2024-000022

特願２０２１－ ９３００３「筋萎縮性側索硬化症を処置するためのｒＡＡＶベースの組成物および方法」拒絶査定不服審判事件〔令和 ３年 ９月３０日出願公開、特開２０２１－１５２０３０〕について、次のとおり審決する。

結 論 本件審判の請求は、成り立たない。

理 由 第１ 手続の経緯 本願は、２０１５年（平成２７年）３月１８日（パリ条約による優先権主張外国庁受理 ２０１４年３月１８日 米国（ＵＳ））を国際出願日とする特願２０１７－５０１１０１号の一部を令和元年９月２日に新たな特許出願とした特願２０１９－１５９５１４号の一部を、さらに令和３年６月２日に新たな特許出願としたものであって、その主な手続の経緯は以下のとおりである。 令和３年 ７月 ２日 ：翻訳文提出 令和３年 ７月 ２日 ：手続補正書の提出 令和４年 ６月 ３日付け ：拒絶理由通知 令和４年 ９月 ８日 ：意見書、手続補正書の提出 令和４年１０月３１日付け ：拒絶理由通知（最後） 令和５年 ５月 ８日 ：意見書の提出 令和５年 ８月２５日付け ：拒絶査定 令和６年 １月 ４日 ：審判請求書の提出 令和６年 １月１９日 ：手続補正書（方式）の提出 令和７年 ７月２５日 ：上申書の提出 第２ 本願発明 本願の請求項に係る発明は、令和４年９月８日提出の手続補正書によって補正された特許請求の範囲の請求項１～２２に記載された事項により特定されるものと認められるところ、その請求項１６に係る発明（以下「本願発明１６」という。）は、以下のとおりのものである。 「【請求項１６】 FTDまたはALSを有するか、または有することが疑われる対象を処置するための医薬組成物であって、医薬組成物が、対象の細胞においてC9orf72のmRNAを標的とする阻害性核酸を発現するように操作された核酸を保有する組換えアデノ随伴ウイルス(rAAV)の有効量を含み、 ここで阻害性核酸が、配列番号6および7に示された配列によってコードされる20個または21個の連続したヌクレオチドを含むマイクロRNAであり、 ここでマイクロRNAがさらに、miR-155の隣接領域を含む、前記医薬組成物。」 第３ 原査定の拒絶の理由 令和５年８月２５日付けの拒絶査定における拒絶の理由（理由１及び理由２）は、概略、次のとおりである。 理由１（実施可能要件） 本願の発明の詳細な説明の段落［００７３］には、配列番号６、７にそれぞれ示されるヌクレオチド配列を有するｍｉＲ－Ｃ９－２１、ｍｉＲ－Ｃ９－４８について、ｍｉＲＮＡによる遺伝子発現抑制効果を試験した結果は記載されていない一方、ｍｉＲＮＡの配列が異なれば、その遺伝子発現抑制効果は大きく変化し得るものであって、当該核酸の機能等を確実に予測することは困難であることが本願出願時の技術常識であるから、本願の特許請求の範囲の請求項１～２２で特定される配列番号６および７に示された配列によってコードされる２０個または２１個の連続したヌクレオチドを含むマイクロＲＮＡがＣ９ｏｒｆ７２の発現を阻害する効果を有するとは直ちには認められない。 したがって、この出願は、発明の詳細な説明の記載が、特許法第３６条第４項第１号に規定する要件を満たしていない。 理由２（サポート要件） 本願の発明の詳細な説明の段落［００７３］には、配列番号６、７にそれぞれ示されるヌクレオチド配列を有するｍｉＲ－Ｃ９－２１、ｍｉＲ－Ｃ９－４８について、ｍｉＲＮＡによる遺伝子発現抑制効果を試験した結果は記載されていない一方、ｍｉＲＮＡの配列が異なれば、その遺伝子発現抑制効果は大きく変化し得るものであって、当該核酸の機能等を確実に予測することは困難であることが本願出願時の技術常識であるから、本願請求項１～２２に係る発明の範囲まで、発明の詳細な説明に開示された内容を拡張ないし一般化できるとはいえない。 したがって、この出願は、特許請求の範囲の記載が、特許法第３６条第６項第１号に規定する要件を満たしていない。 第４ 当審の判断 １．理由１（特許法第３６条第４項第１号：実施可能要件）について （１）実施可能要件の判断について 本願発明１６は「FTDまたはALSを有するか、または有することが疑われる対象を処置するための医薬組成物」という物の発明である。ここで、「FTD」、「ALS」とは、本願の発明の詳細な説明【０００３】段落を参照すれば、それぞれ「前頭側頭型認知症」、「筋萎縮性側索硬化症」を意味するものである。そして、物の発明について実施可能要件を充足するためには、当業者が、明細書の発明の詳細な説明の記載及び出願当時の技術常識に基づいて、過度の試行錯誤を要することなく、その物を製造し、使用することができる程度の記載があることが必要である。 （２）発明の詳細な説明について 本願の発明の詳細な説明には、次の内容が記載されている。（なお、下線は強調のために当審で付与した。また、「・・・」は記載の省略を表す。） 「【０００３】 発明の背景 筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）は、一般に致命的な進行性の運動ニューロン疾患であり、これは前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）と同時に発症することもある。ＡＬＳは、散発性（ＳＡＬＳ）および家族性（ＦＡＬＳ）両方の形態で生じる。症例の約１０％は、常染色体優性形質として遺伝する。ＡＬＳに対するＦＤＡ承認療法は、生存を約１０％延長する化合物である、リルゾールである。 【０００４】 本開示の側面は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）に関連する遺伝子の発現を調節するための、組成物および方法に関する。特に、ＡＬＳに関連するＣ９ｏｒｆ７２およびＳＯＤ１などの遺伝子のサイレンシングに有用な、阻害性核酸が提供される。例えば、本開示のいくつかの側面において、Ｃ９ｏｒｆ７２の全てのバリアントを標的とする、阻害性核酸が提供される。本開示の他の側面において、Ｃ９ｏｒｆ７２のバリアントのサブセットを標的とする、阻害性核酸が提供される。本開示のいくつかの態様は、ｍｉＲＮＡなどの特定の阻害性核酸は一般に細胞質において機能するにも関わらず、それらを細胞質のアルゴノートタンパク質（例えば、ＡＧＯ２、ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体の触媒成分、またはＲＩＳＣ）に負荷して、ｐｒｅ－ｍＲＮＡのサイレンシングが可能な核に移入して戻すことができる、との認識に関する。したがって、いくつかの態様において、核内のＲＮＡおよび細胞質内のＲＮＡの両方を標的とすることができて、タンパク質翻訳を含むＲＮＡの機能を妨害または阻害する、阻害性核酸（例えば、ｍｉＲＮＡ）が提供される。」 「【００２３】 詳細な説明 本開示の側面は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）に関連する遺伝子の発現を調節するための、組成物および方法に関する。本開示の側面は、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ベクターを用いてＡＬＳを処置するための、改良された遺伝子治療用組成物および関連する方法に関する。特に、ＡＬＳに関連するＣ９ｏｒｆ７２およびＳＯＤ１などの遺伝子をサイレンシングする阻害性核酸を発現するように操作された核酸を保有する、ｒＡＡＶが提供される。いくつかの態様において、本開示は、組換えＡＡＶ（例えば、ｒＡＡＶ．Ｒｈ１０）を利用して、マイクロＲＮＡをＣＮＳに送達し、これによってＳＯＤ１またはＣ９ｏｒｆ７２などのＡＬＳ遺伝子をサイレンシングする。 【００２４】 ＡＬＳ症例は、遺伝子Ｃ９ｏｒｆ７２における非コードヘキサヌクレオチドのＧ４Ｃ２伸長に関連する。これらの伸長はまた、家族性前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）の１０～２０％、散発性ＦＴＤの１０％、およびＳＡＬＳの～５％においても検出されている。これらの統計は、Ｃ９ｏｒｆ７２Ｇ４Ｃ２伸長を、ＡＬＳの一般的な原因として規定する。正常な個体では、Ｇ４Ｃ２伸長は、２または３から２５までの反復のサイズ範囲であり；対照的に、ＦＴＤ／ＡＬＳ患者は、これらの反復を数百から数千有する。正常なＣ９ｏｒｆ７２遺伝子からの転写は、３つのｍＲＮＡバリアント、Ｖ１（例えば、Genbank：NM_145005.6；配列番号：１８）、Ｖ２（例えば、Genbank：NM_018325.3；配列番号：１９）、およびＶ３（例えば、Genbank：NM_001256054.1；配列番号：２０）を生成する。転写物Ｖ１はエクソン１ａ～６ｂを含み、２２２アミノ酸タンパク質をコードする。エクソンＶ２とＶ３はそれぞれ、エクソン２～１２およびエクソン１ｂ～１２を含み、同一の４８１ａａタンパク質をコードする（図１）。 【００２５】 本開示の側面は、Ｖ１およびＶ３がＧ４Ｃ２伸長を保有するとの認識に関する。この伸長を有するヒトＡＬＳおよびＦＴＤの脳の分析は、ＲＮＡ転写物の核内蓄積と、前頭皮質および脊髄でのＲＮＡ核内凝集体の生成を示す。これは、転写物Ｖ１とＶ３における伸長が、運動ニューロンで細胞毒性を引き起こす主要な有害物質であることを支持する。Ｃ９ｏｒｆ７２がコードするタンパク質の機能は十分に特徴付けられていないが、バイオインフォマティクスのアプローチは、Ｃ９ｏｒｆ７２タンパク質が、構造的な特徴を（ＤＥＮＮ）およびＧＤＰ／ＧＴＰ交換因子（ＧＥＦ）４と共有し、したがって他の潜在的な機能のうち、膜の細胞輸送を調節し得ることを示す。Ｇ４Ｃ２伸長の細胞毒性は、１または２以上の機能獲得のメカニズムに関連付けられる可能性があり、その例としては以下が挙げられる：１）ＲＮＡ凝集体による転写因子の過剰な隔離（sequestering）（例えば筋強直性ジストロフィーにおける筋肉ブラインド（muscleblind））；２）伸長された反復の、反復関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳が、ジペプチドの発現をもたらす（Ｇｌｙ－Ａｌａ；Ｇｌｙ－Ｐｒｏ；Ｇｌｙ－Ａｒｇ）；この様式で産生されるペプチドは、ＣＮＳ全体で神経細胞封入体を形成する；（３）および、Ｃ９ｏｒｆ７２転写物の発現の減少による、ハプロ不全の誘導。本開示の側面は、ｒＡＡＶ（例えば、髄腔内送達ｒＡＡＶ．Ｒｈ１０）を使用して、阻害性核酸（例えば、マイクロＲＮＡ）を導入し、問題となるＧ４Ｃ２伸長を保有するＣ９ｏｒｆ７２の転写物の発現をサイレンシングすることに関する。いくつかの態様において、本開示は、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＣ９ｏｒｆ７２のキーとなるｐｒｅ－ｍＲＮＡおよび成熟ｍＲＮＡ転写物のサイレンシングを達成する、方法および組成物を提供する。 ・・・ 【００２７】 阻害性核酸 いくつかの態様において、本開示は、ＳＯＤ１およびＣ９ｏｒｆ７２などのＡＬＳの原因となる遺伝子の発現を阻害する、阻害性核酸を提供する。いくつかの態様において、阻害性核酸は、ＲＮＡ、ｐｒｅ－ｍＲＮＡ、ｍＲＮＡなどの標的核酸の少なくとも一部にハイブリダイズして、その機能または発現を阻害する核酸である。いくつかの態様において、阻害性核酸は、一本鎖または二本鎖である。いくつかの態様において、阻害性核酸は、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）である。いくつかの態様において、阻害性核酸は、ｍｉＲ－１５５の隣接領域を有する標的配列を含む、マイクロＲＮＡである。」 「【００３５】 所望のキャプシドタンパク質を有する組換えＡＡＶを得るための方法は、当技術分野で知られている（例えば、米国特許公開番号2003/0138772を参照；この内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。本発明のｒＡＡＶで使用することができるＡＡＶキャプシドタンパク質としては、例えば、G. Gao, et al., J. Virol, 78(12):6381-6388 (June 2004)；G. Gao, et al, Proc Natl Acad Sci USA, 100(10):6081-6086 (May 13, 2003)；US 2003-0138772、US 2007/0036760、US 2009/0197338、およびWO 2010/138263に開示されているものが挙げられ、ＡＡＶキャプシドタンパク質および関連するヌクレオチドおよびアミノ酸配列に関するそれらの内容は、参照により本明細書に組み込まれる。典型的には、方法は、ＡＡＶキャプシドタンパク質またはその断片をコードする核酸配列；機能的ｒｅｐ遺伝子；ＡＡＶ逆方向末端反復（ＩＴＲ）および導入遺伝子から成る組換えＡＡＶベクター；および十分なヘルパー機能、を含む宿主細胞を培養して、組換えＡＡＶベクターのＡＡＶキャプシドタンパク質へのパッケージングを可能にすることを含む。」 「【実施例】 【００６７】 例１：Ｃ９ｏｒｆ７２発現の評価および標的化 Ｃ９ｏｒｆ７２を標的とするｍｉＲＮＡを送達する組換えアデノ随伴ウイルスベクターが、開発された。 細胞株および正常なヒト脳におけるＣ９ｏｒｆ７２発現の評価： ＷＴまたは変異型Ｃ９ｏｒｆ７２のいずれかを発現する、２種類の細胞株を使用した。８３のリンパ芽球様細胞株のセットを、Ｃ９ｏｒｆ７２のＧ４Ｃ２伸長が陽性である７８の家族性ＡＬＳ（ＦＡＬＳ）家系の患者から得た。また、以下を有する、継続的ＨＥＫおよびＳＨ－ＳＹ５Ｙ細胞株を生成した： ・エクソン１ａの上流の、２．０ｋｂのＣ９ｏｒｆ７２プロモーター、 ・Ｇ４Ｃ２反復を含む介在イントロンを有する、エクソン１ａおよび１ｂ、および ・２．１ｋｂの続くイントロンおよびエクソン２、この開始コドンがルシフェラーゼを駆動する。 ４つの下位株が、５０、９０、１６０および２００の反復のＧ４Ｃ２伸長を有するこれらの細胞株から生産された。線維芽細胞培養物は、Ｃ９ｏｒｆ７２Ｇ４Ｃ２伸長の症例からも得た。 【００６８】 Ｃ９ｏｒｆ７２の原理的（principle）転写産物を探索するために、ｐｒｅ－ｍＲＮＡまたはスプライスされたｍＲＮＡのいずれかを検出する、プローブおよびプライマーの系列を生成した。図１に示すように（上）、異なるｐｒｅ－ｍＲＮＡアイソフォームに対するＴａｑＭａｎプローブを開発した。１つのプローブであるＶａｌｌはすべてのｐｒｅ－ｍＲＮＡ転写物を検出し、一方他の２つ（Ｖ１またはＶ３）は、ｐｒｅ－ｍＲＮＡアイソフォームＶ１またはＶ３を検出する。図１に示すように（下）、３つの異なるスプライスされたｍＲＮＡアイソフォームを検出するプライマー対が、生成された。Ｖ１は、アイソフォームＢを検出し、一方プライマー対Ｖ２とＶ３は、アイソフォームＡの２つのバリアントを検出する。 図２に示すように、ＴａｑＭａｎプライマーは、ＨＥＫ２９３およびＳＨ－ＳＹ５Ｙ細胞およびヒトの脳からの、３つの主要なｐｒｅ－ｍＲＮＡ転写物を検出する。Ｖ１とＶ３についての転写レベルは、Ｖａｌｌよりもかなり小さく、示されるように、脳およびこれらの細胞における主要な転写物が、Ｖ２であることを示す。 【００６９】 細胞におけるｐｒｅ－ｍＲＮＡおよびスプライスされたｍＲＮＡの発現の、マイクロＲＮＡ媒介性サイレンシング： Ｃ９ｏｒｆ７２遺伝子を標的とするマイクロＲＮＡの、そのＲＮＡ転写物をサイレンシングする能力を評価した。Ｃ９ｏｒｆ７２のエクソン３におけるＯＲＦの塩基２２０～２４１を標的とする、Ｃ９－ｍｉＲ２２０と称される人工マイクロＲＮＡを開発した。このｍｉＲＮＡはエクソン３に結合するため、ｍＲＮＡバリアントの全てを標的とすることが予想される。図３は、ヒトＣ９ｏｒｆ７２のｉｎ ｖｉｔｒｏでのｍｉＲＮＡ媒介性ノックダウンを示す。これらは、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞における、ｍｉｒ２２０（ＣＢＡプロモータ－ＧＦＰ）の一過性トランスフェクションの、３つの生物学的複製からの結果である。対照は、ＳＯＤ１に対するｍｉＲである。 ｍｉＲＮＡを、Ｕ６またはニワトリβアクチン（ＣＢＡ）プロモーターのいずれかを使用して、２つの異なるプラスミドにクローニングした。これらのプラスミドを次に、Ｈｅｋ－２９３細胞にトランスフェクトした。７２時間後、定量的ＲＴ－ＰＣＲを使用し、ｐｒｅ－ｍＲＮＡ転写物を検出するカスタムＴａｑＭａｎプローブまたはスプライスされたｍＲＮＡバリアントを検出するプライマーを用いて、転写物をアッセイした。図３および図４に示すように、Ｕ６またはＣＢＡプロモーターによって駆動されると、Ｃ９－ｍｉＲ２２０マイクロＲＮＡの両方の形態は、スプライスされたｍＲＮＡのレベルを約５０％低下させた。ｐｒｅ－ｍＲＮＡ転写物のレベルは、ＣＢＡ－Ｃ９ｍｉＲ２２０マイクロＲＮＡにより～６５％に低下し（例えば、～３５％の減少）、一方Ｕ６－Ｃ９ｍｉＲ２２０は、ｐｒｅ－ｍＲＮＡのレベルを～２５％に低下させた（例えば、～７５％の減少）（図４参照）。これらの結果は、人工マイクロＲＮＡを用いた、Ｃ９ｏｒｆ７２遺伝子のｐｒｅ－ｍＲＮＡおよびｍＲＮＡ両方のサイレンシングを実証する。 ・・・ 【００７１】 マイクロＲＮＡの設計： ｍｉＲＮＡのＡＡＶプラットフォームは、ｍｉＲ－１５５をベースにする。標的化配列とステムループを、Ｄｒｏｓｈａ／ＤＧＣＲ８複合体による効率的な認識および処理のために、ｍｉＲ－１５５隣接領域のコンテキスト内にクローニングする（図７）。ｍｉＲＮＡデザインは、５′末端にアデニンまたはウラシルのいずれかを有する、成熟した２１マーのｍｉＲＮＡのガイド配列を生成する。５′末端でのＵまたはＡの選択は、Ａｇｏ２の中間領域が成熟ｍｉＲＮＡの５′末端と相互作用し、これら２つの塩基に対して、シトシンおよびグアニンより２０倍高い親和性を有するという事実により、駆動される。この設計はまた、ＲＩＳＣ複合体へのガイド鎖の熱力学的取り込みを促進する。ｍｉＲＮＡは、低い第二級および第三級複雑性標的ｍＲＮＡの領域を標的とするように、設計される。これはＲＮＡフォールディングアルゴリズムを用いて行われ、標的部位におけるｍｉＲＮＡ：ｍＲＮＡ同族結合の可能性を高めることを目標とする。図７Ｂに示すように、ｍｉＲＮＡは次いで、ポリメラーゼＩＩまたはポリメラーゼＩＩＩプロモーターのいずれかからの、ＧＦＰと関心のｍｉＲＮＡを発現するＩＴＲを有する、プロウイルスプラスミドにクローニングする。選択的にバリアント１および３のいずれかを、またはすべてのバリアントを標的とする、８つのｍｉＲＮＡを、これらのプラスミドにクローニングした（表１参照）。 【００７２】 【表１】 ［図：0001432439000001.jpg］ 【００７３】 表１に示すように、潜在的なｍｉＲＮＡが同定され、ヘキサヌクレオチド反復にわたる領域についてクローニングされた。ｐｒｅ－ｍＲＮＡアイソフォームＶ１およびＶ３が標的とされたが、その理由は、これらがＧ４Ｃ２のヘキサヌクレオチド反復を包含しているためである；表１に示すように、ｍｉＲ－Ｃ９－２１および－４８は、Ｖ１およびＶ３を標的とすることが予想される。 さらに、すべてのバリアントを標的とするｍｉＲＮＡが使用された。ｍｉＲ－Ｃ９－２２０は、ｍＲＮＡおよびｐｒｅ－ｍＲＮＡ種両方のｉｎ ｖｉｔｒｏでのノックダウンについて効果的である。特定の場合において、ｉｎ ｖｉｔｒｏで４０～５０％ノックダウン効率のｍｉＲＮＡは、ウイルスベクターを用いて達成された形質導入およびゲノムコピーの効率の増加により、翻訳してｉｎ ｖｉｖｏで８０％を超えるノックダウンを達成する。このｍｉＲＮＡは、ｐｒｅ－ｍＲＮＡのノックダウンによって決定されるように、核において機能する。核標的化は、ｍｉＲＮＡの３′末端の最後の３塩基を、同族ｍＲＮＡから脱標的化されるように修飾することによって、改善することができる。ｍｉＲＮＡがそのメッセージに１００％相補的でなく、３′末端で脱標的化される場合、該ｍｉＲＮＡは著しくより安定な複合体をＡｇｏ２と形成する。これは、ｍｉＲＮＡのＡｇｏ２複合体中の滞留時間を増加させ、それによって核移行の可能性を増加させる。表１で示したように、我々は、３′ミスマッチを有するｍｉＲＮＡ（ｍｉＲ－Ｃ９－２２０－３′ｍｍ）をクローニングし、これは、この活性を評価するために有用である。 ・・・ 【００８０】 例２：髄腔内送達された組換えアデノ随伴ウイルスＲｈ１０型（ｒＡＡＶ．Ｒｈ１０－Ｃ９ｍｉＲ）の、マウスＣ９ｏｒｆ７２遺伝子からのｐｒｅ－ｍＲＮＡおよび成熟ｍＲＮＡの発現をサイレンシングすることにおける、ｉｎ ｖｉｖｏ有効性 抗Ｃ９ｍｉＲを発現する髄腔内送達されたｒＡＡＶ．Ｒｈ１０は、野生型マウスおよびＢＡＣ由来Ｃ９ｏｒｆ７２ｍｕｔａｎｔトランスジェニックマウスの両方においてＣ９ｏｒｆ７２ ＲＮＡ転写物の中枢神経系レベルを減少させる。ｒＡＡＶ．Ｒｈ１０－Ｃ９ｍｉＲの、Ｃ９ｏｒｆ７２および関連するＧ４Ｃ２転写物のレベルを抑制する有効性を、トランスジェニックマウスにおいて評価する。 プライマーＶ１、Ｖ２、Ｖ３、およびＶａｌｌを用いて、Ｃ９ｏｒｆ７２転写物を評価する。図８に示すように、Ｖ１、Ｖ２、およびＶ３プライマーを使用するアッセイは、トランスジェニックマウスの転写物を検出し、一方Ｖａｌｌプライマーは、マウスおよびヒトのＣ９ｏｒｆ７２の両方を検出する。 ｒＡＡＶ．Ｒｈ１０－Ｃ９ｍｉＲの、Ｃ９ｏｒｆ７２のｐｒｅ－ｍＲＮＡおよびスプライスされたｍＲＮＡ転写物のレベルを低下させることに対する有効性を、野生型および当社のＣ９ｏｒｆ７２ｍｕｔａｎｔトランスジェニックマウスの両方を使用して評価する。ｒＡＡＶ．Ｒｈ１０－Ｃ９ｍｉＲが、トランスジェニックマウスにおけるＲＮＡｉ凝集体の数を減少させる程度を、評価する。・・・ 【００９１】 例３：霊長類におけるＣ９ｏｒｆ７２のｍｉＲＮＡ標的化。 髄腔内送達後の非ヒト霊長類（ＮＨＰ）の中枢神経系における、ｒＡＡＶ．Ｒｈ１０－Ｃ９ｍｉＲの評価およびＣ９ｏｒｆ７２転写物のサイレンシングの程度の評価。 髄腔内投与されたｒＡＡＶ．Ｒｈ１０－Ｃ９ｍｉＲが、非ヒト霊長類（ＮＨＰ）の脊髄、大脳および小脳全体に広がる程度を評価する。３種のｒＡＡＶ．Ｒｈ１０ベクターを、抗Ｃ９ ｍｉＲＮＡをコードする発現構築物の送達用に調製する。ベクターは、髄腔内注射を介して送達される。ＡＡＶＲｈ１０の広がりおよび向性（ｔｒｏｐｉｓｍ）ならびに、２つの異なるプロモーターからのＣ９－ｍｉＲの、サイレンシング有効性を、３週間にわたって評価する。・・・」 「【図１ＡＢ】 ［図：0001432439000002.jpg］ 」 「【図２】 ［図：0001432439000003.jpg］ 」 「【図３】 ［図：0001432439000004.jpg］ 」 「【図４】 ［図：0001432439000005.jpg］ 」 （３）参考文献に記載された事項について ア 参考文献１に記載された事項について 参考文献１は、本願出願日前に発行された、「Argonaute：RNA サイレンシングの構造基盤」と題する総説（領域融合レビュー, 1, e001 (2012), DOI: 10.7875/leading.author.1.e001）であって、次の事項が記載されている。 （ア）１頁右欄１行～２頁左欄４行 「RNAサイレンシングとは，20～30塩基長の小分子RNA（small RNA）を介して，それと相補的な配列領域をもつ遺伝子の発現が抑制される現象である．RNAサイレンシングは1998年，線虫についてはじめて報告され1)，2001年には，真核生物に特異的な遺伝子発現の制御機構として広く保存されていることが知られるようになった2)．また，応用的な観点からみると，RNAサイレンシングは特定の遺伝子産物の発現を人為的に抑制する方法として，高い選択性と汎用性とを兼ね備えたアプローチである．すでに，実験室レベルでは遺伝子の機能を解明するうえで欠かせないツールとして生命科学の実験に幅広く利用されている．」 （イ）２頁左欄６行～２頁右欄下から４行 「RNAサイレンシングのなかでもとくにくわしく調べられている経路として，おもにウイルスなど外因性の長い二本鎖RNAに由来するsmall interfering RNA（siRNA）が原始的な防御システムとしてはたらくRNAi経路，および，ヘアピン型をとる前駆体RNAとしてゲノムにコードされていてさまざまな生命現象の制御を行うmicroRNA（miRNA）のかかわるmiRNA経路の2つがある3-6)（図1）．どちらの経路でも，生合成された21～23塩基長のRNAがRISC（RNA-induced silencing complex）とよばれるRNA-タンパク質複合体を形成し，相補的な配列領域をもつmRNAの発現を抑制するという共通点がある．このRNAサイレンシングの機能複合体であるRISCにおいて，中心的な役割をはたしているのがArgonaute（Ago）とよばれる一群のタンパク質である7)． Agoは，4つのドメイン（Nドメイン，PAZドメイン，MIDドメイン，PIWIドメイン）と2つのリンカー（L1リンカーとL2リンカー）から構成される，分子量が約100 kDaのタンパク質である．siRNAやmiRNAなどのsmall RNAは，通常，二本鎖RNAとして生合成され，二本鎖のままAgoに積み込まれる（図1）．つぎに，Agoのなかで二本鎖RNA鎖の片方の鎖（パッセンジャー鎖）が引きはがされ捨てられることにより，もう片方の鎖（ガイド鎖）のみがAgoに取り込まれた成熟体RISCが形成される3-6)．こうして形成されたRISCは，ガイド鎖の配列相補性を利用して特異的な標的mRNAをみつけだし，翻訳の抑制やポリA鎖の短縮による不安定化をひき起こす（miRNA経路）．また，Agoファミリーに属するタンパク質のなかには“スライサー”とよばれるエンドヌクレアーゼ活性をもつものがあり，こうしたAgoは標的mRNAを切断することもできる（RNAi経路）．」 （ウ）図１ 「 ［図：0001432439000006.jpg］ 図 1 ヒトにおける RNA サイレンシングの分子機構」 イ 参考文献２に記載された事項について 参考文献２は、本願出願日前に発行された、「沈黙の音を探る：標的同定と検証のためのRNAi媒介遺伝子サイレンシング」と題する総説（DDT , Volume 10, Number 22, November 2005, 1559-1565）であって、次の事項が記載されている。なお、参考文献２は英文で記載されているので、合議体の訳文で示す。 （ア）１５５９頁 要約 「創薬は、新規生物学的標的の同定と初期前臨床検証から始まる。このプロセスはしばしば「標的同定と検証」と呼ばれる。通常、文献からの観察や動物・臨床研究の知見に加え、遺伝子・タンパク質の発現、相互作用、機能解析を含む最先端の分子技術が用いられる。ヒトゲノムの解読により、遺伝子およびタンパク質発現解析の研究が活発化している。RNA干渉技術と組み合わせることで、既知遺伝子の新規機能評価に加え、疾患に関連する機能を持つこれまで未知または未研究の遺伝子評価が可能となる。」 （イ）１５６０頁左欄１２行～右欄２１行 「適切なRNAi試薬の設計 標的同定および検証実験に使用する最も効果的なRNAi試薬をどのように特定すればよいか？理論的には、特定の標的RNAに対応するすべての短い二本鎖RNA（dsRNA）はサイレンシング活性を有するはずである。しかし、同一遺伝子に対する異なる試薬が異なるレベルの遺伝子ノックダウンを示すため、最も効果的なRNAi試薬を特定するアルゴリズムは精力的に研究されている分野である[19-21]。これは、RNA二次構造、結合エネルギー、標的アクセシビリティ、および標的配列の熱力学的特性がRNAi試薬の活性に影響を与えることを示唆している[22]。ほとんどの siRNA 識別アルゴリズムは、RNAi 設計に設定された基本的な制約 [23] を考慮に入れ、適切なゲノム全体（例えば、基本局所配列検索ツール（BLAST-N）やスミス・ウォーターマン法に基づくツール）を検索して、識別された配列と、そのゲノム内の他の配列との間に十分なミスマッチがあることを保証する。一部のアルゴリズムでは、RNA二次構造や熱力学的安定性などのパラメータも使用される[22]。しかし、ヒトsiRNAデータベース（HuSiDa, http://itb.biologie.hu-berlin.de/~nebulus/sirna/v2/）など複数のsiRNAを対象とした遡及的解析では、RNAi試薬選定の既発表基準との有意な相関は認められなかった[24]。したがって、効率的なRNAi活性を示す複数の基準が発表され、そのような配列を同定するための複数のアルゴリズムが利用可能であるにもかかわらず、RNAiベース（特にshRNA）アプローチのユーザー間の現在のコンセンサスは、有意な活性（低レベルのRNAi発現で標的遺伝子の75%以上のノックダウンと定義）を持つRNAi試薬を同定するには、複数の（3～10個、場合によってはそれ以上）オリゴヌクレオチドを設計する必要があるというものである。」 ウ 参考文献３に記載された事項について 参考文献３は、本願出願日後に発行された、「C9orf72を標的とする人工マイクロRNAは、ALSおよびFTD患者における核内転写産物の蓄積を減少させ得る」と題する学術論文（Molecular Therapy: Nucleic Acids Vol. 14 March 2019, 593-608）であって、次の事項が記載されている。なお、参考文献３は英文で記載されているので、合議体の訳文で示す。 （ア）５９３頁 要約 「筋萎縮性側索硬化症（ALS）および前頭側頭型認知症（FTD）において最も一般的な病原性変異は、染色体9番オープンリーディングフレーム72（C9orf72）遺伝子内のイントロン領域におけるGGGGCC（G4C2）リピートである。センスおよびアンチセンス反復配列を含む転写産物によって産生されるRNA凝集およびジペプチド反復（DPR）タンパク質による細胞毒性が、両疾患の病態形成の根底にあると考えられている。 C9orf72-ALS患者と対照群のRNAシーケンス（RNA-seq）データを解析し、患者におけるC9orf72の配列保存性をより深く理解した。保存領域においてC9orf72をサイレンシングするマイクロRNA（miC）を開発し、レポーター過剰発現システムにおいて異なるサイレンシング手法の実現可能性を実証した。さらに、2つの連結miCヘアピンを発現させることで双方向標的化アプローチの実現可能性を示した。miCの有効性は、核内および細胞質内における内因性C9orf72 mRNAの発現減少、ならびに(G4C2)44発現細胞における核内RNA凝集の～50%減少によって確認された。最終的に、2つのmiC候補がアデノ随伴ウイルスベクター血清型5（AAV5）に組み込まれ、HEK293T細胞および誘導多能性幹細胞（iPSC）由来ニューロンにおいてC9orf72のサイレンシングが実証された。これらのデータは、ALS および FTD 患者に見られる毒性の増大を軽減できる、マイクロ RNA (miRNA) ベースの AAV デリバリーによる遺伝子治療の実現可能性を裏付けている。」 （イ）５９５頁左欄８行～５９６頁左欄最終行 「保存されたC9orf72領域を標的とするmiRNAの設計 完全なサイレンシングアプローチの標的部位として、保存性の高いエクソン2及びエクソン11を選択した。イントロン1のカバー率が悪いため、過去にASOで標的化に成功した領域を選択した13。アンチセンス鎖については、PCRで以前に同定された領域を選択した21。miC発現構築体miC1-miC11およびmiC22-miC31をイントロン1に設計し、センス鎖イントロン転写物のみを標的とした（図2A）。miC32-miC50はエクソン2およびエクソン11に設計され、全てのセンスC9orf72転写産物を標的とする。miC12*-miC22*はアンチセンス鎖上に設計され、アンチセンス転写産物のみを標的とし、アスタリスクで示される。我々の先行研究でpri-miR-101及びpri-miR-451骨格が活性ガイド鎖を大量産生することが判明したため、miC配列は、両骨格に組み込まれた29。pri-miC-101及びpri-miC-451構造は、それぞれ21及び22塩基長の成熟miCを生成すると予測された（図2B）。・・・ miC-101及びmiC-451構築体のレポーターシステムを用いたin vitro試験 miC候補の有効性を検証するため、補完的なC9orf72標的領域をレニラ・ルシフェラーゼ（RL）遺伝子に融合させたルシフェラーゼ（Luc）レポーターを設計した（図2D）。・・・センス鎖イントロン転写物を標的とするmiC変異体の中で、miC2_101とmiC4_101は中程度のノックダウン（～50%）、miC31_101は強力なノックダウン（～80%）を示した（図3A）。これらをさらに最適化するために選択した。 ・・・ 我々のデータは、イントロン1が依然として困難な標的領域であることを示している。エクソン1aと1bの間の高度に構造化された反復領域にある全てのmiC候補は、強いノックダウンを誘導できなかった。」 （ウ）図２ 「 ［図：0001432439000007.jpg］ 図2. センスとアンチセンスC9orf72を標的とする人工miC発現構築体の設計 (A) ヒトC9orf72遺伝子の模式図。12のエクソン（代替スプライシングエクソン1aおよび1bを含む）とイントロン内のG4C2リピートで構成される。miC標的部位の位置は番号で示される。緑色の数字はLagier-Tourenneら17が報告したASOの位置を示す。灰色はmiR-101骨格に組み込まれたセンス標的miC候補、青色はmiR-451骨格に組み込まれたセンス標的miC候補、赤色はmiR-451骨格に組み込まれたアンチセンス標的miC候補を示す。(B) miC-101およびmiC-451二次構造の模式図。骨格はmiRBaseデータベース（www.mirbase.org）から選択した。ガイド鎖は成熟miC配列に置換し、パッセンジャー鎖はpri-miCの骨格構造を保持するよう修正した。miR-101は活性ガイド鎖（赤）に加工され、場合によってはパッセンジャー鎖（灰色）も生成する。miR-451はガイド鎖のみを生成する。(C) CAGプロモーター、pri-miC配列、ヒト成長ホルモンポリアデニル化（hGH polyA）シグナルで構成されるpri-miC-451およびpri-miC-101構築体の模式図。(D) レポーター遺伝子の模式図。C9orf72のセンス転写物を表現するため、C9orf72イントロン1（int1aおよびint1b）、エクソン2（ex2）、エクソン11（ex11）の配列をRL遺伝子下流にクローニングした。さらに、内部対照としてベクターからFLを共発現させた。アンチセンスレポーター（AS）については、イントロン内のアンチセンス配列をクローニングした。」 （エ）図３ 「 ［図：0001432439000008.jpg］ 図3. LucレポーターにおけるmiC候補遺伝子のサイレンシング効率 (A) miC1～miC11およびmiC22～miC31によるノックダウン効果。いずれもイントロン1を標的とし、エクソン1aとG4C2リピート間、またはエクソン1bとエクソン2間の領域を対象とした。HEK293T細胞に、ルシフェラーゼレポーターとmiR-101（灰色バー）またはmiR-451（青色バー）骨格に組み込まれた異なるmiC変異体を1:1の比率で共トランスフェクトした。トランスフェクション2日後にRLとFLを測定し、RLをFL発現で正規化した。スクランブルmiRNA（miScr）を陰性対照として100%に設定。追加試験対象候補は下線表示した。(BおよびC) miC32～miC45によるエクソン2レポーター(B)およびmiC46～miC50によるエクソン11レポーター(C)のノックダウン効果。(D) miC12_451*～miC21_451*によるアンチセンスレポーターのノックダウン。(E-H) 選択されたmiC候補がLucレポーターに及ぼす用量依存的効果。HEK293T細胞に10 ngのルシフェラーゼレポーターと、イントロン1用(E)、エクソン2用(F)、エクソン11用(G)、アンチセンス転写産物用(H)に選択されたmiC構築体を1、5、10、25 ngで共トランスフェクトした。RLおよびFLルシフェラーゼは前述の方法で測定した。データは多重比較用一元配置分散分析を用いて解析し、スクランブルおよびmiC処理細胞に対して統計的有意性を判定した。追加試験対象として選抜されたmiC候補のp値はグラフ内でアスタリスクで示される：****p < 0.0001。各棒グラフは3回の独立実験の平均値と標準偏差を示す。」 （４）本願出願当時の技術常識について 参考文献１及び２の記載によれば、本願出願当時、次の事項が技術常識であったと認められる。 ア ２０～３０塩基長の小分子ＲＮＡ（ｓｍａｌｌ ＲＮＡ）を用いて、それと相補的な配列領域をもつ遺伝子の発現を抑制するＲＮＡサイレンシングは、特定の遺伝子産物の発現を人為的に抑制する方法として幅広く利用されており、ｓｍａｌｌ ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）とｍｉｃｒｏＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）が詳細に研究されていた（前記（３）ア（ア）、（イ））。 イ ｍｉＲＮＡ及びｓｉＲＮＡは、いずれも二本鎖ＲＮＡとして生合成され、ＲＩＳＣ（ＲＮＡ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ ｃｏｍｐｌｅｘ）とよばれるＲＮＡ－タンパク質複合体の形成を介して、配列特異的な標的ｍＲＮＡの不安定化（ｍｉＲＮＡ経路）、又は標的ｍＲＮＡの切断をそれぞれ引き起こし（ＲＮＡｉ経路）、遺伝子の発現を抑制する（前記（３）ア（イ）、（ウ））。 ウ 特定の標的ＲＮＡに対応する短い二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）は、理論的には、すべてサイレンシング活性を有するはずであるが、実際には、ＲＮＡ二次構造、結合エネルギー、標的アクセシビリティ、及び標的配列の熱力学的特性により、同一遺伝子に対する異なる二本鎖ＲＮＡが、異なるレベルの遺伝子ノックダウンを示す（前記（３）イ（イ））。そのため、効率的なＲＮＡｉ活性を示す配列を同定するための複数のｓｉＲＮＡ識別アルゴリズムが利用可能であるにもかかわらず、有意な活性（低レベルのＲＮＡｉ発現で標的遺伝子の７５％以上のノックダウンと定義）を持つＲＮＡｉ試薬を同定するには、複数（３～１0個、場合によってはそれ以上）のオリゴヌクレオチドを設計する必要がある（前記（３）イ（イ）。 （５）判断 ア 本願の発明の詳細な説明では、【００２４】段落において、「遺伝子Ｃ９ｏｒｆ７２における非コードヘキサヌクレオチドのＧ４Ｃ２伸長」が「正常な個体では、」「２または３から２５までの反復のサイズ範囲」である一方、「ＦＴＤ／ＡＬＳ患者は、これらの反復を数百から数千有する」ことから、「Ｃ９ｏｒｆ７２Ｇ４Ｃ２伸長」が「ＡＬＳの一般的な原因として規定」されていることが説明されたうえで、「正常なＣ９ｏｒｆ７２遺伝子からの転写は、３つのｍＲＮＡバリアント」、すなわち「エクソン１ａ～６ｂを含」む「転写物Ｖ１」、「エクソン２～１２およびエクソン１ｂ～１２を含」む「Ｖ２」及び「Ｖ３」を生成することが記載されている。そして、続く【００２５】段落では、「Ｖ１およびＶ３がＧ４Ｃ２伸長を保有」し、「ＲＮＡ転写物の核内蓄積と、前頭皮質および脊髄でのＲＮＡ核内凝集体の生成を示す」ものであるから、「転写物Ｖ１とＶ３における伸長が、運動ニューロンで細胞毒性を引き起こす主要な有害物質であ」って、「Ｇ４Ｃ２伸長の細胞毒性は、」「１）ＲＮＡ凝集体による転写因子の過剰な隔離（sequestering）（例えば筋強直性ジストロフィーにおける筋肉ブラインド（muscleblind））；２）伸長された反復の、反復関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳が、ジペプチドの発現をもたらす（Ｇｌｙ－Ａｌａ；Ｇｌｙ－Ｐｒｏ；Ｇｌｙ－Ａｒｇ）；この様式で産生されるペプチドは、ＣＮＳ全体で神経細胞封入体を形成する；（３）および、Ｃ９ｏｒｆ７２転写物の発現の減少による、ハプロ不全の誘導」といった「１または２以上の機能獲得のメカニズムに関連付けられる可能性があ」ることが記載されている。 これに対し、本願の発明の詳細な説明の実施例では、まず、「ＷＴまたは変異型Ｃ９ｏｒｆ７２のいずれかを発現する、２種類の細胞株」及び「ヒト脳」において、「Ｖ１とＶ３についての転写レベルは、Ｖａｌｌよりもかなり小さく」、「脳およびこれらの細胞における主要な転写物が、Ｖ２であること」（例１及び図２）が記載されている。そして、「Ｃ９ｏｒｆ７２のエクソン３におけるＯＲＦの塩基２２０～２４１を標的と」し、「ｍＲＮＡバリアントの全てを標的とすることが予想される」「Ｃ９－ｍｉＲ２２０」が「ヒトＣ９ｏｒｆ７２のin vitroでのｍｉＲＮＡ媒介性ノックダウンを示」したこと（例２及び図３）、及び「Ｕ６またはＣＢＡプロモーターによって駆動される」「Ｃ９－ｍｉＲ２２０マイクロＲＮＡ」が、「スプライスされたｍＲＮＡのレベルを約５０％低下させ」、さらに「ｐｒｅ－ｍＲＮＡ転写物のレベルは、ＣＢＡ－Ｃ９ｍｉＲ２２０マイクロＲＮＡにより～６５％に低下し（例えば、～３５％の減少）、一方Ｕ６－Ｃ９ｍｉＲ２２０は、ｐｒｅ－ｍＲＮＡのレベルを～２５％に低下させた（例えば、～７５％の減少）」こと（例２及び図４）が具体的な実験データの裏付けを伴って記載されている。しかしながら、当該Ｃ９ｍｉＲ２２０マイクロＲＮＡによるｐｒｅ－ｍＲＮＡレベルの低下が、Ｖ１～Ｖ３のどのバリアントをどの程度低下させるのかについては確認されておらず、それによりＲＮＡ転写物の核内蓄積が減少するかどうかについても確認されていない。 また、本願の発明の詳細な説明の【表１】には、「標的部位におけるｍｉＲＮＡ：ｍＲＮＡ同族結合の可能性を高めることを目標と」して「ＲＮＡフォールディングアルゴリズムを用いて」設計された「選択的にバリアント１および３のいずれかを、またはすべてのバリアントを標的とする、８つのｍｉＲＮＡ」が記載されており、このうち、配列番号６及び７の配列を有する「ｍｉＲ－Ｃ９－２１および－４８」は、エクソン１ａ及び１ｂを標的エクソンとし、バリアントの「Ｖ１およびＶ３を標的とすることが予想される」ものであって、これは「ｐｒｅ－ｍＲＮＡアイソフォームＶ１およびＶ３」が「Ｇ４Ｃ２のヘキサヌクレオチド反復を包含しているためである」ことが文言上記載されている。さらに、「髄腔内送達された組換えアデノ随伴ウイルスＲｈ１０型（ｒＡＡＶ．Ｒｈ１０－Ｃ９ｍｉＲ）の、マウスＣ９ｏｒｆ７２遺伝子からのｐｒｅ－ｍＲＮＡおよび成熟ｍＲＮＡの発現をサイレンシングすることにおける、in vivo有効性」（例２）や、「霊長類におけるＣ９ｏｒｆ７２のｍｉＲＮＡ標的化」（例３）についても評価できることも、文言上記載されている。しかしながら、いずれも具体的な実験データについては記載されていない。 イ 上述のような本願の発明の詳細な説明の記載によれば、ＦＴＤ及びＡＬＳの病態は、Ｃ９ｏｒｆ７２の転写物Ｖ１及びＶ３が異常なＧ４Ｃ２伸長を有することにより生成されるＲＮＡ転写物の核内蓄積やＲＮＡ核内凝集体が細胞毒性を引き起こすことを発端とするものであって、本願発明１６は、エクソン１ａ及び１ｂを標的エクソンとし、バリアントＶ１およびＶ３を標的とする本願発明１６に係るマイクロＲＮＡにより、ｐｒｅ－ｍＲＮＡアイソフォームＶ１及びＶ３を阻害し、Ｇ４Ｃ２伸長による核内のＲＮＡの蓄積・凝集体を減少させることで、ＦＴＤ又はＡＬＳを処置しようとするものであることは理解できる。 しかしながら、本願の発明の詳細な説明では、エクソン３を標的エクソンとし、Ｖ１～Ｖ３の全てのバリアントを標的として設計された、本願発明１６で特定するマイクロＲＮＡとは異なる塩基配列からなるものであるＣ９－ｍｉＲ２２０について、ｐｒｅ－ｍＲＮＡレベル全体が低下することを確認している一方、各バリアントごとの低下作用については確認されておらず、しかも、脳における主要な転写物がＶ２バリアントであったことが記載されている（本願の発明の詳細な説明の図２ではＣ９ｏｒｆ７２の相対的発現量が対数で示されていることを踏まえると、Ｖ２バリアントはＶ１及びＶ３バリアントの１０倍程度の発現量であることがうかがわれる。）。そうすると、本願の発明の詳細な説明の記載から、Ｃ９ｏｒｆ７２の転写物について唯一具体的な実験結果が示されているマイクロＲＮＡであるＣ９－ｍｉＲ２２０でさえ、Ｖ１～Ｖ３バリアント中でも少数である核内Ｖ１及びＶ３バリアントのｐｒｅ－ｍＲＮＡレベルを、核内ＲＮＡ転写物の蓄積・凝集体を減少させることができる程度にまで低下させることができると理解することができない。ましてや、何ら具体的な実験結果が示されていない本願発明１６で特定するマイクロＲＮＡについて、核内Ｖ１及びＶ３バリアントのｐｒｅ－ｍＲＮＡレベル低下作用を推認できるとはいえない。 ウ また、前記（４）で説示した本願出願当時の技術常識によれば、ＲＮＡサイレンシングの技術分野においては、標的遺伝子産物と小分子ＲＮＡの配列特異的な相互作用が必要であることにくわえ（前記（４）ア、イ）、同一遺伝子に対する異なる試薬が異なるレベルの遺伝子ノックダウンを示すため、たとえＲＮＡｉ設計用のアルゴリズムを用いたとしても、有意な活性を示す配列を得るためには、複数のオリゴヌクレオチドを設計し（前記（４）ウ）、その活性を確認する必要があったものと認められる。そしてこれは、Ｇ４Ｃ２伸長を有するＣ９ｏｒｆ７２の転写物に対するマイクロＲＮＡの阻害活性に関する参考文献３において、Ｃ９ｏｒｆ７２の異なる配列に対して設計されたマイクロＲＮＡ候補が、それぞれ異なる阻害活性を示し、中には全く阻害活性を示さないものも含まれている（前記（３）ウ（イ）、（エ）；全く阻害活性を示さないものとして、図３ＡのｍｉＣプラスミド８及び図３ＢのｍｉＣプラスミド４４を参照。）ことが記載されていることとも符合するものである。 そうすると、上記のような本願出願当時の技術常識を参酌すればなおのこと、当業者が、本願の発明の詳細な説明の記載から、実施例で使用されたＣ９－ｍｉＲ２２０とは塩基配列が異なり、標的エクソンや標的バリアントも異なる上に、何ら具体的な実験結果が示されていない本願発明１６で特定するマイクロＲＮＡについて、Ｇ４Ｃ２伸長を有する核内Ｖ１及びＶ３バリアントのｐｒｅ－ｍＲＮＡレベルを低下させて、核内ＲＮＡ転写物の蓄積・凝集体を減少させることができ、ひいてはＦＴＤ又はＡＬＳを処置することができると認識できるとは到底認められない。 エ したがって、本願の発明の詳細な説明は、当業者が、本願出願当時の技術常識に照らし、過度の試行錯誤を要することなく、本願発明１６に係る医薬組成物を製造し、使用することができる程度の記載があるとはいえない。 オ 請求人の主張 請求人は、令和６年１月１９日提出の手続補正書（方式）により補正された審判請求書において、「配列番号6,7に夫々示されるヌクレオチド配列を有するmiR-C9-21、miR-C9-48は、本願の明細書の段落[0071]に記載されているとおり、RNAフォールディングアルゴリズムを使用し、標的mRNA、すなわちC9orf72の二次構造および三次構造の複雑性が低い領域を標的とするように設計されているものであります。RNAフォールディングアルゴリズムは、当該技術分野においてRNAの低複雑性領域を予測するために使用される一般的なツールであり、かかるツールを用いて設計されたmiRNAとmRNAとが同族(cognate)結合する可能性が最大限に高められ、ひいては標的mRNAの分解が最適化されることを当業者は理解できます」と主張する。 しかしながら、本願の発明の詳細な説明では、ｍｉＲ－Ｃ９－２１及びｍｉＲ－Ｃ９－４８の塩基配列が、ＲＮＡフォールディングアルゴリズムとしていかなるツールを使用し、どのような条件にて設計され、標的エクソン１ａ及び１ｂのどの塩基配列に結合し、どの程度のＶ１及びＶ３バリアント分解効果が期待されるものであるのか何ら記載されていないから、請求人の主張は発明の詳細な説明の記載に基づかない主張であり採用できない。これに、前記（４）ア～ウで説示した技術常識をも併せ考慮すると、信頼性も不明な何らかのＲＮＡフォールディングアルゴリズムを使用した旨の主張のみをもって、ｍｉＲ－Ｃ９－２１及びｍｉＲ－Ｃ９－４８が、異常なＧ４Ｃ２伸長を有する核内Ｖ１及びＶ３バリアントのエクソン１ａ及び１ｂに結合してそのｐｒｅ－ｍＲＮＡレベルを低下させ、核内ＲＮＡ転写物の蓄積・凝集体を減少させることができ、ひいてはＦＴＤ又はＡＬＳを処置することができるとは認識できない。 したがって、請求人の主張は採用できない。 （６）小括 以上のとおりであるから、この出願の発明の詳細な説明の記載は、本願発明１６を当業者が実施できる程度に明確かつ十分に記載したものではない。 ２．理由２（特許法第３６条第６項第１号：サポート要件）について （１）本願発明１６の課題について 特許請求の範囲が、特許法３６条６項１号に適合するか否かは、特許請求の範囲の記載と発明の詳細な説明の記載とを対比し、特許請求の範囲に記載された発明が、発明の詳細な説明に記載された発明で、発明の詳細な説明の記載により当業者が当該発明の課題を解決できると認識できる範囲のものであるか否か、また、その記載や示唆がなくとも当業者が出願時の技術常識に照らし当該発明の課題を解決できると認識できる範囲のものであるか否かを検討して判断すべきものである。 これを本願についてみると、前記１．（５）で説示したとおり、本願の発明の詳細な説明は、本願発明１６に係るマイクロＲＮＡがＦＴＤ又はＡＬＳを処置できることは記載されていないのであるから、本願発明１６は発明の詳細な説明に記載された発明ではない。 また、本願発明１６の解決しようとする課題は、本願の発明の詳細ナ説明の【０００４】段落の記載及び特許請求の範囲の請求項１６の記載からみて、「ＡＬＳに関連するＣ９ｏｒｆ７２遺伝子のサイレンシングに有用であり、ＦＴＤまたはＡＬＳを有するか、または有することが疑われる対象を処置するための医薬組成物」を提供することと認められる。 しかしながら、前記１．（５）で説示したとおり、本願の発明の詳細な説明及び出願当時の技術常識等を参酌しても、本願発明１６の医薬組成物が、Ｇ４Ｃ２伸長を有する核内Ｖ１及びＶ３バリアントのｐｒｅ－ｍＲＮＡレベルを低下させて、核内ＲＮＡ転写物の蓄積・凝集体を減少させることができ、ひいてはＦＴＤ又はＡＬＳを処置することができることを理解するとはいえない。 したがって、本願発明１６は、本願の発明の詳細な説明に、本願発明の上記課題が解決できると当業者が認識できるように記載された範囲のものではない。 （２）審判請求人の主張について 請求人は、令和６年１月１９日提出の手続補正書（方式）により補正された審判請求書において、前記１．（５）オと同様の主張を行っているが、当該主張を採用することができないことは、前記１．（５）オのとおりである。 （３）小括 以上のとおりであるから、本願発明１６について、特許請求の範囲の記載が特許法第３６条第６項第１号に規定する要件を満たしていない。 ３．付記 請求人は、令和７年７月２５日提出の上申書において、「令和６年１月４日審判請求書および令和６年１月１９日付手続補正書（方式）において主張したとおり、原審における拒絶理由は全て解消されましたので、原査定を取り消す、本願は特許するものとする、との審決を賜るものと確信しますが、前置審査官殿による前置報告がなされたこともあり、審判合議体において、万が一、本願発明の特許性につきなお疑義が払しょくできないとされる場合には、本審判請求人は、さらなる補正の用意もあることから、合議体による拒絶理由通知に基づく補正の機会を与えていただき、また必要に応じその前後において合議体との面接の機会を頂戴したく、ここに希求する次第であります」と主張しているが、前記第１で説示したとおり、本願は前置審査を経ていないものであるから、当該主張は本願の手続の経緯に基づかない主張である。そして、本願は令和４年１０月３１日付けの拒絶理由通知（最後）に対する応答期間中、及び審判請求時にも補正の機会があったにもかかわらず、何ら補正を行っていないこと、及び前記１．及び２．のとおり原査定の拒絶の理由が解消しているとは認められないことを併せ考慮すると、審判合議体において、さらなる補正の機会を与えることが必要であるとは認められない。 したがって、請求人の主張は採用できない。 第５ むすび 以上のとおり、本願は、発明の詳細な説明の記載が特許法３６条４項１号に規定する要件を満たしておらず、特許請求の範囲の記載が同条６項１号に規定する要件も満たしていないから、本願は、その他の請求項について検討するまでもなく、拒絶すべきものである。 よって、結論のとおり審決する。