2020-700607

特許第６６５１０６６号発明「ヘモグロビン類測定用試薬及びヘモグロビン類の測定方法」の特許異議申立事件について、次のとおり決定する。

【結　論】 特許第６６５１０６６号の明細書及び特許請求の範囲を訂正請求書に添付された訂正明細書及び特許請求の範囲のとおり、訂正後の請求項〔１－６〕について訂正することを認める。 特許第６６５１０６６号の請求項１、５及び６に係る特許を維持する。 特許第６６５１０６６号の請求項２～４に係る特許についての特許異議の申立てを却下する。

【理　由】 第１　手続の経緯 特許第６６５１０６６号の請求項１～６に係る特許についての出願は、２０１９年（令和元年）９月５日（優先権主張　２０１８年９月１２日　 日本）を国際出願日とする出願であって、令和２年１月２３日にその特許権の設定登録がされ、令和２年２月１９日に特許掲載公報が発行された。その後、その特許について、令和２年８月１７日に特許異議申立人鈴木　敏明（以下「申立人」という。）により特許異議の申立てがされ、当審は、同年１０月２８日付けで取消理由を通知した。特許権者は、その指定期間内である同年１２月２４日に意見書の提出及び訂正の請求を行い、その訂正の請求に対して、申立人は、令和３年２月９日に意見書を提出した。そして、当審は、同年３月１７日付けで取消理由（決定の予告）を通知し、特許権者は、その指定期間内である同年５月２０日に意見書の提出及び訂正の請求（以下当該訂正の請求を「本件訂正請求」という。）を行った。 なお、上記のとおり、特許権者は本件訂正請求を行ったが、下記に記載のとおり、本件訂正請求によって特許請求の範囲の「非イオン性界面活性剤」は「オキシエチレン基の平均付加モル数が１２であるポリオキシエチレンラウリルエーテル」のみに減縮され、「非イオン性界面活性剤」が「オキシエチレン基の平均付加モル数が１２であるポリオキシエチレンラウリルエーテル」については申立人は既に意見を述べており、事件において提出された全ての証拠や意見を踏まえてさらに審理を進めたとしても特許を維持すべきとの結論となると合議体は判断したため、申立人に意見書の提出を求めなかった。 第２　訂正の適否 １　訂正の内容（下線は、訂正箇所を示す。） （１）訂正事項１ 特許請求の範囲の請求項１に、 「前記非イオン性界面活性剤が、下記成分Ａ１、下記成分Ａ２、下記成分Ａ３、下記成分Ａ４、下記成分Ａ５又は下記成分Ａ６である、ヘモグロビン類測定用試薬。 成分Ａ１：オキシエチレン基の平均付加モル数が１０以上２０以下であり、かつアルキル基の炭素数が１２以上１７以下であるポリオキシエチレンアルキルエーテル 成分Ａ２：オキシエチレン基の平均付加モル数が４０以上６０以下であるポリオキシエチレンステアリルエーテル 成分Ａ３：オキシエチレン基の平均付加モル数が９以上１５以下であるポリオキシエチレンオレイルエーテル 成分Ａ４：オキシエチレン基の平均付加モル数が６以上１０以下であり、かつアルキル基の炭素数が１１以上１５以下であるポリオキシエチレン－ｓｅｃ－アルキルエーテル 成分Ａ５：オキシエチレン基の平均付加モル数が１５であるポリオキシエチレントリデシルエーテル 成分Ａ６：ＨＬＢ値が１１以上１５以下であるポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテル」 とあるのを、 「前記非イオン性界面活性剤が、オキシエチレン基の平均付加モル数が１２であるポリオキシエチレンラウリルエーテルである、ヘモグロビン類測定用試薬。」 に訂正する。 そして、請求項１の記載を引用する、請求項５，６も同様に訂正する。 （２）訂正事項２ 特許請求の範囲の請求項２を削除する。 （３）訂正事項３ 特許請求の範囲の請求項３を削除する。 （４）訂正事項４ 特許請求の範囲の請求項４を削除する。 （５）訂正事項５ 特許請求の範囲の請求項５に、「請求項１～４のいずれか１項」とあるのを、「請求項１」に訂正する。 そして、請求項５に係る発明を引用する請求項６も同様に訂正する。 （６）訂正事項６ 特許請求の範囲の請求項６に、「請求項１～５のいずれか１項」とあるのを、「請求項１又は５」に訂正する。 （７）訂正事項７ 明細書の段落【０１８６】において、「実施例２～２３、参考例２４～３０」とあるのを、　「実施例２，３、参考例４～３０」に訂正する。 明細書の段落【０１９４】、【０１９５】、【０１９７】、【０２０１】、【０２０６】、【０２０７】、【０２１４】において、「実施例２～２３、参考例１，２４～３０」とあるのを、「実施例２，３、参考例１，４～３０」に訂正する。 明細書の段落【０２０９】の【表２】において、「実施例４」、「実施例５」、「実施例６」、「実施例７」及び「実施例８」とあるのをそれぞれ、「参考例４」、「参考例５」、「参考例６」、「参考例７」及び「参考例８」に訂正する。 明細書の段落【０２１０】の【表３】において、「実施例９」、「実施例１０」、「実施例１１」、　「実施例１２」、「実施例１３」、「実施例１４」、「実施例１５」、「実施例１６」及び「実施例１７」とあるのをそれぞれ、「参考例９」、「参考例１０」、「参考例１１」、「参考例１２」、「参考例１３」、「参考例１４」、「参考例１５」、「参考例１６」及び「参考例１７」に訂正する。 明細書の段落【０２１２】の【表５】において、「実施例１８」、「実施例１９」、「実施例２０」、「実施例２１」、「実施例２２」及び「実施例２３」とあるのをそれぞれ、「参考例１８」、「参考例１９」、「参考例２０」、「参考例２１」、「参考例２２」及び「参考例２３」に訂正する。 明細書の段落【０２１５】において、「実施例３１～３８」とあるのを、「実施例３１，３２、参考例３３～３８」に訂正する。 明細書の段落【０２１６】において、「実施例３２，３４，３６～３８」とあるのを、「実施例３２、参考例３４，３６～３８」に訂正する。 明細書の段落【０２１９】及び【０２２４】において、「実施例３１～３６」とあるのを、「実施例３１，３２、参考例３３～３６」に訂正する。 明細書の段落【０２３１】の【表７】において、「実施例３３」、「実施例３４」、「実施例３５」、「実施例３６」、「実施例３７」及び「実施例３８」とあるのをそれぞれ、「参考例３３」、　「参考例３４」、「参考例３５」、「参考例３６」、「参考例３７」及び「参考例３８」に訂正する。 明細書の段落【０２３２】において、「実施例３１～３６」、「実施例３７，３８」、「実施例３１～３６」及び「実施例３１～３６」とあるのをそれぞれ、「実施例３１，３２、参考例３３～３８」、「参考例３７，３８」、「実施例３１，３２、参考例３３～３８」及び「実施例３１，３２、参考例３３～３８」に　訂正する。 なお、訂正前の請求項１～６は、請求項２～６が訂正の対象である請求項１を引用するものであるから、訂正前において一群の請求項に該当し、上記訂正は一群の請求項に対してされたものである。 ２　訂正の目的の適否、新規事項の有無、及び特許請求の範囲の拡張・変更の存否 （１）訂正事項１について 上記訂正事項１は、請求項１に規定されている非イオン性界面活性剤を、訂正前の請求項１に規定されていた成分Ａ１の下位概念である「オキシエチレン基の平均付加モル数が１２であるポリオキシエチレンラウリルエーテル」に限定するものであるから、特許請求の範囲の減縮を目的とするものであり、本件明細書の発明の詳細な説明の段落【００７３】に、「界面活性剤の溶解性を高める観点、良好に溶血させ、高い精度でヘモグロビン類を測定する観点から、成分Ａ１におけるオキシエチレン基の平均付加モル数は、好ましくは９以上、より好ましくは１０以上、更に好ましくは１１以上、好ましくは１９以下である。」と記載され、段落【０２０８】及び【０２０９】に実施例２及び３として、「オキシエチレン基の平均付加モル数が１２であるポリオキシエチレンラウリルエーテル」が記載されているから、これらの訂正は、新規事項の追加に該当せず、実質上特許請求の範囲を拡張し、又は変更するものでもない。 （２）訂正事項２～４について 訂正事項２～４は、特許請求の範囲の請求項２～４を削除するものであるから、特許請求の範囲の減縮を目的とするものである。そして、この訂正が、新規事項の追加に該当せず，実質上特許請求の範囲を拡張し，又は変更するものではないことは明らかである。 （３）訂正事項５及び６について 訂正事項５に係る請求項５についての訂正及び訂正事項６に係る請求項６についての訂正は、訂正事項２～４により請求項２～４が削除されたことに伴い、訂正前の請求項５及び６が引用する請求項２～４を削除するものであるから、特許請求の範囲の減縮を目的とするものである。そして、この訂正が、新規事項の追加に該当せず、実質上特許請求の範囲を拡張し、又は変更するものではないことは明らかである。 （４）訂正事項７について 訂正事項７は、上記訂正事項１～６に伴って、訂正後の請求項１に記載の特許発明及び該請求項１に従属する訂正後の請求項５、６に記載の特許発明に、実施例４～２３、３３～３８が含まれなくなったことに伴い、特許請求の範囲の記載と発明の詳細な説明の記載との整合を図るための訂正であるから、明りょうでない記載の釈明を目的とするものであり、この訂正が、新規事項の追加に該当せず、実質上特許請求の範囲を拡張し、又は変更するものではないことは明らかである。 ３　小括 以上のとおりであるから、本件訂正請求による訂正は、特許法第１２０条の５第２項ただし書第１号及び第３号に掲げる事項を目的とするものであり、かつ、同条第９項において準用する同法第１２６条第５項及び第６項の規定に適合する。 したがって、明細書、特許請求の範囲を、訂正請求書に添付された訂正明細書、特許請求の範囲のとおり、訂正後の請求項〔１－６〕について訂正することを認める。 第３　訂正後の本件発明 本件訂正請求により訂正された請求項１～６に係る発明（以下「本件発明１～６」という。）は、訂正特許請求の範囲の請求項１～６に記載された次の事項により特定されるとおりのものである。 「　　【請求項１】 陽イオン交換液体クロマトグラフィーによりヘモグロビン類を測定するために用いられるヘモグロビン類測定用試薬であって、 非イオン性界面活性剤を含み、 前記非イオン性界面活性剤が、オキシエチレン基の平均付加モル数が１２であるポリオキシエチレンラウリルエーテルである、ヘモグロビン類測定用試薬。 【請求項２】　削除 【請求項３】　削除 【請求項４】　削除 【請求項５】 前記非イオン性界面活性剤の含有量が、０．０１重量％以上１．０重量％以下である、請求項１に記載のヘモグロビン類測定用試薬。 【請求項６】 赤血球含有検体と、請求項１又は５に記載のヘモグロビン類測定用試薬とを混合して混合液を得る工程と、 前記混合液を陽イオン交換液体クロマトグラフィーにより測定する工程とを備える、ヘモグロビン類の測定方法。」 第４　取消理由通知（決定の予告）に記載した取消理由について １　取消理由（決定の予告）の概要 請求項１～６に係る特許に対して、当審が令和３年３月１７日に特許権者に通知した取消理由（決定の予告）の要旨は、次のとおりである。 （１）請求項１、３～６に係る特許は、特許請求の範囲の記載が、特許法第３６条第６項第１号に規定する要件を満たしていない特許出願に対してされたものである。 （２）請求項１～６に係る発明は、本件特許出願前に日本国内又は外国において、頒布された下記の引用文献１～５に記載された発明又は電気通信回線を通じて公衆に利用可能となった発明に基いて、本件特許出願前にその発明の属する技術の分野における通常の知識を有する者が容易に発明をすることができたものであるから、請求項１～６に係る特許は、特許法第２９条第２項の規定に違反してされたものである。 引用文献１：特開２００１－０２１５５５号公報（甲１号証） 引用文献２：特開２００７－１６３１８２号公報（甲４号証） 引用文献３：特開２０１３－０３６９５９号公報（甲５号証） 引用文献４：特開２０１４－０２５９１８号公報（甲６号証） 引用文献５：Masahiro FUKUDA, Misao KOIDE, Kazuo OHBU, "Effects of Hydrophile-Lipophile Balance of Alkyl Poly (oxyethylene) Ethers on Hemolysis", Journal of Japan Oil Chemists' Society, JP, Japan Oil Chemists' Society, １９８７年８月２０日, Volume 36 Issue 8 Pages 576-580（甲７号証） ２　引用文献の記載 （１）引用文献１について ア　引用文献１（特開２００１－０２１５５５号公報、甲１号証）に記載された事項 引用文献１には、以下の事項が記載されている。 （引１ａ）「【０００８】 【課題を解決するための手段】上記目的を達成するために、請求項１記載の本発明は、カチオン交換液体クロマトグラフィーによるヘモグロビン類の測定方法において、血液検体を溶血させる際に用いる溶血試薬であって、カオトロピックイオンを含有することを特徴とする溶血試薬を提供する。また、請求項２記載の本発明は、請求項１記載の溶血試薬であって、さらに緩衝剤を含有し、ｐＨが５．０～１０．０であることを特徴とする溶血試薬を提供する。また、請求項３記載の本発明は、請求項１または２記載の溶血試薬を用いることを特徴とするヘモグロビン類の測定方法を提供する。以下に本発明を詳細に説明する。」 （引１ｂ）「【００１９】上記溶血試薬には、以下の物質を添加してもよい。 （１）無機塩類としては、例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸ナトリウム、硫酸カリウム、リン酸ナトリウムなどが挙げられる。これらの塩類の濃度は、特に限定されないが、好ましくは１～１５００ｍＭである。 （２）ｐＨ調節剤として、公知の酸、塩基を添加してもよい。酸としては、例えば、塩酸、リン酸、硝酸、硫酸等が挙げられ、また、塩基としては、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウム、水酸化マグネシウム、水酸化バリウム、水酸化カルシウム、水酸化アンモニウム、水酸化ストロンチウム、水酸化セシウム、水酸化ニッケル、水酸化アルミニウム、水酸化カドミウム等が挙げられる。　これらの酸、塩基の濃度は、特に限定されないが、好ましくは、０．００１～５００ｍＭである。 （３）メタノール、エタノール、アセトニトリル、アセトンなどの水溶性有機溶媒と混合してもよい。これらの有機溶媒の濃度は、特に限定されないが、好ましくは０～８０体積％であり、カオトロピックイオン、無機酸、有機酸、これらの塩などが析出しない程度で用いるのが好ましい。 【００２０】（４）界面活性剤として、ノニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、アニオン性界面活性剤等を添加してもよい。界面活性剤を用いることにより、溶血を効率よく行うだけでなく、例えば高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）等で測定を行う場合、溶血試薬の通過する流路等を洗浄する効果がある。上記界面活性剤は、好ましくはノニオン性界面活性剤が使用され、例えば、ポリオキシエチレン類（以下、ポリオキシエチレンをＰＯＥ、エチレンオキシド付加モル数を（ｎ）で表す。）、ＰＯＥ（７）デシルエーテル、ＰＯＥ（ｎ）ドデシルエーテル、ＰＯＥ（１０）トリデシルエーテル、ＰＯＥ（１１）テトラデシルエーテル、ＰＯＥ（ｎ）セチルエーテル、ＰＯＥ（ｎ）ステアリルエーテル、ＰＯＥ（ｎ）オレイルエーテル、ＰＯＥ（１７）セチルーステアリルエーテル、ＰＯＥ（ｎ）オクチルフェニルエーテル、ＰＯＥ（ｎ）ノニルフェニルエーテル、モノラウリン酸ソルビタン、モノパルミチン酸ソルビタン、モノステアリン酸ソルビタン、モノオレイン酸ソルビタン、ＰＯＥ（ｎ）モノラウリン酸ソルビタン、ＰＯＥ（ｎ）モノパルミチン酸ソルビタン、ＰＯＥ（ｎ）モノステアリン酸ソルビタン、ＰＯＥ（ｎ）モノオレイン酸ソルビタン等が挙げられる。これらの界面活性剤は、単独でもまた複数混合して用いてもよい。 【００２１】これらの界面活性剤の添加量は、好ましくは０．０１～１０重量％である。」 （引１ｃ）「【００４１】 【実施例】次に、実施例、比較例を挙げて本発明を詳しく説明するが、本発明はこれらの実施例にのみ限定されるものではない。 【００４２】（実施例１） 〔充填剤１の調製：カルボキシル基〕テトラエチレングリコールジメタクリレート（新中村化学社製）４００ｇ及びメタクリル酸（和光純薬社製）１５０ｇの混合物に過酸化ベンゾイル（和光純薬社製）１．５ｇを溶解した。これを４重量％ポリビニルアルコール（日本合成化学社製）水溶液２５００ｍｌに分散させ、撹拌しながら窒素雰囲気下で７５℃に昇温し、８時間重合した。重合後、洗浄し乾燥した後、分級して平均粒径６μｍの粒子を得た。 【００４３】〔カラムの充填〕得られた充填剤１をカラムに以下のようにして充填した。粒子０．７ｇを、５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ５．８）３０ｍｌに分散し、５分間超音波処理した後、よく撹拌した。全量をステンレス製の空カラム（４．６φ×３０ｍｍ）を接続したパッカー（梅谷精機社製）に注入した。パッカーに送液ポンプ（サヌキ工業社製）を接続し、圧力３００ｋｇ／ｃｍ2 で定圧充填した。 【００４４】〔ヘモグロビン類の測定〕得られたカラムを用いて、以下の測定条件でヘモグロビン類の測定を行った。 （測定条件） システム：送液ポンプ：ＬＣ－９Ａ（島津製作所社製） オートサンプラ：ＡＳＵ－４２０（積水化学社製） 検出器：ＳＰＤ－６ＡＶ（島津製作所社製） 溶離液：溶離液Ａ：７０ｍＭのリン酸緩衝液（和光純薬社製；ｐＨ５．７） 溶離液Ｂ：７０ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ８．５）、２５０ｍＭ硝酸ナトリウム 測定開始より０～２分の間は溶離液Ａを流し、２～２．１分の間は溶離液Ｂを流し、２．１～３分の間は溶離液Ａを流した。 流速：２．０ｍｌ／分 検出波長：４１５ｎｍ 試料注入量：１０μｌ 【００４５】（測定試料：Ａ）健常人血を採血し、抗血液凝固剤としてフッ化ナトリウムを１０ｍｇ／ｍｌとなるよう添加した。これに、１５０倍量の溶血試薬（界面活性剤として０．１重量％ポリエチレングリコールモノ－４－オクチルフェニルエーテル（トリトンＸ－１００、東京化成社製）とカオトロピックイオンを生成する化合物として１００ｍＭグアニジン及び１０ｍＭリン酸緩衝溶液からなる溶血試薬（ｐＨ７．５））を添加して溶血し、測定試料とした。 （測定試料Ｂ；ＡＨｂ）健常人血１０ｍｌにフッ化ナトリウムを添加し（１０ｍｇ／ｍｌ）、さらに０．３重量％アセトアルデヒドの生理食塩水溶液１ｍｌを添加し、３７℃で３時間反応させた。これに、１５０倍量の溶血試薬（０．１重量％トリトンＸ－１００と１００ｍＭグアニジン及び１０ｍＭリン酸緩衝溶液からなる溶血試薬（ｐＨ７．５））を添加して溶血し、測定試料とした。 【００４６】（測定結果）上記測定条件により、試料を測定して得られたクロマトグラムを図１、２に示す。図１は、試料Ａを測定した結果、図２は、試料Ｂを測定した結果を示す。ピーク１はＨｂＡ１ａ及びｂ、ピーク２はＨｂＦ、ピーク３は不安定型ＨｂＡ１ｃ、ピーク４は安定型ＨｂＡ１ｃ、ピーク５はＨｂＡ０、ピーク６はＡＨｂを示す。図２では、ピーク４と６とが良好に分離されている。また、上記測定試料Ａ、Ｂを５検体測定し安定型ＨｂＡ１ｃの測定精度（ＳＤ；標準偏差、ＣＶ；変動係数値）を求めた結果を表１に示す。」 イ　引用文献１に記載された発明 （ア）上記（引１ａ）及び（引１ｂ）より、引用文献１には、以下の発明（以下「引用発明」という。）が記載されている。 「カチオン交換液体クロマトグラフィーによるヘモグロビン類の測定方法において、血液検体を溶血させる際に用いる溶血試薬であって、 界面活性剤として、ノニオン性界面活性剤である、ＰＯＥ（１０）トリデシルエーテル、ＰＯＥ（１１）テトラデシルエーテルを、単独でもまた複数混合して用いる溶血試薬。」 （イ）上記（引１ｃ）より、引用文献１には、実施例として以下の「測定試料：Ａ」が記載されている。 「測定試料：Ａとして、健常人血を採血し、抗血液凝固剤としてフッ化ナトリウムを１０ｍｇ／ｍｌとなるよう添加し、これに、１５０倍量の溶血試薬（界面活性剤として０．１重量％ポリエチレングリコールモノ－４－オクチルフェニルエーテル（トリトンＸ－１００、東京化成社製）とカオトロピックイオンを生成する化合物として１００ｍＭグアニジン及び１０ｍＭリン酸緩衝溶液からなる溶血試薬（ｐＨ７．５））を添加して溶血した測定試料：Ａ。」 （ウ）上記（イ）の「測定試料：Ａ」に使用される溶血試薬は、上記（引１ａ）より「カチオン交換液体クロマトグラフィーによるヘモグロビン類の測定方法において、血液検体を溶血させる際に用いる溶血試薬」であるから、上記ｂより引用文献１には、実施例としては以下の発明（以下「引用発明’」という。）が記載されている。 「カチオン交換液体クロマトグラフィーによるヘモグロビン類の測定方法において、血液検体を溶血させる際に用いる溶血試薬であって、 界面活性剤として０．１重量％ポリエチレングリコールモノ－４－オクチルフェニルエーテル（トリトンＸ－１００、東京化成社製）とカオトロピックイオンを生成する化合物として１００ｍＭグアニジン及び１０ｍＭリン酸緩衝溶液からなる溶血試薬（ｐＨ７．５）」 （２）引用文献２について ア　引用文献２に記載された事項 引用文献２には、以下の事項が記載されている。 （引２ａ）「【００１５】 本発明に係る溶血試薬は、ＨＬＢ値が１１～１３の範囲のノニオン性界面活性剤であって、該界面活性剤を含有し、糖化タンパク質を検出するための酵素が有する活性を阻害しないことを特徴とするものである。 【発明の効果】 【００１６】 本発明に係る溶血方法および溶血試薬によれば、迅速に赤血球を完全溶血することができ、且つ酵素への活性阻害もない。 また、本発明に係る溶血方法および溶血試薬は、糖尿病用のＨｂＡ１ｃ測定マイクロチップに使用するのに特に好適である。」 （引２ｂ）「【００２２】 本発明者らは、前記特定の成分を検出するための酵素の活性を低下させることがなく、同時に迅速に完全溶血の能力を持つ溶血試薬を探索するために、数多くのノニオン性界面活性剤について検討した結果、ＨＬＢ値が１1～１３の範囲のノニオン性界面活性剤が迅速に完全溶血でき、且つ酵素の活性に阻害がないことを見出すに至った。 また、上記特性値を満たすノニオン性界面活性剤は、さらにエーテル型ノニオン性界面活性剤であることにより、完全溶血するまでの時間をさらに短くすることができた。 ＨＬＢ値とは界面活性剤の水と油(水に不溶性の有機化合物)への親和性の程度を表す値であり、Ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｅ-Ｌｉｐｏｐｈｉｌｅ　Ｂａｌａｎｃｅの頭文字を取ったものである。親水親油バランスともいう。この概念は１９４９年にＡｔｌａｓＰｏｗｄｅｒＣｏｍｐａｎｙのウィリアム・グリフィンによって提唱された。計算によって決定する方法がいくつか提案されている。 （１）アトラス法:　エステル系の界面活性剤について、鹸化価をＳ、界面活性剤を構成する脂肪酸の酸価をＡとし、ＨＬＢ値を２０（１－Ｓ／Ａ)で定義する。 （２）グリフィン法：　ＨＬＢ値＝２０×親水部の式量の総和／分子量で定義する。 （３）デイビス法:　官能基によって決まる基数を定め(例えばメチル基やメチレン鎖は親油基で０．４７５、水酸基は親水基で１．９など)、ＨＬＢ値＝７＋親水基の基数の総和－親油基の基数の総和で定義する。界面活性剤の混合物のＨＬＢ値は各成分のＨＬＢ値の加重平均となる。 （４）標準試料にＨＬＢ値を決定したい界面活性剤を添加して乳化し、実験的に決定する方法もあるが煩雑であるためあまり行われない。 （５）高速液体クロマトグラフィーでの保持時間から決定する方法もある。 本発明には、有機概念図（甲田善生，「有機概念図　－基礎と応用－」，ｐ．２２７(１９８４）三共出版）に基づくＩＯＢ方法で求めたＨＬＢ値を用いた。ＩＯＢ値は界面活性剤の無機性値と有機性値の比で、ＨＬＢ値はＩＯＢ値×１０の値である。 【００２３】 本発明においては、下記一般式（１）で表わされるポリオキシエチレン系ノニオン性界面活性剤を用いることが好ましい。 一般式（１） Ｒ－（ＯＣＨ2ＣＨ2）nＯＨ 上記一般式（１）中、Ｒは、炭素数８～２０の直鎖でも分岐していてもよい脂肪族炭化水素基、炭素数８～２０の直鎖でも分岐していてもよいアルキル基を置換基として有していてもよい脂環式炭化水素基、または、炭素数８～２０の直鎖でも分岐していてもよいアルキル基を置換基として有していてもよい芳香族炭化水素基であり、ｎは５～２０の整数である。 上記脂環式炭化水素基としては、１つの環の炭素数が５～６であり、脂環式炭化水素環の数が１～４であるものが好ましく挙げられる。 上記芳香属炭化水素基としては、１つの環の炭素数が５～６であり、芳香属炭化水素環の数が１～４であるものが好ましく挙げられる。 【００２４】 ポリオキシエチレン系ノニオン性界面活性剤として好ましくは、ポリオキシエチレンセチルエーテル、ポリオキシエチレンオレイルエーテル、ポリオキシエチレンステアリルエーテル、ポリオキシエチレンラウリルエーテル、ポリオキシエチレンイソセチルエーテル、ポリオキシエチレンイソステアリルエーテル、ポリオキシエチレンオクチルドデシルエーテル、ポリオキシエチレンコレステリルエーテル及び、炭素数８～２０の直鎖でも分岐していてもよいアルキル基を置換基として有していてもよいポリオキシエチレンフェニルエーテルが挙げられる。 【００２５】 本発明においてさらに好ましく使用されるノニオン性界面活性剤としては、 ポリオキシエチレンセチルエーテル（オキシエチレン単位１０～１７のもの）、 ポリオキシエチレンオレイルエーテル（オキシエチレン単位１２～２０のもの）、 ポリオキシエチレンステアリルエーテル（オキシエチレン単位１１～２０のもの）、 ポリオキシエチレンラウリルエーテル（オキシエチレン単位7～１２のもの）、 ポリオキシエチレンイソセチルエーテル（オキシエチレン単位１０～１５のもの）、 ポリオキシエチレンイソステアリルエーテル（オキシエチレン単位１０～２０のもの）、 ポリオキシエチレンコレステリルエーテル、 ポリオキシエチレンオクチルドデシルエーテル（オキシエチレン単位１６～２０のもの）及び ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル（該アルキル基は、炭素数が８～２０であり、直鎖でも分岐していてもよい。例えば、オキシエチレン単位平均９～１０含有　Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ－１００）が挙げられる。 【００２６】 本発明において溶血剤に用いられる上記界面活性剤の使用濃度は、０．０５％～５％（質量濃度）が好ましく、好ましくは０．０５％～１％、より好ましくは０．１％～１％、さらに好ましくは０．１％～０．２％である。この濃度範囲であれば、迅速な溶血能力を持つと同時に、エンザイムイムノアッセイで通常用いられる多くの標識酵素の酵素活性に悪影響を与えることもない。」 （引２ｃ）「【００４４】 表１に、使用濃度０．１％における各化合物の特性と迅速溶血評価結果、酵素阻害評価結果をまとめて示す。完全溶血を○とし、それ以外を×とした。また、０．０５％、０．２％、０．５％および１％の各濃度においても同様の結果を得た。 【００４５】 上記のノニオン性界面活性剤の溶血性能と酵素への阻害評価の結果から、本願発明のノニオン性界面活性剤（化合物１～化合物６）、すなわち、１１～１３という特定のＨＬＢ値範囲内のポリオキシエチレンエーテルが優れた溶血能力を有し、且つ酵素活性の阻害性も無いことがわかった。比較化合物１～比較化合物３はイオン性界面活性剤であり、強力な溶血力を有するが、酵素活性を阻害性した。比較化合物４はノニオン性界面活性剤のポリオキシエチレンラウリルエーテルであるが、ＨＬＢ値が１０であり、酵素活性を阻害し、弱い溶血力が確認された。また、比較化合物５、６はエステル系のノニオン性界面活性剤であり、酵素活性の阻害を示さなかったが、強力な溶血力を持っていなかった。 【００４６】 【表１】 」 イ　引用文献２に記載された技術事項 （ア）上記（引２ａ）より、引用文献２には、「ＨＬＢ値が１１～１３の範囲のノニオン性界面活性剤を含有」する「溶血試薬は」、「糖化タンパク質を検出するための酵素が有する活性を阻害しない」ものであって、「迅速に赤血球を完全溶血することができ」、「糖尿病用のＨｂＡ１ｃ測定マイクロチップに使用するのに特に好適である」旨記載されている。 （イ）上記（引２ｂ）より、引用文献２には、「迅速に完全溶血でき」る「ＨＬＢ値が１１～１３の範囲のノニオン性界面活性剤が」、「エーテル型ノニオン性界面活性剤であることにより、完全溶血するまでの時間をさらに短くすることができ」る旨、「ノニオン性界面活性剤として」、「ポリオキシエチレンセチルエーテル（オキシエチレン単位１０～１７のもの）、ポリオキシエチレンオレイルエーテル（オキシエチレン単位１２～２０のもの）、ポリオキシエチレンラウリルエーテル（オキシエチレン単位7～１２のもの）」「が挙げられる」旨記載されている。 （ウ）上記（引２ｃ）より、引用文献２には、「１１～１３という特定のＨＬＢ値範囲内のポリオキシエチレンエーテル」である「ノニオン性界面活性剤（化合物１～化合物６）」は、「優れた溶血能力を有」する旨記載され、「迅速溶血評価結果」が示された「表１」より、ポリオキシエチレンラウリルエーテルである化合物１～３と、ポリオキシエチレンセチルエーテルである化合物５が、Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ－１００である化合物６と同様に「迅速溶血評価結果」が良好である旨記載されている。 （エ）上記（ア）～（ウ）より引用文献２には、以下の技術事項（以下「技術事項２」という。）が記載されている。 「ＨＬＢ値が１１～１３の範囲のノニオン性界面活性剤を含有する溶血試薬は、糖化タンパク質を検出するための酵素が有する活性を阻害しないものであって、迅速に赤血球を完全溶血することができ、糖尿病用のＨｂＡ１ｃ測定マイクロチップに使用するのに特に好適であり、 迅速に完全溶血できるＨＬＢ値が１１～１３の範囲のノニオン性界面活性剤は、エーテル型ノニオン性界面活性剤であることにより、完全溶血するまでの時間をさらに短くすることができ、 ノニオン性界面活性剤として、 ポリオキシエチレンセチルエーテル（オキシエチレン単位１０～１７のもの）、 ポリオキシエチレンオレイルエーテル（オキシエチレン単位１２～２０のもの）、 ポリオキシエチレンラウリルエーテル（オキシエチレン単位７～１２のもの） が挙げられ、 実際に、ポリオキシエチレンラウリルエーテルである化合物１～３と、ポリオキシエチレンセチルエーテルである化合物５が、Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ－１００である化合物６と同様に迅速溶血評価結果が良好である。」 （３）引用文献３について ア　引用文献３に記載された事項 引用文献３には、以下の事項が記載されている。 （引３ａ）「【００１５】 本発明の測定方法の特徴的な構成 本発明の全血検体の成分測定方法は、以下の工程を含むことを特徴とする。 （１）全血検体を、酸化剤および界面活性剤を含む溶液と希釈する工程。 （２）希釈した検体の目的成分を測定する工程。 （３）希釈した検体のヘモグロビン（Ｈｂ）量を定量する工程。 （４）（２）における測定結果を、（３）における定量値に基づいてヘマトクリット（Ｈｔ）補正を行うことにより、血清または血漿を測定した際の測定結果に換算する工程。」 （引３ｂ）「【００１８】 「目的成分の測定」 本発明の成分測定方法が対象とする目的成分およびその測定方法は、特に限定されない。 目的成分としては、総タンパク質（ＴＰ）、アルブミン（Ａｌｂ）、コリンエステラーゼ、乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）、ＡＳＴ（ＧＯＴ）、ＡＬＴ（ＧＰＴ）、γ－ＧＴＰ、アルカリホスファターゼ、総ビリルビン（Ｔ．Ｂ）、直接ビリルビン（Ｄ．Ｂ）　、アミラーゼ（ＡＭＹ）、クレアチニン（ＣＲＥ）、クレアチンキナーゼ（ＣＫ）、総コレステロール（Ｔ－ＣＨＯ）、中性脂肪（トリグリセリド）、ＨＤＬコレステロール（ＨＤＬ－Ｃ）、ＬＤＬコレステロール（ＬＤＬ－Ｃ）、尿素窒素（ＢＵＮ）、ナトリウム（Ｎａ）、カリウム（Ｋ）、クロール（Ｃｌ）、カルシウム（ＣＡ）、無機リン（ＩＰ）、鉄（血清鉄：ＦＥ）、不飽和鉄結合能（ＵＩＢＣ）、グルコース（ＧＬＵ）、ＨｂＡ１ｃ、グリコアルブミン、インスリン、Ｃ反応性蛋白（ＣＲＰ）、ＣＥＡ、ＡＦＰ、ＰＳＡ、ＢＮＰ、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰなどが挙げられる。 目的成分の測定方法としては、検体と目的成分に反応する試薬とを接触させることにより生じる物理化学的変化を測定する方法など、種々の公知の測定原理を用いた方法が挙げられる。物理化学的変化としては、色素の化学変化や凝集による光学的・電気化学的変化などが例示され、その手段として、酵素などを介してもよい。 波長は、適宜設定すればよく３００ｎｍから８５０ｎｍの間であれば、特に限定されない。ヘモグロビン量の定量と同じ波長を用いることもできる。」 （引３ｃ）「【００２５】 「界面活性剤」 本発明の成分測定方法で用いる界面活性剤としては、特に限定されないが、以下の（ａ）～（ｇ）のうちいずれかが例示できる。 （ａ）下記式（Ｉ）で示される化合物 Ｒ－Ｏ－Ｘ　・・・（Ｉ） （Ｒは、炭素数が９～１８のアルキル基または置換アルキル基であり、Ｘは、ポリオキシエチレン残基である。） このような化合物としては、エマルゲン１３０Ｋ、エマルゲン１５０、エマルゲン１４７、エマルゲン１２０が例示できる。」 （引３ｄ）「【００３２】 後述の実施例でも示すように、全血検体を、本発明の方法で用いる酸化剤および界面活性剤を含む溶液で希釈することによって、迅速にＨｂの吸光度が一定になる。 このような現象がおこる理由は、本発明の界面活性剤を用いることでＨｂの溶血および試料の均一化が迅速に行われ、同時に、本発明の酸化剤によってＨｂがメト化されるため、迅速にヘモグロビンの酸化還元状態を一定にすることができるからであると考察される。 これにより、好ましくは希釈後６０秒、５０秒、４０秒、３０秒、２０秒、１０秒以下でＨｂの吸光度が一定になり、迅速なＨｂ定量が可能となることから、トータルでの測定時間が、好ましくは１０分、５分、３分、２分、６０秒以下と大幅に短縮されるため、迅速な測定が可能となる。」 イ　引用文献３に記載された技術事項 上記（引３ａ）～（引３ｃ）より、引用文献３には、以下の技術事項（以下「技術事項３」という。）が記載されている。 「全血検体の成分測定方法は、 全血検体を、界面活性剤を含む溶液と希釈する工程と、 希釈した検体の目的成分を測定する工程とを含み、 成分測定方法が対象とする目的成分は、ＨｂＡ１ｃであり、 成分測定方法で用いる界面活性剤としては、エマルゲン１４７、エマルゲン１２０が例示され、 これらの界面活性剤を用いることでＨｂの溶血および試料の均一化が迅速に行われる技術。」 （４）引用文献４について ア　引用文献４に記載された事項 引用文献４には、以下の事項が記載されている。 （引４ａ）「【００３０】 界面活性剤ＡとＢとの組み合わせによって血液中の稀少細胞に対するダメージを抑制しつつ血球の排除が可能となるメカニズムの詳細は明らかではないが、以下のように考えられる。界面活性剤Ａに、血球への溶解性の高い界面活性剤Ｂが組み合わされることにより、界面活性剤Ａ及びＢが混合ミセルを形成し、この混合ミセルが、その割合によって界面活性剤Ａの血球への選択性を邪魔することなく血球に選択的に作用し、界面活性剤Ｂの高い溶解性により接触した血球を迅速に溶解する。すなわち、血球のすばやく排除を可能とすることで、がん細胞へのダメージがより抑制されると考えられる。ただし、本開示はこれらのメカニズムに限定されて解釈されなくてもよい。」 （引４ｂ）「【００４５】 ［界面活性剤Ｂ］ 本開示の処理方法に使用する界面活性剤Ｂは、赤血球を溶解する能力が前記界面活性剤Ａのそれよりも高い非イオン性界面活性剤である。本明細書において、「赤血球の溶解」とは、赤血球を含む試料と混合した場合の溶血が生じる現象をいい、例えば、同じ濃度及び／又は混合比で処理した場合に溶血させるまでの時間が速いほど赤血球を溶解する能力が高いと判断できる。溶血とは赤血球の細胞膜が、物理的又は化学的、生物学的など様々な要因によって損傷や溶解し、ヘモグロビン等が細胞外に漏出し赤血球が死に至る現象のことを言う。本開示の処理方法に使用する界面活性剤Ｂは、一又は複数の実施形態において、血液中の稀少細胞に対するダメージを抑制しつつ血球の排除をする観点から、その白血球の成育阻害の能力が前記界面活性剤Ａのそれよりも高いことが好ましい。 【００４６】 界面活性剤Ｂは、血液中の稀少細胞に対するダメージを抑制しつつ血球の排除をする観点から、非イオン性界面活性剤であって、一又は複数の実施形態において、ポリオキシエチレンポリオキシアルキレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルエーテル（ＥＯ＝１３～２２）、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される非イオン性界面活性剤が挙げられる。 【００４７】 ポリオキシエチレンポリオキシアルキレンアルキルエーテル型の界面活性剤Ｂは、一又は複数の実施形態において、血液中の稀少細胞に対するダメージを抑制しつつ血球の排除をする観点から、好ましくは下記式（III）で表わされる非イオン性界面活性剤である。 Ｒ3-Ｏ-(ＡＯ)m/(ＥＯ)n-Ｒ4　　（III） ［前記式（III）中、Ｒ3は炭素数１～２４のアルキル基であり、Ｒ4は水素原子又は炭素数1～３のアルキル基を示し、ＡＯは炭素数３～６のオキシアルキレン基を示し、ＥＯはオキシエチレン基を示し、ｍ及びｎはそれぞれＡＯ及びＥＯの平均付加モル数である。ｍは１～１００の数であり、ｎは０～５０の数であり、"／"はＡＯ基及びＥＯ基が、順序に関係なく、ランダム又はブロックのいずれに付加したものであってもよいことを示す。］ 【００４８】 前記式（III）のＲ3は、一又は複数の実施形態において、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル（ラウリル）、トリデシル、テトラデシル（ミリスチル）、ペンタデシル、ヘキサデシル（セチル）、ヘプタデシル、オクタデシル（ステアリル）、ノナデシル、イコシル、ヘネイコシル、ドコシル（ベヘニル）、トリコシル、テトラコシル等が挙げられる。前記式（III）のＲ4は、水素原子又は炭素数１～３の炭化水素基であって、一又は複数の実施形態において、血液中の稀少細胞に対するダメージを抑制しつつ血球の排除をする観点から、水素原子又は炭素数１～３のアルキル基であり、前記アルキル基は、一又は複数の実施形態において、メチル基、エチル基、プロピル基、又はイソプロピル基である。前記式（III）中、ＡＯとしては、一又は複数の実施形態において、ポリオキシポリオキシプロピレン、ポリオキシブチレン等が挙げられる。前記式（III）中、一又は複数の実施形態において、血液中の稀少細胞に対するダメージを抑制しつつ血球の排除をする観点から、ｍは、１～６０が好ましく、１～３０がより好ましい。同様に、ｎは、１～５０が好ましく、１～２５がより好ましい。 【００４９】 前記式（III）の界面活性剤Ｂは、一又は複数の実施形態において、血液中の稀少細胞に対するダメージを抑制しつつ血球の排除をする観点から、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテルが好ましい。前記ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテルは、一又は複数の実施形態において、血液中の稀少細胞に対するダメージを抑制しつつ血球の排除をする観点から、ＨＬＢ値（親水性－親油性バランス値）が、１０．０～１８．０のものが好ましく、より好ましくは１２．０～１５．０、さらに好ましくは１２．５～１３．５である。さらに、前記ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテルは、同様の観点から、曇点（℃／２％水溶液）が、３４℃～８８℃のものが好ましく、より好ましくは４０℃～７５℃、さらに好ましくは５０℃～６０℃である。 【００５０】 前記式（III）の界面活性剤Ｂは、一又は複数の実施形態において、市販品として、ＥＭＡＬＥＸ　ＤＡＰＥ－２０７、ＥＭＡＬＥＸ　ＤＡＰＥ－２１０、ＥＭＡＬＥＸ　ＤＡＰＥ－２１２、ＥＭＡＬＥＸ　ＤＡＰＥ－２１５、ＥＭＡＬＥＸ　ＤＡＰＥ－２２０、ＥＭＡＬＥＸ　ＤＡＰＥ－２３０(以上、日本エマルジョン社製)、プルラファックＬＦ３００、プルラファックＬＦ４００、プルラファックＬＦ４３１、プルラファックＬＦ７１１、プルラファックＬＦ９００、プルラファックＬＦ９０１、プルラファックＬＦ１３００〔ＢＡＳＦジャパン（株）製〕及びエマルゲンＬＳ－１０６、エマルゲンＬＳ－１１０、エマルゲンＬＳ１１４、エマルゲンＭＳ１１０〔花王（株）製〕として市販され、ワンダーサーフＲＬ－８０、ワンダーサーフＲＬ－１００、ワンダーサーフＲＬ－１４０、ワン ダーサーフＳ－８００、ワンダーサーフＳ－１０００、ワンダーサーフＳ－１４００（以上、青木油脂社製）、ユニセーフＰＫＡ－５０１５、ユニセーフＰＫＡ－５０１６、ユニセーフＰＫＡ－５０１７、ユニセーフＬＭ－２（以上、日本油脂社製）等が挙げられる。 【００５１】 ポリオキシエチレンアルキルエーテル（ＥＯ＝１３～２２）型の界面活性剤Ｂは、一又は複数の実施形態において、血液中の稀少細胞に対するダメージを抑制しつつ血球の排除をする観点から、好ましくは下記式（IV）で表わされる非イオン性界面活性剤である。 Ｒ5-Ｏ-(ＥＯ)n-Ｒ6　　　　（IV） ［前記式（IV）中、Ｒ5は炭素数１２～４０の炭化水素基を示し、ＥＯはオキシエチレン基を示し、ｎはＥＯの平均付加モル数であって８～２２であり、Ｒ6は水素原子又は炭素数１～３の炭化水素基である。］ 【００５２】 前記式（IV）のＲ5は、一又は複数の実施形態において、血液中の稀少細胞に対するダメージを抑制しつつ血球の排除をする観点から、分岐鎖を有する炭素数１２～４０の炭化水素基であることが好ましく、より好ましくは分岐鎖を有する炭素数１２～３０のアルキル基である。前記炭化水素基及びアルキル基の炭素数は、一又は複数の実施形態において、血液中の稀少細胞に対するダメージを抑制しつつ血球の排除をする観点から、１２～２８が好ましく、より好ましくは１４～２６、さらに好ましくは１６～２４、さらにより好ましくは１８～２２、さらにより好ましくは２０である。前記式（IV）のＲ5の好ましい実施形態として、イソヘキシル基、イソノニル基、イソデシル基、イソドデシル基、イソヘキサデシル基、ヘキシルデシル基、ヘキシルドデシル基、ヘキシルヘキサデシル基、オクチルデシル基、オクチルドデシル基、オクチルヘキサデシル基、ノニルデシル基、ノニルドデシル基、ノニルヘキサデシル基が挙げられ、一又は複数の実施形態において、同様の観点から、オクチルドデシル基が好ましい。前記式（IV）のＲ6は、水素原子又は炭素数１～３の炭化水素基であって、一又は複数の実施形態において、血液中の稀少細胞に対するダメージを抑制しつつ血球の排除をする観点から、水素原子又は炭素数１～３のアルキル基であり、前記アルキル基は、一又は複数の実施形態において、メチル基、エチル基、プロピル基、又はイソプロピル基である。前記式（IV）として、血液中の稀少細胞に対するダメージを抑制しつつ血球の排除をする観点から、下記式（V）がより好ましい。 【００５３】 【化３】 【００５４】 式（IV）及び（V）におけるＥＯの平均付加モル数ｎは、一又は複数の実施形態において、血液中の稀少細胞に対するダメージを抑制しつつ血球の排除をする観点から、１０～２２が好ましく、より好ましくは１３～２２、さらに好ましくは１５～２１、さらにより好ましくは１８～２１、さらにより好ましくは２０である。」 イ　引用文献４に記載された技術事項 上記（引４ａ）及び(引４ｂ)より、引用文献４には、以下の技術事項（以下「技術事項４」という。）が記載されている。 「高い溶解性により接触した血球を迅速に溶解する界面活性剤Ｂは、赤血球を溶解する能力が高い非イオン性界面活性剤であって、 下記式（IV）で表わされるポリオキシエチレンアルキルエーテル（ＥＯ＝１３～２２）型の非イオン性界面活性剤である界面活性剤Ｂ。 Ｒ5-Ｏ-(ＥＯ)n-Ｒ6　　　　（IV） ［前記式（IV）中、Ｒ5は炭素数１２～４０の炭化水素基を示し、ＥＯはオキシエチレン基を示し、ｎはＥＯの平均付加モル数であって８～２２であり、Ｒ6は水素原子又は炭素数１～３の炭化水素基である。］」 （５）引用文献５について 引用文献５には、以下の事項が記載されている。 （引５ａ）「Zaslavsky et al3). reported that the hemolytic activity of nonionic surfactants does not depend on the hydrophile-lipophile balance (HLB) of the compounds. However, they claimed that when the alkyl chain length is 12, the hemolytic activity becomes the greatest in nonionic surfactant with an oxyethylene number of 9 to 15.」（５７８頁右欄４-１１行、当審訳：「Zaslavskyら３）は、非イオン性界面活性剤の溶血活性は、化合物の親水性-親油性バランス（HLB）に依存しないことを報告した。 しかし、彼らは、アルキル鎖の長さが12の場合、溶血活性は、オキシエチレン数が9～15の非イオン性界面活性剤で最大になると主張した。」） （６）甲２号証に記載の事項 甲２号証（特開２００２-８２１０５号公報）には、以下の事項が記載されている。 （甲２ａ）「【特許請求の範囲】 【請求項１】　ヘモグロビン類の測定方法に用いられる、カチオン交換液体クロマトグラフィー用充填剤であって、 安定型ＨｂＡ１ｃ保持力試験法により、８０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ５．６０）を使用して測定した保持力パラメータが２．５～６０、 及び／または、４５ｍＭ過塩素酸含有３０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ５．５０）を使用して測定した保持力パラメータが１．５～６０であることを特徴とする液体クロマトグラフィー用充填剤。 【請求項２】　請求項１記載の液体クロマトグラフィー用充填剤が、カラム筐体に充填されてなる液体クロマトグラフィー用カラム。 【請求項３】　請求項１記載の充填剤または請求項２記載のカラムを使用した、液体クロマトグラフィーによるヘモグロビン類の測定方法。」 （甲２ｂ）「【００５２】（６）界面活性剤として、ノニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、アニオン性界面活性剤等を添加してもよい。界面活性剤を用いることにより、溶血を効率よく行うだけでなく、例えば高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）等で測定を行う場合、溶血試薬の通過する流路等を洗浄する効果がある。上記界面活性剤は、好ましくはノニオン性界面活性剤が使用され、例えば、ポリオキシエチレン類（以下、ポリオキシエチレンをＰＯＥ、エチレンオキシド付加モル数を（ｎ）で表す。）、ＰＯＥ（７）デシルエーテル、ＰＯＥ（ｎ）ドデシルエーテル、ＰＯＥ（１０）トリデシルエーテル、ＰＯＥ（１１）テトラデシルエーテル、ＰＯＥ（ｎ）セチルエーテル、ＰＯＥ（ｎ）ステアリルエーテル、ＰＯＥ（ｎ）オレイルエーテル、ＰＯＥ（１７）セチルーステアリルエーテル、ＰＯＥ（ｎ）オクチルフェニルエーテル、ＰＯＥ（ｎ）ノニルフェニルエーテル、モノラウリン酸ソルビタン、モノパルミチン酸ソルビタン、モノステアリン酸ソルビタン、モノオレイン酸ソルビタン、ＰＯＥ（ｎ）モノラウリン酸ソルビタン、ＰＯＥ（ｎ）モノパルミチン酸ソルビタン、ＰＯＥ（ｎ）モノステアリン酸ソルビタン、ＰＯＥ（ｎ）モノオレイン酸ソルビタン等が挙げられる。これらの界面活性剤は、単独でもまた複数混合して用いてもよい。また、これらの界面活性剤の添加量は、好ましくは０．０１～１０重量％である。」 （７）甲３号証に記載の事項 甲３号証（特開２００３-３４４３７２号公報）には、以下の事項が記載されている。 （甲３ａ）「【０００４】 【発明が解決しようとする課題】キャリブレータ及びコントロール液は、溶液として調製した後、ＨｂＡ1ｃ値が経時的に小さくなる現象が認められる。これは、キャリブレータ及びコントロール液を冷蔵保存すると、ＨｂＡ1ｃ値が経時的に小さくなる現象が抑制されることから、前記現象はキャリブレータ及びコントロール液中のＨｂＡ1ｃが温度の影響を受けて、何らかの変性きたし、結果としてＨｂＡ1ｃの測定値が誤差を受けていると推定される。 【０００５】特に高速液体クロマトグラフィー法(以下ＨＰＬＣ法と記す。)による測定において顕著に認められるため、ＨｂＡ1ｃの３次元構造が変化している可能性がある。ただし、検体中に存在するＨｂＡ1ｃ値は経時的な変化が認められず、キャリブレータ及びコントロール液に限ってＨｂＡ1ｃ値は経時的な変化が認めらることから、一度乾燥されたＨｂＡ1ｃが、温度による影響を受けることにより、３次元構造が経時的に変化していると推測される。しかし、本発明者らが調べる限り原因は未だ解明されていない。」 （甲３ｂ）「【００２０】本発明において、好ましくは添加される上記非イオン性界面活性剤とは特に限定されるわけではないが、例えば、ポリオキシエチレン類（以下、ポリオキシエチレンをＰＯＥ、エチレンオキシド付加モル数を（ｎ）で表わす。）、ＰＯＥ（７）デシルエーテル、ＰＯＥ（ｎ）ドデシルエーテル、ＰＯＥ（１０）トリデシルエーテル、ＰＯＥ（１１）テトラデシルエーテル、ＰＯＥ（ｎ）セチルエーテル、ＰＯＥ（ｎ）ステアリルエーテル、ＰＯＥ（ｎ）オレイルエーテル、ＰＯＥ（１７）セチル－ステアリルエーテル、ＰＯＥ（ｎ）オクチルフェニルエーテル、ＰＯＥ（ｎ）ノニルフェニルエーテル、モノラウリン酸ソルビタン、モノパルミチン酸ソルビタン、モノステアリン酸ソルビタン、モノオレイン酸ソルビタン、ＰＯＥ（ｎ）モノラウリン酸ソルビタン、ＰＯＥ（ｎ）モノパルミチン酸ソルビタン、ＰＯＥ（ｎ）モノステアリン酸ソルビタン、ＰＯＥ（ｎ）モノオレイン酸ソルビタン、ＰＯＥ（９）ラウリルエーテル等が挙げられる。また、オキシエチレン－オキシプロピレンブロック共重合体等の高分子化合物も用いることができる。上記界面活性剤は、１種のみが用いられてもよく、２種以上併用されて用いられてもよい。また、１種あるいは２種以上の界面活性剤の含有量は、好ましくは０．０１～１０重量％である。」 ３　当審の判断 （１）特許法３６条６項１号について 当審は、 本件の発明の詳細な説明において開示された有効な実施例として記載されている非イオン性界面活性剤は、成分Ａ１はオキシエチレン基の平均付加モル数及びアルキル基の炭素数が、成分Ａ２～成分Ａ４は、オキシエチレン基の平均付加モル数が、そして、成分Ａ６はＨＬＢ値が、それぞれ特定のものであって、各成分はそれぞれ単独で使用された実施例のみであるから、訂正前の請求項１、３及び４に係る発明の非イオン界面活性剤の成分は、有効な実施例として記載された成分以外のものを含んでおり、また、複数の成分を混合することも排除していない。 そうすると、ヘモグロビン類測定用試薬において、成分中のオキシエチレン基の平均付加モル数、アルキル基の炭素数又はＨＬＢ値が相違した場合にどの程度の効果を有するか、実際に実施してみないと予測することができないという、出願時の技術常識に照らしても発明の詳細な説明において開示された内容を、訂正前の請求項１、３及び４に係る発明の範囲まで、拡張ないし一般化できるとはいえないから、訂正前の請求項１、３及び４に係る発明が、発明の詳細な説明に記載したものであるとはいえない。 旨通知したが、本件訂正請求により、請求項１に係る発明の非イオン性界面活性剤が、「オキシエチレン基の平均付加モル数が１２であるポリオキシエチレンラウリルエーテル」に訂正され、請求項３及び４は削除されたので、上記理由は解消した。 （２）特許法２９条２項について ア　本件発明１について （ア）対比 本件発明１と引用発明’とを対比する。 ａ　引用発明’の「カチオン交換液体クロマトグラフィーによるヘモグロビン類の測定方法において、血液検体を溶血させる際に用いる溶血試薬」は、本件発明１の「陽イオン交換液体クロマトグラフィーによりヘモグロビン類を測定するために用いられるヘモグロビン類測定用試薬」に相当する。 ｂ　引用発明’が含む「界面活性剤」である「ポリエチレングリコールモノ－４－オクチルフェニルエーテル（トリトンＸ－１００、東京化成社製）」は、オキシエチレン基の平均付加モル数が１０のＰＯＥオクチルフェニルエーテルであって、上記（引１ｂ）より「ノニオン性界面活性剤」であるから、本件発明１の「オキシエチレン基の平均付加モル数が１２であるポリオキシエチレンラウリルエーテルである」「前記非イオン性界面活性剤」とは、「前記非イオン性界面活性剤」である点で共通する。 ｃ　そうすると、ａ及びｂより本件発明１と引用発明’とは、以下の一致点と相違点がある。 （一致点）「陽イオン交換液体クロマトグラフィーによりヘモグロビン類を測定するために用いられるヘモグロビン類測定用試薬であって、 非イオン性界面活性剤を含む、ヘモグロビン類測定用試薬。」 （相違点）ヘモグロビン類測定用試薬に含まれる非イオン性界面活性剤が、本件発明１は、「オキシエチレン基の平均付加モル数が１２であるポリオキシエチレンラウリルエーテル」であるのに対し、引用発明’が、「ポリエチレングリコールモノ－４－オクチルフェニルエーテル（トリトンＸ－１００、東京化成社製）」である点。 （イ）判断 上記相違点について検討する。 ａ　上記（引１ｂ）より、引用文献１には、「カチオン交換液体クロマトグラフィーによるヘモグロビン類の測定方法において、血液検体を溶血させる際に用いる溶血試薬」に含まれる「ノニオン性界面活性剤」として、「ＰＯＥ（ｎ）ドデシルエーテル」、「ＰＯＥ（ｎ）セチルエーテル」、「ＰＯＥ（ｎ）ステアリルエーテル」、「ＰＯＥ（ｎ）オレイルエーテル」が、「ポリエチレングリコールモノ－４－オクチルフェニルエーテル（トリトンＸ－１００、東京化成社製）」である「ＰＯＥ（ｎ）オクチルフェニルエーテル」とともに、「単独でもまた複数混合して用い」ることができる旨記載されているが、「オキシエチレン基の平均付加モル数が１２であるポリオキシエチレンラウリルエーテル」は記載されていない。 ｂ　技術事項２には、「ノニオン性界面活性剤を含有する溶血試薬」の「ノニオン性界面活性剤」として「オキシエチレン基の平均付加モル数が１２であるポリオキシエチレンラウリルエーテル」を含む「ポリオキシエチレンラウリルエーテル（オキシエチレン単位７～１２のもの）」が挙げられており、技術事項２の「溶血試薬」は、「糖化タンパク質を検出するための酵素が有する活性を阻害しないもの」であるが、「糖化タンパク質を検出するための酵素が有する活性を阻害しない」「ノニオン性界面活性剤」の内の「オキシエチレン基の平均付加モル数が１２であるポリオキシエチレンラウリルエーテル」が、陽イオン交換液体クロマトグラフィーによりヘモグロビン類を測定するために用いられるヘモグロビン類測定用試薬に含まれる場合においてどの程度の効果を有するか、実際に実施してみないと予測することができないという、出願時の技術常識を考慮すると、引用発明’のヘモグロビン類測定用試薬に含まれる非イオン性界面活性剤として、技術事項２の「ポリオキシエチレンラウリルエーテル（オキシエチレン単位７～１２のもの）」の内のオキシエチレン基の平均付加モル数が１２であるものを適用することは、当業者が容易に想到できたことであるとはいえないし、仮に、適用できたとしても、陽イオン交換液体クロマトグラフィーによりヘモグロビン類を測定する際に格別顕著な効果を得られることを、当業者が予測し得たとは到底認められない。 ｃ　技術事項３の「成分測定方法が対象とする目的成分」である「ＨｂＡ１ｃ」を「測定する」ために「全血検体」を「希釈する」ための「溶液」に含まれる「界面活性剤」として例示されている「エマルゲン１２０」は、「オキシエチレン基の平均付加モル数が１２であるポリオキシエチレンラウリルエーテル」であり、技術事項４の「赤血球を溶解する能力が高い非イオン性界面活性剤であ」るポリオキシエチレンアルキルエーテル（ＥＯ＝１３～２２）型の非イオン性界面活性剤である界面活性剤Ｂ」には、「オキシエチレン基の平均付加モル数が１２であるポリオキシエチレンラウリルエーテル」が含まれ、引用文献５には、「アルキル鎖の長さが12の場合、溶血活性は、オキシエチレン数が9～15の非イオン性界面活性剤で最大」となる旨記載されており、「オキシエチレン数が9～15の非イオン性界面活性剤」は、「オキシエチレン基の平均付加モル数が１２であるポリオキシエチレンラウリルエーテル」が含まれているが、引用文献３～５に記載された非イオン性界面活性剤を含む溶液は、溶血性能が良い旨記載されているものの、陽イオン交換液体クロマトグラフィーによりヘモグロビン類を測定するために用いられるヘモグロビン類測定用試薬において使用する場合の記載はないから、上記ｂと同様に、引用発明’のヘモグロビン類測定用試薬に含まれる非イオン性界面活性剤として、技術事項３、４及び引用文献５に記載された非イオン性界面活性剤を適用することは、当業者が容易に想到できたことであるとはいえないし、仮に、適用できたとしても、陽イオン交換液体クロマトグラフィーによりヘモグロビン類を測定する際に格別顕著な効果を得られることを、当業者が予測し得たとは到底認められない。 ｄ　したがって、本件発明１は、引用発明’、引用文献１及び５に記載された技術事項、技術事項２～４に基づいて、当業者が容易に発明することができたものではない。 イ　本件発明５及び６について 本件発明５は、本件発明１の「ヘモグロビン類測定用試薬」において、「前記非イオン性界面活性剤の含有量が、０．０１重量％以上１．０重量％以下である」旨の限定を加えたものであって、本件発明６は、「赤血球含有検体と」、本件発明１又は５の「ヘモグロビン類測定用試薬とを混合して混合液を得る工程と、前記混合液を陽イオン交換液体クロマトグラフィーにより測定する工程とを備える、ヘモグロビン類の測定方法」としたものであり、何れの発明も上記相違点を有しているから、上記アと同様の理由により、本件発明５及び６は、引用発明’、引用文献１及び５に記載された技術事項、技術事項２～４に基づいて、当業者が容易に発明することができたものではない。 （３）特許異議申立人の意見について 申立人は、令和３年２月９日に提出した意見書において、ヘモグロビン類の測定を高精度で行う場合に、赤血球中のヘモグロビンを可溶化する必要があることは技術常識であるから、良好な溶血性能を示す非イオン性界面活性剤であれば、陽イオン交換液体クロマトグラフィーによりヘモグロビン類を測定する際においても効果があることは、当業者であれば容易に予測できるものであるから、本件発明は、引用文献１～５から容易に想到できるものである旨主張している。 しかしながら、上記（２）において検討したとおり、特定の非イオン性界面活性剤が、陽イオン交換液体クロマトグラフィーによりヘモグロビン類を測定するために用いられるヘモグロビン類測定用試薬に含まれる場合においてどの程度の効果を有するか、実際に実施してみないと予測することができないという、出願時の技術常識を考慮すると、引用文献２～５に記載された非イオン性界面活性剤が良好な溶血性能を示すとしても、この非イオン性界面活性剤が陽イオン交換液体クロマトグラフィーによりヘモグロビン類を測定するために用いられるヘモグロビン類測定用試薬に含まれる場合において、格別顕著な効果を得られることを、当業者が予測し得たとは到底認められないから、本件発明は、引用文献１～５から容易に想到できるものであるとはいえない。 第５　取消理由通知（決定の予告）において採用しなかった特許異議申立理由について 申立人は、特許異議申立書において、訂正前の特許請求の範囲に関し、請求項１、３及び６に係る発明は、甲１～３号証に記載の発明であって特許法２９条１号３号に該当し、特許法２９条１項に規定に違反してされたものであり、請求項１～６に係る発明は、甲２～７号証に記載された発明に基づいて、当業者が容易に想到できたものであるから、特許法２９条２項の規定に違反してされたものである旨も主張している。 しかしながら、上記第４の３（２）で検討したとおり、本件発明１及び６と甲１号証である上記引用文献１に記載された発明である引用発明’とを対比すると上記相違点で相違し、該相違点に係る構成は引用文献１にも、甲２及び３号証にも記載されていないから、本件発明１及び６は、甲１～３号証に記載された発明であるとはいえず、また、甲２及び３号証に記載された発明と本件発明１、５及び６とは、上記相違点で相違するから、甲２及び３号証に記載された発明からも、当業者が容易に想到できたものであるともいえない。 したがって、申立人のかかる主張は、採用することができない。 第６　むすび 以上のとおりであるから、取消理由通知（決定の予告）に記載した取消理由及び特許異議申立書に記載した特許異議申立理由によっては、本件請求項１、５及び６に係る特許を取り消すことはできない。さらに、他に本件請求項１、５及び６に係る特許を取り消すべき理由を発見しない。 また、請求項２～４に係る特許は、上記のとおり、訂正により削除された。これにより、申立人による特許異議の申立てについて、請求項２～４に係る申立ては、申立ての対象が存在しないものとなったため、特許法第１２０条の８第１項で準用する同法第１３５条の規定により却下する。 よって、結論のとおり決定する。