（Millipore）を使用して精製した。精製された融合タンパク質を、サンドイッチＥＬＩＳＡ試験によってアッセイし、続いてｈＬＤＬＲ ＣＨＯ細胞、一次内皮細胞及びインビトロのＢＢＢモデルで試験を実施するために使用した。

【０１５６】

Ｆｃフラグメント（Millipore）へのペプチド配列番号１７及び配列番号１の化学的カップリングのために、制御されたタンパク質－タンパク質架橋キット（Controlled Protein-Protein Crosslinking Kit、Thermo Scientific）を使用した。ペプチド配列番号１７及び配列番号１を、Ｆｃフラグメントの第一級アミン上に付加されたマレイミド基を有する精製Ｆｃフラグメントとの連結のために利用できる遊離スルフヒドリル基（システアミド）を担持するように合成された。１モルのＦｃフラグメントあたりのペプチドのモル数は１～７と評価された。得られたタンパク質はＦｃ－配列番号１７及びＦｃ－配列番号１と命名され、サンドイッチＥＬＩＳＡ試験によってアッセイされた。それらを続いて使用して、ＣＨＯ ｈＬＤＬＲ細胞上での試験を実施した。

【０１５７】

Ｆｃ－配列番号４３及びＦｃ－配列番号１の結合及びエンドサイトーシスもまた、パルスチェイス実験を使用した免疫細胞化学法によって評価された（図４）。簡潔に言えば、ＣＨＯ－ｈＬＤＬＲ－ＧＦＰ細胞を、４℃で３０分間、５nMの濃度のＦｃ－ペプチドと共にインキュベーションし、その後、十分に洗浄し、チェイス媒体中、３７℃で５分間インキュベーションして、細胞質内小胞の蓄積を可能とした。その後、細胞を４％ＰＦＡを用いて１０分間かけて固定し、ＰＢＳ／トリトンＸ１００ ０．１％を用いて１０分間かけて透過処理し、その後、Ａｌｅｘａ５９４にコンジュゲートさせた抗ヒトＦｃ抗体を用いて免疫染色した。Ｆｃフラグメントに融合させたペプチド配列番号４３、及びＦｃフラグメントに化学結合させたペプチド配列番号１は、ＳＴａｇにカップリングさせたペプチドで観察されたようにＬＤＬＲ媒介エンドサイトーシスを受ける。Ｆｃ単独では結合は全く観察されない。ＣＨＯ ＷＴ細胞では全く結合は観察されていない（示していない）。

【０１５８】

実施例Ｖに記載のようなインビトロＢＢＢモデルのラットＢＣＥＣを、Ｆｃ－配列番号４３、対、陰性対照として使用されたＦｃフラグメント単独、及び、Ｆｃ－配列番号１、対、陰性対照としてのＦｃ－ＣＴＲＬ（配列番号４３のスクランブル）の結合／取り込み及び輸送実験に使用した。ＬＤＬＲの発現、及びインビトロＢＢＢモデルにおけるＲＭＴについてのその機能性を評価した（図５）。その後、Ｆｃ－配列番号４３対Ｆｃを、３７℃で生ＲＢＣＥＣ上、種々の濃度で３０分間インキュベーションした（図７－Ａ）。Ｆｃ－配列番号１対Ｆｃ－ＣＴＲＬもまた、０．１μMで３０分間（図６－Ｇ及び６－Ｈ）又は２時間、生ＲＢＣＥＣ上、３７℃でインキュベーションした（図７－Ｂ）。このような共インキュベーション後、細胞単層を十分に洗浄し、４％のＰＦＡで固定した。細胞単層を、０．１％トリトンＸ１００溶液を用いて透過処理した。Ｆｃ、Ｆｃ－配列番号４３、Ｆｃ－配列番号１及びＦｃ－ＣＴＲＬを、ヒトＦｃフラグメントに対する一次抗体を使用して明らかとした（図６）。その後、共焦点顕微鏡を使用して、ＤｉＩ－ＬＤＬ小胞とＦｃ－配列番号４３の蛍光との間の共局在を評価した（図６－ＡからＤ）。同じ実験をまた、ＬＤＬＲ－/－ラット（ＫＯ）のラットＢＣＥＣを用いて実施した（Sigma AldrichのSAGE研究所）（図６－Ｅ及び６－Ｆ）。この実験により、ＤｉＩ－ＬＤＬ結合及びエンドサイトーシスにおけるＬＤＬＲの役割が確認された。なぜなら、ＤｉＩ－ＬＤＬ結合は、ＬＤＬＲ－/－ラットＢＣＥＣにおいては観察されなかったからである。同時に、ＤｉＩ－ＬＤＬの結合及びＦｃ－配列番号４３についての染色は、ＬＤＬＲ－／－ＢＣＥＣには検出されなかった。

【０１５９】

Ｆｃ－配列番号４３及びＦｃ－配列番号１のＢＣＥＣへの結合／取り込みを確認するために、種々の時間及び濃度を、ラットのインビトロＢＢＢモデルにおいて評価した（図７）。図７－Ａのグラフは、Ｆｃフラグメントと比較したＦｃ－配列番号４３の結合／取り込みの有意差を示す。図７－Ｂのグラフは、Ｆｃ－ＣＴＲＬと比較したＦｃ－配列番号１の結合／取り込みの有意差を示す。」

イ 引用文献５の記載事項

原査定の拒絶の理由で引用文献５として引用された、本願の優先日前の２０１５年１２月２１日に頒布された総説刊行物である、Reports of Practical Oncology and Radiotherapy, 2014年, Vol.19, S13-S21（以下、引用文献５という。）には、以下の事項が記載されている。下線は当審にて付加した。

（キ）

「４．１． 神経内分泌腫瘍イメージングにおけるガリウム-68二官能性キレーター(BFC)

二官能性キレーターは、放射性同位元素とベクターの結合体として作用する化合物である。BFCの主な特徴は、アイソトープを迅速かつ安定的に取り込み、生体分子と共有結合を形成する能力であり、ターゲティングを担う。過去10年間、BFCへの関心は、臨床および前臨床診断における陽電子放射断層撮影（PET）用の放射性標識ペプチドの合成と使用、および放射線を利用した治療薬と切っても切れない関係にある。

ガリウム-68の導入には、環内に3個または4個の窒素原子を持つ大環状キレーターがよく検討されている。その中でも、ガリウム原子の不可逆的錯形成、熱力学的安定性、室温での優れた動力学的安定性から、トリアザ環とテトラアザ環を持つ分子が最も普及している。外部置換基は通常カルボキシル基の形で、様々な標的分子との結合を可能にする。

DOTA (1,4,7,10-テトラアザシクロドデカン-1,4,7,10-テトラ酢酸)は、入手しやすく、配位化学がよく認識されているため、最も頻繁に使用されるキレーターであり続けている。その6配位トリアザ環類似体であるNOTA ((1,4,7-トリアザノナン-1,4,7-トリイル)トリ酢酸)は、ガリウム-68とわずかに変形した八面体錯体を形成し、低温でより高い安定性とGa(III)の迅速な取り込みを示す。DOTAやNOTAに類似した化合物のかなりの数が、特定の用途に使用されてきた（Fig. 2)。

・・・・

多くのレセプターは癌細胞で過剰発現しているため、活性中心に特異的なアミノ酸配列を持つ標的ペプチドをBFCを介して適切な放射性同位元素で標識し、PETや治療薬のための特異性の高いイメージングプローブの開発に使用されている。

68Ga-DOTAペプチドは、神経内分泌腫瘍（NET）細胞に過剰発現しているソマトスタチン受容体（SST）に特異的に結合するPETトレーサーである。標的薬剤は、活性オクタペプチド（オクトレオトライド、OC）や関連ペプチドアナログ、TOC（Tyr3-OC）、TATE（Tyr3-Thr8-OC）、NOC（NaI3-OC）などのペプチドの共有結合を可能にする標準中間体を利用して、BFCを介して結合される（図2）。」（S15頁右欄19行～S16頁左欄下から3行）

（ク）

「ソマトスタチン受容体への親和性にはばらつきがあるが、記載されたすべての化合物（68Ga-DOTA-TOC、-NOC、-TATE）は、高分化NET病変の局在診断に正確であり、CTよりも良好であることが報告されている。

他のモダリティと比較して、転移および原発不明神経内分泌腫瘍の検出において、111In-pentetreotide-SPECTよりもPETの優位性が示されている。68Ga-SSTRを用いたPET画像診断もまた、非癌性腫瘍において18F-FDOPA-PETよりも正確であることが判明している。神経堤腫瘍（傍神経節腫を含む）の患者では、[68Ga]-DOTA-TATEは[123I]-MIBGよりも多くの腫瘍部位を検出した。

放射性核種で標識されたDOTA-SSTRアナログは、神経内分泌腫瘍の診断および治療に使用される。典型的には、68Ga-DOTA-TOCが診断に用いられ、イットリウム-90やルテチウム-177のような高エネルギーまたは中エネルギーのβ-放出核種で標識された同じ化合物が治療に用いられる。診断用アイソトープと治療用アイソトープを結合させたリガンドをNETの治療に使用することで、より良い治療計画が可能になり、診断がその後の治療に合わせて行われる個別化医療のように治療結果を評価することができる。」（S16頁右欄9～31行）

（ケ）

「図2

DOTA-TOC（a）、DOTA-NOC（b）、DOTA-TATE（c）の構造。核医学で最も臨床応用されている68Ga標識医薬品。」（S17頁図2）

（コ）

「４．２．１． 血管新生

血管新生に重要な役割を果たす受容体は、いくつかの実験薬の重要な標的である。αvβ3インテグリンの発現は、血管新生が旺盛な血管で検出され、転移能の高い腫瘍を示す。これまでに最も多く評価された化合物の一つは[18F]ガラクト-RGDであり、これはαvβ3インテグリンに特異的に結合し、非常に優れた薬物動態を示す。[68Ga]DOTA-RGDや、修飾された二官能性リガンドと結合した他のRGDペプチドについても、同様の結果が得られている： [68Ga]NS3-RGD、[68Ga]Oxo-DO3A-RGD、または4つの窒素原子を持つ開鎖H2dedpa。VEGF（血管内皮増殖因子）受容体を用いた血管新生の効果的な診断も報告されている。トレーサーは一本鎖のVEGF（scVEGF）で、NOTAにポリエチレングリコール（PEG）ブリッジで結合しており、常温でガリウム-68による標識に適していた。ガリウム-68で標識したscVEGFPEG-NOTAをHT-29（ヒト結腸腺癌）担癌マウスに静脈内注射したところ、腫瘍構造が明瞭に可視化された。この標識法は、腫瘍血管新生の標的イメージング用のキット化放射性医薬品として提案された。」（S18頁左欄6～27行）

（サ）

「４．２．２． 一般的な腫瘍イメージング

腫瘍におけるケモカイン受容体CXCR4のマッピングは、乳癌、前立腺癌、肺癌における腫瘍の攻撃性の評価や転移播種確率の推定に用いられる。CXCR4イメージング用の特異的トレーサーであるガリウム-68標識DOTA-4-FBn-TN14003（フッ素化14-アミノ酸ペプチド）は、この目的のための潜在的PETトレーサーとして合成された。

同様の研究が、腫瘍の攻撃性と転移性のバイオマーカーとして確立されているウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子受容体（uPAR）を用いて行われた。合成ペプチド（Asp-cyclohexylalanine-Phe-d-Ser-d-Arg-Tyr-Leu-Trp-Ser (AE105)）はヒトuPARに高い親和性を持つことが同定されている。68Ga-DOTA-AE105-NH2および68Ga-NODAGA-AE105-NH2をPETイメージング用の最初のガリウム-68標識uPAR放射性トレーサーとして使用したことが報告されており、NODAGAは腫瘍対バックグラウンド比が最も高いトレーサーとして好まれている。」（S18頁左欄28行～右欄3行）

（シ）

「B16F10マウスを用いた68Ga-SCN-NOTA-BZAの生体内分布およびマイクロPET試験では、腫瘍への選択的取り込みが示された。この放射性トレーサーは、それ以上代謝されることなく、腎排泄によって効果的に消去された。」。」（S18頁右欄12～15行）

（ス）

「４．２．５． 前立腺癌

前立腺癌のイメージングには、フッ素-18または炭素-11で標識された18FFDG、酢酸、コリンの3つのトレーサーが主流であった。前立腺特異的膜抗原（PSMA）は、前立腺癌で過剰発現するユニークな膜結合型糖タンパク質であり、特異性の高い前立腺癌細胞表面タンパク質として診断が確立されている。68Ga-DOTA-PSMAおよび68Ga(HBED-CC)-PSMAの合成に成功した後、臨床試験で有望な結果が得られ、PSAが2.2ng/mlを超えると100％の検出率で少なくとも1つの癌を疑う病変が示された。前立腺がんが疑われる病変は、注入後1時間という早い段階で優れた造影性を示し、PSA値が低い場合でも高い検出率を示した。」（S19頁左欄42行～最下行）

（セ）

「６．結論

68Ge/68Gaジェネレーターの建設により、このアイソトープで標識された放射性医薬品の医療への応用が拡大した。市販の製薬グレードの68Ge/68Gaジェネレーターが日常的に使用できるようになり、DOTA、NOTA由来の二官能性キレーターを用いた化学的性質が良好になったことで、PETイメージングのあらゆる分野へのガリウム-68の応用に輝かしい未来が開かれた。」（S19頁右欄25～40行）

ウ 引用文献４の記載事項

また、原査定の拒絶の理由で引用文献４として引用された、本願の優先日前の２０１５年１２月２１日に頒布された刊行物である、Nuclear Medicine and Biology，2012年，Volume 39, Issue 4，pp. 560-569（以下、引用文献４という。）には、以下の事項が記載されている。下線は当審にて付加した。

（ソ）

「要旨

はじめに：ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子受容体（uPAR）は、腫瘍の攻撃性と転移性を示すバイオマーカーとして確立されている。64Cuで標識したDOTA-AE105およびDOTA-AE105-NH2は、ヒト癌異種移植マウスモデルにおいて、陽電子放射断層撮影法（PET）を用いてuPARの発現を非侵襲的にモニターできることがこれまでに証明されている。ここでは、68Ga-DOTA-AE105-NH2および68Ga-NODAGA-AE105-NH2を導入し、小動物PETを用いたイメージング特性を評価する。

方法：DOTA-AE105-NH2およびNODAGA-AE105-NH2の合成は、Fmoc戦略を用いた固相ペプチド合成プロトコルに基づく。溶出液は陽イオン交換カラムで濃縮するか、分画して標識に直接使用した。両トレーサーのin vitro特性評価として、分配係数、緩衝液および血漿安定性、uPAR結合親和性および細胞取り込みを測定した。In vivoでの特性を明らかにするために、ヒト神経膠腫U87MG腫瘍異種移植片を持つヌードマウスの中でダイナミックmicroPETイメージングを行った。

結果：in vitro実験では、両ペプチドともuPAR結合親和性はnMの低い範囲であり、AE105と同一であった。DOTA-AE105-NH2およびNODAGA-AE105-NH2の68Gaに対する標識は、それぞれ95℃及び室温で行われた。最も高い放射化学的収率と純度は分画溶出を用いて得られた。NODAGA-AE105-NH2の標識効率に対するアセトンの負の影響が観察された。リン酸緩衝生理食塩水およびマウス血漿中での安定性は良好であった。U87MG腫瘍細胞では、両トレーサーとも高い細胞取り込みが認められた。ダイナミックマイクロPETイメージングでは、両トレーサーとも良好な腫瘍対バックグラウンド比を示した。腫瘍への取り込みは、68Ga-NODAGA-AE105-NH2および68Ga-DOTA-AE105-NH2について、それぞれ注入後30分で2.1% ID/gおよび1.3% ID/g、注入後60分で2.0% ID/gおよび1.1% ID/gであった。

結論：68Ga-DOTA-AE105-NH2および68Ga-NODAGA-AE105-NH2を、汎用性と優れた画像特性を併せ持つ非侵襲的PETイメージング用の最初のガリウム-68標識uPAR放射性トレーサーとして使用したことが報告された。これらの新しいトレーサーは、腫瘍組織内のuPAR発現を検出するための64Cu標識バージョン（64Cu-DOTA-AE105および64Cu-DOTA-AE105-NH2）に代わる興味深いトレーサーである。また、68Ga-NODAGA-AE105-NH2は、腫瘍とバックグラウンドの比率が最も高いため、好ましいトレーサーである。」（560頁要旨）

（タ）

「４． 考察

本研究では、サイクロトロンに依存する放射性核種に代わる興味深い選択肢として、68Ga標識ペプチドをPETトレーサーとして使用し、uPAR発現をイメージングするための放射性標識とその実現可能性について報告した。68Gaは68Ge/68Gaジェネレーターから容易に得られるので、68Ga標識ペプチドの癌イメージングへの使用は最近注目されている。」（564頁右欄26～33行）

（チ）

「インテグリン、ガストリン放出ペプチド受容体、ソマトスタチン、HER-2、MMP-9、前立腺特異的膜抗原などの受容体ベースの標的は、68Ga標識PETリガンドの有望な標的である。」（565頁右欄1～4行）

（ツ）

「しかし、神経内分泌腫瘍患者のソマトスタチン受容体のイメージングに68Ga-DOTA結合ペプチドを使用した良好な臨床結果が報告されている。より小さなトリシクロノナン構造に基づく改善された特性を持つ新しい大環状キレーターが開発され、対応するDOTA標識アナログと比較して腫瘍対バックグラウンド比がある程度改善された多くの研究で使用されている。」（566頁左欄2～10行）

審判請求人は、令和４年６月３０日付けの審判請求書において、要するに以下の旨、主張している。

（ア）

引用文献１には、上記本願発明の特徴の全てを開示してはおらず、特にキレーター及び当該キレーターとともにキレートを形成する放射線核種を用いることや、本願発明で具体的に用いられるキレーターやスペーサーやペプチドの種類に関して開示も示唆もなく、さらに、ＬＤＬＲを過剰発現するがん細胞におけるＬＤＬＲを標的とすることについても開示も示唆もなく、本願発明のような特定のコンジュゲート化合物およびその用途を開示も示唆もしていない。

引用文献４のコンジュゲートに使用されているペプチドは、ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子受容体（ｕＰＡＲ）を標的としており、ＬＤＬＲを標的とするペプチドとは全く異なっており、引用文献４は、配列番号１～９のペプチドを含み、ＬＤＬＲを過剰発現するがん細胞においてＬＤＬＲを標的とする本願発明のコンジュゲート化合物については、何ら記載も示唆もしていない。

また、引用文献５のコンジュゲートで使用されるペプチドは、ＬＤＬＲとは全く異なる受容体、すなわちソマトスタチン受容体を標的としており、引用文献５は、配列番号１～９のペプチドを含み、ＬＤＬＲを過剰発現するがん細胞においてＬＤＬＲを標的とする本願発明のコンジュゲート化合物について、何ら記載も示唆もしていない。

（イ）

本願発明は、上記の通り、ＬＤＬＲを過剰発現するがん細胞においてＬＤＬＲと結合し、イメージング又は放射線治療剤のために最適化された新規なコンジュゲート化合物を提供し、当該化合物がＬＤＬＲを過剰発現するがん細胞の効果的で信頼性が高い選択的標識化を可能にし、かかる癌の効率的診断又は放射線治療に最も適する。これに関して、ＬＤＬＲを標的としたコンジュゲート化合物を使用してがんのイメージングや放射線治療に適性があることを、本願発明が初めて示した。従って、本願発明のコンジュゲート化合物の開発は、当業者が容易になし得るものではなく、多数の実験結果に基づく多数のステップの選択の結果であり、本願発明のように特定のペプチド配列に基づいて、がんのイメージング、検出又は放射線治療に有効な化合物を得ることができたものである。

（ウ）

本願発明の化合物は、ＬＤＬＲを過剰発現するがん細胞に十分なレベルの標識を付与でき、このような効果は、がん細胞の表面における高いＬＤＬＲ密度及び受容体の再編成の可能性を考慮すると容易ではなく、なぜならばそのような変化は、コンジュゲート化合物ががん細胞に結合する能力に影響を及ぼすことが予想されるからである。本発明者らは、本願発明のコンジュゲート化合物がインビトロ及びインビボでがん細胞を効果的に標識し、その効果的なイメージング、検出、ステージ分類、又は放射線治療を可能にし、がん細胞に十分なレベルの照射を行い、かつ健康な組織には影響を与えないことを実証した（本願明細書段落００２５及び実施例）。

さらに、本発明者らによって得られた結果は、本願発明のコンジュゲート化合物がＬＤＬＲに対する親和性（ＫＤ）が向上し（実施例３）、健康な膵臓と比較して膵臓腫瘍においてより高い蓄積性を示すことも明確に示している（実施例４）。特に、当該実施例に示すように、がん組織の標識は、非がん組織の標識と比較して、１０～５０倍高い標識が可能である。この程度の蓄積量であれば画像上で確実且つ明確に識別するのに十分であり、また、放射線治療で使用する場合に、このコンジュゲート化合物は健康な細胞と比較して腫瘍細胞に対して非常に優れた特異性を有することを意味する。このような結果及び利点は、引用文献からは推論できない。

本願発明に係るコンジュゲート化合物の効果をより強調するために、別途手続補足書にて甲第１号証として補足データを提出した。全てのデータは、本願発明のコンジュゲート化合物がＬＤＬＲを過剰発現する種々のがん細胞の標識及び／又は検出において多くの利点を有することを証明するものであり、本願発明のコンジュゲート化合物は、引用文献の発明からは予測できない格別顕著な効果を有する。

上記（１）及び（２）において指摘したとおり、引用文献１には、「ＬＤＬＲに結合することができ、かつ、治療又は診断（イメージングを含む）薬物又は薬剤を送達、ターゲティング又はベクター化して、ＬＤＬＲの豊富な癌細胞に到達するために、特に有利である新規製品」が記載されており、特定のペプチド配列に基づいて、がんのイメージング、検出に有効な化合物は本願優先日前にすでに得られていたといえる。

請求人の主張は本願優先日前にこれら特定のペプチド配列が知られていたことや、薬学的に許容される放射性核種とともにキレートを形成するＮＯＤＡＧＡ、ＤＯＴＡ、ＤＯＴＡ－ＧＡ、ＮＯＴＡ、及びそれらの機能的誘導体から選択されるキレーターを用いることが当該分野における周知の解決手段であったことを無視するものであって、主張（イ）を採用することはできない。

上記（４）イにおいて指摘したとおり、ＬＤＬＲを過剰発現するがん細胞に十分なレベルの標識を付与できること、本願発明のコンジュゲート化合物がＬＤＬＲに対する親和性（ＫＤ）が向上していることなどは、引用文献１において用いられている配列番号１のペプチドが天然リガンドと競合することなく、従って、内因性ＬＤＬの輸送を干渉することなく、ＬＤＬＲに結合することができ、かつ、治療又は診断（イメージングを含む）薬物又は薬剤を送達、ターゲティング又はベクター化して、特にＣＮＳ及び／又は眼及び／又はＬＤＬＲの豊富な他の器官（例えば肝臓、副腎、腸）に、及び／又はＬＤＬＲの豊富な癌細胞に、及び／又は細胞のリソソーム区画に到達するために、特に有利であるものであるのだから、引用文献１の記載から予見しうる範囲内のことでしかない。

また、インビトロ及びインビボでがん細胞を効果的に標識し、その効果的なイメージング、検出、ステージ分類、又は放射線治療を可能にし、がん細胞に十分なレベルの照射を行い、かつ健康な組織には影響を与えないこと、健康な膵臓と比較して膵臓腫瘍においてより高い蓄積性を示すこと、特に、当該実施例に示すように、がん組織の標識は、非がん組織の標識と比較して、１０～５０倍高い標識が可能であること、画像上で確実且つ明確に識別するのに十分であり、また、放射線治療で使用する場合に、このコンジュゲート化合物は健康な細胞と比較して腫瘍細胞に対して非常に優れた特異性を有すること、甲第１号証に示されるように、腫瘍細胞への有意な取り込みが確認されたことなどについても、配列番号１のペプチドのＬＤＬＲへの結合特異性や、周知技術において知られた薬学的に許容される放射性核種とともにキレートを形成するＮＯＤＡＧＡ、ＤＯＴＡ、ＤＯＴＡ－ＧＡ、ＮＯＴＡ、及びそれらの機能的誘導体から選択されるキレーターを用いたことによる腫瘍への選択的取り込み、局在診断が正確、優れた造影性、優れた腫瘍対バックグラウンド比等から導かれる範囲内のことでしかなく、甲第１号証を参照しても本願補正発明に進歩性を認める余地はない。

よって、上記審判請求人の主張はいずれも採用できない。