2020-000087

本願は、平成２７年 ２月 ３日（パリ条約による優先権主張 ２０１４年 ２月 ６日 （ＵＳ）アメリカ合衆国）を国際出願日とする出願であって、令和 １年 ８月２８日付けで拒絶査定がなされ、これに対して、令和 ２年 １月 ６日に拒絶査定不服審判請求がなされるとともに手続補正がなされたものである。その後の当審における手続の経緯は、以下のとおりである。

令和 ３年 ７月２９日付け 拒絶理由通知書

令和 ４年 ２月 ３日付け 意見書、手続補正書

当審の拒絶理由で引用文献１として引用した、本願優先日前に頒布された又は電気通信回線を通じて公衆に利用可能となった引用文献である国際公開第２０１２／１４６６２８号（以下、「引用文献１」という。）には、以下の事項が記載されている（英語で記載されているため、日本語訳で摘記する。下線は合議体による。）。

ア．「請求項１．第一の抗原結合部分、２つのサブユニットからなるＦｃドメイン、及びエフェクター部分を含み、１以下のエフェクター部分が存在するイムノコンジュゲート。

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請求項１０．前記Ｆｃドメインは、Ｆｃ受容体への結合を改変されるように、及び／又はエフェクター機能を改変されるように操作される、請求項１から９の何れか一項に記載のイムノコンジュゲート。

請求項１１．前記Ｆｃ受容体がＦｃγ受容体である、請求項１０に記載のイムノコンジュゲート。

請求項１２．前記エフェクター機能がＡＤＣＣである、請求項１０に記載のイムノコンジュゲート。

請求項１３．前記改変される結合及び／又はエフェクター機能は、結合及び／又はエフェクター機能の減少である、請求項１０に記載のイムノコンジュゲート。

請求項１４．前記Ｆｃドメインは、Ｆｃ受容体、特にＦｃγ受容体に対するＦｃドメインの結合を減少させる一以上のアミノ酸変異を含む、請求項１３に記載のイムノコンジュゲート。

請求項１５．前記アミノ酸変異が、位置Ｐ３２９でのアミノ酸置換である、請求項１４に記載のイムノコンジュゲート。

請求項１６．Ｆｃドメインが、そのサブユニットの各々において、アミノ酸置換のＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇを含む、請求項１４又は１５に記載のイムノコンジュゲート。

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請求項２０．イムノコンジュゲートが第一及び第二の抗原結合部分を含む、請求項１から１９の何れかに記載のイムノコンジュゲート。

請求項２１．前記第一及び第二の抗原結合部分及び前記Ｆｃドメインが免疫グロブリン分子の一部である、請求項２０に記載のイムノコンジュゲート。

請求項２２．前記免疫グロブリン分子がＩｇＧクラスの免疫グロブリンである、請求項２１に記載のイムノコンジュゲート。

請求項２３．前記エフェクター部分が、免疫グロブリン重鎖の一方のカルボキシ末端のアミノ酸に、任意でリンカーペプチドを介して融合している、請求項２０又は２１に記載のイムノコンジュゲート。

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請求項２５．前記第一の抗原結合部分又は前記第一及び前記第二の抗原結合部分が、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、テネイシンＣのＡ１ドメイン（ＴＮＣ Ａ１）、テネイシン－ＣのＡ２ドメイン（ＴＮＣ Ａ２）、フィブロネクチンのエキストラドメインＢ（ＥＤＢ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、及びメラノーマ関連コンドロイチン硫酸プロテオグリカン（ＭＣＳＰ）からなる群から選択される抗原を指向する、請求項１から２３の何れか一項に記載のイムノコンジュゲート。

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請求項２７．エフェクター部分がサイトカインである、請求項１から２６の何れか一項に記載のイムノコンジュゲート。

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請求項３１．前記サイトカインがＩＬ－１０である、請求項２７に記載のイムノコンジュゲート。

請求項３２．請求項１から３１の何れか一項に記載のイムノコンジュゲート又はその断片をコードする単離されたポリヌクレオチド。

請求項３３．請求項３２に記載の単離されたポリヌクレオチドを含む発現ベクター。

請求項３４．請求項３２に記載の単離されたポリヌクレオチド、又は請求項３３に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。

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請求項３６．請求項３４又は３５に記載の宿主細胞を、イムノコンジュゲートの発現に適した条件下で培養すること、及び任意でイムノコンジュゲートを回収することを含む、請求項１から３１の何れか一項に記載のイムノコンジュゲートを生成する方法。

請求項３７．前記イムノコンジュゲートが請求項３６に記載の方法により生成される、抗原結合部分、Ｆｃドメイン及び単一エフェクター部分を含むイムノコンジュゲート。

請求項３８．請求項１から３１又は請求項３７の何れか一項に記載のイムノコンジュゲートと薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物。

請求項３９．必要とする個体における疾患の治療における使用のための、請求項１から３３又は請求項３７の何れか一項に記載のイムノコンジュゲート、又は請求項３８に記載の薬学的組成物。

請求項４０．必要とする個体における疾患の治療のための医薬の製造のための、請求項１から３３又は請求項３７の何れか一項に記載のイムノコンジュゲート、又は請求項３８に記載の薬学的組成物。

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請求項４３．前記疾患が炎症性疾患である、請求項３９又は４０に記載のイムノコンジュゲート又は薬学的組成物、又は請求項４１に記載の方法。

請求項４４．イムノコンジュゲートのエフェクター部分がＩＬ－１０である、請求項４３に記載のイムノコンジュゲート、薬学的組成物又は方法。」（請求項１～４４）

イ．「それにもかかわらず、当技術分野で公知の免疫グロブリン－サイトカインイムノコンジュゲートに関連した特定の欠点がある。例えば、これらのイムノコンジュゲートは、２つの免疫グロブリン重鎖の各々に結合された少なくとも一のサイトカインを有し、二価標的結合部分及び二つ以上のサイトカイン部分を持つイムノコンジュゲートを生じる（Ｃｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ４，１８１－１９４（２００９）、又はＯｒｔｉｚ－Ｓａｎｃｈｅｚ ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｌ Ｔｈｅｒ ８，６０９－６３２（２００８）に総説される）。図１は、当技術分野で知られている従来の免疫グロブリン、サイトカインイムノコンジュゲートを示し、ここでサイトカインは、２本の抗体重鎖の各々のＣ末端に融合される。二以上のサイトカイン部分の存在のため、このようなイムノコンジュゲートは、各々のサイトカイン受容体に対して高い親和性を有し（例えば、ＩＬ－２の場合にはピコモル親和性）、従ってサイトカインが連結されている免疫グロブリンの標的抗原（ｎＭの親和性）に対するよりも、サイトカイン受容体を発現する免疫エフェクター細胞にむしろ標的化される。更に、従来のイムノコンジュゲートは、イムノコンジュゲートのサイトカイン部分による末梢血中の免疫エフェクター細胞上のサイトカイン受容体の活性化から少なくとも部分的に生じる注入反応と関連することが知られている（例えば、Ｋｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２２，４４６３－４４７３（２００４）を参照）。」（第２頁第１２行～第２６行）

ウ．「本発明は、既知のイムノコンジュゲートに比較して、有効性の改善、活性の高い特異性、毒性の減少、及び血中半減期と安定性の改善を示す免疫グロブリン様イムノコンジュゲートを提供する。」（第３頁第１４行～第１６行）

エ．「図２２．Ａ）分析的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ（ＮｕＰＡＧＥ Ｎｏｖｅｘ Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓ Ｍｉｎｉ Ｇｅｌ， インビトロジェン）、ＮｕＰＡＧＥ ＬＤＳサンプルバッファー（４×）、１０分間７０℃で加熱、ＭＯＰＳバッファー、１６０Ｖ、６０分、ＭＷマーカーＭａｒｋ１２、還元（１）及び非還元（２）４Ｇ８ ＩｇＧ－ＩＬ－１０Ｍ１の無染色標準物質（インビトロジェン、Ｍ）。Ｂ）１：１相互作用モデルに対して全体的に近似される、４Ｇ８ ＩｇＧ－ＩＬ－１０Ｍ１のヒトＦＡＰに対するＳＰＲにもとづく親和性決定（ＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６）（チップ：ＧＬＭ；リガンド：ｈｕＦＡＰ（５００ＲＵ）；分析物：ＦＡＰ ４Ｇ８ ＩｇＧ－ＩＬ－１０Ｍ１ １６４ｋＤａ；分析物の濃度の範囲：１０、２、０．４、０．０８、０ｎＭ；会合時間：１８０ｓ；解離時間：６００ｓ；流速：５０μｌ／分；ｋｏｎ ６．６８×１０５ １／Ｍｓ；ｋｏｆｆ：１．７５×１０－５ １／ｓ；ＫＤ：２６ｐＭ）。Ｃ）１：１相互作用モデルに対して全体的に近似される、４Ｇ８ ＩｇＧ－ＩＬ－１０Ｍ１のヒトＩＬ－１０Ｒ１に対するＳＰＲにもとづく親和性決定（ＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６）（チップ：ＮＬＣ；リガンド：ＩＬ １０Ｒ１（１６００ＲＵ）；分析物：ＦＡＰ ４Ｇ８ ＩｇＧ－ＩＬ－１０Ｍ１ １６４ｋＤａ；分析物の濃度の範囲：５０、１０、２、０．４、０．０８、０ｎＭ；会合時間：１８０ｓ；解離時間：６００ｓ；流速：５０μｌ／分；ｋｏｎ：３．６４×１０５ １／Ｍｓ；ｋｏｆｆ：２．９６×１０－４ １／ｓ；ＫＤ：８１５ｐＭ）。」（第１１頁第１７行～第２８行）

オ．「本明細書で使用しているように、用語「イムノコンジュゲート」は、１つ以下のエフェクター部分が存在することを条件として、１つのエフェクター部分、少なくとも一つの抗原結合部分及びＦｃドメインを含む融合ポリペプチド分子を指す。特定の実施態様では、イムノコンジュゲートは、１つのエフェクター部分、２つの抗原結合部分、及びＦｃドメインを含む。本発明による特定のイムノコンジュゲートは、一以上のリンカー配列により連結される、エフェクター部分、２つの抗原結合部分、及びＦｃドメインから本質的になる。抗原結合部分およびエフェクター部分は、様々な相互作用によって、本明細書に記載されるように様々な立体配置でＦｃドメインに結合することができる。特定の実施態様において、２つの抗原結合部分とＦｃドメインは、完全な免疫グロブリン分子を形成するような立体配置でお互いに連結される。本明細書で言及されるイムノコンジュゲートは、融合タンパク質であり、すなわち、イムノコンジュゲートの成分はペプチド結合により、直接又はリンカーペプチドを介して相互に連結されている。」（第１３頁第２６行～第１４頁第５行）

カ．「本明細書で使用しているように、用語「サイトカイン」は、生物学的又は細胞性機能又はプロセス（例えば免疫、炎症および造血）を媒介および／または制御する分子を指す。本願明細書において使用する用語「サイトカイン」には、「リンホカイン」、「ケモカイン」、「モノカイン」及び「インターロイキン」が含まれる。有用なサイトカインの例には、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＭＩＰ－１α、ＭＩＰ－１β、ＴＧＦ－β、ＴＮＦ－αおよびＴＮＦ－βが含まれるが、これに限定されるものではない。特定のサイトカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＦＮ－α及びＩＦＮ－γである。特定の実施態様において、サイトカインは、ヒトサイトカインである。本明細書で使用される用語「サイトカイン」はまた、Ｓａｕｖｅ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８８，４６３６－４０（１９９１）；Ｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０１，４８５３－４８６１（２００３）及び米国特許出願公開第２００３／０１２４６７８号；Ｓｈａｎａｆｅｌｔ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １８，１１９７－１２０２（２０００）；Ｈｅａｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ５３，２５９７－６０２（１９９３）及び米国特許第５，２２９，１０９号；米国特許出願公開第２００７／００３６７５２号；国際公開第２００８／００３４４７３号；国際公開第２００９／０６１８５３号；ＰＣＴ特許出願ＰＣＴ／ＥＰ２０１２／０５１９９１に記述される、ＩＬ－２変異体などの野生型サイトカインに対応するアミノ酸配列における一以上のアミノ酸変異を含むサイトカイン変異体を含む。更に、サイトカイン変異体、例えばＩＬ－１５変異体が本明細書に記載されている。特定の実施態様において、サイトカインは、グリコシル化を排除するために変異されている。」（第１６頁第４行～第１９行）

キ．「用語「免疫グロブリン分子」は、天然に存在する抗体の構造を有するタンパク質を指す。例えば、ＩｇＧクラスの免疫グロブリンは、ジスルフィド結合している２つの同一の軽鎖と２つの同一の重鎖から成る約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端に、各重鎖は、可変重鎖ドメイン又は重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）を有し、続いて重鎖定常領域とも呼ばれる３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３）がある。同様に、Ｎ末端からＣ末端に、各軽鎖は、可変軽鎖ドメイン又は軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）を有し、続いて軽鎖定常領域とも呼ばれる定常軽鎖（ＣＬ）ドメインがある。免疫グロブリンの重鎖は、α（ＩｇＡ）、δ（ＩｇＤ）、ε（ＩｇＥ）、γ（ＩｇＧ），又はμ（ＩｇＭ）と呼ばれる５つのタイプの１つに割り当てることができ、そのうち幾つかは更にγ１（ＩｇＧ１）、γ２（ＩｇＧ２）、γ３（ＩｇＧ３）、γ４（ＩｇＧ４）、α１（ＩｇＡ１）及びα２（ＩｇＡ２）などのサブタイプに分割され得る。免疫グロブリンの軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）とラムダ（λ）と呼ばれる、２つのタイプのいずれかに割り当てることができる。免疫グロブリンは、免疫グロブリンのヒンジ領域を介して連結された２つのＦａｂ分子およびＦｃドメインから本質的になる。用語「抗体」は最も広い意味で用いられ、様々な抗体構造を包含し、限定されないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、及び、所望の抗原結合活性を示す限り、抗体断片を含む。」（第１７頁第１０行～第２３行）

ク．「エフェクター部分

本発明における使用のためのエフェクター部分は、一般に、例えばシグナル伝達経路を介して細胞活性に影響を与えるポリペプチドである。従って、本発明において有用なイムノコンジュゲートのエフェクター部分は、細胞内応答を調節する細胞膜の外側からシグナルを伝達する受容体媒介性シグナル伝達と関連することができる。例えば、イムノコンジュゲートのエフェクター部分は、サイトカインとすることができる。特定の実施態様において、エフェクター部分はヒトである。

特定の実施態様において、エフェクター部分は、単鎖エフェクター部分である。特定の実施態様において、エフェクター部分はサイトカインである。有用なサイトカインの例としては、限定されないが、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－２１、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＭＩＰ－１α、ＭＩＰ－１β、ＴＧＦ－β、ＴＮＦ－α、及びＴＮＦ－βを含む。一実施態様において、イムノコンジュゲートのエフェクター部分は、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－γ、ＭＩＰ－１α、ＭＩＰ－１β及びＴＧＦ－βの群から選択されるサイトカインである。一実施態様において、イムノコンジュゲートのエフェクター部分は、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＦＮ－α及びＩＦＮ－γの群から選択されるサイトカインである。特定の実施態様において、サイトカインのエフェクター部分は、Ｎ－および／またはＯ－グリコシル化部位を除去するために変異される。グリコシル化の排除は、組換え生産で得られる生成物の均質性を向上させる。

特定の実施態様において、イムノコンジュゲートのエフェクター部分はＩＬ－２である。

特定の実施態様において、ＩＬ－２のエフェクター部分は、活性化Ｔリンパ球細胞における増殖、活性化Ｔリンパ球細胞における分化、細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）活性、活性化Ｂ細胞における増殖、活性化Ｂ細胞における分化、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞内の増殖、ＮＫ細胞における分化、活性化Ｔ細胞またはＮＫ細胞によるサイトカイン分泌、及びＮＫ／リンパ球活性化キラー（ＬＡＫ）抗腫瘍細胞毒性からなる群から選択される一又は複数の細胞応答を誘発することができる。別の特定の実施態様において、ＩＬ－２エフェクター部分は、ＩＬ－２受容体のαサブユニットへの結合親和性が低下した変異体ＩＬ－２エフェクター部分である。β－およびγ－サブユニット（それぞれＣＤ１２２及びＣＤ１３２としても知られている）と一緒に、α－サブユニット（ＣＤ２５とも呼ばれる）は、ヘテロ三量体高親和性ＩＬ－２受容体を形成し、一方β－およびγ－サブユニットのみからなる二量体受容体は、中間体親和性ＩＬ－２受容体と呼ばれている。その全体が参照により本明細書に組み込まれるＰＣＴ特許出願番号ＰＣＴ／ＥＰ２０１２／０５１９９１に記載されるように、ＩＬ－２受容体のαサブユニットへの結合が減少した変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、野生型ＩＬ－２ポリペプチドと比較して、調節性Ｔ細胞におけるＩＬ－２シグナル伝達を誘導する能力の低下を有し、Ｔ細胞においてより少ない活性化誘導細胞死（ＡＩＣＤ）を誘導し、そしてインビボで減少した毒性プロファイルを有する。毒性が低下したそのようなエフェクター部分の使用は、Ｆｃドメインの存在に起因して長い血清半減期を有する、本発明によるイムノコンジュゲートに特に有利である。一実施態様において、本発明によるイムノコンジュゲートの変異体ＩＬ－２エフェクター部分は、非変異型ＩＬ－２エフェクター部分に比べて、ＩＬ－２受容体のαサブユニット（ＣＤ２５）に対する変異体ＩＬ－２エフェクター部分の親和性を低減又は消失させるが、（ＩＬ－２受容体のβ－及びγ－サブユニットからなる）中間体親和性ＩＬ－２受容体への変異体ＩＬ－２エフェクター部分の親和性を保持した少なくとも１つのアミノ酸変異を含む。一実施態様において、一又は複数のアミノ酸変異はアミノ酸置換である。特定の実施態様において、変異体ＩＬ－２エフェクター部分は、ヒトＩＬ－２の残基４２、４５、及び７２に対応する位置から選択される一つ、二つ、または三つの位置で、一つ、二つ又は三つのアミノ酸置換を含む。より特定の実施態様において、変異体ＩＬ－２エフェクター部分は、ヒトＩＬ－２の残基４２、４５、及び７２に対応する位置で三つのアミノ酸置換を含む。更により具体的な実施態様において、変異体ＩＬ－２エフェクター部分は、アミノ酸置換のＦ４２Ａ、Ｙ４５Ａ及びＬ７２Ｇを含むヒトＩＬ－２である。一実施態様において、変異体ＩＬ－２エフェクター部分はさらに、ヒトＩＬ－２の位置３に相当する位置でアミノ酸変異を含み、これはＩＬ－２のＯ－グリコシル化部位を除去する。特に、前記の付加的アミノ酸変異は、アラニン残基によってトレオニン残基を置換するアミノ酸置換である。本発明において有用な特定の変異体ＩＬ－２エフェクター部分は、ヒトＩＬ－２の残基、３、４２、４５および７２に対応する位置に４個のアミノ酸置換を含む。具体的なアミノ酸置換はＴ３Ａ、Ｆ４２Ａ、Ｙ４５Ａ及びＬ７２Ｇである。ＰＣＴ特許出願番号ＰＣＴ／ＥＰ２０１２／０５１９９１及びその添付の実施例に示すように、四重変異体ＩＬ－２ポリペプチド（ＩＬ－２ ｑｍ）は、ＣＤ２５への検出可能な結合、Ｔ細胞においてアポトーシスを誘導する能力の低下、Ｔｒｅｇ細胞においてＩＬ－２シグナル伝達を誘導する能力の低下、及びインビボでの毒性プロファイルの減少を呈示しない。しかし、それはエフェクター細胞においてＩＬ－２シグナル伝達を活性化する能力を保持しており、エフェクター細胞の増殖を誘導し、ＮＫ細胞による二次的サイトカインとしてＩＦＮ－γを生成する。

上記実施態様のいずれかに記載のＩＬ－２又は変異体ＩＬ－２エフェクター部分は、発現の増加又は安定性などのさらなる利点を提供する付加的な変異を含み得る。例えば、位置１２５のシステインは、ジスルフィド架橋ＩＬ－２二量体の形成を回避するためにアラニンなどの中性アミノ酸で置換されてもよい。従って、特定の実施態様において、本発明によるイムノコンジュゲートのＩＬ－２又は変異体ＩＬ－２エフェクター部分は、ヒトＩＬ－２の残基１２５に対応する位置で付加的なアミノ酸変異を含む。一実施態様において、前記付加的アミノ酸変異はアミノ酸置換Ｃ１２５Ａである。

特定の実施態様において、イムノコンジュゲートのＩＬ－２エフェクター部分は、配列番号２のポリペプチド配列を含む。別の特定の実施態様において、イムノコンジュゲートのＩＬ－２エフェクター部分は、配列番号３のポリペプチド配列を含む。

別の実施態様において、イムノコンジュゲートのエフェクター部分はＩＬ－１２である。特定の実施態様において、前記ＩＬ－１２のエフェクター部分は、単鎖ＩＬ－１２のエフェクター部分である。更により具体的な実施態様において、単鎖ＩＬ－１２のエフェクター部分は、配列番号４のポリペプチド配列を含む。一実施態様において、ＩＬ－１２のエフェクター部分は、ＮＫ細胞における増殖、ＮＫ細胞における分化、Ｔ細胞における増殖、及びＴ細胞分化からなる群から選択される細胞応答の一つ以上を誘発することができる。

別の実施態様において、イムノコンジュゲートのエフェクター部分はＩＬ－１０である。特定の実施態様において、前記ＩＬ－１０のエフェクター部分は、単鎖ＩＬ－１０のエフェクター部分である。更により具体的な実施態様において、単鎖ＩＬ－１０のエフェクター部分は、配列番号５のポリペプチド配列を含む。特定の実施態様において、前記ＩＬ－１０のエフェクター部分は、単鎖ＩＬ－１０のエフェクター部分である。更により具体的な実施態様において、単鎖ＩＬ－１０のエフェクター部分は、配列番号６のポリペプチド配列を含む。一実施態様において、ＩＬ－１０のエフェクター部分は、サイトカイン分泌の阻害、抗原提示細胞による抗原提示の阻害、酸素ラジカルの放出の減少、及びＴ細胞増殖の阻害からなる群から選択される細胞応答の一つ以上を誘発することができる。エフェクター部分はＩＬ－１０であることを特徴とする本発明によるイムノコンジュゲートは、炎症の下方制御のため、例えば炎症性疾患の治療において特に有用である。

別の実施態様において、イムノコンジュゲートのエフェクター部分はＩＬ－１５である。特定の実施態様において、前記ＩＬ－１５エフェクター部分は、ＩＬ－１５受容体のαサブユニットへの結合親和性が低下した変異体ＩＬ－１５エフェクター部分である。理論に縛られることを望むものではないが、ＩＬ－１５受容体のαサブユニットへの結合が減少した変異体ＩＬ－１５ポリペプチドは、身体全体の線維芽細胞に特異的に結合する能力が低下しており、野生型ＩＬ－１５ポリペプチドと比較して、改善された薬物動態及び毒性プロファイルをもたらす。毒性が低下したエフェクター部分、例えば説明され変異体ＩＬ－２及び変異体ＩＬ－１５エフェクター部分の使用は、Ｆｃドメインの存在に起因して長い血清半減期を有する、本発明によるイムノコンジュゲートに特に有利である。一実施態様において、本発明によるイムノコンジュゲートの変異体ＩＬ－２エフェクター部分は、非変異型ＩＬ－１５エフェクター部分に比べて、ＩＬ－１５受容体のαサブユニットに対する変異体ＩＬ－１５エフェクター部分の親和性を低減又は消失させるが、（ＩＬ－１５／ＩＬ－２受容体のβ－及びγ－サブユニットからなる）中間体親和性ＩＬ－１５／ＩＬ－２受容体への変異体ＩＬ－１５エフェクター部分の親和性を保持した少なくとも１つのアミノ酸変異を含む。一実施態様では、アミノ酸変異はアミノ酸置換である。特定の実施態様において、変異体ＩＬ－１５エフェクター部分は、ヒトＩＬ－１５の残基５３に対応する位置でアミノ酸置換を含む。より具体的な実施態様において、変異体ＩＬ－１５エフェクター部分は、アミノ酸置換のＥ５３Ａを含むヒトＩＬ－１５である。一実施態様において、変異体ＩＬ－１５エフェクター部分はさらに、ヒトＩＬ－１５の位置７９に相当する位置でアミノ酸変異を含み、これはＩＬ－１５のＮ－グリコシル化部位を除去する。特に、前記の付加的アミノ酸変異は、アラニン残基によってアスパラギン残基を置換するアミノ酸置換である。更により具体的な実施態様において、ＩＬ－１５のエフェクター部分は、配列番号７のポリペプチド配列を含む。一実施態様において、ＩＬ－１５のエフェクター部分は、活性化Ｔリンパ球細胞における増殖、活性化Ｔリンパ球細胞における分化、細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）活性、活性化Ｂ細胞における増殖、活性化Ｂ細胞における分化、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞内の増殖、ＮＫ細胞における分化、活性化Ｔ細胞またはＮＫ細胞によるサイトカイン分泌、及びＮＫ／リンパ球活性化キラー（ＬＡＫ）抗腫瘍細胞毒性からなる群から選択される一又は複数の細胞応答を誘発することができる。」（第４３頁第１５行～第４６頁第３２行）

ケ．「特定の実施態様において、イムノコンジュゲートは、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）に特異的である少なくとも一、典型的には二以上の抗原結合部分を含む。具体的な実施態様において、イムノコンジュゲートの抗原結合部分は、配列番号４１、配列番号４５、配列番号４７、配列番号５１、配列番号５５、配列番号５９、配列番号６３、配列番号６７、配列番号７１、配列番号７５、配列番号７９、配列番号８３、配列番号８７、配列番号９１、配列番号９５、配列番号９９、配列番号１０３、配列番号１０７、配列番号１１１、配列番号１１５、配列番号１１９、配列番号１２３、配列番号１２７、配列番号１３１、配列番号１３５、配列番号１３９、配列番号１４３、配列番号１４７、配列番号１５１及び配列番号１５５からなる群から選択される配列に対して、少なくともおよそ８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である重鎖可変領域配列、又は機能性を保持したその変異体を含む。別の具体的な実施態様において、イムノコンジュゲートの抗原結合部分は、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４３、配列番号４９、配列番号５３、配列番号５７、配列番号６１、配列番号６５、配列番号６９、配列番号７３、配列番号７７、配列番号８１、配列番号８５、配列番号８９、配列番号９３、配列番号９７、配列番号１０１、配列番号１０５、配列番号１０９、配列番号１１３、配列番号１１７、配列番号１２１、配列番号１２５、配列番号１２９、配列番号１３３、配列番号１３７、配列番号１４１、配列番号１４５、配列番号１４９及び配列番号１５３，からなる群から選択される配列に対して、少なくともおよそ８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である軽鎖可変領域配列、又は機能性を保持したその変異体を含む。より具体的な実施態様において、イムノコンジュゲートの抗原結合部分は、配列番号４１、配列番号４５、配列番号４７、配列番号５１、配列番号５５、配列番号５９、配列番号６３、配列番号６７、配列番号７１、配列番号７５、配列番号７９、配列番号８３、配列番号８７、配列番号９１、配列番号９５、配列番号９９、配列番号１０３、配列番号１０７、配列番号１１１、配列番号１１５、配列番号１１９、配列番号１２３、配列番号１２７、配列番号１３１、配列番号１３５、配列番号１３９、配列番号１４３、配列番号１４７、配列番号１５１及び配列番号１５５からなる群から選択される配列に対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である重鎖可変領域配列又は機能性を保持したその変異体、及び配列番号３７、配列番号３９、配列番号４３、配列番号４９、配列番号５３、配列番号５７、配列番号６１、配列番号６５、配列番号６９、配列番号７３、配列番号７７、配列番号８１、配列番号８５、配列番号８９、配列番号９３、配列番号９７、配列番号１０１、配列番号１０５、配列番号１０９、配列番号１１３、配列番号１１７、配列番号１２１、配列番号１２５、配列番号１２９、配列番号１３３、配列番号１３７、配列番号１４１、配列番号１４５、配列番号１４９及び配列番号１５３からなる群から選択される配列に対して、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である軽鎖可変領域配列又は機能性を保持したその変異体を含む。特定の実施態様において、イムノコンジュゲートの抗原結合部分は、配列番号１１１の重鎖可変領域配列、及び配列番号１０９の軽鎖可変領域配列を含む。更なる特定の実施態様において、イムノコンジュゲートの抗原結合部分は、配列番号１４３の重鎖可変領域配列、及び配列番号１４１の軽鎖可変領域配列を含む。特定の実施態様において、イムノコンジュゲートの抗原結合部分は、配列番号５１の重鎖可変領域配列、及び配列番号４９の軽鎖可変領域配列を含む。

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更に別の実施態様において、イムノコンジュゲートは、ＦＡＰに特異的なＦａｂ重鎖が、ホール修飾を含むＦｃドメインサブユニットとカルボキシ末端のペプチド結合を共有し、同様にＩＬ－１０ポリペプチドとカルボキシ末端ペプチド結合を共有するポリペプチド配列を含む。より具体的な実施態様において、イムノコンジュゲートは配列番号２４３又は配列番号２４５のポリペプチド配列、または機能性を保持したその変異体を含む。一実施態様において、イムノコンジュゲートは、ＦＡＰに特異的なＦａｂ重鎖が、ノブ修飾を含むＦｃドメインサブユニットとカルボキシ末端のペプチド結合を共有するポリペプチド配列を含む。更により具体的な実施態様において、イムノコンジュゲートは配列番号２４１のポリペプチド配列、または機能性を保持したその変異体を含む。別の実施態様において、イムノコンジュゲートはＦＡＰに特異的なＦａｂ軽鎖を含む。更により具体的な実施態様において、イムノコンジュゲートは配列番号２０５のポリペプチド配列、または機能性を保持したその変異体を含む。別の実施態様において、イムノコンジュゲートは配列番号２０５、配列番号２４１及び配列番号２４３のポリペプチド配列、または機能性を保持したその変異体を含む。更に別の実施態様において、イムノコンジュゲートは配列番号２０５、配列番号２４１及び配列番号２４５のポリペプチド配列、または機能性を保持したその変異体を含む。別の特定の実施態様において、ポリペプチドは、共有結合、例えばジスルフィド結合により連結されている。幾つかの実施態様において、Ｆｃドメインサブユニットの各々は、アミノ酸置換のＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇを含む。」（第５５頁第２２行～第５９頁第２３行）

コ．「実施例５

ＦＡＰ標的化４Ｇ８ベース、並びにＴＮＣ Ａ２標的化２Ｂ１０ベースのＩｇＧ－ＩＬ－１０イムノコンジュゲートが、２つの異なるＩＬ－１０サイトカインフォーマットを、ホール修飾を含んでなるヘテロ二量体ＩｇＧの重鎖のＣ末端へ融合させることにより構築された：（Ｇ４Ｓ）４２０量体リンカーが２つのＩＬ－１０分子の間に挿入された単鎖ＩＬ－１０、又は操作された単量体ＩＬ－１０のどちらか（Ｊｏｓｅｐｈｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７５，１３５５２－７（２０００））。両方の分子は、（Ｇ４Ｓ）３１５量体リンカーを介して、Ｃ末端Ｌｙｓ残基の欠失を伴い、ホール修飾を含んでなる重鎖のＣ末端へ融合された。ＩＬ－１０部分を保有する一重鎖のみにて生じるヘテロ二量体は、ノブ・イントゥ・ホール技術の適用によって達成される。ＩｇＧ－サイトカイン融合体は、ＩｇＧ様特性を有する。ＦｃγＲ結合／エフェクター機能を低下させ、ＦｃＲ同時活性化を防止するために、Ｐ３２９Ｇ ＬＡＬＡの変異がイムノコンジュゲートのＦｃドメインに導入された。各コンストラクトの配列は配列番号２３３、２３５及び２３９（ｓｃＩＬ－１０を含む２Ｂ１０）、配列番号２３３、２３７及び２３９（単量体ＩＬ－１０“ＩＬ－１０Ｍ１”を含む２Ｂ１０）、配列番号２４１、２４３及び２０５（ｓｃＩＬ－１０を含む４Ｇ８）、配列番号２４１、２４５及び２０５（ＩＬ－１０Ｍ１を含む４Ｇ８）に与えられる。これらの全てのイムノコンジュゲートは上記の方法に従って精製された。続いて、ＦＡＰ又はＴＮＣ Ａ２のそれぞれに対する結合特性、並びにヒトＩＬ－１０Ｒ１へのそれらの親和性がＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６バイセンサーを用いてＳＰＲによって測定された。簡潔には、標的のＦＡＰ又はＴＮＣ Ａ２並びにヒトＩＬ－１０Ｒ１はセンサーチップ表面に垂直な配向で固定化された（ＦＡＰは標準的なアミンカップリングにより、ＴＮＣ Ａ２及びヒトＩＬ－１０Ｒ１（両方ともＣ末端ａｖｉ－タグを介してビオチン化）はニュートラアビジン捕捉による）。続いて、ＩｇＧ－ＩＬ－１０イムノコンジュゲートは、水平配向での分析物として、ゼロ濃度を含む６つの異なる濃度で注入された。二重に参照した後、運動速度定数および親和性を決定するために、センサーグラムは１：１相互作用モデルに適合させた。分析的ＳＤＳ ＰＡＧＥ分析及び標的抗原並びにＩＬ－１０受容体に対するＳＰＲに基づいた親和性決定の結果を図２１および図２２に示す。データは、イムノコンジュゲートはＴＮＣ Ａ２又はＦＡＰにＫＤ値がそれぞれ５２又は２６で結合するが、ＩＬ－１０受容体に対するＫＤ値は５２０と８１５ｐＭであることを示している。」（第１０２頁第１１行～第１０３頁第５行）

サ．「実施例８

生体内分布の研究が、本発明のイムノコンジュゲートの腫瘍標的化を評価するために行われた。ＦＡＰ標的化２８Ｈ１ベースのＩｇＧ－ＩＬ－２ ｑｍは、ＦＡＰ標的化非結合型２８Ｈ１ ＩｇＧ及び４Ｂ９ ＩｇＧ、及び非標的化ＤＰ４７ＧＳ ＩｇＧに対して比較された。更に、ＳＰＥＣＴ／ＣＴイメージング研究が４Ｂ９ ＩｇＧ－ＩＬ－２ ｑｍを用いて行われ、ＤＰ４７ＧＳ ＩｇＧ－ＩＬ－２ ｑｍ、４Ｂ９ ＩｇＧ及びＤＰ４７ＧＳ ＩｇＧと比較された。

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図３１は、２４時間での２８Ｈ１及び４Ｂ９ ＩｇＧ１及び２８Ｈ１ ＩｇＧ－ＩＬ－２ ｑｍの組織分布と腫瘍標的化の間に有意差はなく（それ故サイトカインはイムノコンジュゲートの組織分布および腫瘍標的化の特性を有意には変更せず）、そしてＦＡＰ標的化コンストラクトの腫瘍対血液比は、非標的化ＤＰ４７ＧＳ対照ＩｇＧよりも有意に大きいことを示している。

これらの結果は、４Ｂ９ ＩｇＧ－ＩＬ－２ ｑｍイムノコンジュゲートのＳＰＥＣＴ／ＣＴイメージングで確認された（データは示さず）。４Ｂ９ ＩｇＧ－ＩＬ－２ ｑｍはＦＡＰ陽性ＨＥＫ－ＦＡＰに局在化するが、ＦＡＰ陰性ＨＥＫ－２９３対照腫瘍には局在化せず、一方非標的化ＤＰ４７ＧＳイムノコンジュゲートはどちらの腫瘍にも局在化しなかった。非結合体のＩｇＧとは異なり、４Ｂ９ ＩｇＧ－ＩＬ－２ ｑｍの弱い取り込みは、脾臓でも観察された。」（第１０６頁第３行～第１０８頁第１８行）

シ．「実施例２

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ＦＡＰ結合親和性

４Ｇ８及び２８Ｈ１抗ＦＡＰ抗体に基づいたＩｇＧ－ＩＬ－２ ｑｍイムノコンジュゲートのＦＡＰ結合活性が、対応する非修飾型ＩｇＧ抗体に比較してＢｉａｃｏｒｅ機器で表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定された。・・・・・・・・・・・・

［図：0001389989000001.jpg］

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続いて、ＩＬ－２Ｒβγヘテロ二量体とＩＬ－２Ｒαサブユニットへの４Ｇ８－及び２８Ｈ１ベースのＩｇＧ－ＩＬ－２ ｑｍイムノコンジュゲートの親和性を表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）により測定し、ＰＣＴ特許出願ＰＣＴ／ＥＰ２０１２／０５１９９１に記載されたＦａｂ－ＩＬ－２ ｑｍ－Ｆａｂ－イムノコンジュゲートのフォーマットと直接比較した。・・・・・・・・・・・・

［図：0001389989000002.jpg］

」（第９２頁第１９行～第９５頁第１行）

当審の拒絶理由で引用文献２として引用した、本願優先日前に頒布された又は電気通信回線を通じて公衆に利用可能となった引用文献である特表２０１２－５０４４２５号公報（以下、「引用文献２」という。）には、以下の事項が記載されている（下線は合議体による。）。

ス．「【図２３】図２３は、ＭＣ／９細胞増殖アッセイにおいて、改変体ＩＬ１０（Ｉ８７変異を有するＩＬ１０またはモノＩＬ１０のいずれか）を含むいくつかのｘｃｅｐｔｏｒタンパク質が、マウスＩＬ１０よりも免疫賦活性が低いことを示す。

【図２４】図２４は、ＭＣ／９細胞増殖アッセイにおいて、改変体ＩＬ１０（Ｉ８７変異を有するＩＬ１０またはモノＩＬ１０のいずれか）を含むいくつかのｘｃｅｐｔｏｒタンパク質が、ヒトＩＬ１０よりも免疫賦活性が低いことを示す。」（【００１３】）

セ．「（ＩＬ１０）

上記のように、一部の特定の実施形態では、本開示により、ＩＬ１０アゴニストである（すなわち、ＩＬ１０シグナル伝達を増大させ得る）結合領域またはドメインを含むポリペプチドを提供する。一部の実施形態では、ＩＬ１０アゴニスト結合ドメインは、ＩＬ１０もしくはＩＬ１０Ｆｃまたはその機能性サブドメインである。他の実施形態において、ＩＬ１０アゴニスト結合ドメインは、ＩＬ１０Ｒ１またはＩＬ１０Ｒ２に特異的に結合する単鎖結合タンパク質（ｓｃＦｖなど）である。一部の実施形態では、ＩＬ１０アゴニスト結合ドメインは、配列番号７の８７位に点変異、例えば「Ｉ」から「Ａ」または「Ｓ」（本明細書において、それぞれ、Ｉ８７ＡまたはＩ８７Ｓと称する）を含むＩＬ１０である。Ｉ８７改変体ＩＬ１０分子は、野生型ＩＬ１０と比べて免疫賦活性が低いことがわかっている（Ｄｉｎｇら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９１：２１３，２０００）。また、ＩＬ１０は、通常、各単量体分子のアミノ末端ドメインが他方の単量体のカルボキシ末端ドメインに結合しているホモ二量体を形成している。一実施形態において、ＩＬ１０アゴニスト結合ドメインは、分子の２つのサブドメイン（アミノおよびカルボキシ末端ドメイン）を引き離す短いリンカー（ｇｇｇｓｇｇ 配列番号３７９）を有するＩＬ１０分子であり、そのため、これらのサブドメインが分子内二量体を形成し得ることも調べた。これを、本明細書においてモノＩＬ１０分子と称する。」（【００３９】）

ソ．「一部の特定の実施形態では、本発明の多重特異性融合タンパク質は、特定の細胞型を標的化するために異なるフロントおよびバック末端親和性を有するように操作され得る。例えば、ＣＤ８６に対する親和性が、操作型ＩＬ１０アゴニスト（例えば、Ｉ８７ＡもしくはＩ８７Ｓ変異またはモノＩＬ１０構造を有する）がｈｕＩＬ１０Ｒ１に対して有する親和性よりも高い、抗ＣＤ８６結合ドメイン（例えば、３Ｄ１、ＦＵＮ１、またはそのヒト化改変体）の使用、およびかかる分子を本開示（ｄｉｓｃｌｃｏｓｕｒｅ）のｘｃｅｐｔｏｒ分子に組み合わせることは、目的の特定の細胞型（抗原提示細胞（ＡＰＣ）など）を標的とすることに有利になるように使用され得る。これに関連して、標的とする所望の細胞型に応じて、ＣＤ８６に対する親和性が高いかまたは低い、あるいは、本明細書に記載の任意の異種標的タンパク質に対する親和性が高いかまたは低い融合タンパク質が作製され得る。好ましい実施形態では、ＣＤ８６アンタゴニスト結合ドメインが、異種結合ドメインがその結合パートナーに対して有する親和性よりも大きいＣＤ８６に対する親和性を有することにより、多標的特異的ｘｃｅｐｔｏｒ分子はＡＰＣを優先的に標的とする。」（【０１２０】）

タ．「（実施例１５）

（ＩＬ１０を含むＸｃｅｐｔｏｒ分子の免疫賦活活性）

種々のｘｃｅｐｔｏｒ融合タンパク質におけるＩＬ１０の免疫賦活活性を、インビトロ細胞増殖アッセイにおいて試験した。特に、ＭＣ／９マウス肝臓脂肪細胞株を以下のようにして使用した。ＭＣ／９細胞株（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ♯ＣＲＬ－８３０６）をＤＭＥＭまたはＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳおよび５％Ｒａｔ Ｔ－ＳＴＩＭ（ＢＤ ♯３５４１１５）中で培養した。Ｒａｔ Ｔ－ＳＴＩＭなしの培地中でＭＣ／９細胞を洗浄し、一晩おいて置いた（３７℃、５％ＣＯ２でインキュベート、９６ウェル平底プレート内、１×１０５細胞／ウェル、１００μｌ／ウェル）。種々の濃度のＩＬ１０タンパク質およびｘｃｅｐｔｏｒ融合タンパク質を２４時間インキュベートし、６時間後、増殖を［３Ｈ］チミジン取込みによって評価した。

ＩＬ１０のＩ８７改変体は、野生型ＩＬ１０と比べて免疫賦活性が低いことがわかっている（Ｄｉｎｇら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９１：２１３，２０００）。ＩＬ１０は、通常、各単量体分子のアミノ末端ドメインが他の単量体のカルボキシ末端ドメインに結合しているホモ二量体を形成している。ＩＬ１０ Ｉ８７ 改変体（Ｉ８７ＡおよびＩ８７Ｓ）を、ＩＬ１０の該２つのサブドメインをさらに引き離し、これらのサブドメインが分子内二量体を形成することを可能にする短いリンカー（ｇｇｇｓｇｇ；配列番号３７９）を有するＩＬ１０分子とともに、ｘｃｅｐｔｏｒ形式にて免疫賦活活性について調べた。

図２３は、マウスＩＬ１０が、ＭＣ／９細胞増殖を、ＩＬ１０のアミノ酸８７に単一の変異を含むＣＴＬＡ４：：ＩＬ１０－Ｉ８７Ａ（配列番号１９１）ｘｃｅｐｔｏｒよりも高い程度まで増進させ得ることを示す。図２４は、ヒトＩＬ１０と（ＣＴＬＡ４：：ＩＬ１０）－７５（配列番号１７３）がともに、ＣＴＬＡ４：：ＩＬ１０－Ｉ８７Ａ（配列番号１９１）またはＣＴＬＡ４：：モノＩＬ－１０（配列番号１８１）のいずれかよりも大きくＭＣ／９細胞増殖を増進させ得ることを示す。」（【０２２５】～【０２２７】）

チ．「（実施例１６）

（Ｘｃｅｐｔｏｒ分子が特定の細胞型を標的とするようにする操作）

この実施例では、Ｘｃｅｐｔｏｒ融合タンパク質が特定の細胞型を標的とするようにする操作を説明する。これは、ＢＤ１およびＢＤ２の親和性を操作することによりなされる。４種類のＸｃｅｐｔｏｒ分子を、ＣＤ８６およびｈｕＩＬ１０Ｒ１に対して異なる親和性を有するように操作した。表９は、これらの４種類の分子の異なる親和性比を示す。例えば、ＣＤ８６結合ドメイン（例えば、３Ｄ１またはヒト化ＦＵＮ１）およびｈｕＩＬ１０Ｒ１に対して低い親和性を有する操作型ＩＬ１０分子（Ｉ８７Ａ）の使用によってＣＤ８６に対する親和性を改善することにより、次いで、かかる配置は、目的の特定の細胞型（ＡＰＣなど）を標的とするのに有利になるように使用され得る。

［図：0001389989000003.jpg］

」（【０２２８】）

当審の拒絶理由で引用文献３として引用した、本願優先日前に頒布された又は電気通信回線を通じて公衆に利用可能となった引用文献であるＪ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．（２０００）Ｖｏｌ．１９１，Ｎｏ．２，ｐ．２１３－２２３（以下、「引用文献３」という。）には、以下の事項が記載されている（英語で記載されているため、日本語訳で摘記する。）。

ツ．「特異的活性を計算するために、Ｂａ／Ｆ３－ｍＩＬ－１０Ｒ１細胞の短期間増殖を刺激する能力を、ｈＩＬ－１０、ｈＩＬ－１０（Ｉ８７Ａ）、ｖＩＬ－１０及びｖＩＬ－１０（Ａ８７Ｉ）の様々な濃度で比較した（図５ｃ）。ｈＩＬ－１０は、２００Ｕ／ｎＭの特異的活性で増殖を誘導し、８７位の単一置換（Ｉ→Ａ）は、受容体結合を１００倍低下させたにもかかわらず、２０Ｕ／ｎＭまで特異的活性を１０倍だけ低下させた。」（第２１８頁右欄第２２行～第２９行）。

上記記載事項ア．、イ．、エ．、オ．及びキ．～コ．によると、引用文献１には、「サイトカインイムノコンジュゲートである、ＩｇＧクラス抗体とＩＬ－１０分子との融合タンパク質であって、融合タンパク質は２つの重鎖ポリペプチドと２つの軽鎖ポリペプチドとを含み、前記重鎖ポリペプチドが、ＩｇＧクラス抗体重鎖と、そのＮ末端にて前記ＩｇＧクラス抗体重鎖のＣ末端に融合しているＩＬ－１０単量体とを含み、前記ＩｇＧクラス抗体が、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）と特異的に結合でき、融合タンパク質が、ＦＡＰと、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）により２５℃にて測定した場合に、２６ｐＭの親和性定数（ＫＤ）で結合できる、融合タンパク質。」の発明（以下、「引用発明」という。）が記載されていると認められる。

審判請求人は、令和 ２年 １月 ６日付け審判請求書において、以下の（ア）～（ウ）の点を主張し、また、令和 ４年 ２月 ３日付け意見書において、以下の（エ）の点を主張しているので、以下この点について検討する。

（ア）４Ｂ９ ＩｇＧ－ｈＩＬ－１０ Ｉ８７Ａ又は４Ｇ８ ＩｇＧ－ｈＩＬ－１０ Ｉ８７Ａ等に代表される、本願発明のＦＡＰ標的化ＩｇＧ－ＩＬ－１０融合タンパク質は、炎症性疾患の治療に対し、改善された生産しやすさ、安定性、血清半減期、及び驚くべきことに、標的抗原との結合時の生物活性の著しい増加を含む、野生型ＩＬ－１０分子を有する対応する融合タンパク質を上回る優れた特性を示した。

（イ）本願明細書は、ＩＬ－１０のＩ８７Ａ変異が、野生型ＩＬ－１０分子と比較して、ＩＬ－１０受容体への結合親和性を有意に低減させることを実証しており（表２４等）、本願発明の融合タンパク質は、インビトロ効力のレベルを保持しつつ、ＩＬ－１０受容体（特に、ヒトＩＬ－１０Ｒ１）への親和性の減少を介した標的効率の改善、及びＩＬ－１０の免疫賦活特性の低減により引き起こされる副作用の減少を示す（本願明細書段落【００１１】、【０１４６】、【０１８６】、表２４及び表２６等）。

（ウ）参考資料１（Ｄｉｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ．，１９１（２），２１３－２２３（２０００））は、Ｉ８７Ａ置換を含む変異したＩＬ－１０分子を開示しているが、当該先行技術文献の教示は、全身毒性の低い代替免疫複合体を提供する客観的な技術的問題に直面した当業者を、免疫複合体にＩ８７Ａ置換を含むＩＬ－１０分子を含ませることから遠ざけたものと思料する。著者らは、生物学的反応と比活性はリガンド親和性と相関していなかったと要約し、予想外に、Ｉ８７Ａ置換を含む分子は、一部の試験（Ｉ８７Ａを含むｖＩＬ－１０等）で効力が増加し、他の試験（ＭＣ７９細胞の増殖等）で残留活性を示さなかったから、当業者は、全身毒性の低い代替免疫複合体を提供するためにＩ８７Ａ変異を含めることを妨げられたと思料する。当業者は、Ｉ８７Ａ変異ＩＬ－１０分子の包含がＩＬ－１０受容体への結合親和性の適度な減少をもたらすことを予見できず、むしろ、ＩＬ－１０分子の活性が完全に失われる可能性があること、または活性が増加する可能性さえあることを恐れたであろうと思料するから、当業者はＩｇＧクラス抗体をＩ８７Ａ変異ＩＬ－１０分子に融合させることはなく、ましてやＩｇＧクラス抗体を２つのＩ８７Ａ変異ＩＬ－１０分子に融合させることはなかったであろうと思料する。

（エ）本願明細書は、ＩＬ－１０におけるＩ８７Ａの変異が、野生型ＩＬ－１０分子と比較して、ＩＬ－１０受容体への結合親和性を大幅に低下させたことを示している（表２４等）。補正後の請求項に記載のＦＡＰ標的化ＩｇＧ－ＩＬ－１０融合タンパク質、代表例として４Ｂ９ ＩｇＧ－ｈＩＬ－１０ Ｉ８７Ａまたは４Ｇ８ ＩｇＧ－ｈＩＬ－１０ Ｉ８７Ａは、対応する野生型ＩＬ－１０分子融合タンパク質と比較して、改善された生産性、安定性、血清半減期、そして驚くべきことに、標的抗原への結合時の有意に増加した生物学的活性を含む、炎症性疾患を治療するための優れた特性を示した。特に、本願請求項に記載の特定の融合タンパク質は、補正後の請求項に記載されているように、融合タンパク質が１００ｐＭ未満の親和定数（ＫＤ）でＦＡＰに結合できる場合、インビトロ効力のレベルを保持したまま、ＩＬ－１０受容体（特に、ヒトＩＬ－１０Ｒ１）への親和性の低下を通じて、改善された標的化効率を示し、並びにＩＬ－１０の免疫刺激特性の低下によって引き起こされる副作用の低下を示した（明細書段落【００１１】、【０１４６】、【０１８６】、表２４及び表２６等）。

本願明細書は、標的ＦＡＰに対する融合構築物の親和性が、本願請求項に記載されるように、高親和性サイトカイン受容体ＩＬ－１０Ｒの場合よりも高い（１００ｐＭ未満の親和定数（ＫＤ））場合に効率的な標的化が達成されることを示している。

表２４は、ＩＬ－１０ Ｉ８７ＡがＩＬ－１０Ｒ１に対して４７６ｐＭのＫＤを有することが示されており、野生型ＩＬ－１０はＩＬ－１０Ｒ１に対して３８．９ｐＭのＫＤを有することが示されている。表１は、４Ｇ８抗体が２～６ｐＭのＫＤでヒトＦＡＰに結合することを示しており、表２は、４Ｂ９抗体が０．６～２ｐＭのＫＤでヒトＦＡＰに結合することを示している。

表２３は、４Ｇ８ ＩＧ分子と４Ｇ８ ＩｇＧ－ＩＬ－１０分子が同様の効率で炎症を起こした関節を標的化したことを示しており、本願明細書には、「４Ｇ８ ＩｇＧと４Ｇ８ ＩｇＧ－ＩＬ－１０との間で炎症を起こした関節での蓄積に有意な差はなく、このことは、ｌＬ－１０が炎症部位への４Ｇ８ ＩｇＧの標的化に著しく影響しなかったことを示す。」と記載されている（明細書段落【０１６８】）。

表２３のデータは、炎症を起こした関節への４Ｇ８ ＩｇＧ－ＩＬ－１０分子の標的化が影響を受けなかったことを示しており（例えば、血液中のＩＬ－１０Ｒ１への分子の結合による）、これは、４Ｇ８バインダーの結合親和性（２～６ｐＭ）が、ＩＬ－１０のＩＬ－１０Ｒ１への結合親和性（３８．９ｐＭ）と比較して高いという事実によるものである。

このデータに基づいて、当業者は、炎症を起こした関節への標的化は４Ｇ８ ＩｇＧ－ＩＬ－１０ Ｉ８７Ａでも影響を受けないと予想したと思料され、これは、ＩＬ－１０ Ｉ８７Ａ分子が野生型ＩＬ－１０と比較してＩＬ－１０Ｒ１に対して１０分の１の親和性を持っているためである。

主張（ア）について

本願明細書の段落【００１１】に「本発明のＩｇＧ－ＩＬ－１０融合タンパク質は、公知の抗体断片に基づく（例えばｓｃＦｖ、ダイアボディ、Ｆａｂ）ＩＬ－１０融合タンパク質に対して、改善された生産しやすさ、安定性、血清半減期及び驚くべきことに、標的抗原との結合による生物活性の著しい増加を含むいくつかの利点を有する。」と記載されているように、審判請求人が主張する「改善された生産しやすさ、安定性、血清半減期、及び驚くべきことに、標的抗原との結合時の生物活性の著しい増加」という本願発明の融合タンパク質の効果は、公知の抗体断片に基づく（例えばｓｃＦｖ、ダイアボディ、Ｆａｂ）ＩＬ－１０融合タンパク質と比較した効果であって、野生型ＩＬ－１０分子を有する対応する融合タンパク質と比較した効果であるとは認められない。

また、審判請求人の上記主張が、「４Ｂ９ ＩｇＧ－ｈＩＬ－１０ Ｉ８７Ａ又は４Ｇ８ ＩｇＧ－ｈＩＬ－１０ Ｉ８７Ａ等に代表される、本願発明のＦＡＰ標的化ＩｇＧ－ＩＬ－１０融合タンパク質は、炎症性疾患の治療に対し、改善された生産しやすさ、安定性、血清半減期、及び驚くべきことに、標的抗原との結合時の生物活性の著しい増加を含む、公知の抗体断片に基づく（例えばｓｃＦｖ、ダイアボディ、Ｆａｂ）ＩＬ－１０融合タンパク質を上回る優れた特性を示した。」という主張であると解したとしても、そのような効果は、引用文献１の記載（上記記載事項ウ．）から、当業者が予測することができる範囲の効果である。

したがって、審判請求人の上記主張（ア）は採用できない。

主張（イ）について

引用文献３には、「８７位の単一置換（Ｉ→Ａ）は、受容体結合を１００倍低下させた」と記載されている（上記記載事項ツ．）ように、ＩＬ－１０のＩ８７Ａ変異が、野生型ＩＬ－１０分子と比較して、ＩＬ－１０受容体への結合親和性を有意に低減させることを実証している。

そして、引用文献２には、その引用文献３に該当する文献（Ｄｉｎｇら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９１：２１３，２０００）を引用して、「Ｉ８７改変体ＩＬ１０分子は、野生型ＩＬ１０と比べて免疫賦活性が低いことがわかっている（Ｄｉｎｇら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９１：２１３，２０００）。」（上記記載事項セ．）、「ＩＬ１０のＩ８７改変体は、野生型ＩＬ１０と比べて免疫賦活性が低いことがわかっている（Ｄｉｎｇら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９１：２１３，２０００）。」（上記記載事項タ．）と記載されており、さらに、「図２４は、ＭＣ／９細胞増殖アッセイにおいて、改変体ＩＬ１０（Ｉ８７変異を有するＩＬ１０またはモノＩＬ１０のいずれか）を含むいくつかのｘｃｅｐｔｏｒタンパク質が、ヒトＩＬ１０よりも免疫賦活性が低いことを示す。」（上記記載事項ス．）、「図２４は、ヒトＩＬ１０と（ＣＴＬＡ４：：ＩＬ１０）－７５（配列番号１７３）がともに、ＣＴＬＡ４：：ＩＬ１０－Ｉ８７Ａ（配列番号１９１）またはＣＴＬＡ４：：モノＩＬ－１０（配列番号１８１）のいずれかよりも大きくＭＣ／９細胞増殖を増進させ得ることを示す。」（上記記載事項タ．）と記載されているように、Ｉ８７Ａ変異を有するＩＬ－１０を含む融合タンパク質が、ヒトＩＬ１０を含む融合タンパク質よりも免疫賦活性が低いことを実際に確認している。また、引用文献２には、「ＣＤ８６に対する親和性が、操作型ＩＬ１０アゴニスト（例えば、Ｉ８７ＡもしくはＩ８７Ｓ変異またはモノＩＬ１０構造を有する）がｈｕＩＬ１０Ｒ１に対して有する親和性よりも高い、抗ＣＤ８６結合ドメイン（例えば、３Ｄ１、ＦＵＮ１、またはそのヒト化改変体）の使用、およびかかる分子を本開示（ｄｉｓｃｌｃｏｓｕｒｅ）のｘｃｅｐｔｏｒ分子に組み合わせることは、目的の特定の細胞型（抗原提示細胞（ＡＰＣ）など）を標的とすることに有利になるように使用され得る。」（上記記載事項ソ．）、「ＣＤ８６結合ドメイン（例えば、３Ｄ１またはヒト化ＦＵＮ１）およびｈｕＩＬ１０Ｒ１に対して低い親和性を有する操作型ＩＬ１０分子（Ｉ８７Ａ）の使用によってＣＤ８６に対する親和性を改善することにより、次いで、かかる配置は、目的の特定の細胞型（ＡＰＣなど）を標的とするのに有利になるように使用され得る。」（上記記載事項チ．）と記載されているように、引用文献２には、「ＩＬ－１０受容体（特に、ヒトＩＬ－１０Ｒ１）への親和性の減少を介した標的効率の改善」効果も示されている。

そして、引用文献１には、ＩＬ－１０と同様にイムノコンジュゲートのエフェクター部分として使用されるサイトカインのＩＬ－２について、ＩＬ－２エフェクター部分として、ＩＬ－２受容体のαサブユニットへの結合親和性が低下した変異体ＩＬ－２エフェクター部分を使用すると、ＩＬ－２受容体のαサブユニットへの結合が減少した変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、野生型ＩＬ－２ポリペプチドと比較して、調節性Ｔ細胞におけるＩＬ－２シグナル伝達を誘導する能力の低下を有し、Ｔ細胞においてより少ない活性化誘導細胞死（ＡＩＣＤ）を誘導し、インビボで減少した毒性プロファイルをもたらすこと、この毒性が低下したエフェクター部分の使用は、Ｆｃドメインの存在に起因して長い血清半減期を有することが記載されている（上記記載事項ク．）。また、引用文献１には、ＩＬ－１０と同様にイムノコンジュゲートのエフェクター部分として使用されるサイトカインのＩＬ－１５について、ＩＬ－１５エフェクター部分として、ＩＬ－１５受容体のαサブユニットへの結合親和性が低下した変異体ＩＬ－１５エフェクター部分を使用すると、ＩＬ－１５受容体のαサブユニットへの結合が減少した変異体ＩＬ－１５ポリペプチドは、身体全体の線維芽細胞に特異的に結合する能力が低下しており、野生型ＩＬ－１５ポリペプチドと比較して、改善された薬物動態及び毒性プロファイルをもたらすこと、この毒性が低下したエフェクター部分の使用は、Ｆｃドメインの存在に起因して長い血清半減期を有することが記載されている（上記記載事項ク．）。そうすると、ＩＬ－１０受容体への結合親和性が低下した変異体ＩＬ－１０分子についても、変異体ＩＬ－２ポリペプチド、ＩＬ－１５ポリペプチドと同様の上記のような改善された薬物動態及び毒性プロファイルをもたらす効果を奏することが予測できる。

したがって、審判請求人が主張する本願発明の融合タンパク質の効果は、引用文献１及び２の記載から、当業者が予測することができる範囲の効果であるから、審判請求人の上記主張（イ）は採用できない。

主張（ウ）について

参考資料１に該当する引用文献３には、「特異的活性を計算するために、Ｂａ／Ｆ３－ｍＩＬ－１０Ｒ１細胞の短期間増殖を刺激する能力を、ｈＩＬ－１０、ｈＩＬ－１０（Ｉ８７Ａ）、ｖＩＬ－１０及びｖＩＬ－１０（Ａ８７Ｉ）の様々な濃度で比較した（図５ｃ）。ｈＩＬ－１０は、２００Ｕ／ｎＭの特異的活性で増殖を誘導し、８７位の単一置換（Ｉ→Ａ）は、受容体結合を１００倍低下させたにもかかわらず、２０Ｕ／ｎＭまで特異的活性を１０倍だけ低下させた。」ことが記載されており（上記記載事項ツ．）、ｈＩＬ－１０（Ｉ８７Ａ）が、ｈＩＬ－１０と比較して、受容体結合を低下させたこと、Ｂａ／Ｆ３－ｍＩＬ－１０Ｒ１細胞の増殖を刺激する能力を低下させるものの、増殖刺激活性を有している（２０Ｕ／ｎＭ）ことが明確に記載されているから、当業者が、Ｉ８７Ａ変異ＩＬ－１０分子の包含がＩＬ－１０受容体への結合親和性の適度な減少をもたらすことを予測できないということはできないし、また、ＩＬ－１０分子の活性が完全に失われる可能性や活性が増加する可能性があることを恐れたと解すべき理由もない。

また、引用文献２には、参考資料１に該当する文献（Ｄｉｎｇら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９１：２１３，２０００）を引用して、「Ｉ８７改変体ＩＬ１０分子は、野生型ＩＬ１０と比べて免疫賦活性が低いことがわかっている（Ｄｉｎｇら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９１：２１３，２０００）。」（上記記載事項セ．）、「ＩＬ１０のＩ８７改変体は、野生型ＩＬ１０と比べて免疫賦活性が低いことがわかっている（Ｄｉｎｇら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９１：２１３，２０００）。」（上記記載事項タ．）と記載されており、さらに、「図２４は、ＭＣ／９細胞増殖アッセイにおいて、改変体ＩＬ１０（Ｉ８７変異を有するＩＬ１０またはモノＩＬ１０のいずれか）を含むいくつかのｘｃｅｐｔｏｒタンパク質が、ヒトＩＬ１０よりも免疫賦活性が低いことを示す。」（上記記載事項ス．）、「図２４は、ヒトＩＬ１０と（ＣＴＬＡ４：：ＩＬ１０）－７５（配列番号１７３）がともに、ＣＴＬＡ４：：ＩＬ１０－Ｉ８７Ａ（配列番号１９１）またはＣＴＬＡ４：：モノＩＬ－１０（配列番号１８１）のいずれかよりも大きくＭＣ／９細胞増殖を増進させ得ることを示す。」（上記記載事項タ．）と記載されているように、Ｉ８７Ａ変異を有するＩＬ－１０を含む融合タンパク質が、ヒトＩＬ１０を含む融合タンパク質よりも免疫賦活性が低いことを確認しているから、参考資料１が、当業者が融合タンパク質にＩ８７Ａ置換を含むＩＬ－１０分子を含ませることを妨げる文献であるとは認められない。

したがって、審判請求人の上記主張（ウ）は採用できない。

主張（エ）について

審判請求人は、「補正後の請求項に記載のＦＡＰ標的化ＩｇＧ－ＩＬ－１０融合タンパク質、代表例として４Ｂ９ ＩｇＧ－ｈＩＬ－１０ Ｉ８７Ａまたは４Ｇ８ ＩｇＧ－ｈＩＬ－１０ Ｉ８７Ａは、対応する野生型ＩＬ－１０分子融合タンパク質と比較して、改善された生産性、安定性、血清半減期、そして驚くべきことに、標的抗原への結合時の有意に増加した生物学的活性を含む、炎症性疾患を治療するための優れた特性を示し」たと主張しているが、上記「主張（ア）について」において述べたように、審判請求人が主張する「改善された生産性、安定性、血清半減期、そして驚くべきことに、標的抗原への結合時の有意に増加した生物学的活性を含む、炎症性疾患を治療するための優れた特性」という本願発明の融合タンパク質の効果は、公知の抗体断片に基づく（例えばｓｃＦｖ、ダイアボディ、Ｆａｂ）ＩＬ－１０融合タンパク質と比較した効果であって、対応する野生型ＩＬ－１０分子融合タンパク質と比較した効果であるとは認められない。

審判請求人は、「本願明細書は、ＩＬ－１０におけるＩ８７Ａの変異が、野生型ＩＬ－１０分子と比較して、ＩＬ－１０受容体への結合親和性を大幅に低下させたことを示している（表２４等）。・・・・・・・・・特に、本願請求項に記載の特定の融合タンパク質は、補正後の請求項に記載されているように、融合タンパク質が１００ｐＭ未満の親和定数（ＫＤ）でＦＡＰに結合できる場合、インビトロ効力のレベルを保持したまま、ＩＬ－１０受容体（特に、ヒトＩＬ－１０Ｒ１）への親和性の低下を通じて、改善された標的化効率を示し、並びにＩＬ－１０の免疫刺激特性の低下によって引き起こされる副作用の低下を示した」と主張しているが、上記「第４ 引用文献の記載事項及び引用発明の認定」において述べたように、引用発明の融合タンパク質は、ＦＡＰと、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）により２５℃にて測定した場合に、２６ｐＭの親和性定数（ＫＤ）で結合できる、すなわち、１００ｐＭ未満の親和性定数（ＫＤ）で結合できる融合タンパク質であり、また、上記「主張（イ）について」において述べたように、審判請求人が主張する本願発明の融合タンパク質の効果は、引用文献１及び２の記載から、当業者が予測することができる範囲の効果である。

また、引用文献１には、「２８Ｈ１及び４Ｂ９ ＩｇＧ１及び２８Ｈ１ ＩｇＧ－ＩＬ－２ ｑｍの組織分布と腫瘍標的化の間に有意差はなく（それ故サイトカインはイムノコンジュゲートの組織分布および腫瘍標的化の特性を有意には変更せず）、そしてＦＡＰ標的化コンストラクトの腫瘍対血液比は、非標的化ＤＰ４７ＧＳ対照ＩｇＧよりも有意に大きいことを示している。 これらの結果は、４Ｂ９ ＩｇＧ－ＩＬ－２ ｑｍイムノコンジュゲートのＳＰＥＣＴ／ＣＴイメージングで確認された（データは示さず）。」と記載されており（上記記載事項サ．）、ＦＡＰ標的化２８Ｈ１ ＩｇＧ１とＦＡＰ標的化２８Ｈ１ ＩｇＧ－ＩＬ－２ ｑｍの間の腫瘍標的化に有意差はなく、ＦＡＰ標的化４Ｂ９ ＩｇＧ１とＦＡＰ標的化４Ｂ９ ＩｇＧ－ＩＬ－２ ｑｍの間の腫瘍標的化に有意差はないことが記載されているから、本願明細書の表２３に示された実験結果は、引用文献１の記載から、当業者が予測することができるものといえる。

そして、これは、２８Ｈ１のＦＡＰ結合親和性が、ＩＬ－２ ｑｍのＩＬ－２受容体への結合親和性と比較して高い（上記記載事項シ．）ことによるものと認められるから、標的ＦＡＰに対する融合構築物の親和性が、高親和性サイトカイン受容体ＩＬ－１０Ｒの場合よりも高い場合に効率的な標的化が達成されることも、引用文献１の記載から、当業者が予測することができるものといえる。

したがって、審判請求人の上記主張（エ）は採用できない。