2022-008038

本願は、２０１７年（平成２９年）１１月９日（パリ条約に基づく優先権主張 ２０１６年１１月９日（ＵＳ）アメリカ合衆国）を国際出願日とする出願であって、その手続の経緯は、概略、以下のとおりである。

（以下、令和６年８月２１日提出の手続補正書による手続補正を「本件補正」といい、令和５年７月１９日付け拒絶理由通知を「先の拒絶理由」、令和５年１１月２４日提出の意見書を「先の意見書」という。）

１ 引用文献１に記載された事項及び発明

（１）引用文献１に記載された事項について

引用文献１には、次の記載がある。原文は英文なので当審による和訳を示す。下線は当審による。また、原則全角表記とし、読みやすいように内容は変えずに適宜改行、空行等を加える等、体裁を変更し、図面の摘記を本文の関連する箇所に続けて加入記載した。

さらに、引用文献１には、段落番号の記載がないので、参考情報として、摘記の冒頭に括弧書きで、対応日本語ファミリー文献である特表２０１７－５１６８１３号公報の段落番号を「ファミリー」を付して記載するとともに、後述の「オ」以降の具体的な薬理試験結果の記載等を含め、本願明細書に中で同様の内容が記載されているところについては、可能な範囲で本願明細書の段落番号を「本願」を付して記載した（例えば、（ファミリー【０００１】、本願【０００１】）等）。

ア ＣＬＡＩＭＳ（特許請求の範囲）

「１． １又は２以上の活性剤がヒト又は動物対象へ投与される場合に前記１又は２以上の活性剤により引き起こされる心臓パターンにおける不規則性又は変化に起因する１又は２以上の心臓チャネル病又は状態を予防又は治療するための組成物であって、

前記活性剤により引き起こされる心臓パターンにおける不規則性又は変化に起因する前記１又は２以上の心臓チャネル病又は状態を低減又は予防するのに有効な量のリゾホスファチジル化合物

を含む、前記組成物。

・・・

続きを表示（全28行）

３． １－ミリストイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１２－ミステロイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－［ホスホ－ｒａｃ－（グリセロール）］（ＤＭＰＧ）、一般式ＩＩのモノグリセリド（当審注：一般式ＩＩの記載は省略する。）、一般式ＩＩＩの遊離脂肪酸（当審注：一般式ＩＩＩの記載は省略する。）、又は上述の組合せのうちの少なくとも１つをさらに含む、請求項１に記載の組成物。

・・・

７． リゾホスファチジル化合物が、ラウロイル－リゾホスファチジル化合物、ミリストイルリゾホスファチジル化合物、パルミトイル－リゾホスファチジル化合物、ステアロイル－リゾホスファチジル化合物、アラキドイル－リゾホスファチジル化合物、オレオイル－リゾホスファチジル化合物、リノレオイルリゾホスファチジル化合物、リノレノイル－リゾホスファチジル化合物又はエルコイルリゾホスファチジル化合物のうちの少なくとも１つから選択される、請求項１に記載の組成物。

８． リゾホスファチジル化合物が、１０：０ ＬｙｓｏＰＧ、１２：０ ＬｙｓｏＰＧ、１４：０ ＬｙｓｏＰＧ、１４：０ ＥＧＰＧ、１６：０ ＬｙｓｏＰＧ、又は１８：０ ＬｙｓｏＰＧのうちの少なくとも１つから選択される、請求項１に記載の組成物。

・・・

２１． ＬｙｓｏＰＧ：ミリストイルモノグリセリド：ミリスチン脂肪酸を含む共融混合物である、請求項３に記載の組成物。

（当審注：原文では、「ミリスチン脂肪酸」は「myristic fatty」と表記されているが、請求項２１が引用する請求項３及び引用文献１の７頁１７～１８行の記載からみて「myristic fatty acid」の誤記であることは明らかであるから、「ミリスチン脂肪酸」と訳した。）

２２． リン脂質対活性剤の比が、３：１、１：１、０．３：１、及び０．１：１である、請求項１に記載の組成物。

２３． 心臓パターンにおける不規則性又は変化に起因する心臓チャネル病又は状態が、心臓内の遅延整流性Ｋ＋電流に関与するイオンチャネルの阻害、多形性心室性頻拍、ＱＴｃ、ＬＱＴ２、ＬＱＴＳの延長、又はトルサード・ド・ポアンツである、請求項１に記載の組成物。

２４． 心臓、アレルギー又はがん関連疾患の治療に使用される活性剤又は薬物の投与により誘導されるＩＫｒチャネル阻害の延長又はＱＴ延長の治療又は予防に使用される、請求項１に記載の組成物。

（当審注：「ＩＫｒ」は、引用文献１の２６頁２１行（ファミリー【０１１１】）に記載されるとおり、「整流性カリウム選択電流」のことである。）

・・・

２６． １又は２以上の活性剤が、アルブテロール（サルブタモール）、・・・ニロチニブ、ノルエピネフリン（ノルアドレナリン）、・・・又はジプラシドンから選択される、請求項１に記載の方法

・・・

２８． ヒト又は動物対象における疾患を治療するのに使用される１又は２以上の活性剤により引き起こされるヒト又は動物対象における１又は２以上の心臓チャネル病、心臓パターンにおける不規則性若しくは変化、ＩＫｒチャネル阻害又はＱＴ延長を予防又は治療する方法であって、

前記ヒト又は動物対象へ、前記１又は２以上の活性剤により引き起こされる心臓チャネル病、心臓パターンにおける不規則性若しくは変化、ＩＫｒチャネル阻害、又はＱＴ延長のうちの１つを低減又は予防するのに有効な量の、経口投与用に適合されたリゾホスファチジル化合物、及び

前記疾患を治療するのに十分な有効量の前記１又は２以上の活性剤を投与するステップ

を含み、

経口的に供給されたリゾホスファチジル化合物が、少なくとも１つの心臓チャネル病、心臓パターンにおける不規則性若しくは変化、ＩＫｒチャネル阻害又はＱＴ延長を低減又は排除する、前記方法。

・・・

３０． １－ミリストイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１２－ミステロイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－［ホスホ－ｒａｃ－（グリセロール）］（ＤＭＰＧ）、一般式ＩＩのモノグリセリド（当審注：一般式ＩＩの記載は省略する。）、一般式ＩＩＩの遊離脂肪酸（当審注：一般式ＩＩＩの記載は省略する。）、又は上述の組合せのうちの少なくとも１つをさらに含む、請求項２８に記載の方法。

・・・

３２． 心臓パターンにおける不規則性又は変化に起因する心臓チャネル病又は状態が、心臓内の遅延整流性Ｋ＋電流に関与するイオンチャネルの阻害、多形性心室性頻拍、ＱＴｃ、ＬＱＴ２、ＬＱＴＳの延長、又はトルサード・ド・ポアンツである、請求項２８に記載の方法。

３３． １又は２以上の活性剤が、アルブテロール（サルブタモール）、・・・ニロチニブ、ノルエピネフリン（ノルアドレナリン）、・・・又はジプラシドンから選択される、請求項２８に記載の方法。・・・」

イ １頁３行～２頁１５行（ファミリー【０００１】～【０００６】、本願【０００１】～【０００６】）

「 技術分野

（ファミリー【０００１】、本願【０００１】）

本発明は、概して、薬物治療の分野に、より詳細には、活性剤又は薬物により引き起こされる心臓パターンにおける不規則性又は変化に起因するチャネル病又は状態を低減又は排除するための新規組成物及び方法に関する。

背景技術

続きを表示（全14行）

（ファミリー【０００２】、本願【０００２】では一部のみを記載）

本発明の範囲を限定することなく、対象における心室ＱＴの再分極の持続期間を制御するための組成物及び方法に関連して、その背景について記載する。

（ファミリー【０００３】、本願【０００３】）

心臓の拍動は、心筋の興奮及び収縮の正確に制御された規則的な間隔の波に起因する。イオンベースの脱分極及び再分極中の電流は、電波を測定する特定の位置での身体上に配置された導線により測定することができる（心電図）。Ｐ波は、心房における脱分極の波を表す。心房全体が脱分極されるようになると、波はゼロに戻る。０．１秒後、心室は完全に脱分極されて、ＱＲＳ複合体を生じる。３つのピークは、電流が心室に広がる様式に起因する。Ｔ波又は心室の再分極がこれに続く。ＱＲＳ複合体の始まりから標準的なＥＣＧ上のＴ波の終わりまで測定されるＱＴ間隔は、心筋細胞の再分極期（又は心室の脱分極及び再分極）の完了までの持続期間を表す。この間隔の持続期間は、遺伝的変異、心疾患、電解質バランス、毒物注入、及び薬物治療に起因して様々であり得る。ＱＴ間隔の延長は、心室性不整脈及び突然死をもたらし得る。

（ファミリー【０００４】、本願【０００４】）

薬物誘導性の長いＱＴｃシンドローム（ＬＱＴＳ）、即ち活動電位の持続期間の延長は、政府の権限による休薬の一般的な原因である。ＱＴｃ延長は、トルサード・ド・ポアンツ（Torsades de Pointes，ＴｄＰ）、心室細動を招く多形性心室性頻拍に関する予測不可能なリスク因子である。薬物誘導性ＬＱＴＳは、処方全ての約３％を構成し、それは、ＴｄＰが続くと、致死的な有害反応を引き起こし得る。１又は１よりも多いＱＴｃ延長性の薬物を併用して摂取する患者は、ＴｄＰのリスクが高まる。ＴｄＰの全体的な発生は、統計学的に珍しい一方で、それは、罹患個体にとって臨床的に意義がある。この薬物効果に関する実験は、薬物を臨床試験に進ませるのに先立つ必須要件である。

（ファミリー【０００５】、本願【０００５】）

一般的な構造的に異なる薬物は、ヒトｅｔｈｅｒ－ａ－ｇｏ－ｇｏ関連遺伝子（ＫＣＮＨ２又はｈＥＲＧ）コードＫ＋チャネル及び心臓遅延整流性カリウム電流ＩＫ（ＫＶ１１．１）を遮断して、後天性ＬＱＴＳをもたらす。ＬＱＴＳの薬物関連のリスクの増加は、薬物開発の主要な障害であり、多くの薬物が、前臨床開発中に中止されたか、認可後に黒枠警告（当審注：原文は「black box warnings」）を割り当てられたか、又は市場から取り下げられている。カリウムチャネルをコードする１０個の異なる遺伝子における５００個の考えられ得る変異に基づく常染色体劣性又は優性ＬＱＴＳは、１：３０００の発生率を有する。ＱＴ間隔の延長、又はＬＱＴＳのリスクは、無症候性ＵＳ集団の２．５％に見られる。このシンドロームは、発現されると、未処置患者において重篤な心不整脈及び突然死を招き得る。ＬＱＴＳ誘導性薬物を投薬される無症候性先天性ＬＱＴＳを有する患者における心臓死の確率は増加する。

（ファミリー【０００６】、本願【０００６】）

後天性ＬＴＱＳ薬物中止の大部分は、ヒトｅｔｈｅｒ－ａ－ｇｏ－ｇｏ関連遺伝子（ｈＥＲＧ）によりコードされるカリウムイオンチャネルの閉塞に起因する。高濃度のｈＥＲＧ遮断薬は概して、ＱＴｃ間隔の延長を誘導して、ＴｄＰの確率を高める。薬物誘導性ＴｄＰの事例の最大１０％が、１３個の主要な遺伝的変異、４７１個の異なる変異、及び１２４個の多型に起因し得る（Ｃｈｉｇ，Ｃ ２００６）。」

ウ ２１頁１３行～２２頁５行（ファミリー【００７８】～【００８７】）（本願明細書に対応記載なし）

「（ファミリー【００７８】）

ある特定の実施形態では、組成物は、下記略記、化学名及び構造を有する：

クルクミン（３６８．３８）（ＭＷ）

（ファミリー【００７９】）

続きを表示（全24行）

［図：0001422774000001.jpg］

（ファミリー【００８０】）

ＤＭＰＣ：１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（６７７．９４）（ＭＷ）

一般用語－ホスファチジルコリン

（ファミリー【００８１】）

［図：0001422774000002.jpg］

（ファミリー【００８２】）

ＤＭＰＧ：１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－［ホスホリック－（１－グリセロール）］（ナトリウム塩）（６８８．８６）（ＭＷ）

一般用語－ホスファチジルグリセロール

（ファミリー【００８３】）

［図：0001422774000003.jpg］

（ファミリー【００８４】）

１４：０ ＬｙｓｏＰＧ、１４：０ ＬＰＧ、１４：０ リゾホスファチジルグリセロール、ミリストイルリゾホスファチジルグリセロール：１－ミリストイル－２－ヒドロキシ－ｓｎ－グリセロ－３－［ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロール）］（ナトリウム塩）（４７８）（ＭＷ）

（ファミリー【００８５】）

［図：0001422774000004.jpg］

（ファミリー【００８６】）

１４：０ モノグリセリドミリストイルモノグリセリド（３０２）（ＭＷ）

（ファミリー【００８７】）

［図：0001422774000005.jpg］

（当審注：上記の最後の２つの化学式は、原文では枠囲いがあるが、当審で枠囲いを削除して表記した。）」

エ ２６頁１９～３１行（ファミリー【０１１１】、本願【００７３】）、２６頁３２行～２７頁３行（ファミリー【０１１２】）、２９頁３０行～３０頁２８行（ファミリー【０１２０】～【０１２２】、本願【００７５】～【００７７】）

・２６頁１９～３１行

「（ファミリー【０１１１】、本願【００７３】）

リポソーム及び断片によるヒトｅｔｈｅｒ－ａ－ｇｏ－ｇｏ関連遺伝子（ｈＥＲＧ）カリウムチャネル抗遮断。

カリウムチャネルは、遅延整流性カリウム電流ＩＫｒの迅速な構成成分を伝導し、それは、心臓活動電位の再分極に不可欠である。遺伝的欠陥又は有害な薬物の影響のいずれかに起因したｈＥＲＧ電流の低減は、活動電位延長、表面ＥＣＧ上でのＱＴ間隔の長期化、並びにトルサード・ド・ポアンツ不整脈及び突然死に対するリスクの増加を特徴とする遺伝性又は後天性ＱＴ延期症候群を招き得る。非抗不整脈化合物のこの望ましくない副作用が、薬物の市場からの取り下げを促してきた。ｈＥＲＧチャネル阻害のメカニズムに関する研究は、ｈＥＲＧ電流阻止の状態、電圧及び使用依存度を決定する分子要因への有意な洞察を提供する。ｈＥＲＧにおける高親和性薬物結合部位及び薬物分子とのその相互作用の特性を変更させる変異は、生命に関わる不整脈に関して高いリスクで、電流増加及び遺伝性短期ＱＴ症候群を引き起こす（Ｔｈｏｍａｓ Ｄ１，２００６）。」

・２６頁３２行～２７頁３行

「（ファミリー【０１１２】、本願明細書に対応する記載なし）

Ｋ＋チャネルの解剖学的特徴

内向き整流性カリウム（ＩＫｒ）チャネルのタイプ及び分布は、心筋細胞の電気生理学的特性の主な決定因子の１つである。内向き整流性カリウム（ＩＫｒ）チャネルは、細胞膜を通るＫ＋イオンの細胞興奮性及び輸送を調節する。」

・２９頁３０行～３０頁２８行

「（ファミリー【０１２０】、本願【００７５】では一部のみを記載）

チャネル病

ヒトｅｔｈｅｒ－ａ－ｇｏ－ｇｏ遺伝子関連心臓四量体カリウムチャネルは、変異されると、患者を、１６３個を上回る薬物に対して感受性にさせることができ、それは、イオン伝導を阻害して、活動電位をダウンレギュレートし得る。（・・・）カリウムチャネルの影響の結果として、活動電位の延長が起きる。イオンチャネル活性薬物は、ＱＴｃ間隔を直接増加させて、トルサード・ド・ポアンツ及び突然心臓死のリスクを増加させ得る。（表１）・・・

（ファミリー【０１２１】、本願【００７６】では一部の記載なし）

これらの理由で、心筋細胞カリウムチャネル機能に対する薬物の影響の評価は、薬物開発中の極めて重要なステップであり、重症であると、規制当局の承認への障害となり得る。ホールセルパッチ－クランプ実験では、クルクミンは、用量依存的様式で、ＩＣ５０値５．５５μＭで、ｈＥＲＧチャネルを安定に発現するＨＥＫ２９３細胞においてｈＥＲＧ Ｋ＋電流を阻害した。ｈＥＲＧチャネルの失活、不活性化及び不活性化からの回復時間は、１０μＭクルクミンの急性処置により著しく変化した。２０μＭクルクミンの２４時間のインキュベーションは、ＨＥＫ２９３細胞生存率を低減させた。ウサギにおけるクルクミン２０ｍｇの静脈内注射は、ＱＴｃ値に現れる心臓再分極に影響を及ぼさなかった。（Ｈｕ ＣＷ ２０１２）。しかしながら、ＱＴｃ延長薬を拮抗する特定分子が、本明細書で実証される（Ｈｅｌｓｏｎ Ｌ，２００２ Ｒａｎｊａｎ Ａ，２０１４，Ｓｈｏｐｐ Ｇ，２０１４）。これらの分子は、最初に親油性薬物へ結合させて、生理学的条件下で静脈内溶解性を可能にさせて、有害事象を低減させた特定リポソーム、又はリポソームの構成成分である。作用の位置は、カリウムイオンの動作を制御するチャネル内イオン選択性又はゲーティング部位（複数可）であり、下流で筋細胞収縮を招く活動電位の調節の重要な機能的成分に存在するようである。

（ファミリー【０１２２】、本願【００７７】）

ヒトｅｔｈｅｒ－ａ－ｇｏ－ｇｏ関連遺伝子チャネル遮断のメカニズムは、ＤＭＰＣ／ＤＭＰＧリポソーム又はその代謝産物の抗遮断効果の作用メカニズムを間接的に示唆し得る外部から加えられた第四級アンモニウム誘導体の効果に類似し得る。チャネル阻害に関する阻害定数及び相対結合エネルギーにより、より疎水性の第四級アンモニウムが、より高い親和性遮断を有する一方で、陽イオン－π相互作用又はサイズ効果は、第四級アンモニウムによるチャネル阻害において決定的な要因ではないことが示される。また、テトラエチルアンモニウムよりも長い尾部基又はより大きな頭部基のいずれかを有する水性第四級アンモニウムは、細胞膜を透過して、遺伝子チャネルにおける高親和性内部結合部位に容易に近づき、より強力な遮断を発揮する。」

オ ３０頁２９行～３５頁２４行及びＦＩＧＵＲＥ１～５（ファミリー【０１２３】～【０１５８】、本願【００７８】～【０１１１】、図１～５）

「（ファミリー【０１２３】、本願【００７８】）

説明として、また本発明の限定ではなく、これらのデータは、リポソーム又はその構成成分の改善効果に関する基礎が、ＱＴｃ延長薬、イオン輸送調節のその構成的な欠如と比較してＤＭＰＣ及びＤＭＰＧにより結合部位に関してより高い競合親和性である、即ち、リポソーム又はその断片は、Ｋ＋イオン輸送を妨害しないことを示す。

（ファミリー【０１２４】、本願【００７９】）

説明として、またこれらの特許請求の範囲の限定ではなく、これらのデータは、リポソーム又はその構成成分の改善効果に関する基礎が、ＱＴｃ延長薬、イオン輸送調節のその構成的な欠如と比較してＤＭＰＣ及びＤＭＰＧにより結合部位に関してより高い競合親和性である、即ち、リポソーム又はその断片は、Ｋ＋イオン輸送を妨害しないことを示唆し、ＤＭＰＣ又はＤＭＰＧ防護のメカニズムの部位は、チャネルの選択性セグメントに、又はイオンを取り巻く水和に存在し得ることを示す。

続きを表示（全46行）

（ファミリー【０１２５】、本願【００８０】前半）

さらに、これらのｈＥＲＧチャネルデータに基づいて、これらのリポソーム構成成分の構造は、薬物誘導性心不整脈を予防するために他の分子を設計又は選択するのに有益となり得る。

（ファミリー【０１２６】、本願【００８０】後半）

この研究は、心筋細胞カリウムチャネルで誘導される薬物によるＱＴｃ調節効果、並びにリポソーム及びリポソーム構成成分による緩和に関してさらなる情報を提供する。後者の分子は、薬物誘導性のチャネル病の薬理学的緩和に対する標的としてＫ＋チャネルを探る機会を提示する。

（ファミリー【０１２７】、本願【００８１】前半）

ニロチニブによるｈＥＲＧ阻害に対するＤＭＰＣ、ＤＭＰＧ、ＤＭＰＣ／ＤＭＰＧ、ＬｙｓｏＰＧ及びＬｙｓｏＰＣの防護効果の評価。

（ファミリー【０１２８】、本願【００８１】後半）

研究の目的：この研究の目的は、安定にトランスフェクトしたヒト胎児由来腎臓細胞（ＨＥＫ２９３細胞）において正常酸素圧条件下で発生させた迅速に活性化する遅延整流性カリウム選択電流（ＩＫｒ）に対するＤＭＰＣ、ＤＭＰＧ、ＤＭＰＣ／ＤＭＰＧ、ＬｙｓｏＰＧ及びＬｙｓｏＰＣの防護効果をｉｎ ｖｉｔｒｏで評価することである（非ＧＬＰ遵守）。

（ファミリー【０１２９】、本願【００８２】）

被検試料（当審注：本願明細書においては、「被験物質」と記載されている。以下、同様。）：

１－ＤＭＰＣ

２－ＤＭＰＧ

３－ＤＭＰＣ／ＤＭＰＧ ９０：９

４－１４：０ ＬｙｓｏＰＣ

５－１４：０ ＬｙｓｏＰＧ

６－ＤＭＰＣ＋ニロチニブ（０．１μＭ）

７－ＤＭＰＧ＋ニロチニブ（０．１μＭ）

８－ＤＭＰＣ／ＤＭＰＧ ９０：９＋ニロチニブ（０．１μＭ）

９－１４：０ ＬｙｓｏＰＣ＋ニロチニブ（０．１μＭ）

１０－１４：０ ＬｙｓｏＰＧ＋ニロチニブ（０．１μＭ）

（ファミリー【０１３０】、本願【００８３】）

試験系：ｈＥＲＧ発現ＨＥＫ２９３トランスフェクト細胞株。実施した試験：ホールセルパッチ－クランプ電流獲得及び分析。実験温度：３５±２℃。

（ファミリー【０１３１】、本願【００８４】）

被検試料の適用：閉鎖循環式灌流（２ｍＬ／分）の存在下での各濃度への曝露５分。閉鎖循環式灌流（２ｍＬ／分）に加えて、フロースルー灌流（２ｍＬ／分）の存在下での洗い流し期間５分。正の対照（ニロチニブ、０．０５μｇ／ｍＬ）を、閉鎖循環式灌流（２ｍＬ／分）の存在下で５分間、同じ細胞株及び同じ継代数から得られる未感作細胞に添加した。

（ファミリー【０１３２】、本願【００８５】）

細胞は、実験全体にわたってパルスプロトコールの連続的な刺激下にあり、細胞電流を、各条件への曝露５分後に記録した。

・・・

（ファミリー【０１３４】、本願【００８７】）

化合物又は媒体／溶媒同等物を実験する際の獲得に関する設計

・・・

（ファミリー【０１３６】、本願【００８９】）

統計分析：統計学的比較は、対応のあるスチューデントｔ検定を使用して行われた。２日目、３日目及び４日目に得られる記録した電流を、１日目に記録した電流と統計学的に比較した。

（ファミリー【０１３７】、本願【００９０】）

正の対照（ニロチニブ単独）曝露後に記録される電流を、ベースライン条件で記録された電流と比較した。

（ファミリー【０１３８】、本願【００９１】）

差は、ｐ≦０．０５である場合に有意であるとみなした。

・・・

（ファミリー【０１４３】、本願【００９６】）

【表１】

［図：0001422774000006.jpg］

（ファミリー【０１４４】、本願【００９７】）

図１は、トランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞由来のｈＥＲＧ電流密度に対するＤＭＰＣ、ＤＭＰＣ＋ニロチニブ及びニロチニブの効果を示すグラフである。」

「

［図：0001422774000007.jpg］

」

「（ファミリー【０１４５】、本願【００９８】）

［図：0001422774000008.jpg］

（ファミリー【０１４６】、本願【００９９】）

図２は、トランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞由来のｈＥＲＧ電流密度に対するＤＭＰＧ、ＤＭＰＧ＋ニロチニブ及びニロチニブの効果を示すグラフである。」

「

［図：0001422774000009.jpg］

」

「（ファミリー【０１４７】、本願【０１００】）

［図：0001422774000010.jpg］

（ファミリー【０１４８】、本願【０１０１】）

図３は、トランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞由来のｈＥＲＧ電流密度に対するＤＭＰＣ／ＤＭＰＧ、ＤＭＰＣ／ＤＭＰＧ＋ニロチニブ及びニロチニブの効果を示すグラフである。」

「

［図：0001422774000011.jpg］

」

「（ファミリー【０１４９】、本願【０１０２】）

［図：0001422774000012.jpg］

（ファミリー【０１５０】、本願【０１０３】）

図４は、トランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞由来のｈＥＲＧ電流密度に対するＬｙｓｏＰＣ、ＬｙｓｏＰＣ＋ニロチニブ及びニロチニブの効果を示すグラフである。」

「

［図：0001422774000013.jpg］

」

「（ファミリー【０１５１】、本願【０１０４】）

［図：0001422774000014.jpg］

（ファミリー【０１５２】、本願【０１０５】）

図５は、トランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞由来のｈＥＲＧ電流密度に対するＬｙｓｏＰＧ、ＬｙｓｏＰＧ＋ニロチニブ及びニロチニブの効果を示すグラフである。」

「

［図：0001422774000015.jpg］

」

「（ファミリー【０１５３】、本願【０１０６】）

この研究は、ニロチニブにより引き起こされる安定にトランスフェクトしたヒト胎児由来腎臓（ＨＥＫ）２９３細胞において正常酸素圧条件下で発生させた迅速に活性化する遅延整流性カリウム選択電流（ＩＫｒ）の阻害に対するＤＭＰＣ、ＤＭＰＧ、ＤＭＰＣ／ＤＭＰＧ、ＬｙｓｏＰＧ及びＬｙｓｏＰＣの防護効果を定量化することを目的とした。

（ファミリー【０１５４】、本願【０１０７】）

この研究で提示されるデータ点は全て、溶媒効果及び時間依存的電流ランダウンに関して補正してある。これらの２つのパラメーターは、被検試料を用いて行われるのと同じ実験計画を、媒体に正確に適用させることにより評価した。電流は、被検試料の存在下で行われるのと同じ時間的経過で測定した。溶媒効果及び時間依存的ランダウンの両方を表す得られた値を使用して、存在するのであれば、被検試料の効果を補正した。このことは、時間又は溶媒に帰される変化が、誤って被検試料に帰されないことを保証する。

続きを表示（全12行）

（ファミリー【０１５５】、本願【０１０８】）

ＤＭＰＣ、ＤＭＰＧ、ＤＭＰＣ／ＤＭＰＧ及びＬｙｓｏＰＧ単独は、ｈＥＲＧテール電流密度のいかなる阻害も引き起こさなかった（ｎ＝３）。ＬｙｓｏＰＣ単独は、ｈＥＲＧテール電流密度の１６％の阻害を引き起こした（ｎ＝４）。

（ファミリー【０１５６】、本願【０１０９】）

０．１μＭでＤＭＳＯ中に配合したニロチニブ単独は、ｈＥＲＧテール電流の５４．１％の阻害を引き起こした（ｎ＝３）。観察された阻害は、同一条件で作成されたこれまでのデータと合致して、この化合物に関する報告された阻害値に一致する。

（ファミリー【０１５７】、本願【０１１０】）

ニロチニブは、ＤＭＰＣ、ＤＭＰＧ、ＤＭＰＣ／ＤＭＰＣ、ＬｙｓｏＰＧ又はＬｙｓｏＰＣを含有する水溶液中で配合されると（比１：９）、ｈＥＲＧテール電流のいかなる阻害も引き起こさなかった。

（ファミリー【０１５８】、本願【０１１１】）

これらのデータは、ニロチニブをＤＭＰＣ、ＤＭＰＧ、ＤＭＰＣ／ＤＭＰＣ、ＬｙｓｏＰＧ及びＬｙｓｏＰＣと同時配合することが、ニロチニブにより引き起こされるｈＥＲＧ阻害を防護することを示唆する。」

カ ３５頁２５行～３７頁末行及びＦＩＧＵＲＥ６～７（ファミリー【０１５９】～【０１６８】、本願【０１１２】～【０１２１】、図６～７）

「（ファミリー【０１５９】、本願【０１１２】）

この研究では、ＤＭＰＣ＋ニロチニブ、ＤＭＰＧ＋ニロチニブ、ＤＭＰＣ／ＤＭＰＣ＋ニロチニブ、ＬｙｓｏＰＧ＋ニロチニブ又はＬｙｓｏＰＣ＋ニロチニブは全て、同じ方法を使用して配合した。適切な量のニロチニブ粉末を、ＤＭＰＣ、ＤＭＰＧ、ＤＭＰＣ／ＤＭＰＣ、ＬｙｓｏＰＧ又はＬｙｓｏＰＣのいずれかを含有する水溶液中に溶解した（比９：１）。溶液を１０分間ボルテックスした後、パッチクランプアッセイで使用した。

（ファミリー【０１６０】、本願【０１１３】）

対比して、ニロチニブ単独に曝露させる細胞に使用するニロチニブを、ＤＭＳＯ中に溶解した。さらなる研究を行って、ＤＭＳＯ配合したニロチニブと、脂質と同時配合したニロチニブとの間のｈＥＲＧ阻害の差が、種々の配合物（水性又はＤＭＳＯベース）に起因するかどうかを決定した。

続きを表示（全17行）

（ファミリー【０１６１】、本願【０１１４】）

［図：0001422774000016.jpg］

［図：0001422774000017.jpg］

（ファミリー【０１６２】、本願【０１１５】）

ＤＭＰＣ／ＤＭＰＧ又はＬｙｓｏ変異体が、配合時にニロチニブをクエンチしたという可能性は、ｈＥＲＧ電流の防護を説明するとみなされるメカニズムの中の１つであり、ニロチニブが、その受容体部位でチャネルに入り込むのを本質的に防止した。別の可能性は、ニロチニブが、水溶液中にあまり溶解性でないこと、したがって０．１μＭで不完全に溶解されることであった。

（ファミリー【０１６３】、本願【０１１６】）

両方の仮説を試験するために、ニロチニブをＤＭＳＯ中に配合して、ＤＭＰＣ又はＤＭＰＧの添加後に、実験チャンバーへ添加した。これは、１－ＤＭＰＣ／ＤＭＰＧ単独を、続いてＤＭＳＯ配合したニロチニブを添加することにより、リソソームによるニロチニブの初期クエンチングの可能性が排除されるという原理、及び２－ＤＭＳＯが、ニロチニブの溶解度を維持する（ｈＥＲＧの「ニロチニブのみ」阻害は、ＤＭＳＯ配合したニロチニブを細胞へ添加した場合に観察された）という原理に基づいた。

（ファミリー【０１６４】、本願【０１１７】）

［図：0001422774000018.jpg］

（ファミリー【０１６５】、本願【０１１８】）

［図：0001422774000019.jpg］

（ファミリー【０１６６】、本願【０１１９】）

図６は、トランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞由来のｈＥＲＧ電流密度に対するＤＭＰＣ、ＤＭＰＣ＋ニロチニブ、ＤＭＰＣ＋ニロチニブ（ＤＭＳＯ中）及びニロチニブの効果を示すグラフである。」

「

［図：0001422774000020.jpg］

」

「（ファミリー【０１６７】、本願【０１２０】）

［図：0001422774000021.jpg］

（ファミリー【０１６８】、本願【０１２１】）

図７は、トランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞由来のｈＥＲＧ電流密度に対するＤＭＰＧ、ＤＭＰＧ＋ニロチニブ、ＤＭＰＧ＋ニロチニブ（ＤＭＳＯ中）及びニロチニブの効果を示すグラフである。」

「

［図：0001422774000022.jpg］

」

キ ３８頁１行～３９頁１４行及びＦＩＧＵＲＥ８（ファミリー【０１６９】～【０１７５】、図８）（本願明細書に対応記載なし）

「（ファミリー【０１６９】）

リポソーム分解産物の経口製剤は、ｉｎ ｖｉｖｏで静脈内モキシフロキサシン誘導性ＱＴｃ延長を緩和する。

（ファミリー【０１７０】）

構造的に多様な抗がん薬は、ｅｔｈｅｒ－ａ－ｇｏ－ｇｏ遺伝子（ｈＥＲＧ）によりコードされる心臓遅延整流性Ｋ＋チャネル（ＩＫｒ）を遮断して、後天性ＱＴ延長症候群（ＬＱＴＳ）をもたらす。重篤な心不整脈及び突然死の蓋然性は、ＬＱＴＳ誘導性抗がん薬を投薬した患者において増加する。このリスクは、薬物開発の障害であり、薬物は、市場から取り下げられたか、又は黒枠警告を割り当てられた。抗がん薬としてのクルクミンの開発中に、クルクミンが、ＩＣ５０ ４．９μＭで、濃度依存的様式でｈＥＲＧチャネルを遮断したことを、本発明者らは確認した。この効果は、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）及び１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－［ホスホリック－１－グリセロール）］－ナトリウム塩（ＤＭＰＧ）から構成される可溶化リポソーム製剤により抑止された。本明細書中で上記に示したように、この効果は、クリゾチニブ、ニロチニブ及びメタンスルホンアミド抗不整脈誘導剤Ｅ４０３１などの他のＬＱＴＳ誘導薬を用いた場合に見られた。個々のリポソーム構成成分ＤＭＰＣ及びＤＭＰＧ並びにそれらの分解産物は、ウサギ及びラットに静脈内投与されると、ｉｎ ｖｉｔｒｏでｈＥＲＧチャネルに対するニロチニブの効果を抑止した。本研究では、本発明者らは、モキシフロキサシンにより誘導されるＬＱＴＳに対する分解産物のうちの１つの経口製剤の効果を試験した。モキシフロキサシンは、気管支炎、肺炎、及び静脈洞、皮膚、又は胃の感染を含むある特定の細菌感染を治療するのに使用される抗生物質である。モキシフロキサシンは、錠剤及び静脈内注射フロキサシン静脈内注射として利用可能であり、病院向けのみである。

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（ファミリー【０１７１】）

方法。本発明者らは、経口ＬＱＴＳ誘導薬で治療されているがん患者における薬物送達を促進するために、経口用途として複合体混合物中に生成物を配合した。経口用途の前臨床評価は、機器を装着したスプラーグドーリー雄（２５０－３００ｇ）ラットで行った。皮膚ＥＣＧリードを使用して、Ｔ波検出を最大にした。３匹のラットのグループの動物を、少量のイソフルランで一時的に麻酔して、前処置ＥＣＧを獲得して、明確なＴ波を確立して、既存の不整脈素因を除外した。前処置ＥＣＧプロフィールは正常であった。

（ファミリー【０１７２】）

９：１のモキシフロキサシンの比での単回用量の経口複合体を連続して５分間ボルテックスして、エマルジョンを得て、経管栄養により即座に投与した。立証されたＬＱＴＳ活性を有する広域抗生物質であるモキシフロキサシンをＤＭＳＯ中に配合して、２時間後、開始用量２．８ｍｇ／ｋｇで２０分かけて、静脈内に（大腿カニューレ）注入した。注入の５分前から注入の２０分の間、ＥＣＧを記録した。次に、動物に２０分かけて、６．１ｍｇ／ｋｇで、続いて２０分かけて２０ｍｇ／ｋｇで投薬した。正の対照群では、モキシフロキサシンを単独で注入した。ラットの第２の群では、モキシフロキサシンの最初の用量の２時間前に、複合体を経口投与した。ラットの第３の群では、モキシフロキサシンの各用量レベルの５分前に、複合体を静脈内に投与した。

（ファミリー【０１７３】）

６．１ｍｇ／ｋｇ及び２０ｍｇ／ｋｇでのモキシフロキサシンは、それぞれ、３０及び４８ｍｓのＱｔｃ延長を引き起こした。ＦＤＡでの認容性に関する閾値は３０ｍｓであり、その時点で、薬物は、黒枠ＱＴ延長ラベル（当審注：原文は「black box QT prolongation label」）を獲得する。２０ｍｇ／ｋｇのモキシフロキサシンは、５５ｍｓの生命に関わるＱＴ延長を引き起こす。経口複合体による前処置により、ＱＴ延長を、２０ｍｇ／ｋｇのモキシフロキサシン用量に関しては１１ｍｓ未満へと著しく下げた。

（ファミリー【０１７４】）

これらの見解により、経口複合体をＬＱＴＳ誘導薬と組み合わせることは、がん患者で使用されるモキシフロキサシン及び他のＬＱＴＳ延長薬の臨床的脅威及び黒枠ラベル（当審注：原文はblack box label）を除去し得ることがさらに実証される。

（ファミリー【０１７５】）

図８は、５５ｍｓの生死に関わるＱＴ延長を引き起こす最高用量のモキシフロキサシン（２０ｍｇ／ｋｇ）で（ＦＤＡでの認容性に関する閾値は３０ｍｓであり、その時点で、薬物は、黒ＱＴラベル（当審注：原文は「black QT label」）を依然として獲得している）、本発明は、Ｑｔｃ延長を排除したことを示すグラフである。」

「

【図８】

［図：0001422774000023.jpg］

」

（２）引用文献１に記載された発明

引用文献１の請求項１の「１又は２以上の活性剤がヒト又は動物対象へ投与される場合に前記１又は２以上の活性剤により引き起こされる心臓パターンにおける不規則性又は変化に起因する１又は２以上の心臓チャネル病又は状態」と記載され、請求項１を引用する請求項２６に、「１又は２以上の活性剤が・・・ニロチニブ・・・から選択される」と記載されるとおり、「ニロチニブ」は、チャネル病を引き起こす活性剤（薬物）である。

そして、引用文献１の３０頁２９行～３５頁２４行及びＦＩＧＵＲＥ１～５（上記（１）オ）には、ニロチニブが脂質に対して比１：９で配合された被検試料であって、脂質として、ＤＭＰＣ（被検試料６）、ＤＭＰＧ（被検試料７）、ＤＭＰＣ／ＤＭＰＧ（９０：９）（被検試料８）、１４：０ ＬｙｓｏＰＣ（被検試料９）、及び１４：０ ＬｙｓｏＰＧ（被検試料１０）を含む組成物（３１頁２１～３１行（ファミリー【０１２９】）及び３５頁２１～２２行（ファミリー【０１５７】）を使用して、ｈＥＲＧ発現ヒト胎児由来腎臓細胞（ＨＥＫ２９３細胞）においてニロチニブにより発生させた遅延整流性カリウム選択電流（ＩＫｒ）に対する防護効果をｉｎ ｖｉｔｒｏで確認した試験結果が記載されているところ、当該試験についての引用文献１の２６頁１９～３１行及び２９頁３０行～３０頁２８行（上記（１）エ（ファミリー【０１１１】及び【０１２０】～【０１２２】））並びに３０頁２９行～３１頁１３行（同オ（ファミリー【０１２３】～【０１２６】））の記載、特に、３１頁の１０～１３行（同オ（ファミリー【０１２６】））の「この研究は、心筋細胞カリウムチャネルで誘導される薬物によるＱＴｃ調節効果、並びにリポソーム及びリポソーム構成成分による緩和に関してさらなる情報を提供する。後者の分子は、薬物誘導性のチャネル病の薬理学的緩和に対する標的としてＫ＋チャネルを探る機会を提示する。」なる記載によれば、当該試験で使用される被検試料は、薬物誘導性のチャネル病の薬理学的緩和を目的とする組成物であるといえるから、引用文献１には、以下の発明が記載されているといえる。

「ＤＭＰＣと、ニロチニブ０．１μＭを含み、ニロチニブは、ＤＭＰＣと１：９で配合される、ニロチニブにより誘導されるチャネル病の薬理学的緩和のための組成物。」（以下「引用発明Ａ」という。）

「ＤＭＰＧと、ニロチニブ０．１μＭを含み、ニロチニブは、ＤＭＰＧと比１：９で配合される、ニロチニブにより誘導されるチャネル病の薬理学的緩和のための組成物。」（以下「引用発明Ｂ」いう。）

「ＤＭＰＣ／ＤＭＰＧ（９０：９）と、ニロチニブ０．１μＭを含み、ニロチニブは、ＤＭＰＣ／ＤＭＰＧ（９０：９）と比１：９で配合される、ニロチニブにより誘導されるチャネル病の薬理学的緩和のための組成物。」（以下「引用発明Ｃ」という。）

「１４：０ ＬｙｓｏＰＣと、ニロチニブ０．１μＭを含み、ニロチニブは、１４：０ ＬｙｓｏＰＣと比１：９で配合される、ニロチニブにより誘導されるチャネル病の薬理学的緩和のための組成物。」（以下「引用発明Ｄ」という。）

「１４：０ ＬｙｓｏＰＧと、ニロチニブ０．１μＭを含み、ニロチニブは、１４：０ ＬｙｓｏＰＧと比１：９で配合される、ニロチニブにより誘導されるチャネル病の薬理学的緩和のための組成物。」（以下「引用発明Ｅ」という。）

２ 引用文献２に記載された事項について

（１）引用文献２には、次の記載がある。

原文は英文なので、当審による和訳で記載する。

ア タイトル

「リポソーム: 製造技術の概要」

イ ７１３頁４～９行

「リポソーム形成の基本的な原理は、調製方法にかかわらず、脂質－脂質及び脂質－水分子間の親水性／疎水性相互作用である。（超音波処理、ホモジナイズ、振とう、加熱などの形で）エネルギーを与えると、脂質分子が二重層小胞の形で配列し、水相での熱力学的平衡が達成される。」

（２）上記（１）の記載によれば、リポソーム形成には、超音波処理、均質化処理、振とう、加熱などのようなエネルギーの導入が必要であることが、本願優先日当時における技術常識であったといえる。

なお、引用文献２は、請求人が先の拒絶理由に対して提出した先の意見書に添付された、周知技術を示す参考資料３であり、先の意見書において請求人は、リポソームの形成にはエネルギーの導入が必要であると説明している。