2021-800035

第２ 訂正請求について

１ 訂正請求の趣旨及び訂正の内容

被請求人が令和４年３月１８日付け訂正請求書により請求する訂正は、本件特許の特許請求の範囲を、訂正請求書に添付した訂正特許請求の範囲のとおり訂正することを求めるものであって、その訂正の内容は、下記訂正事項１～９のとおりである（下線は訂正箇所を示す）。

なお、令和３年８月１２日にされた訂正の請求は、特許法第１３４条の２第６項の規定により、取り下げられたものとみなされる。

（１）訂正事項１

特許請求の範囲の請求項１で「血液中にある、細菌または酵母を含む微生物を、遠心分離または濾過によって沈殿させ、該微生物のマススペクトルを取得し、該マススペクトルによって該微生物を同定する質量分析同定の方法であって、該微生物の沈殿の前に、界面活性剤を添加することによって、血液培養からの血液試料の血球を溶解させることを特徴とする、方法。」と記載されているのを、「血液中にある、細菌または酵母を含む微生物を、遠心分離または濾過によって沈殿させ、該微生物のマススペクトルを取得し、該マススペクトルによって該微生物を同定する質量分析同定の方法であって、

該微生物の沈殿の前に、界面活性剤としてドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を添加することによって、血液培養からの血液試料の血球を溶解させることを特徴とする、方法。」と訂正する。請求項１を直接的または間接的に引用する請求項２～３，５～１７も同様に訂正する。

（２）訂正事項２

特許請求の範囲の請求項４を削除する。

（３）訂正事項３

特許請求の範囲の請求項５で「前記界面活性剤が溶液として添加される、請求項１～請求項４のいずれか１項に記載の方法。」と記載されているのを、「前記界面活性剤が溶液として添加される、請求項１～請求項３のいずれか１項に記載の方法。」と訂正する。

（４）訂正事項４

特許請求の範囲の請求項７で「前記血液試料に抗凝固剤が添加される、請求項１～請求項６のいずれか１項に記載の方法。」と記載されているのを、「前記血液試料に抗凝固剤が添加される、請求項１～請求項３、請求項５～請求項６のいずれか１項に記載の方法。」と訂正する。

（５）訂正事項５

特許請求の範囲の請求項８で「前記血液試料に１つ以上のヌクレアーゼが添加される、請求項１～請求項７のいずれか１項に記載の方法。」と記載されているのを、「前記血液試料に１つ以上のヌクレアーゼが添加される、請求項１～請求項３、請求項５～請求項７のいずれか１項に記載の方法。」と訂正する。

（６）訂正事項６

特許請求の範囲の請求項９で「前記血液試料のための前記血液が、蒸留水で１：２～１：１０の希釈率で希釈される、請求項１～請求項８のいずれか１項に記載の方法。」と記載されているのを、「前記血液試料のための前記血液が、蒸留水で１：２～１：１０の希釈率で希釈される、請求項１～請求項３、請求項５～請求項８のいずれか１項に記載の方法。」と訂正する。

（７）訂正事項７

特許請求の範囲の請求項１２で「前記沈殿微生物が超音波または機械的処理によって分解される、請求項１～請求項１１のいずれか１項に記載の方法。」と記載されているのを、「前記沈殿微生物が超音波または機械的処理によって分解される、請求項１～請求項３、請求項５～請求項１１のいずれか１項に記載の方法。」と訂正する。

（８）訂正事項８

特許請求の範囲の請求項１３で「前記微生物が蟻酸またはトリフルオロエタン酸などの酸およびアセトニトリルを含む溶液によって分解される、請求項１～請求項１１のいずれか１項に記載の方法。」と記載されているのを、「前記微生物が蟻酸またはトリフルオロエタン酸などの酸およびアセトニトリルを含む溶液によって分解される、請求項１～請求項３、請求項５～請求項１１のいずれか１項に記載の方法。」と訂正する。

（９）訂正事項９

特許請求の範囲の請求項１５で「測定試料を調製する工程をさらに含み、前記調製する工程が、マトリックス支援レーザー脱離／イオン化のためのマトリックス物質を備えた溶液を添加する質量分析試料支持体上に、前記沈殿物の微生物の一部を移すことを含む、請求項１～請求項１３のいずれか１項に記載の方法。」と記載されているのを、「測定試料を調製する工程をさらに含み、前記調製する工程が、マトリックス支援レーザー脱離／イオン化のためのマトリックス物質を備えた溶液を添加する質量分析試料支持体上に、前記沈殿物の微生物の一部を移すことを含む、請求項１～請求項３、請求項５～請求項１３のいずれか１項に記載の方法。」と訂正する。

なお、訂正前の請求項２～１７は、訂正前の請求項１を直接的又は間接的に引用するものであるから、訂正前の請求項１～１７は、特許法第１３４条の２第３項に規定する一群の請求項である。

２ 訂正の適否

（１） 訂正事項１について

ア 訂正の目的について

訂正事項１による訂正は、訂正前の請求項１に記載されていた「界面活性剤」を「界面活性剤としてドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）」と訂正するものであり、「界面活性剤」の一態様である「ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）」に限定するものであるから、特許法第１３４条の２第１項ただし書き第１号に規定する特許請求の範囲の減縮を目的とするものである。

イ 願書に添付した明細書、特許請求の範囲又は図面に記載した事項の範囲内の訂正であること

訂正前の請求項４には「前記界面活性剤としてドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）が使用される、請求項１～請求項３のいずれか１項に記載の方法。」、願書に添付した明細書（以下、「本件特許明細書」という。）における【００３９】には「非常に単純ながら、培養血から微生物を隔離および分離する方法の、すでに非常に成功を収めている実施形態を、図１に示す。最初に、約１ミリリットルの血液を数本の特殊遠心分離管それぞれに充填し、界面活性剤溶液を加え、よく攪拌する。この界面活性剤は好ましくは溶液として、例えば５～２０パーセントＳＤＳ溶液（好ましくは１０パーセント）を２０～２００マイクロリットル（好ましくは１００マイクロリットル）の形態で添加される。」と記載されているから、訂正事項１は、本件特許明細書の記載から導かれる技術的事項との関係において、新たな技術的事項を導入するものではなく、願書に添付した明細書又は図面に記載した事項の範囲内においてしたものといえる。

したがって、訂正事項１は、特許法１３４条の２第９項で準用する同法第１２６条第５項に適合するものである。

ウ 実質上特許請求の範囲を拡張し、又は変更する訂正ではないこと

前記アのとおり、訂正事項１は、「界面活性剤」を「界面活性剤としてドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）」と訂正するものであり、「界面活性剤」の一態様である「ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）」に限定するものであるから、実質上特許請求の範囲を拡張し、又は変更するものには該当しない。

したがって、訂正事項１は、特許法第１３４条の２第９項で準用する同法第１２６条第６項に適合するものである。

（２）訂正事項２について

ア 訂正の目的について

訂正事項２は、訂正前の請求項４の記載を削除するものである。

したがって、訂正事項２は、特許法第１３４条の２第１項ただし書き第１号に規定する特許請求の範囲の減縮を目的とするものである。

イ 願書に添付した明細書、特許請求の範囲又は図面に記載した事項の範囲内の訂正であること

訂正事項２は、訂正前の請求項４の記載を削除するものであるから、願書に添付した明細書、特許請求の範囲、又は図面に記載した事項の範囲内の訂正であり、特許法１３４条の２第９項で準用する同法第１２６条第５項に適合するものである。

ウ 実質上特許請求の範囲を拡張し、又は変更する訂正ではないこと

訂正事項２は、訂正前の請求項４の記載を削除するのみであるから、訂正前の請求項４について、発明のカテゴリーを変更するものでもなく、かつ、発明の対象や目的を変更するものとはならない。

したがって、訂正事項２は、実質上特許請求の範囲を拡張し、又は変更するものではないため、特許法第１３４条の２第９項で準用する同法第１２６条第６項に適合するものである。

（３）訂正事項３～９について

ア 訂正の目的について

訂正事項３は、訂正前の請求項４の削除に伴い、訂正前の請求項５で引用している請求項を「請求項１～請求項４のいずれか１項に記載の方法。」から、「請求項１～請求項３のいずれか１項に記載の方法。」にするものであり、特許法第１３４条の２第１項ただし書き第１号に規定する特許請求の範囲の減縮を目的とするものである。

訂正事項４～９も、請求項４の削除に伴い、引用している請求項４を単に削減するものであるから、訂正事項３と同様に、特許法第１３４条の２第１項ただし書き第１号に規定する特許請求の範囲の減縮を目的とするものである。

イ 願書に添付した明細書、特許請求の範囲又は図面に記載した事項の範囲内の訂正であること

前記アのとおり、訂正事項３は、訂正前の請求項５で引用している請求項を削減するものであり、願書に添付した明細書、特許請求の範囲、又は図面に記載した事項の範囲内の訂正であり、特許法１３４条の２第９項で準用する同法第１２６条第５項に適合するものである。

訂正事項４～９も、引用している請求項４を単に削減するものであるから、訂正事項３と同様に、願書に添付した明細書、特許請求の範囲、又は図面に記載した事項の範囲内の訂正であり、特許法１３４条の２第９項で準用する同法第１２６条第５項に適合するものである。

ウ 実質上特許請求の範囲を拡張し、又は変更する訂正ではないこと

前記アのとおり、訂正事項３は、訂正前の請求項５で引用している請求項を削減するものであり、発明のカテゴリーを変更するものでもなく、かつ、発明の対象や目的を変更するものとはならない。

したがって、訂正事項３は、実質上特許請求の範囲を拡張し、又は変更するものではないため、特許法第１３４条の２第９項で準用する同法第１２６条第６項に適合するものである。

訂正事項４～９も、引用している請求項４を単に削減するものであるから、訂正事項３と同様に、実質上特許請求の範囲を拡張し、又は変更するものではないため、特許法第１３４条の２第９項で準用する同法第１２６条第６項に適合するものである。

３ 本件訂正後の発明の独立特許要件について

上記の「第１ 手続の経緯」で述べたように、本件特許無効審判の請求は、本件請求項１～１７に係る発明についてなされたものであるから、上記の請求項に係る発明は、独立特許要件の判断を要しない。

４ 訂正請求についての結論

以上のとおり、本件訂正は、特許法第１３４条の２第１項ただし書き第１号に掲げる事項を目的とするものであり、同法第１３４条の２第９項で準用する同法第１２６条第５項及び第６項、並びに、同法１８４条の１９で読み替えて準用する同法第１２６条第５項の規定に適合するので、本件訂正を認める。

第３ 本件訂正発明

本件特許の請求項１～１７に係る発明は、訂正後の本件特許請求の範囲の請求項１～１７に記載された事項により特定される、以下のとおりのものである（下線は訂正箇所である。以降、訂正後の本件特許請求項１に係る発明を項番にしたがい「本件訂正特許発明１」という。また、訂正後の本件特許発明１～１７を、まとめて「本件訂正特許発明」ということがある。）。

【請求項１】

血液中にある、細菌または酵母を含む微生物を、遠心分離または濾過によって沈殿させ、該微生物のマススペクトルを取得し、該マススペクトルによって該微生物を同定する質量分析同定の方法であって、

該微生物の沈殿の前に、界面活性剤としてドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を添加することによって、血液培養からの血液試料の血球を溶解させることを特徴とする、方法。

【請求項２】

前記血液中の十分な数の微生物が、培養によって産生される、請求項１に記載の方法。

【請求項３】

遠心分離によって沈殿した前記微生物を洗浄し、再び遠心分離にかける、請求項１または請求項２に記載の方法。

【請求項４】

（削除）

【請求項５】

前記界面活性剤が溶液として添加される、請求項１～請求項３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項６】

前記界面活性剤溶液が消泡剤を含む、請求項５に記載の方法。

【請求項７】

前記血液試料に抗凝固剤が添加される、請求項１～請求項３、請求項５～請求項６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項８】

前記血液試料に１つ以上のヌクレアーゼが添加される、請求項１～請求項３、請求項５～請求項７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項９】

前記血液試料のための前記血液が、蒸留水で１：２～１：１０の希釈率で希釈される、請求項１～請求項３、請求項５～請求項８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項１０】

前記血液試料のための前記血液が、蒸留水で約１：５の希釈率で希釈される、請求項９に記載の方法。

【請求項１１】

前記血液試料が遠心分離され、その上澄みを除去してから、前記界面活性剤溶液が添加される、請求項５または請求項６に記載の方法。

【請求項１２】

前記沈殿微生物が超音波または機械的処理によって分解される、請求項１～請求項３、請求項５～請求項１１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項１３】

前記沈殿微生物が蟻酸またはトリフルオロエタン酸などの酸およびアセトニトリルを含む溶液によって分解される、請求項１～請求項３、請求項５～請求項１１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項１４】

質量分析試料支持プレート上で測定試料を調製する工程をさらに含み、前記調製する工程が、前記分解微生物の可溶性タンパク質が埋め込まれている結晶のマトリックス支援レーザー脱離／イオン化のためのマトリックス物質を使用して実施される、請求項１２または請求項１３に記載の方法。

【請求項１５】

測定試料を調製する工程をさらに含み、前記調製する工程が、マトリックス支援レーザー脱離／イオン化のためのマトリックス物質を備えた溶液を添加する質量分析試料支持体上に、前記沈殿物の微生物の一部を移すことを含む、請求項１～請求項３、請求項５～請求項１３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項１６】

前記質量分析測定が、マトリックス支援レーザー脱離イオン化法（ＭＡＬＤＩ）によるイオン化を備えた飛行時間質量分析計で実施される、請求項１４または請求項１５に記載の方法。

【請求項１７】

前記溶液が５～２０％のドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）水溶液である、請求項５または請求項６に記載の方法。

第４ 当事者の主張及び証拠方法

第５ 当審の判断

１ 特許法第３６条第６項第１号について

（１）本件訂正特許発明の解決しようとする課題

本件訂正特許発明１は、「血液中にある、細菌または酵母を含む微生物を、遠心分離または濾過によって沈殿させ、該微生物のマススペクトルを取得し、該マススペクトルによって該微生物を同定する質量分析同定の方法であって、

該微生物の沈殿の前に、界面活性剤としてドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を添加することによって、血液培養からの血液試料の血球を溶解させることを特徴とする、方法。」というものである。

本件特許明細書の発明の詳細な説明には、技術分野として、「本発明は血流感染症（敗血症）の血液培養における病原体の質量分析法による同定に関連する。」（【０００１】）と記載され、発明が解決しようとする課題に関して、「出願者の研究室においてこの蒸留水添加方法を実施した実験では、洗浄と遠心分離のプロセスを数回繰り返した場合であっても、十分にクリーンな遠心分離沈殿を得るのには成功しなかった。沈殿は全く赤みがかっていなかったにもかかわらず、ヒトタンパク質信号の重なりが常に微生物タンパク質信号に干渉し、この沈殿からの同定が不確定になるほどまでになっていた。」（【００２２】）、「本発明は、血中の敗血症病原体のクリーンな分離のための迅速な方法を提供し、これにより質量分析同定を種または亜種のレベルまで行い、更に、病原体の他の検査も可能にするためのものである。」（【００２３】）、「本発明は、上記特許文献１から知られる遠心分離または濾過による体液からの微生物の沈殿またはペレット化を介した直接沈殿のための方法に基づくが、血球破壊のために純蒸留水を使用する代わりに、強い界面活性剤(すなわち両親媒性の表面活性化物質)を使用するものである。強い陰イオン界面活性剤であるＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム）は、タンパク質の変性化剤としてバイオテクノロジー分野でも使用されており、（１）微量の界面活性剤はＭＡＬＤＩなどのイオン化プロセスにおいてタンパク質およびその他の分析対象物のイオン化阻害剤として知られていること、および（２）ＳＤＳのような強い界面活性剤は微生物を殺すことが知られており、すなわち、微生物の増殖能力を破壊することにより殺菌剤として作用すること、という事実があるにもかかわらず、理想的であることが実証されている。」（【００２４】）と記載されている。また、「本発明は具体的に、微生物を破壊することなく、さまざまなタイプの血球を迅速かつ完全に溶解させることに基づく。」とも記載されている（【００３０】）。

そうすると、本件訂正特許発明の解決すべき課題は、「質量分析による血液試料中の敗血症病原体等に関する微生物のクリーンな分離による正確な質量同定のために、血液試料中の微生物を破壊することなく、血球を迅速かつ完全に溶解させることでヒトタンパク質信号が微生物タンパク質信号に干渉しないようにすること」であると認める。

この点に関連して、訂正前の本件特許発明について、請求人が審判請求書ｐｐ．３、４の７（３）ア（ア）ｂで主張する、「血液試料中の微生物に対して正確に質量分析同定できるようにするために、血液試料中の微生物を破壊することなく、さまざまなタイプの血球を迅速かつ完全に溶解できるようにすること」である、との課題は上記合議体が認定した本件訂正特許発明の解決しようとする課題と特段相違するものでないと認められる。

一方、被請求人は、訂正請求書と共に提出した審判事件答弁書ｐ．４（ア）で、本件訂正特許発明の課題は、請求人が主張する「正確に質量同定できるようにするため」という事項をより具体化した、「血液試料中の微生物に対して質量同定できるようにするために、血液試料中の微生物を破壊することなく、さまざまなタイプの血球を迅速かつ完全に溶解できるようにし、もって、血液試料中の血球の残留物が、微生物の同定を妨げないようにすること」であると主張しているが、「血液試料中の血球の残留物が、微生物の同定を妨げない」点は、合議体の認定する課題では、本件特許明細書の【００２２】に基づく「ヒトタンパク質信号が微生物タンパク質信号に干渉しないようにする」とされているから、被請求人が主張する本件訂正特許発明の課題についても上記認定した本件訂正特許発明の解決しようとする課題と特段相違するものでないと認められる。

そうすると、上記合議体が認定した本件訂正特許発明の解決しようとする課題、請求人の主張する本件訂正特許発明の解決しようとする課題、被請求人が主張する本件訂正特許発明の解決しようとする課題は本質的に相違せず、そのいずれを想定するかで以下の検討事項の判断の結果は左右されないものと認められる。

そこで以下では、上記の合議体が認定した本件訂正特許発明の解決しようとする課題に基づいて判断を示す。

（２）界面活性剤の種類

界面活性剤について、本件特許明細書には、以下のとおりの記載がある。

「【００３０】

本発明は具体的に、微生物を破壊することなく、さまざまなタイプの血球を迅速かつ完全に溶解させることに基づく。デリケートな血球細胞膜は主にリン脂質で構成されており、この非共有結合によって膜が形成されている。強い界面活性剤(特にSDS)は、タンパク質および脂質の非共有結合すべてを溶解させ、分子の三次構造および四次構造を破壊する。よって細胞膜は完全に溶解する。細胞核の膜や白血球の染色体を含む、血球の内部構造もまたSDSによって破壊されて溶解する。これらの溶解した構成部分はすべて、遠心分離後の上澄み液と共に、または濾過によって、除去される。」

「【図面の簡単な説明】

【００３２】

【図１】 通常レベルの白血球を有するすべての患者の血液について成功が知られている、単純な基本手順を説明する手順図である。

【００３３】

【図２】 高レベルの白血球数の場合、DNA凝集の問題を感度低下と引き換えに克服する手順図である。

【００３４】

【図３】 高レベルの白血球数の血液試料全てに適用できる、通常感度の手順図である。」

「【００３８】

この方法とは対照的に、本発明では、同定の妨げとなり得るヒトタンパク質の痕跡をすべて除去する絶対的な必要性を伴う、質量分析同定のため培養血から純化微生物の迅速な回収を目的としている。各種微生物同定法のために重要な微生物の増殖能力は、質量分析同定法では不要である。というのは、保持される必要があるのは、細胞壁の構造的完全さと内部タンパク質分子の化学的完全さのみであり、増殖能力ではないからである。質量分析同定法では、内部タンパク質の三次構造および四次構造がほどけることによって変質した場合、何の役割も果たさない。しかしながら上述の本発明による非常に迅速な方法では、微生物がSDSに曝されるのは最長でも数分間だけであるため、SDSの抗生物質効果にもかかわらず多くの微生物ではその増殖能力が保持されることになり、血液からの微生物の分離および隔離の方法は、例えば耐性試験などの他の検査のために微生物を更に分離された形態で提供するためにも使用され得る。

【００３９】

非常に単純ながら、培養血から微生物を隔離および分離する方法の、すでに非常に成功を収めている実施形態を、図1に示す。最初に、約1ミリリットルの血液を数本の特殊遠心分離管それぞれに充填し、界面活性剤溶液を加え、よく攪拌する。この界面活性剤は好ましくは溶液として、例えば5～20パーセントSDS溶液(好ましくは10パーセント)を20～200マイクロリットル(好ましくは100マイクロリットル)の形態で添加される。」

「【００５５】

本発明は特に、さまざまなタイプの血球を迅速かつ完全に破壊することに依存しており、これにより微生物が非常に純粋な形態で得られ、血球由来の内因性血液タンパク質が同定に干渉しない。微生物細胞の構造は、血球とは対照的に、このプロセスでは破壊されない。デリケートな血球細胞膜は主にリン脂質で構成されており、この非共有結合によって膜が形成されている。タンパク質および脂質に対する界面活性剤、特にSDSの効果は、特に、すべての非共有結合を破壊し、これにより細胞膜および細胞構造分子の三次構造および四次構造を破壊することに依存している。細胞膜およびすべての細胞内構造はこれにより完全に溶解し、界面活性剤は可溶化剤として作用する。細胞膜のリン脂質はそれ自体が両親媒性であり、すなわち界面活性剤特性を有しており、ミセルを形成することによって他の界面活性剤によりナノコロイド的に溶解し得る。細胞核の膜や白血球の染色体を含む、血球の内部構造も、SDSによって破壊されほとんど溶解する。これらの溶解した構成部分はすべて、遠心分離後の上澄みと共に、またはマイクロ濾過によって、除去される。」

「

［図：0001394728000006.jpg］

」

以上の本件特許明細書の記載によると、本件特許明細書の発明の詳細な説明には、界面活性剤としてＳＤＳを用いた場合に、上記（１）で示した課題を解決できることを当業者は認識し得ることが記載されているといえる。

（３）ＳＤＳの濃度、ＳＤＳによる血液試料の処理時間

ＳＤＳの濃度、ＳＤＳによる血液試料の処理時間について、本件特許明細書には、以下のとおりの記載がある。

「【００２５】

特に単純な実施形態においては、血液培養から約1ミリリットルの血液へ、更なる前処理なしに界面活性剤を直接添加し、振盪器内で10～30秒間よく混合する。好ましくはこの界面活性剤は、例えば5～20%SDS水溶液を10μl～200μlの形態の溶液として添加される。混合後すぐに、混合物を10,000gで2分間遠心分離にかけ、その上澄みを捨てる。ペレットが目に見える場合は、その沈殿は多くの場合、驚くべきことに透明な白色を呈する。界面活性剤の痕跡を完全に除去するには、ペレットを1ミリリットルの蒸留水で洗い、再び遠心分離にかける。その上澄みを再び捨てる。この沈殿物を、数マイクロリットルの蟻酸およびアセトニトリルを加えて取り出し、この溶液の1～2マイクロリットルを質量分析試料支持体に移すことができ、ここでマトリックス溶液を添加し、乾燥させる。」

「【００３８】

この方法とは対照的に、本発明では、同定の妨げとなり得るヒトタンパク質の痕跡をすべて除去する絶対的な必要性を伴う、質量分析同定のため培養血から純化微生物の迅速な回収を目的としている。各種微生物同定法のために重要な微生物の増殖能力は、質量分析同定法では不要である。というのは、保持される必要があるのは、細胞壁の構造的完全さと内部タンパク質分子の化学的完全さのみであり、増殖能力ではないからである。質量分析同定法では、内部タンパク質の三次構造および四次構造がほどけることによって変質した場合、何の役割も果たさない。しかしながら上述の本発明による非常に迅速な方法では、微生物がSDSに曝されるのは最長でも数分間だけであるため、SDSの抗生物質効果にもかかわらず多くの微生物ではその増殖能力が保持されることになり、血液からの微生物の分離および隔離の方法は、例えば耐性試験などの他の検査のために微生物を更に分離された形態で提供するためにも使用され得る。

【００３９】

非常に単純ながら、培養血から微生物を隔離および分離する方法の、すでに非常に成功を収めている実施形態を、図1に示す。最初に、約1ミリリットルの血液を数本の特殊遠心分離管それぞれに充填し、界面活性剤溶液を加え、よく攪拌する。この界面活性剤は好ましくは溶液として、例えば5～20パーセントSDS溶液(好ましくは10パーセント)を20～200マイクロリットル(好ましくは100マイクロリットル)の形態で添加される。数本の遠心分離管を充填することにより、遠心分離のバランスをとることができ、信頼性の高い同定のために確認試料をすぐに得ることも可能になる。振盪器で10～30秒間混合した後、遠心分離管内の血液試料を10,000gで2分間遠心分離にかける。例えば取り外し可能な先端を備えた従来型のピペットを用いて、深赤色の上澄み液を除去する。ここで微生物の沈殿を取り出し、蒸留水で洗浄し、更に遠心分離にかけた後、分離された微生物の沈殿が残り、これはもし目に見える場合は完全に白色である。臨界的な(critical)場合にのみ、この洗浄手順を繰り返してヒトタンパク質のすべての痕跡を除去する必要がある。各洗浄プロセスは、合計の手順時間を約2～3分延長させるだけである。」

「【００５０】

凝固の問題に関する第2の解決策では、SDS溶液添加の前に血液試料を遠心分離する方法を使用することができる。おそらくはSDS溶液の添加前に血液の凝固タンパク質すべてを除去することによって、この成功率は改善される。本発明のこの非常に好ましい実施形態は、専門病院での標準手順として導入することができ、ここにおいて遠心分離管に最初に充填した血液は、界面活性剤溶液を添加することなく最初に遠心分離にかけられる。何百種ものタンパク質と、追加された栄養物および抗凝固剤を含んだ、上澄みの透明な血漿が次に除去され、界面活性剤(例えば1パーセントSDS溶液)を合計最高1ミリリットル、管に入れて、深赤色の沈殿だけを取り出す。この深赤色の沈殿は、微生物だけでなく、1ミリリットルの血液に由来する500万個の赤血球、7000個の白血球、20万個の血小板を通常含んでおり、振盪器内で追加された界面活性剤と混合されることにより、血球の細胞膜が破壊され、可溶性タンパク質が放出される。この深赤色溶液を再び遠心分離にかけ、今度は上澄みが深赤色のままとなり、沈殿はもし見える場合は純白となる。この上澄みを除去し、界面活性剤溶液を充填し、遠心分離にかけるプロセスを、ここで繰り返して行い、血球の最後の残留物すらも除去することができる。このプロセスを純蒸留水を用いて繰り返すことにより、界面活性剤を除去することができる。この界面活性剤は、マトリックス支援レーザー脱離イオン化法(MALDI)を阻害する可能性があるためである。上澄みを最後に除去した後、その沈殿物は、目に見えるものであるか否かを問わず、上述の方法で分解され、可溶性タンパク質は試料支持プレートに移される。」

「【００５６】

一方、細菌の細胞壁は非常に安定である。これらは主に共有結合で架橋することにより重合したムレイン(ペプチドグリカン)から成っている。グラム陽性菌については、テイコ酸と更に架橋しており、テイコ酸自体も重合している。これらの共有結合したメッシュ構造は、少なくとも数分間という短時間では、界面活性剤の溶解作用に耐える。この後の質量分析同定のためには、内部のタンパク質が放出されていない限り、またはその一次構造に変化がない限り、微生物がこの方法で死滅するかどうかは関係がない。しかしながら多くの微生物では、本発明によるこの短時間手法でも、十分な数の微生物が生存したままであり、更なる培養のために増殖させることができる。」

以上の記載に鑑みると、本件特許明細書の発明の詳細な説明には、界面活性剤のＳＤＳについて、所定の濃度、血液試料の処理時間が記載されており、これらの記載は良好な結果を示すＳＤＳの濃度、血液試料の処理時間の一例であると認められるから、実施例と異なる実験条件下でＳＤＳを用いる場合の基準となり得るものであるとも認められる。

また、界面活性剤の濃度と血液試料の処理時間との関係についてみると、濃度を高くすると処理時間が短くなり、濃度を低くすると処理時間が長くなるという、逆相関のような関係にあることや、濃度や処理時間は実施の際の実験条件等に応じて異なることは本件訂正特許発明の出願時における技術常識である。

そうすると、上記の本件特許明細書の発明の詳細な説明の記載や本件特許の出願時の技術常識を踏まえると、実施例に記載されたＳＤＳの濃度やＳＤＳによる血液試料の処理時間とは異なる条件であっても、上記（１）で示した課題を解決できることを当業者は認識し得るといえる。

したがって、請求項の記載において、サポート要件の観点から、実施例等に記載されたＳＤＳの濃度や血液試料の処理時間に特定することは要しないと認められる。

ここで、界面活性剤の濃度に関して、請求人は、審判請求書ｐｐ．６、７のｅにおいて、甲第１号証のｐ．４５４右欄第１０－１４行には、界面活性剤の濃度に関して、０．７％の濃度のＴｗｅｅｎ２０に対して最小限の感受性を示した微生物種（Neisseria種、S. pneumoniaeおよびFusobacterium nucleatum）において、濃度を０．０５％に低減すると、それらは抑制されないことが示されていることから、界面活性剤の濃度によって、界面活性剤による処理後の微生物の状態が異なることは当業者にとって周知であり、技術常識であるため、本件特許の発明の詳細な説明から、本件特許の出願時の技術常識を考慮しても、発明の詳細な説明に記載された最終濃度が約０．０５％～約３．３３％以外のＳＤＳ濃度を用いた場合に、本件特許発明の課題を解決できることを当業者は認識できない旨、主張している。

また、血液試料の処理時間に関して、請求人は、審判請求書ｐｐ．７、８のｆにおいて、甲第２号証のｐ．Ｓ１３５右欄第６－２１行には、ＳＤＳ等の強いイオン性界面活性剤は「秒」のオーダーでの細胞溶解を可能とし、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００等の穏やかな非イオン性界面活性剤はより遅い細胞溶解を引き起こす旨の記載があり、さらに、ｐ．Ｓ１３６左欄第１３－１７行には、０．１％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００を用いた３０秒の遅い溶解、０．５％のＳＤＳを用いた２秒未満の速い溶解についての記載があることから、細胞溶解において界面活性剤の処理には適切な処理時間があり、また、界面活性剤の種類によって、その適切な処理時間は異なることは当業者に周知であり、技術常識であるため、本件特許の発明の詳細な説明から、本件特許の出願時の技術常識を考慮しても、発明の詳細な説明に記載された２分１０秒～２分３０秒間以外のＳＤＳによる処理時間を用いた場合に、本件特許発明の課題を解決できることを当業者は認識できない旨、主張している。

しかしながら、上記で検討したように、当業者であれば、ＳＤＳの濃度や血液試料の処理時間は、実施例に開示されたＳＤＳの濃度や血液試料の処理時間を基準として、実際の実験条件等に応じて、本件訂正特許発明の課題を解決できる範囲で当業者が適宜決定し得るものであり、請求項の記載において実施例に記載された濃度や血液試料の処理時間だけに特定することまでは要しないと認められることから、請求人の主張は採用できない。

（４）本件訂正特許発明１～３、５～１７のサポート要件の検討

本件訂正により、本件訂正特許発明１、１７で使用する界面活性剤がＳＤＳに特定されたため、上記（２）、（３）で検討したところによると、本件訂正特許発明１、１７で、ＳＤＳの濃度やＳＤＳによる血液試料の処理時間が特定されていなくても、本件訂正特許発明１、１７は、上記（１）で示した課題を解決できることを当業者は認識し得るものと認められる。

したがって、本件訂正特許発明１、１７は、特許法第３６条６項第１号の規定を満たすものである。

また、本件訂正特許発明２、３、５～１６は、本件訂正特許発明１を直接的又は間接的に引用するものであるから、本件訂正特許発明１と同様の理由により、特許法第３６条６項第１号の規定を満たすものである。

２ 特許法第３６条第４項第１号について

（１）本件訂正特許発明１、１７について

上記第５の１（４）で検討したように、本件訂正により本件訂正特許発明１、１７の界面活性剤がＳＤＳに特定されており、ＳＤＳの濃度や血液試料の処理時間については、当業者であれば、実施例に開示されたＳＤＳの濃度や血液試料の処理時間を基準として、実際の実験条件等に応じて、本件訂正特許発明の課題を解決できる範囲で当業者が適宜決定し得るものであるから、その実施において当業者が過度の試行錯誤を要するものとは認められない。

なお、請求人は、ＳＤＳを用いたとしても本件特許の発明の詳細な説明に記載された濃度及び処理時間以外を用いた場合に、血球を溶解する一方で血液中の微生物の細胞構造を維持できることについて何らの記載はない旨（審判請求書ｐ．１２第１－４行）、また、請求項２～１７自体は訂正されておらず、界面活性剤の種類、濃度及び処理時間の全てを特定するものは無い旨（口頭審理陳述要領書ｐ．６のカ）、主張しているが、上記第５の１（３）で述べたとおり、本件訂正により本件訂正特許発明１、１７は、当業者が過度の試行錯誤を要しないものとなったから、当該請求人の主張は採用できない。

よって、本件特許の発明の詳細な説明は、当業者が本件訂正特許発明１、１７を実施することができる程度に明確かつ十分に記載されたものと認められ、特許法第３６条第４項第１号の規定を満たすものである。

（２）本件訂正特許発明２、３、５～１６について

本件訂正特許発明２、３、５～１６に関して、本件訂正特許発明１と同様の理由により、本件特許の発明の詳細な説明は、特許法第３６条第４項第１号の規定を満たすものである。

（３）小括

以上のとおり、本件特許の発明の詳細な説明は、当業者が本件訂正特許発明1～１７を実施することができる程度に明確かつ十分に記載されたものと認められ、特許法第３６条第４項第１号の規定を満たすものである。

第６ むすび

以上のとおり、本件訂正特許発明１～３、５～１７に係る特許は、請求人が主張する無効理由によって無効とすることはできない。

本件特許の請求項４は、訂正により削除され、当該請求項に対しては請求人がした審判の請求はその対象が存在しないものとなったため、特許法第１３５条の規定により、却下する。

審判に関する費用については、特許法第１６９条第２項において準用する民事訴訟法第６１条の規定により、請求人の負担とする。