2022-016460

特願２０１９－５５５４２３「武装した腫瘍溶解性ウイルス」拒絶査定不服審判事件〔平成３０年 ６月２８日国際公開、ＷＯ２０１８／１１８８１９、令和 ２年 ４月２３日国内公表、特表２０２０－５１２３９２〕について、次のとおり審決する。

結 論 本件審判の請求は、成り立たない。

理 由 第１ 手続の経緯 本願は、２０１７年（平成２９年）１２月１８日（パリ条約による優先権主張外国庁受理 ２０１７年１２月１５日 米国、２０１６年１２月２１日 米国）を国際出願日とする出願であって、その手続の経緯は以下のとおりである。 （日付は、当審合議体による起案を除き、書類の受付日である。） 令和元年８月２１日 ：翻訳文提出 令和元年９月２６日 ：手続補正書の提出 令和３年１０月２８日付け：拒絶理由通知 令和４年５月９日 ：意見書、手続補正書の提出 令和４年６月７日付け ：拒絶査定 令和４年１０月１４日 ：審判請求書の提出 令和６年３月２５日付け ：拒絶理由通知 令和６年６月２６日 ：意見書、手続補正書の提出（以下、この手続補正書による手続補正を「本件補正」という） 第２ 本願発明 本願の請求項に係る発明は、本件補正によって補正された特許請求の範囲の請求項１～３に記載された事項により特定されるものと認められるところ、その請求項１に係る発明（以下「本願発明１」という。）は、以下のとおりのものである。 「【請求項１】 腫瘍の治療に使用するための組成物であって、 腫瘍溶解性ウイルスゲノムに挿入された異種核酸を含む腫瘍溶解性ウイルスを含み、 前記核酸が、転写制御エレメントに作動可能に連結するキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドをコードする配列を含み、 前記腫瘍溶解性ウイルスが、治療タンパク質をコードする異種遺伝子をさらに含み、 前記異種遺伝子が、ヒトＧＭ－ＣＳＦをコードする遺伝子であり、 前記腫瘍溶解性ウイルスが、ＭＥＭ４０とヒトＧＭ－ＣＳＦの両方を発現する単純ヘルペスウイルスであり、 前記ＭＥＭ４０と前記ヒトＧＭ－ＣＳＦの挿入は、 前記ヒトＧＭ－ＣＳＦ発現カセットの一方のＩＣＰ３４．５コード領域への挿入と、前記ＭＥＭ４０発現カセットの他方のＩＣＰ３４．５遺伝子コード領域への挿入であるか、 または、 前記ヒトＧＭ－ＣＳＦ発現カセット及び前記ＭＥＭ４０発現カセットの両ＩＣＰ３４．５遺伝子コード領域への挿入であるか、 または、 前記ヒトＧＭ－ＣＳＦ及び前記ＭＥＭ４０が、内部リボソーム侵入部位により分離され、同一の発現カセットの一部である挿入であり、単一のＣＭＶプロモーターを介して各タンパク質を同時発現させる ことを特徴とする腫瘍の治療に使用するための組成物。」 第３ 拒絶の理由 令和６年３月２５日付けの拒絶理由通知書で当審が通知した拒絶理由は、概略、次のとおりのものである。 なお、当該拒絶理由通知書の＜引用文献一覧＞では、引用文献７が、 「７．Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ．， １９９９年， Ｖｏｌ． １９０， Ｎｏ． １」 と記載されている。 しかしながら、拒絶理由の具体的な説明の３（２）イにおいて、「・・・また、引用文献７には、ＧＭ－ＣＳＦ及びＣＤ４０Ｌの両遺伝子を、ウイルスベクターを用いて導入した腫瘍細胞を接種したマウスの４０％は腫瘍を形成せず、初期に形成された腫瘍の一部は退縮し、最終的に７０％のマウスの腫瘍がなくなったこと（図１、第１２７頁右欄第８～２０行）、ＧＭ－ＣＳＦが腫瘍細胞の免疫原性を増強し、主にＣＤ４０ＬがＣＤ４０との相互作用を通じて免疫応答を誘導すること、すなわち、樹状細胞を腫瘍に集積、活性化することが記載されているから（第１３１頁左欄第２５行、第３５～３７行、右欄第１６～１８行）、・・・」と記載されていることから、引用文献７は上記下線部の頁を含む以下の文献であることは明らかである。 「７．Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ．， １９９９年， Ｖｏｌ． １９０， Ｎｏ． １， ｐｐ．１２５－１３３」 このため、当該拒絶理由通知書における引用文献一覧の誤記を正した上で、拒絶理由の概要を示す。 （進歩性） この出願の請求項１～３に係る発明は、その出願前に日本国内又は外国において、頒布された又は電気通信回線を通じて公衆に利用可能となった以下の引用文献６に記載された発明及び引用文献６，１，２，７に記載された事項に基いて、その出願前にその発明の属する技術の分野における通常の知識を有する者が容易に発明をすることができたものであるから、特許法第２９条第２項の規定により特許を受けることができない。 ＜引用文献等一覧＞ １．Ｖｉｒｕｓｅｓ， ２０１５年， Ｖｏｌ． ７， ｐｐ． ５７８０－５７９１ ２．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ２０１２年， Ｖｏｌ． ７２， Ｎｏ． １２， ｐｐ． ２９３７－２９４８ ６．特表２００３－５２０７８９号公報 ７．Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ．， １９９９年， Ｖｏｌ． １９０， Ｎｏ． １， ｐｐ．１２５－１３３ 第４ 当審の判断 １．引用文献の記載事項 （１） 引用文献６の記載事項 当審の拒絶の理由で引用され、本願優先日前に頒布された又は電気通信回線を通じて公衆に利用可能となった引用文献６（特表２００３－５２０７８９号公報）には、以下の記載がある（下線は当審合議体が付した。以下、他の箇所で引用文献について記載する場合も同様である。）。 ア 特許請求の範囲 「【請求項１】 改変された腫瘍崩壊性非実験室ウイルス株の、癌の腫瘍崩壊治療用の医薬品の製造における使用。 ・・・ 【請求項４】 非実験室ウイルス株が、ヘルペスウイルス株…である、請求項１～３のいずれか１項に記載の使用。 【請求項５】 非実験室ウイルス株がヘルペスウイルス株である、請求項４に記載の使用。 【請求項６】 非実験室ウイルス株が単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）株である、請求項５に記載の使用。 【請求項７】 ＨＳＶ株がＨＳＶ１またはＨＳＶ２株である、請求項６に記載の使用。 ・・・ 【請求項９】 前記株がＨＳＶ株であり、かつ該ウイルスは機能的ＩＣＰ３４．５コード遺伝子を欠損していることを特徴とする、請求項５～８のいずれか１項に記載の使用。 【請求項１０】 ウイルスが機能的ＩＣＰ４７遺伝子をさらに欠損していることを特徴とする、請求項９に記載の使用。 【請求項１１】 非実験室ウイルス株が異種遺伝子をさらに含むことを特徴とする、請求項１～１０のいずれか１項に記載の使用。 【請求項１２】 異種遺伝子が免疫応答を改変可能な遺伝子である、請求項１１に記載の使用。 【請求項１３】 免疫応答を改変可能な異種遺伝子が、免疫応答を改変可能な免疫刺激ポリペプチドもしくは他の遺伝子産物…であることを特徴とする、請求項１２に記載の使用。 【請求項１４】 免疫刺激ポリペプチドが、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭＣＳＦ）、他のサイトカインもしくはケモカイン、ＲＡＮＴＥＳ、Ｂ７．１もしくはＢ７．２、またはＩＬ－１２である…ことを特徴とする、請求項１３に記載の使用。 【請求項１５】 非実験室株がＨＳＶ株であり、かつ請求項２に規定する対照の株が該非実験室株と同等な改変を有するＨＳＶ１ １７＋株、ＨＳＶ１ Ｆ株またはＨＳＶ１ ＫＯＳ株である、請求項２～１４のいずれか１項に記載の使用。 ・・・ 【請求項３１】 請求項１～１５のいずれか１項に規定する改変された腫瘍崩壊性株への改変に対する非実験室ウイルス株の適合性を決定する方法であって： （ｉ） 場合によっては非実験室ウイルス株を宿主から単離し； （ｉｉ） １種以上の型の腫瘍細胞におけるウイルスの増殖を評価し；そして場合によっては、 （ｉｉｉ） 高増殖率を有するウイルス株を改変のために選択する； ことを含む前記方法。 ・・・ 【請求項３３】 改変された腫瘍崩壊性株への改変に対する非実験室ウイルス株の適合性を決定する方法であって： （ｉ） １種の非実験室ウイルス株、場合によっては請求項３１または３２のステップ（ｉｉ）に記載の方法によって選択された株を用意し； （ｉｉ） 腫瘍崩壊性となるように前記株を改変し；そして、 （ｉｉｉ） 前記改変された腫瘍崩壊性非実験室株の腫瘍細胞を死滅させる能力を評価し、そして場合によっては； （ｉｖ） さらなる改変のために高い腫瘍細胞死滅能力を示す株を選択し、そして場合によっては、 （ｖ） さらなる改変を実施する； ことを含む前記方法。 ・・・ 【請求項３８】 遺伝子がウイルスの抗腫瘍効果を増強するか否かを決定する方法であって： （ｉ） 請求項１～１５のいずれか１項に規定する改変された腫瘍崩壊性非実験室株を用意し； （ｉｉ） 前記遺伝子を異種遺伝子として前記ウイルスに挿入し；そして、 （ｉｉｉ）前記改変された腫瘍崩壊性非実験室株の腫瘍細胞を死滅させる能力を、ステップ（ｉ）で用意した前駆株の該能力と比較して評価する； ことを含む前記方法。 【請求項３９】 改変された腫瘍崩壊性非実験室ウイルス株を産生する方法であって： （ｉ） 非実験室ウイルス株を宿主から単離し； （ｉｉ） 場合によっては請求項３３の記載に従って改変に対する前記ウイルス株の適合性を決定し；そして、 （ｉｉｉ） 前記ウイルス株を腫瘍崩壊性にするために改変し；そして場合によっては、 （ｉｖ） さらなる改変を実施する； ことを含む前記方法。」 イ 【００６４】段落 「ＨＳＶの場合、選択的な腫瘍崩壊活性を可能にするこのような突然変異には、ＩＣＰ３４．５、ＩＣＰ６および／またはチミジンキナーゼ（ＴＫ）、好ましくはＩＣＰ３４．５をコードする遺伝子に対する突然変異が含まれる。ＨＳＶの実験室株におけるＩＣＰ３４．５コード遺伝子に対するこのような突然変異は、Ｃｈｏｕら １９９０、Ｍａｃｌｅａｎら １９９１に記載されているが、ＩＣＰ３４．５が非機能的となる突然変異のいずれも用いることができる。」 ウ 【００６９】段落 「…免疫刺激ポリペプチド、例えばＣＤ４０Ｌ、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭＣＳＦ）、別のサイトカインもしくはケモカイン（例えばＲＡＮＴＥＳ）、Ｂ７．１もしくはＢ７．２、またはＩＬ１２をコードするものである。…」 エ 【００８７】段落 「１以上の異種遺伝子は、例えばＨＳＶ配列に挟まれた１以上の異種遺伝子を有するプラスミドベクターを用いてＨＳＶ株に相同的組換えを行うことによりウイルスゲノム中に挿入することができる。１以上の異種遺伝子は、当技術分野で周知であるクローニング技法を用いてヘルペスウイルス配列を含む好適なプラスミドベクター中に導入することができる。１以上の異種遺伝子は、ウイルスが増殖可能である限り、ウイルスゲノム中のいずれの位置にも挿入することができる。１以上の異種遺伝子は必須遺伝子中に挿入されることが好ましい。異種遺伝子は、ウイルスゲノム内の複数の部位に挿入することができる。」 オ 【００８８】段落 「１以上の異種遺伝子の転写される配列は、好ましくは、哺乳動物細胞（好ましくは腫瘍細胞または中枢神経系細胞）内でのその１以上の異種遺伝子の発現を可能とする制御配列と機能的に連結されている。「機能的に連結される」という用語は、記載された構成要素が、その意図する機能を果たすことができるような関係にある並置を意味する。コード配列に「機能的に連結された」制御配列は、そのコード配列の発現がその制御配列に適合した条件下で達成されるように連結されている。」 カ 【００８９】段落 「制御配列は、１以上の異種遺伝子の発現を可能とするプロモーターおよび転写終結シグナルを含む。…」 キ 【００９０】段落 「１以上の異種遺伝子と制御配列を含む発現カセットおよび他の好適な構築物は、当業者に公知である慣例なクローニング技法を用いて作製することができる（…）。」 ク 【００９４】段落 「遺伝子治療および他の治療的用途は、おそらくは複数の遺伝子の投与を必要であろう。複数の遺伝子の発現は、種々の症状の治療において有利であり得る。ヘルペスウイルスは、他のウイルスベクター系のパッケージング能力が制限されていないので、特に適切なものである。従って、複数の異種遺伝子をそのゲノム内に収容することができる。例えば、２～５つの遺伝子をゲノムに挿入することができる。」 ケ 【００９５】段落 「例えば、これを達成可能な方法は少なくとも２つある。例えば２以上の異種遺伝子および関連する制御配列を特定のＨＳＶ株の中の、そのウイルスゲノムの１つの部位または複数の部位に導入することができる。また、お互いから反対方向を向いているプロモーター対（同じまたは異なるプロモーター）を用いることも可能であり、これらのプロモーターの各々は、上記のように異種遺伝子（同じまたは異なる異種遺伝子）の発現を駆動する。」 コ 【０１０６】段落 「以下の実施例は本発明を説明するものである。 実施例 神経毒性因子（ｎｅｕｒｏｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｆａｃｔｏｒ）ＩＣＰ３４．５が不活化されている単純ヘルペスウイルスＩ型（ＨＳＶ１）は、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏの双方で腫瘍モデルにおいて腫瘍特異的細胞溶解を指令することが既に示されている。またこのようなウイルスは、神経膠腫末期患者に直接脳内注入することによる第１段階臨床試験において安全であることも示されている。」 サ 【０１０８】段落 「…本発明者らは、ＨＳＶ１臨床単離株からＩＣＰ３４．５を欠失させ、多くのヒト腫瘍細胞型における複製および溶解潜在能力について、ＨＳＶ１ １７＋株（標準的な実験室株）と比較した。」 シ 【０１０９】段落 「ウイルス構築（図１を参照されたい） 用いるウイルスは、ＨＳＶ１ １７＋株（標準的な実験室株）またはＨＳＶ１を頻繁に再発する個体（ｒｅ－ａｃｔｉｖａｔｏｒ）からの口辺ヘルペスに由来する２種の臨床単離株に基づいた。これらの株は、ＢＬ１およびＪＳ１と名付けられた。ＩＣＰ３４．５を１７＋株およびＪＳ１株から完全に欠失させるとともにＣＭＶ－ＧＦＰカセットを挿入した。またＪＳ１をさらに操作して、ＩＣＰ３４．５遺伝子に置き換わるようにヒトもしくはマウスＧＭ－ＣＳＦを挿入した。従って、ＢＬ１およびＪＳ１は、臨床単離株、すなわち「非実験室」株である。本明細書で考察したＪＳ１の誘導株もまた非実験室株、すなわち本発明の改変された非実験室株である。」 ス 【０１１０】段落 「腫瘍細胞におけるウイルス増殖（図２を参照されたい） ＪＳ１およびＢＬ１は、７２時間にわたって試験した場合、ＩＣＰ３４．５を欠失したＨＳＶ１ １７＋株と比較して幾つかのヒト腫瘍細胞における増殖の増強を示した（図２）。ＪＳ１をさらなる研究のために選択し、上記の改変（図１および上記を参照されたい）をＪＳ１に行った。」 セ 【０１１１】段落 「ウイルスの溶解能力（図３を参照されたい） 溶解（細胞死滅）能力は、試験した全ての腫瘍細胞系において、ＪＳ１に由来する（非実験室株に由来する）ウイルスで増強されていた。より詳細には、図３を参照すると、ＪＳ１／３４．５－ウイルス（すなわち、ＩＣＰ３４．５が欠失によって除去されたＪＳ１）により、ＨＴ２９結腸直腸腺癌細胞、ＬＮＣａＰ．ＦＧＣ前立腺腺癌細胞、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１乳腺腺癌細胞、ＳＫ－ＭＥＬ－２８悪性黒色腫細胞およびＵ－８７ ＭＧ神経グリア芽細胞腫・神経膠星状細胞腫細胞における溶解能力の増強が示された。」 ソ 【０１１５】段落 「さらに増強された抗腫瘍活性 またこれらのウイルスを用いて抗腫瘍活性を有する遺伝子を送達する場合には、さらに増強された活性を期待することができる。このような遺伝子としては、プロドラッグアクチベーターまたは免疫刺激タンパク質をコードするものが挙げられる。」 タ 【０１１６】段落 「この目的のために、本発明者らは、ＩＣＰ３４．５を欠失し、かつ強力な免疫刺激因子であるヒトもしくはマウスＧＭ－ＣＳＦを発現するＨＳＶ１の臨床単離株を、ＪＳ１から産生した。このウイルスは、腫瘍内注入に続く抗腫瘍免疫応答を増強するために設計される。」 チ 図１ 「 ［図：0001418453000001.jpg］ 」 （２） 引用文献１の記載事項 当審の拒絶の理由で引用され、本願優先日前に頒布された又は電気通信回線を通じて公衆に利用可能となった引用文献１（Ｖｉｒｕｓｅｓ， ２０１５年， Ｖｏｌ． ７， ｐｐ． ５７８０－５７９１）には、以下の記載がある（原文が英文のため訳文にて示す。）。 ア 第５７８１頁第２段落 「２． 免疫刺激性遺伝子治療 免疫賦活性遺伝子治療は、免疫賦活性タンパク質をコードする遺伝子を腫瘍領域に導入し、腫瘍免疫を誘導することを目的としている。実験モデルにおける免疫刺激性遺伝子治療を用いた最初の研究は９０年代後半に発表され、有望な結果が得られている。例えば、ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）のマウス遺伝子が、遺伝子導入手段としてレトロウイルスを用いてマウス神経芽腫腫瘍細胞に導入された。ＣＤ４０Ｌは樹状細胞（ＤＣ）の最も強力な刺激因子の一つであり、Ｔヘルパー１（Ｔｈ１）型免疫応答の形成とそれに続くＣＴＬの活性化を促進する。」 イ 第５７８４頁第１２～１９行 「高リスクだが限局性の膀胱癌患者には、根治的膀胱摘出術または切除術の前に、ＣＤ４０Ｌを有するアデノウイルス（ＡｄＣＤ４０Ｌ）を３回膀胱に注入した。これら８人の患者のうち４人は膀胱壁に腫瘍が残存していなかったが、そのうちの１人は尿管に腫瘍が残存していた。しかしながら、腫瘍が残存しなかった患者は根治的膀胱切除術を受けているため、長期的な結果は得られていない。マウス／ヒトキメラＣＤ４０Ｌ（Ａｄ－ＩＳＦ３５）を用いた研究では、１５人の慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）患者が局所注射で治療された。３人の患者に部分奏効がみられたが、６人もの患者はウイルス注射後６ヵ月以上追加治療を受けなかった。」 （３） 引用文献２の記載事項 当審の拒絶の理由で引用され、本願優先日前に頒布された又は電気通信回線を通じて公衆に利用可能となった引用文献２（Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ２０１２年， Ｖｏｌ． ７２， Ｎｏ． １２， ｐｐ． ２９３７－２９４８）には、以下の記載がある（原文が英文のため訳文にて示す。）。 ア 第２９３７頁要約 「慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）に対する新しい治療法、特に残存病変を根絶し、抗ＣＬＬ免疫応答を惹起する治療法が必要とされている。キメラＣＤ１５４（Ａｄ－ＩＳＦ３５）をコードするアデノウイルスを用いてＣＬＬ細胞上のＣＤ４０をライゲーションすることにより、抗原提示細胞としての機能が強化され、免疫－エフェクター機構によるクリアランスに対する感受性が向上する。本研究では、毒性、安全性、忍容性を評価するため、ＣＬＬ患者を対象としたＡｄ－ＩＳＦ３５の結節内直接注射（ＩＤＩ）の第１相臨床試験の結果を報告する。１５人の患者が、１×１０１０から３３×１０１０個のＡｄ－ＩＳＦ３５ウイルス粒子（ｖｐ）の単回ＩＤＩを受け、最大耐容量は１×１０１１ ｖｐと定義された。最も一般的な有害事象は、注射部位の一過性のグレード１～２の疼痛およびＩＤＩ後のインフルエンザ様症状であったが、最高用量を投与された患者の中には、一過性の無症候性グレード３～４の低リン血症、好中球減少症、または高トランスアミナーゼ血症を認めた者もいた。細胞死受容体、免疫共刺激性分子、Ａｄ－ＩＳＦ３５ベクターＤＮＡの発現増加が循環ＣＬＬ細胞で検出された。注目すべきは、白血病細胞数、リンパ節腫脹、脾腫の減少を含む予備的な臨床効果も観察されたことである。６人の患者は６ヵ月以上追加治療を必要とせず、３人は部分寛解を達成した。結論として、Ａｄ－ＩＳＦ３５ ＩＤＩはＣＬＬ患者に安全に投与され、全身性の生物学的および臨床的反応を誘導した。これらの結果は、ＣＬＬ、リンパ腫、ＣＤ４０発現固形癌における第ＩＩ相試験の根拠となる。」 イ 第２９３８頁第２段落 「われわれは以前、このアプローチの安全性と臨床活性を評価する臨床試験を行った。これらの臨床試験では、患者は白血球除去術を受け、その後ＣＬＬ細胞はマウスＣＤ１５４またはキメラヒト化ＣＤ１５４をコードするＡｄベクター（Ａｄ－ＩＳＦ３５と呼ばれる）を用いて生体外で形質導入された。Ａｄ－ＩＳＦ３５はマウスＣＤ１５４に対する免疫の発生を緩和し、膜の安定性を改善するために開発された。ＣＬＬ細胞をＡｄ－ＣＤ１５４またはＡｄ－ＩＳＦ３５で形質導入すると、ＣＤ１５４を持つ細胞との接触によって活性化されたＣＬＬ細胞の表現型の特徴を持つ形質導入ＣＬＬ細胞が生じた。さらに、これらの形質転換ＣＬＬ細胞はＣＤ４０のリガンドを発現するため、バイスタンダーな非形質転換ＣＬＬ細胞を活性化し、そのような表現型の変化を起こさせることもできた。 臨床研究では、Ａｄ－ＣＤ１５４またはＡｄ－ＩＳＦ３５で形質転換された自己ＣＬＬ細胞のｉ．ｖ．輸注は、許容できない毒性や長期毒性を引き起こさず、ＣＤ１５４－／ＩＳＦ３５保有細胞との接触によって達成されるのと同様の「バイスタンダー」非形質転換ＣＬＬ細胞の活性化を誘導し、ほとんど必ず白血病細胞の血球数、リンパ節腫脹、脾腫の急性減少をもたらし、抗白血病免疫応答を誘導できることが示された。」 （４） 引用文献７の記載事項 当審の拒絶の理由で引用され、本願優先日前に頒布された又は電気通信回線を通じて公衆に利用可能となった引用文献７（Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ．， １９９９年， Ｖｏｌ． １９０， Ｎｏ． １， ｐｐ．１２５－１３３）には、以下の記載がある（原文が英文のため訳文にて示す。）。 ア 第１２５頁要約 「我々は、ＢＡＬＢ／ｃ由来Ｃ－２６結腸癌細胞に顆粒球／マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）およびＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）遺伝子を導入し、これらの細胞と宿主樹状細胞（ＤＣ）との相互作用を促進し、したがってクロスプライミングを促進した。共導入された細胞は、腫瘍形成能の減少を示し、一部のマウスでは腫瘍形成に続いて腫瘍が退縮した。Ｉｎ ｖｉｖｏの腫瘍にはＤＣが多量に浸潤しており、これらのＤＣを単離し、表現型を決定し、ｉｎ ｖｉｔｒｏで腫瘍特異的細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）の刺激について試験した。ＢＡＬＢ／ｃ Ｃ－２６癌細胞は、腫瘍関連抗原として内因性マウス白血病ウイルス（ＭｕＬＶ）ｅｎｖ遺伝子を発現している。この抗原はＢＡＬＢ／ｃマウスとＣ５７ＢＬ／６マウスの固形腫瘍で共有されており、２つのエピトープ、ＡＨ－１とＫＳＰを含み、それぞれ主要組織適合性複合体クラスＩ分子Ｈ－２ＬｄとＨ－２Ｋｂの文脈で認識される。（ＢＡＬＢ／ｃ３× Ｃ５７ＢＬ／６）Ｆ１マウス（Ｈ－２ｄ×ｂ）で増殖させたＣ－２６／ＧＭ／ＣＤ４０Ｌ腫瘍から単離したＤＣは、抗ＡＨ－１およびＫＳＰ ＣＴＬｓの両方によるインターフェロンγ産生を刺激したが、ＢＡＬＢ／ｃマウスの腫瘍浸潤ＤＣ（ＴＩＤＣｓ）は抗ＡＨ－１ ＣＴＬのみを刺激した。さらに、ＴＩＤＣｓは足蹠に注射して２日後にはナイーブマウスにＣＴＬ活性のプライミングを行ったが、二重導入された腫瘍細胞はプライミングに少なくとも５日を要した。この違いは、ＤＣの直接的なプライミングと腫瘍細胞の間接的なプライミングを反映しているのかもしれない。免疫組織化学的染色は、腫瘍におけるＤＣとアポトーシス小体の共局在を示した。これらのデータは、ＧＭ－ＣＳＦとＣＤ４０Ｌを産生する腫瘍に浸潤したＤＣは、おそらくアポトーシス小体の取り込みを通して細胞抗原を捕捉し、その場で抗原提示に適した段階まで成熟できることを示している。従って、宿主ＤＣとの相互作用を促進するように設計された腫瘍細胞ベースのワクチンが考えられる。」 イ 第１２７頁右欄第８～２０行 「腫瘍増殖に対するＧＭ－ＣＳＦおよび／またはＣＤ４０Ｌ導入の効果を評価するために、ＢＡＬＢ／ｃマウスに導入または親Ｃ－２６細胞を皮下注射した。Ｃ－２６またはＣ－２６／ＧＭ細胞を注射されたすべてのマウスは、急速に成長する腫瘍を発生し、最初の苦痛の徴候で３週以内に殺されたが、Ｃ－２６／ＣＤ４０ＬおよびＣ－２６／ＧＭ／ＣＤ４０Ｌ細胞をそれぞれ注射された動物の２２および４０％は、全観察期間（３ヶ月）腫瘍のないままであった。二重形質転換された腫瘍の一部は初期に成長した後に退縮し、最終的に７０％が腫瘍のないマウスとなった（図１）。特異的抗体による細胞枯渇は、ＣＤ８＋ Ｔ細胞とＧＲ１＋ ＰＭＮの両方が腫瘍拒絶反応に必要であることを示していた（データは示さず）。」 ウ 図１ 「 ［図：0001418453000002.jpg］ 」 脚注の訳 「図１ Ｃ－２６細胞および遺伝子組み換え変異体のｉｎ ｖｉｖｏでの腫瘍形成性。細胞（５×１０４）を雌性ＢＡＬＢ／ｃマウス（ｎ＝３５）の左脇腹に皮下注射した。○，Ｃ－２６；□，Ｃ－２６／ＧＭ；●，Ｃ－２６／ＣＤ４０Ｌ；■，Ｃ－２６／ＧＭ／ＣＤ４０Ｌ，＊Ｐ ＜０．０１； ＊＊Ｐ ＜０．０５、Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ検定を用いて、形質導入細胞株と親Ｃ－２６細胞を比較して決定した。」 エ 第１３１頁左欄第２５行 「我々の予備実験によると、ＧＭ－ＣＳＦは腫瘍の免疫原性を増強し、形質導入細胞の増殖を損なうことなく、その後の生きた親Ｃ－２６腫瘍細胞によるチャレンジからマウスを保護した（未発表結果）。」 オ 第１３１頁左欄第３５～３７行 「我々の二重形質移入細胞ワクチンのもう一つの成分であるＣＤ４０Ｌは、ＣＤ４０との相互作用を通して免疫反応を誘導する上で中心的な役割を果たすことが示されている。」 カ 第１３１頁右欄第１６～１８行 「我々のモデルでは、ＧＭ－ＣＳＦとＣＤ４０ＬはＤＣのリクルートを促進し、腫瘍部位でＤＣを活性化するのに必要かつ十分であると思われる。」 ２．引用文献６に記載された発明 引用文献６には、前記１．（１）アの下線部のとおり、請求項１を引用する請求項１１に、「改変された腫瘍崩壊性非実験室ウイルス株の、癌の腫瘍崩壊治療用の医薬品の製造における使用」に関し、「非実験室ウイルス株が異種遺伝子をさらに含む」ことが記載されている。そして、これを具現化した実施例には、前記１．（１）コ～タの下線部のとおり、「改変された腫瘍崩壊性非実験室ウイルス株」として、「単純ヘルペスウイルスＩ型（ＨＳＶ１）」の「臨床単離株、すなわち「非実験室」株である」「ＪＳ１株」について、「ＩＣＰ３４．５を…ＪＳ１株から完全に欠失させるとともにＣＭＶ－ＧＦＰカセットを挿入した」ものが記載され、当該「改変された腫瘍崩壊性非実験室ウイルス株」が「腫瘍細胞においてウイルス増殖」を示し、腫瘍に対して「溶解（細胞死滅）能力」を有することが、実験データの裏付けをもって記載されている。 引用文献６には、くわえて、前記１．（１）シ、タ、チの下線部のとおり、上記「改変された腫瘍崩壊性非実験室ウイルス株」を「腫瘍内注入に続く抗腫瘍免疫応答を増強するために設計され」た「ＪＳ１をさらに操作して、ＩＣＰ３４．５遺伝子に置き換わるようにヒトもしくはマウスＧＭ－ＣＳＦを挿入」することにより作製したことが具体的に記載されている。なおここで、「ＧＭ－ＣＳＦを挿入」することが、「ＧＭ－ＣＳＦをコードする遺伝子を挿入」することであることは技術常識に照らし明らかである。 そうすると、引用文献６には、 「単純ヘルペスウイルスＩ型（ＨＳＶ１）のＩＣＰ３４．５遺伝子に置き換わるようにヒト又はマウスＧＭ－ＣＳＦをコードする遺伝子が挿入された、改変された腫瘍崩壊性非実験室単純ヘルペスウイルスＩ型（ＨＳＶ１）を含む、癌の腫瘍崩壊治療用の医薬品」（以下「引用発明６」という。）が記載されているといえる。 ３．本願発明１と引用発明６との対比 本願発明１と引用発明６を対比する。 引用発明６の「癌の腫瘍崩壊治療用の医薬品」は、本願発明１の「腫瘍の治療に使用するための組成物」に相当する。 引用発明６の「腫瘍崩壊性非実験室単純ヘルペスウイルスＩ型（ＨＳＶ１）」は、本願発明１の「腫瘍溶解性ウイルス」である「単純ヘルペスウイルス」に相当する。 引用発明６の「単純ヘルペスウイルスのＩＣＰ３４．５遺伝子に置き換わるように」「挿入され」は、本願発明１の「腫瘍溶解性ウイルスゲノムに挿入され」に相当する。 引用発明６の「ヒト又はマウスＧＭ－ＣＳＦをコードする遺伝子」は、ＧＭ－ＣＳＦが、その生理活性からみて「治療タンパク質」であって、ヒト又はマウスが単純ヘルペスウイルスからみて「異種」であることに照らせば、本願発明１の「治療タンパク質をコードする異種遺伝子」であって、「異種遺伝子が、ヒトＧＭ－ＣＳＦをコードする遺伝子であ」るものに相当する。 そうすると、両者は、 「腫瘍の治療に使用するための組成物であって、 腫瘍溶解性ウイルスゲノムに挿入された異種核酸を含む腫瘍溶解性ウイルスを含み、 前記腫瘍溶解性ウイルスが、治療タンパク質をコードする異種遺伝子を含み、 前記異種遺伝子が、ヒトＧＭ－ＣＳＦをコードする遺伝子であり、 前記腫瘍溶解性ウイルスが、ヒトＧＭ－ＣＳＦを発現する単純ヘルペスウイルスである、腫瘍の治療に使用するための組成物。」である点で一致し、次の点で相違する。 ＜相違点１＞ 本願発明１においては、腫瘍溶解性ウイルスが、ゲノムに挿入された異種核酸として、ヒトＧＭ－ＣＳＦをコードする遺伝子とともに、「前記核酸が、転写制御エレメントに作動可能に連結するキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドをコードする配列を含み」、「ＭＥＭ４０とヒトＧＭ－ＣＳＦの両方を発現する」ものであるのに対し、引用発明６においては、腫瘍溶解性ウイルスのゲノムが転写制御エレメントに作動可能に連結するキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドをコードする配列を含む核酸を含むことについても、ＭＥＭ４０とヒトＧＭ－ＣＳＦの両方を発現することについても特定されていない点。 ＜相違点２＞ 本願発明１においては、「前記ＭＥＭ４０と前記ヒトＧＭ－ＣＳＦ」の挿入が「前記ヒトＧＭ－ＣＳＦ発現カセットの一方のＩＣＰ３４．５コード領域への挿入と、前記ＭＥＭ４０発現カセットの他方のＩＣＰ３４．５遺伝子コード領域への挿入であるか、または、前記ヒトＧＭ－ＣＳＦ発現カセット及び前記ＭＥＭ４０発現カセットの両ＩＣＰ３４．５遺伝子コード領域への挿入であるか、または、前記ヒトＧＭ－ＣＳＦ及び前記ＭＥＭ４０が、内部リボソーム侵入部位により分離され、同一の発現カセットの一部である挿入」であり、「単一のＣＭＶプロモーターを介して各タンパク質を同時発現させる」ことが特定されているのに対し、引用発明６においては、そのような特定はされていない点。 ４．判断 （１）相違点について 相違点１について検討する。 引用文献６には、前記１．（１）アのとおり、特許請求の範囲には、「非実験室ウイルス株が異種遺伝子をさらに含むこと」（請求項１１）、「異種遺伝子が免疫応答を改変可能な遺伝子であ」り（請求項１２）、「免疫応答を改変可能な異種遺伝子が、免疫応答を改変可能な免疫刺激ポリペプチド」であってよく（請求項１３）、「免疫刺激ポリペプチドが、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭＣＳＦ）」等であってよいと記載されているところ（請求項１４）、発明の詳細な説明には、「免疫刺激ポリペプチド、例えばＣＤ４０Ｌ、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭＣＳＦ）…をコードするものである」（前記１．（１）ウ）と記載され、「遺伝子治療および他の治療的用途は、おそらくは複数の遺伝子の投与を必要であろう。複数の遺伝子の発現は、種々の症状の治療において有利であり得る。ヘルペスウイルスは、他のウイルスベクター系のパッケージング能力が制限されていないので、特に適切なものである。従って、複数の異種遺伝子をそのゲノム内に収容することができる。例えば、２～５つの遺伝子をゲノムに挿入することができる。」（前記１．（１）ク）と記載されている。 ここで、癌の免疫療法において、免疫機能の向上は当業者が通常、課題としているものであることから、引用発明６の改変された腫瘍崩壊性非実験室単純ヘルペスウイルスにおいて、免疫機能を向上させるべく、ＧＭ－ＣＳＦに加えて、これと並んで記載された免疫刺激ポリペプチドであるＣＤ４０Ｌの発現を駆動するように、制御配列と共にＣＤ４０Ｌをコードする核酸をウイルスゲノムに導入すること、すなわち、引用発明６の改変された腫瘍崩壊性非実験室単純ヘルペスウイルスゲノムが異種核酸を含み、前記核酸が、転写制御エレメントに作動可能に連結するＣＤ４０リガンドをコードする核酸を含み、前記腫瘍崩壊性単純ヘルペスウイルスが更にＣＤ４０リガンドを発現するようにすることは当業者が容易に着想し得たことであって、その際、引用文献１，２に示されるとおり周知のＣＤ４０リガンドである、キメラマウス／ヒトＣＤ４０リガンド「ＩＳＦ３５」（前記１．（２）ア、イ、前記１．（３）ア、イ）、すなわち本願発明１に係る「ＭＥＭ４０」を採用することに、格別の技術的困難性を見い出せない。 次に相違点２について検討する。 異種遺伝子のウイルスゲノムへの挿入方法につき、引用文献６には、ＧＭ－ＣＳＦ発現カセットを両ＩＣＰ３４．５遺伝子コード領域へ挿入することが具体的に記載されているところ（前記１．（１）チ）、複数異種遺伝子の挿入についても、前記１．（１）ケのとおり、「例えば、これを達成可能な方法は少なくとも２つあ」り、「例えば２以上の異種遺伝子および関連する制御配列を特定のＨＳＶ株の中の、そのウイルスゲノムの１つの部位または複数の部位に導入することができる。」、「また、お互いから反対方向を向いているプロモーター対（同じまたは異なるプロモーター）を用いることも可能であり、これらのプロモーターの各々は、上記のように異種遺伝子（同じまたは異なる異種遺伝子）の発現を駆動する。」との記載がされている。 そうするとこれらの記載に接した当業者であれば、ＭＥＭ４０発現カセットを、ＧＭ－ＣＳＦ発現カセットとともに両ＩＣＰ３４．５遺伝子コード領域へ挿入すること、又はヒトＧＭ－ＣＳＦ発現カセットを一方のＩＣＰ３４．５コード領域へ挿入し、ＭＥＭ４０発現カセットを他方のＩＣＰ３４．５遺伝子コード領域へ挿入して、相違点２に係る構成に至ることは、当然に適宜なし得たことである。 （２） 効果について 本願明細書の発明の詳細な説明には、ＧＭ－ＣＳＦ及びＣＤ４０Ｌの両遺伝子を発現させることにより、腫瘍溶解性ウイルスを殺傷効果が向上したことを示す具体的な薬理試験等の開示は何らされておらず、本願発明１の構成により奏される効果が格別顕著なものであるとはいえない。 かえって、引用文献７には、ＧＭ－ＣＳＦ及びＣＤ４０Ｌの両遺伝子を、ウイルスベクターを用いて導入した腫瘍細胞を接種したマウスの４０％は腫瘍を形成せず、初期に形成された腫瘍の一部は退縮し、最終的に７０％のマウスの腫瘍がなくなったこと（前記１．（４）イ、ウ）、ＧＭ－ＣＳＦが腫瘍細胞の免疫原性を増強し、主にＣＤ４０ＬがＣＤ４０との相互作用を通じて免疫応答を誘導すること、そして、ＧＭ－ＣＳＦとＣＤ４０Ｌが樹状細胞を腫瘍に集積、活性化することが記載されているから（前記１．（４）エ～カ）、本願発明１の腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルスについても、前記ウイルスが感染した細胞内でＭＥＭ４０遺伝子及びＧＭ－ＣＳＦ遺伝子が転写、翻訳され、これらのタンパク質が発現すれば、一定の抗腫瘍効果が得られることは引用文献７の記載からみても当業者が容易に予測できたことである。 （３）請求人の主張について 審判請求人は、令和６年６月２６日受付の意見書において、以下のとおり主張している。 「引用文献６には、腫瘍溶解性ウイルスのゲノムが転写制御エレメントに作動可能に連結するキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドをコードする配列を含む核酸を含む点と、腫瘍溶解性ウイルスがＭＥＭ４０を発現する点とについては言及がない。 ここで、引用文献７には、ＧＭ－ＣＳＦ及びＣＤ４０Ｌの両遺伝子をウイルスベクターを用いて導入した腫瘍細胞を接種したマウスの抗腫瘍効果と、ＧＭ－ＣＳＦが腫瘍細胞の免疫原性を増強し、ＣＤ４０ＬがＣＤ４０との相互作用を通じて免疫応答を誘導することは記載されているが、腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルスについては言及や示唆はない。 また、引用文献６の【００９４】－【００９５】における記載「・・・」は、【００８６】－【００８７】における記載「・・・」と同様に、一般的な緒言にとどまっていて、実際の個々のケースに機械的に適用できるわけではない。 そのため、腫瘍の治療を目的として、腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルスを採用し、ＭＥＭ４０とＧＭ－ＣＳＦの両方を発現させるようにすることについては、容易には想到しないものと思料する。ＭＥＭ４０とヒトＧＭ－ＣＳＦの両方を発現する腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルスの具体的な設計については、いずれの引用文献にも言及や示唆がない。 そこで、図２－４、【００６４】－【００６６】における記載「・・・」を根拠に、ＭＥＭ４０とヒトＧＭ－ＣＳＦの両方を発現する腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルスの具体的な設計を特定する補正を請求項１に行う。」 たしかに、引用文献６には、腫瘍溶解性ウイルスのゲノムが転写制御エレメントに作動可能に連結するキメラヒト／マウスＣＤ４０リガンドをコードする配列を含む核酸を含む点と、腫瘍溶解性ウイルスがＭＥＭ４０を発現する点とについては言及がないが、前記４．（１）で説示したとおり、引用文献６には腫瘍溶解性ウイルスへ組み込む異種遺伝子の免疫刺激ポリペプチドとしてＣＤ４０リガンドが、まず第一に例示されており、ＣＤ４０リガンドとしては、本願優先日当時、ＭＥＭ４０と呼ばれるキメラマウス／ヒトＣＤ４０リガンド「ＩＳＦ３５」が、ウイルスベクターを用いた癌の免疫賦活遺伝子治療で既に用いられ、その有効性が確認されていたのであるから、引用発明６において、免疫賦活効果の向上を期待して、腫瘍溶解性ウイルスへＣＤ４０リガンドとしてＭＥＭ４０を採用することは、当業者にとり、むしろ自然に動機付けられることである。 そして、ＭＥＭ４０とＧＭ－ＣＳＦの両方を腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルスで発現させるための具体的な設計については、前記１．（１）カ～ケにある複数異種遺伝子発現に関する開示に加え、前記１．（１）チのＧＭ－ＣＳＦを両ＩＣＰ３４．５遺伝子コード領域へ挿入する具体的な設計に関する開示を踏まえれば、当業者が、ＨＳＶ１に２リピートあるＩＣＰ３４．５遺伝子コード領域に着目し、両ＩＣＰ３４．５遺伝子コード領域でＧＭ－ＣＳＦ及びＭＥＭ４０を、又は一方のＩＣＰ３４．５遺伝子コード領域でＧＭ－ＣＳＦを、他方のＩＣＰ３４．５遺伝子コード領域でＭＥＭ４０を発現するように設計することは、通常の創作能力の発揮にすぎない。 したがって、請求人の主張は採用できない。 第５ むすび 以上のとおり、本願の請求項１に係る発明は、特許法第２９条第２項の規定により特許を受けることができないものであるから、本願は、その他の請求項について検討するまでもなく、拒絶すべきものである。