2021-002740

本願は、平成２８年３月１０日（パリ条約による優先権主張 ２０１５年３月１０日 （ＵＳ）アメリカ合衆国）を国際出願日とする出願であって、以降の手続の経緯は以下のとおりものである。

令和 １年１２月１８日付け 拒絶理由通知書

令和 ２年 ６月 ５日 手続補正書・意見書・手続補足書（甲１ ～２号証）の提出

令和 ２年１０月２７日付け 拒絶査定

令和 ３年 ３月 １日 審判請求書・手続補正書の提出

令和 ３年 ４月１５日 手続補正書（方式）の提出

ア 引用文献１

原査定の拒絶の理由で引用文献１として引用された、本願の優先日前の２０１４年に頒布された刊行物である、Ａｎｎ． Ｎｅｕｒｏｌ． ２０１４年；Ｖｏｌ．７６（ｓｕｐｐｌ １８）：Ｓ１７６（ＰＬ１－６）（以下、引用文献１という。）には、以下の事項が記載されている。なお、原文は英語であるため、当審による翻訳文を示す。

（ア） 「ＰＬ１－６． Ｇｌｕｔ１欠損症症候群のための遺伝子治療」（タイトル）

（イ） 「目的：ＳＬＣ２Ａ１遺伝子におけるヘテロ接合性変異は、血液脳関門を介したグルコースの促進性拡散を制限し、結果として、小児性神経障害であるＧｌｕｔ１欠損症症候群（Ｇｌｕｔ１ ＤＳ）を生じる。該疾患は、乳児性けいれん、発育遅延、後天性小頭症、脳脊髄液（ＣＳＦ）におけるグルコース量低下－髄液糖減少症－、運動失調とともにジストニアを呈する複合運動障害によって特徴づけられる。ケトン誘発食が現在の処置の中心であるが、特定の疾患症状のみを和らげるにすぎない。私達は、該疾患の臨床前モデルにおけるＧｌｕｔ１の回復が、該疾患を治療するのに有効であるかどうかを決定しようとした。」（本文の第１～１２行）

（ウ） 「方法：マウスＧｌｕｔ１遺伝子をアデノ随伴ウイルス９（ＡＡＶ９）にパッケージングし、新生児変異体に体系的に導入した。投与された変異体および関連する対照個体は、１）Ｇｌｕｔ１ ｍＲＮＡとタンパク質発現、２）血液およびＣＳＦのグルコースレベル、３）脳と体の重さ、および、４）ロータロッドおよび垂直ポールアッセイを用いた運動パフォーマンスを調べることによって、成体期に評価された。」（本文の第１３～１９行）

（エ） 「結果：ＰＢＳ又はＡＡＶ９－ＧＦＰを投与したＧｌｕｔ１モデルマウスでは、野生型対照個体と比べて、Ｇｌｕｔ１ ＲＮＡやタンパク質の発現が低減していた。さらに、該マウスは、髄液糖低下症、小頭症、および、ロータロッドと垂直ポールテストにおいて劣った運動パフォーマンスの証拠を示した。対照的に、ＡＡＶ９－Ｇｌｕｔ１で処置した変異体では、Ｇｌｕｔ１ ＲＮＡやタンパク質のレベルが上昇し、ＣＳＦにおけるグルコースレベルが回復し、脳の大きさが標準化し、運動障害が是正された。」（本文の第２０～２７行）

（オ） 「結論：私達の結果は、Ｇｌｕｔ１欠損症症候群において、Ｇｌｕｔ１タンパク質の機能を回復する治療効果の重要な概念実証データを提供し、ヒト疾患の治療に向けて重要なステップを構成する。」（本文の第２８～３１行）

イ 引用文献３

原査定の拒絶の理由で引用文献３として引用された特表２０１３－５３１４７１号公報には、以下の記載がある。（下線は強調のために当審で付与した。以下、同様である。）

（ア） 「・・・いくつかの実施態様で、プロモーターはニワトリβ－アクチンプロモーターである。」（【００５３】）

（イ） 「・・・異なる血清型の、１２のｓｃＡＡＶＥＧＦＰベクター、または自然変異体の、ＣＮＳ遺伝子移入特性を評価した。血管脳関門（ＢＢＢ）を越えて乏突起膠細胞をターゲットするＲＡＡＶが発見された。実験は、新生仔マウス（１日令）および成体マウス（１０週令）（Ｃ５７ＢＬ／６）で実施した。以下のＡＡＶ血清型を試験した：・・・ＡＡＶ９、ｒｈ．１０（本明細書ではＡＡＶｒｈ．１０とも呼ばれる）、ｒｈ．３９、ｒｈ．４３、ＣＳｐ３。」（【００８１】）

（ウ） 「組み換えＡＡＶベクターは、ＣＭＶ強化ニワトリβ－アクチンハイブリッドプロモーターのもとで、強化されたＧＦＰレポーター遺伝子を発現し、２９３細胞における一時的形質移入によって産生された。・・・」（【００８２】）

（エ） 「【表１】

［図：0001391313000001.jpg］

」（ 【００８６】）

（オ） 「ＣＤのための遺伝子療法ベクターとしてＡＳＰＡタンパク質（配列番号１３または配列番号１５）をコードしている領域と操作可能に連結されたプロモーターを含むｒＡＡＶベクターを構築する。本構築物は配列番号１４または配列番号１６で示されるようなコード配列を有するＡＳＰＡの発現を推進するために、ＣＡＧ（ＣＭＶエンハンサーを含むニワトリβ－アクチンプロモーター）を使用する。・・・」（【００８８】）

（カ） 「・・・近年、ＡＡＶ９は、静脈内注射後、血管脳関門（ＢＢＢ）を越えて脊髄細胞を形質導入することが証明された。・・・」（【００９６】）

（キ） 「・・・本構築物は、ＥＧＦＰおよび３’－ＵＴＲのイントロンに位置するｍｉＲ－ＳＯＤ１の発現を推進するために、ＣＡＧ（ＣＭＶエンハンサーを含むニワトリβ－アクチンプロモーター）を使用した。」（【００９７】）

（ク） 「・・・ＭｉＲＮＡ－１結合部位およびｍｉＲＮＡ－１２２－結合部位をｓｃＡＡＶ９ＣＢ強化ＧＦＰ（ＥＧＦＰ）ベクターゲノムに付加し、２×１０１４ＧＣ／ｋｇを１０週令のＣ５７ＢＬ／６オスマウスに注射した。３週間後、脳および脊髄の４０μｍ切片ならびに肝臓、心臓および骨格筋の８μｍ切片を作製して、ＥＧＦＰタンパク質発現について検査した。静脈内送達されたｓｃＡＡＶ９ＣＢＥＧＦＰは、ＣＮＳを効率的に形質導入；ＥＧＦＰは、脳の視床領域および脊髄の頚部のみならず肝臓、心臓および筋肉等の非ＣＮＳ組織でも容易に検出可能であった。・・・」（【０１２４】）

（ケ） 「例９：ｒＡＡＶの静脈内注射は、新生仔マウスＣＮＳで広範な形質導入を仲介した。・・・本試験では、ｒＡＡＶ２およびｒＡＡＶ５を除き、他の全ての７ベクターが様々な形質導入効率でＢＢＢを越え（中でもｒＡＡＶｒｈ．１０、ｒＡＡＶｒｈ．３９、ｒＡＡＶｒｈ．４３、ｒＡＡＶ９およびｒｈＡＡＶ７が上位５位を占めた）、ＣＮＳ全体にわたり神経細胞およびグリア細胞の両細胞で強力なＥＧＦＰ発現を仲介した。・・・」（【０１４０】）

ウ 周知例１

原査定の拒絶の理由で周知技術を示す引用文献４として引用された、本願の優先日前の２０１１年に頒布された刊行物である、Ｍｏｌ． Ｔｈｅｒ． ２０１１年 ｖｏｌ．１９， ｎｏ．１１， ｐ．１９７１－１９８０には、以下の事項が記載されている。なお、原文は英語であるため、当審による翻訳文を示す。

（ア） 「アデノ随伴ウイルス９型（ＡＡＶ９）は静脈注射に続いて遺伝子を中枢神経系（ＣＮＳ）にわたって送達するための強力なツールである。」（要約の第１行～第３行）

（イ） 「本研究で、私達は体系的にカニクイザルにＡＡＶ９を注射し、中枢神経系および末梢組織に標的化するために出生時から３歳齢まで投与した。私達は、調査した全ての時期において、ＡＡＶ９が血液脳関門（ＢＢＢ）を通過するのに有効であったことを示す。」（要約の第８行～第１３行）

（ウ） 「マウス、ラットおよびネコでＡＡＶ９のＢＢＢ通過が示され、ヒト集団への転換の見込みを示している。」（第１９７１頁右欄下から第６行～下から第４行）

エ 周知例２

本願優先日前の２０１１年に頒布された刊行物である、ＧＲＡＹ Ｓ． Ｊ． ｅｔ ａｌ． ２０１１年 Ｖｅｃｔｏｒ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ＣＮＳ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ Ｉｎ：Ｇｅｎｅ Ｖｅｃｔｏｒ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｔｏ Ｔｒｅａｔ Ｎｅｒｖｏｕｓ Ｓｙｓｔｅｍ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ．（Ｇｌｏｒｉｏｓｏ Ｊ， ｅｄ） ｐｐ．７－１５． Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ：Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ． ＜ＵＲＬ：ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｓｆｎ．ｏｒｇ／－／ｍｅｄｉａ／ＳｆＮ／Ｄｏｃｕｍｅｎｔｓ／Ｓｈｏｒｔ－Ｃｏｕｒｓｅｓ／２０１１－Ｓｈｏｒｔ－Ｃｏｕｒｓｅ－Ｉ／ＳＣ１＿２０１１．ａｓｈｘ？ｌａ＝ｅｎ＆ｈａｓｈ＝ＦＦ３０Ｅ６Ｄ２７Ｄ４６１ＣＡ５Ａ７Ｆ９１Ｅ１０ＤＡ７２０４８２０６Ｅ４８ＣＤＢ＞には、以下の事項が記載されている。なお、原文は英語であるため、当審による翻訳文を示す。

（ア） 「一般的に使用される強力かつ“普遍的な”プロモーターは、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターやトランケートされたニワトリβアクチン（ＣＢＡ）プロモーターを含み、それぞれ～８００ｂｐ（ＣＭＶエンハンサーと５‘ＵＴＲ配列を含む。）である（Ｇｒａｙ ｅｔ ａｌ．，２０１１ｂ）。」（第１０頁左欄下から第１０行～下から第５行）。

（イ） 「興味深いことに、ＡＡＶ９（そして、より低い程度でＡＡＶ８）は静脈投与に続いて血液脳関門（ＢＢＢ）を通過し、脳や脊髄の神経細胞やグリア細胞を形質導入することができる（Ｇｒａｙ ｅｔ ａｌ．，２０１１ａ）。」（第１１頁左欄第２４行～第２８行）

オ 周知例３

本願優先日前の２０１３年に頒布された刊行物である、特表２０１３－５３１４９０号公報には、以下の事項が記載されている。

（ア） 「・・・ＣＡＧプロモーターは、ＣＭＶ初期／中間エンハンサーとニワトリβ－アクチンプロモーターとから成るハイブリッドプロモーターである。このプロモーターは、遍在的に強力な発現を動因することができる。・・・」（【００８６】）

（イ） 「（実施例５：ＡＡＶ９－ＣＡＧ－ｍｕ－ＳＦＭＤの静脈内輸送）

総量１０１２のＡＡＶ９－ＣＡＧ－ｍｕ－ＳＦＭＤベクターのベクターゲノムを生後２ヶ月のＭＰＳＩＩＩＡマウスに尾静脈から注射した。」（【０１１８】）

（ウ） 「処置群のマウスは、オス、メス共に高レベルの循環スルファミダーゼ（対照群に対して、オスは５００％、メスは１５０％）を示し、両性のすべての体組織を効率よく修正した。また、脳へのＡＡＶ血清型９の形質導入の効率が高いことを考えると、両性の脳において、有意なスルファミダーゼ活性が観察され、脳のすべての部位でＧＡＧの蓄積が修正された（図６（ａ）及び（ｂ）参照）。ＭＰＳＩＩＩＡの特徴を示す神経炎症（星細胞症や小膠細胞症）は、ＡＡＶ９で治療したマウスにおいて完全に正常化された。また、ロータロッドテストでは、ＡＡＶ９で治療したマウスは、無処置群の動物よりも良好な結果を示した（図６（ｃ）参照）。」（【０１１９】）

カ 周知例４

本願優先日前の２００６年に頒布された刊行物である、特開２００６－３４５７０３号公報には、以下の事項が記載されている。

「・・・組換え発現のための強力なプロモーターとしては、例えば、・・・人工のプロモーター（例えば、ＳＲαプロモーター（ＳＶ４０初期プロモーターとＨＴＬＶのＬＴＲプロモーターの融合）、ＣＡＧプロモーター（ＣＭＶ－ＩＥエンハンサーとニワトリ アクチンプロモーターのハイブリッド）のような融合プロモーター）が周知であることから、これら周知のプロモーターまたはその改変体を用いることによって、組換え発現の発現量を容易に上昇させることができる。」（【０００５】）

ア 参考文献６

原査定の拒絶の理由で参考文献として引用したＡＣ Ｐ１７８０９， ＳｕｂＮａｍｅ： Ｆｕｌｌ＝Ｓｏｌｕｔｅ ｃａｒｒｉｅｒ ｆａｍｉｌｙ ２， ｆａｃｉｌｉｔａｔｅｄ ｇｌｕｃｏｓｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ ｍｅｍｂｅｒ １， ＡｌｔＮａｍｅ： ＧＬＵＴ－１， ＵｎｉＰｒｏｔ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｒｅｖｉｓｉｏｎ Ｈｉｓｔｏｒｙ ［ｏｎｌｉｎｅ］， ０４－Ｆｅｂ－２０１５ ｕｐｌｏａｄｅｄ， ［ｒｅｔｒｉｅｖｅｄ ２６－Ｏｃｔ－２０２０］， ＵｎｉＰｒｏｔ， ＜ＵＲＬ： ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ／ｕｎｉｐｒｏｔ／Ｐ１７８０９．ｔｘｔ？ｖｅｒｓｉｏｎ＝１５０＞（以下、「参考文献６」という。）は、本願優先日前に電気通信回線を通じて公衆に利用可能となったものであり、マウスＧＬＵＴ－１タンパク質のアミノ酸配列を含む情報を提示する文献である。そして、参考文献６には、受入番号「ＮＰ＿０３５５３０．２」が外部データベースの対応データ（ＤＲ）の情報として記載されるとともに、マウスＧＬＵＴ－１タンパク質のアミノ酸配列が開示されている。

イ 参考文献７

原査定の拒絶の理由で参考文献として引用したＡＣ Ｐ１１１６６， ＳｕｂＮａｍｅ： Ｆｕｌｌ＝ Ｓｏｌｕｔｅ ｃａｒｒｉｅｒ ｆａｍｉｌｙ ２， ｆａｃｉｌｉｔａｔｅｄ ｇｌｕｃｏｓｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ ｍｅｍｂｅｒ １， ＡｌｔＮａｍｅ： ＧＬＵＴ－１， ＵｎｉＰｒｏｔ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｒｅｖｉｓｉｏｎ Ｈｉｓｔｏｒｙ ［ｏｎｌｉｎｅ］， ０４－Ｆｅｂ－２０１５ ｕｐｌｏａｄｅｄ， ［ｒｅｔｒｉｅｖｅｄ ２６－Ｏｃｔ－２０２０］， ＵｎｉＰｒｏｔ， ＜ＵＲＬ： ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ／ｕｎｉｐｒｏｔ／Ｐ１１１６６．ｔｘｔ？ｖｅｒｓｉｏｎ＝１８３＞（以下、「参考文献７」という。）は、本願優先日前に電気通信回線を通じて公衆に利用可能となったものであり、ヒトＧＬＵＴ－１タンパク質のアミノ酸配列を含む情報を提示する文献である。そして、参考文献７には、受入番号「ＮＰ＿００６５０７．２」が外部データベースの対応データ（ＤＲ）として記載されるとともに、ヒトＧＬＵＴ－１タンパク質のアミノ酸配列が開示されている。

上記（５）アにおいて記載したように、ニワトリβ－アクチンプロモーターは、強力かつ普遍的に遺伝子を発現させるプロモーターとして汎用されていたプロモーターであって、引用文献３には、ＡＡＶベクターを用いて導入遺伝子を中枢神経系にターゲッティングする系において、ニワトリβ－アクチンプロモーターを含むプロモーターを使用することも具体的に開示されている（上記記載事項（１）イ（ア）、（ウ）、（オ）、（キ））。

そうすると、引用発明１においてＧｌｕｔ１遺伝子を中枢神経系において発現させようとする際に、当該分野で汎用され、かつ、中枢神経系における導入遺伝子の発現においても機能することが知られているニワトリβ－アクチンプロモーターを用いることは、当業者が格別の創意工夫なく容易に想到し得ることである。

引用文献１には、新生児の変異体マウスにＡＡＶ９－Ｇｌｕｔ１を投与した後、成体期の間にその表現型を評価して、Ｇｌｕｔ１の発現、脳脊髄液のグルコースレベル、脳の大きさ、および運動パフォーマンスが改善したことが具体的に記載されている（上記記載事項（１）ア（ウ）、（エ））。このことから、該変異体マウスにおいて、ＡＡＶ９－Ｇｌｕｔ１が血液脳関門を越えて送達されていることは明らかであるし、その効果は成体期においても持続することが十分に示されていると認められる。

仮に、成体期におけるＡＡＶ９の血液脳関門に対する通過性が引用文献１に示されていなかったとしても、引用文献３には、無傷の血液脳関門を有する新生仔マウス（１日齢）および成体マウス（１０週齢）（Ｃ５７ＢＬ／６）にＡＡＶ９を投与して中枢神経系への指向性を確認したことが記載されているし（上記記載事項イ（イ）、（エ）、（ク））、引用文献４には、出生時のカニクイザルだけでなく、３歳齢のカニクイザルにＡＡＶ９を投与した場合にも、効果的に血液脳関門を通過することができたことが確認されているのである（上記記載事項ウ（イ））。そして、組換え型ＡＡＶを生体内に投与する際には、組換えＡＡＶゲノムがＡＡＶカプシドタンパク質にパッケージングされた組換え型ＡＡＶ粒子として投与されるのだから、その指向性は、導入遺伝子の種類ではなく、組換え型ＡＡＶが有するＡＡＶカプシドタンパク質に主に依存するものと認められる。そうすると、ＡＡＶ９カプシドタンパク質を有するＡＡＶ９が血液脳関門を通過する性質を有していることが上記のとおり周知であれば、引用発明１に記載のＧｌｕｔ１遺伝子がパッケージングされたＡＡＶ９も当然に血液脳関門を通過することができることを当業者は当然に把握できたものと認められ、引用文献３に記載される一部の実施例においてＡＬＳモデルマウスの血液脳関門が破壊されているとか、本願補正発明において、Ｇｌｕｔ１遺伝子に加えてニワトリβ－アクチンプロモーターがパッケージングされているという事実は、当業者が前述の性質を予想することを何ら妨げるものではない。

よって、上記審判請求人の主張はいずれも採用できない。