2025-002403

本願は、２０１８年（平成３０年）１２月６日（パリ条約による優先権主張外国庁受理 ２０１７年１２月６日、米国 ２０１８年５月４日、米国、２０１８年６月２９日、米国、２０１８年１２月３日、米国）を国際出願日とする特願２０２０－５３１１３２号の一部を、令和５年５月２５日に新たな特許出願としたものであって、同年６月２６日に上申書の提出とともに手続補正がなされ、令和６年４月２日付けの拒絶理由の通知に対し、同年７月９日に意見書の提出とともに手続補正がなされたが、同年１０月３日付けで拒絶査定がなされ、これに対して令和７年２月１７日に拒絶査定不服審判の請求がなされたものである。

ア 引用文献１の記載事項

原査定の拒絶の理由で引用され、本願の最先の優先権主張の日前の２０１６年１１月２４日に電気通信回線を通じて公衆に利用可能となった引用文献である、HUMAN SOLUBLE ALPHA KLOTHO (A-KLOTHO) ELISA，Immuno-Biological Laboratories, Inc.，，https://www.ibl-america.com/klotho-alpha-human-soluble/（以下「引用文献１」という。）には、以下の記載事項がある。なお、括弧内に当審による翻訳文を記載するとともに、引用発明の認定等に用いた箇所に下線を付した。

（ア）「Solid phase sandwich ELISA for the determination of human soluble Alpha Klotho (α-Klotho) in serum and EDTA-plasma. For research use only, not for use in diagnostic procedures.」

（血清およびＥＤＴＡ血漿中のヒト可溶性アルファクロトー（α－クロトー）を測定するための固相サンドイッチＥＬＩＳＡ。研究用のみ。診断手順での使用は不可。）

（イ）「α-Klotho is a key player that integrates a multi-step regulatory system of calcium metabolism and phosphate homeostasis. α-klotho was identified as an extremely down-regulated gene in the genetic mutation mouse (Klotho mouse) of which phenotype is very similar to various symptoms of human aging. 」

（α－クロトーは、カルシウム代謝とリン酸恒常性の多段階調節システムを統合する重要な役割を果たす。α－クロトーは、遺伝子変異マウス（クロトーマウス）において極度の発現抑制遺伝子として同定され、その表現型はヒトの老化のさまざまな症状と非常に類似する。）

（ウ）「Assay Description: 1 hour incubation(RT)+30 min.(RT)+30 min.(RT)=2 hours total incubation time」

（試験方法： １時間（室温）＋３０分（室温）＋３０分（室温）のインキュベーション＝合計２時間のインキュベーション時間）

（エ）「Catalog number: 27998」

（カタログ番号： ２７９９８）

（オ）「design: Solid phase sandwich ELISA using 2 kinds of highly specific antibodies」

（設計： ２種類の高特異性抗体を用いた固相サンドイッチＥＬＩＳＡ）

（カ）「Sample types: Serum, plasma (EDTA, Heparin, Citrate), urine and cell culture supernatant」

（検体種別: 血清、血漿（ＥＤＴＡ、ヘパリン、クエン酸塩）、尿、細胞培養上清）

（キ）「Sample volume: 100 μL of properly diluted unknown / determination」

（試料量： １００μＬの適切に希釈した未知試料／測定試料）

（ク）「Standards: 8 standards, serially diluted from 1 prepared lyophilized standard」

（標準液： ８種類の標準液。１種類の調整済み凍結乾燥標準液を段階的に希釈）

（ケ）「Standard range: 0 / 93.75 - 6000 pg/mL」

（標準範囲： ０／９３．７５～６０００ｐｇ／ｍＬ）

（コ）「storage: 2-8℃」

（保存温度：２～８℃）

（サ）「Species: Human」

（種： ヒト）

イ 引用文献１に記載された発明

「血清およびＥＤＴＡ血漿中のヒト可溶性アルファクロトーを測定するための固相サンドイッチＥＬＩＳＡを用いる試験方法であって、

ヒトの血清、血漿（ＥＤＴＡ、ヘパリン、クエン酸塩）を、１００μＬに適切に希釈して未知試料又は測定試料とし、１種類の調整済み凍結乾燥標準液を段階的に希釈した８種類の標準液を用い、２種類の高特異性抗体を用いた固相サンドイッチＥＬＩＳＡにより、１時間（室温）＋３０分（室温）＋３０分（室温）のインキュベーションを行う試験方法。」

ア 引用文献１１の記載事項

原査定の拒絶の理由において、クロトーたんぱく質は凍結保存に向かないものであるという技術的事項を示す文献として引用され、本願の最先の優先権主張の日前の平成２９年８月３１日に、電気通信回線を通じて公衆に利用可能となった引用文献である、特表２０１７－５２４３６２号公報（以下「引用文献１１」という。）には、図面と共に以下の記載事項がある。なお、技術的事項の認定に用いた箇所に下線を追加した。

（ア）技術分野

「【０００３】

αＫｌｏｔｈｏポリペプチド内のエピトープと特異的に、例えば、競合的ＥＬＩＳＡアッセイにより測定した場合に約２ｎＭ以下の解離定数（ＫＤ）で結合する抗体および／またはその結合フラグメント、ならびに例えば、腎臓病を診断するための前記抗体の作製方法および使用方法。」

（イ）発明の具体的説明

「【０１４９】

さらなる態様は、サンプルにおいてαＫｌｏｔｈｏポリペプチドを検出するためのアッセイであり、このアッセイは、

ａ）サンプルと本明細書に記載の抗体または結合フラグメントとを、抗体：αＫｌｏｔｈｏ複合体を形成する条件下で接触させること、および

ｂ）抗体：αＫｌｏｔｈｏ複合体を検出すること

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を含んでなる。

・・・

【０１５４】

１つの実施形態では、本方法は、例えば可溶性αＫｌｏｔｈｏを検出するためのものであり、この場合、サンプルは体液である。

【０１５５】

さらなる態様は、可溶性αＫｌｏｔｈｏを検出および／または測定する方法を含み、その方法は、

ａ）体液であるサンプルと本明細書に記載の抗体または結合フラグメントとを、抗体：可溶性αＫｌｏｔｈｏ複合体を形成する条件下で接触させること、および

ｂ）抗体：可溶性αＫｌｏｔｈｏ複合体を検出および／または測定すること

を含んでなる。

【０１５６】

検出は、定性的方法、または例えば標準もしくは標準曲線と比較することによる定量的方法を用いて測定される方法を用いて実施することができる。

【０１５７】

１つの実施形態では、体液サンプルは血液、または血清もしくは血漿などのその一部、あるいは尿である。

・・・

【０１７３】

１つの実施形態では、サンプルは、血液、または血漿もしくは血清などのその画分などの体液であり、本方法は、例えば、可溶性αＫｌｏｔｈｏを検出する。１つの実施形態では、体液は尿である。

【０１７４】

別の実施形態では、サンプルは、新鮮な体液サンプルまたは組織サンプルなどの新鮮なサンプル（例えば、凍結されていないまたは１回凍結（例えば、サンプル入手時に１回の凍結）を含む）および反復凍結サンプル（例えば、凍結および解凍ならびに凍結体液サンプルまたは反復凍結組織サンプル）から選択される。１つの実施形態では、サンプルは、固定が限定された変性および／または折り畳みの解除を誘導する軽度固定サンプルなどの固定サンプルである。

【０１７５】

１つの実施形態では、αＫｌｏｔｈｏのレベルは、本明細書に記載の抗体または結合フラグメントを用いて測定される。」

（ウ）実施例

「【０１９３】

実施例３：αＫｌｏｔｈｏアッセイおよび詳細な方法

ＥＬＩＳＡは、製造者（Ｉｍｍｕｎｏ－Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、日本）により説明されている通りに実施した。ＩＰ－ＩＢアッセイでは、一般に、５０μｌの血清または尿をＫＲＨバッファー［２５ｍＭ Ｈｅｐｅｓ－ＮａＯＨ（ｐＨ７．４）、１２０ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＫＣｌ、１．２ｍＭ ＭｇＳＯ４、１．３ｍＭ ＣａＣｌ２、１．３ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４］で希釈して最終容量０．５ｍｌとし、低結合性のシリコン処理済みチューブ中、４℃で一晩、２μｇのｓｂ１０６－Ｆａｂとともにインキュベートした。ＫＲＨバッファーで３回前洗浄した抗ＦＬＡＧ抗体（５０％ｖ／ｖ）を結合させたセファロースビーズ（５０μＬ）を加え、インキュベートした（４℃×２時間）、洗浄し（チューブ当たりＫＲＨ－５００μｌ ３回；２２℃）。免疫複合体を２×ＳＤＳサンプルローディングバッファー（５０μｌ；１００℃×３分；４℃×３分；回転）で溶出させ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥで分画し、ニトロセルロース膜に転写し、抗ＫＬ１抗体（ＫＭ２０７６、１：４０００または３．１ｍｇ／ｍＬ、１：１００００希釈）および希釈剤（Ｄａｋｏ＃Ｓ３０２２、カーピンテリア、ＣＡ、ＵＳＡ）で一晩（４℃、ロッカー）ブロットした。膜を洗浄し（３回、０．１％Ｔｗｅｅｎを含むＴｒｉｓ緩衝生理食塩水；ＴＢＳ－Ｔ）、抗ラットＩｇＧ２Ａ（ＬＳＢｉｏ ｃａｔ＃ＬＳ－Ｃ５９０５１、５％ミルク／２％ヤギ血清／ＴＢＳ－Ｔ中１：２００００×１時間）に曝し、洗浄した（３回、ＴＢＳ－Ｔ）。化学発光については、膜をＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ Ｗｅｓｔ Ｆｅｍｔｏ Ｍａｘｉｍｕｍ Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ基質（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ロックフォード、ＩＬ、ＵＳＡ）で覆い、３０～９０秒間露光した。１３０ｋＤバンドをスキャンし、Ａｄｏｂｅ Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐ ＣＳ４を用い、既知量のＫｌｏｔｈｏの内部対照サンプルと密度を比較した。

・・・

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【０１９８】

実施例７：ヒトＣＫＤにおけるαＫｌｏｔｈｏレベル

ＩＰ－ＩＢ法がＣＫＤ患者の一施設データベースからの血清αＫｌｏｔｈｏレベルを確実に決定できるかどうかを試験した。

・・・

【０２００】

ＣＫＤ診療から動員された患者の性質は、糖尿病および高血圧症が優勢であるＣＫＤの全国的特性と類似している（表１）。拡散しているものの、ＣＫＤのステージとともにαＫｌｏｔｈｏの明らかな段階的低下が見られる（図５Ａ）。血清αＫｌｏｔｈｏの低下はＣＫＤの早期に見られ、高ＦＧＦ２３、高ＰＴＨ、および高リン酸塩血症に先行した（表１）。ＩＰ－ＩＢアッセイでは、同サンプルで、市販のαＫｌｏｔｈｏ ＥＬＩＳＡキットと直接比較した（図５Ｂ）。全体的に見れば、二者の間に相関が見られるが、直線の両側に同一直線からの分離がある。新鮮サンプルでは、ＥＬＩＳＡはＩＰ－ＩＢよりも高い値を示すが（識別ライン(the line of identity)の左側のグレーの菱形、図５Ｂ）、１回以上の凍結－解凍を経たサンプルでは、ＥＬＩＳＡ値ははるかに低い（識別ラインの右側の黒い菱形、図５Ｂ）。厳密に同じサンプルが反復凍結－解凍前および後にこれらの２つの方法で試験された場合、ＩＰ－ＩＢアッセイはより安定な結果を示すが、ＥＬＩＳＡ値は急速に下降した（図５Ｃ）。

・・・

【０２０７】

ＩＰ－ＩＢアッセイのバリデーションおよび市販のＥＬＩＳＡとの比較

・・・

【０２１１】

ＩＰ－ＩＢおよび市販のＥＬＩＳＡは両方とも、ＣＫＤにおいて低い尿αＫｌｏｔｈｏを検出したが、αＫｌｏｔｈｏの絶対レベルはＥＬＩＳＡアッセイを用いた場合にはるかに高く、低下率はＩＰ－ＩＢアッセイと同じではない。ＣＫＤにおける尿αＫｌｏｔｈｏレベルの劇的な低下では、これら２つのアッセイは、量的には異なるが、同じ結論を示した。血清での状況は異なる。全体的には正の相関が見られるが、これらの２つのアッセイを比較すると、完全に２群に分離した（図５Ｂ）。新鮮サンプルは、ＥＬＩＳＡのほうが高い読み取りを示したが、保存サンプルはＥＬＩＳＡで極めて低い結果を示した。１つの可能性は、ＥＬＩＳＡがαＫｌｏｔｈｏと新鮮サンプル中の他のいくつかの反応性タンパク質を測定しているということである。ＩＰ－ＩＢアッセイは、反復凍結－解凍によりいくらか有効性を失ったが、これはＥＬＩＳＡではるかに重大な問題である。」

［図：0001435900000001.jpg］

イ 引用文献１１に記載された技術的事項

前記ア（ウ）の記載に基づけば、本願の最先の優先権主張の日前において、次の技術的事項が知られていたといえる。

「凍結－解凍を経たサンプルは、ＥＬＩＳＡやＩＰ－ＩＢにおいて可溶性αＫｌｏｔｈｏの測定値が低下する」

原査定の拒絶の理由で周知技術を示す文献として引用され、本願の最先の優先権主張の日前の２００７年８月１６日に頒布された引用文献である、米国特許出願公開第２００７／０１９０６６８号明細書（以下「引用文献３」という。）には、以下の記載事項がある。なお、括弧内に当審による翻訳文を記載するとともに、周知技術の認定に用いた箇所に下線を付した。

（ア）発明の分野

「[0002] 1. Field of the Invention

[0003] This invention relates to a homogenous immunoassay method and a system for determining specific antibody levels to a multiplicity of allergens from a blood sample, or for determining total immunoglobulins E levels in such a sample, for the purpose of diagnosing allergy.」

（［０００２］ １．発明の分野

［０００３］ 本発明は、均質イムノアッセイの方法および血液サンプルから、またはそのような試料中の全免疫グロブリンＥレベルを決定するための多数のアレルゲンに対する特異的抗体レベルを決定するためのシステムに関し、アレルギーを診断する目的のためにある。）

（イ）発明の概要

「［0017] Speaking very generally, this invention provides a method and a system for simultaneously detecting and quantifying levels of specific immunoglobulin antibodies to a plurality of allergens, using a very small sampling of blood, for the purpose of diagnosing allergy. The invention also provides a method and a system for detecting and quantifying levels of total immunoglobulin E in such a small blood sampling.

[0018] In general, the method of this invention comprises simultaneously measuring specific immunoglobin antibody levels to from 2 to about 100 allergens in a blood sample, said method comprising:

[0019] (a) collecting a blood sample of from about 10 to about 100 μL from an individual;

[0020] (b) performing a homogeneous immunoassay on the blood sample or a portion thereof, wherein the immunoassay is capable of determining specific immunoglobin antibody levels to from 2 to about 100 allergens; and

[0021] (c) determining the said specific immunoglobin antibody levels,

[0022] and the system comprises a system for simultaneously measuring a plurality of specific immunoglobin antibody levels by use of a homogeneous immunoassay, said system comprising:

[0023] (a) a plurality of particles coupled to from 2 to about 100 allergens;

[0024] (b) a first conjugate comprising an anti-human IgE or IgG antibody conjugated to a first member of a specific binding pair; and

[0025] (c) a second conjugate comprising a second specific binding pair member that binds to the first specific binding pair member; the system being capable of conducting simultaneous quantitative determination of specific immunoglobin antibody levels to from 2 to about 100 allergens, by a homogeneous immunoassay.」

（［００１７］ 非常に一般的に述べると、本発明は、アレルギー診断を目的として、微量の血液サンプルを用いて、複数のアレルゲンに対する特異的免疫グロブリン抗体のレベルを同時に検出し、定量する方法およびシステムを提供する。また、本発明は、このような微量の血液サンプル中の総免疫グロブリンＥのレベルを検出し、定量する方法およびシステムも提供する。

［００１８］ 一般に、本発明の方法は、血液サンプル中の２～約１００種のアレルゲンに対する特異的免疫グロブリン抗体レベルを同時に測定することを含み、前記方法は以下を含む：

［００１９］ （ａ) 個体から約１０～約１００μＬの血液サンプルを採取する工程；

［００２０］ （ｂ） 血液サンプルまたはその一部に対して、２～約１００種のアレルゲンに対する特異的免疫グロブリン抗体レベルを測定可能な均一系免疫アッセイを実施する工程；および

［００２１］ （ｃ） 前記特異的免疫グロブリン抗体レベルを測定する工程、

［００２２］ また、このシステムは、均質免疫アッセイを用いて複数の特異的免疫グロブリン抗体レベルを同時に測定するシステムを含み、前記システムは以下を含む：

［００２３］ （ａ) ２～約１００種のアレルゲンに結合した複数の粒子；

［００２４］ （ｂ） 特異的結合ペアの第１のメンバーに結合した抗ヒトＩｇＥ又はＩｇＧ抗体を含む第１のコンジュゲート；および

［００２５］ （ｃ） 第１の特異的結合ペアメンバーに結合する第２の特異的結合ペアメンバーを含む第２のコンジュゲート；前記システムは、均質免疫アッセイによって、２～約１００種のアレルゲンに対する特異的免疫グロブリン抗体レベルの同時定量測定を行うことができる。）

（ウ）発明の詳細な説明

「[0049] This invention provides a method and a system for detecting and quantifying specific antibodies to allergens in a blood sample of an individual, for the diagnosis of allergy. Heretofore, in vitro tests for allergy have employed immunoassay methods requiring venous draw samplings of blood to enable testing on a panel of allergens. Typically, sample requirements of current methods, to determine levels of specific antibodies against a panel of five or more allergens, are from one to three milliliters of blood. As compared to the prior art, the invention limits the sample volume requirements to ten microliters of sample or less, which can be used to test against two or more allergens, preferably against ten, twenty, forty or more allergens. The amount of sample required is sufficiently small that individuals can remotely obtain a blood sample using a fingerstick or similar procedure. The invention removes the need for obtaining blood samples by venous drawing procedures at physicians' offices, hospital laboratories or clinical reference laboratories.

[0050] In a preferred embodiment of this invention, the individual whose blood is to be tested is provided with a kit for collecting and mailing, or otherwise submitting, the blood sample. The kit typically contains one or more devices for puncturing the skin of a finger or other portion of the body (e.g., a “fingerprick” or “fingerstick” device) in order to draw some blood, an alcohol or other antiseptic swab for cleaning the area to be punctured, a vial or other small container in which the blood is to be put and sealed, and an appropriate container for mailing the blood sample to the laboratory for testing. The kit also may contain additional items such as adhesives to protect the wound, instructional inserts and labels with individual identification numbers (e.g., PIN) for samples. In any case, the exact form and contents of such a kit can vary according to the desires of the laboratory and do not form a part of this invention. Numerous components for such kits are readily available for collection and/or testing of blood (for instance, at home) for various purposes.」

［００４９］ 本発明は、アレルギーの診断のために、個人の血液サンプル中のアレルゲンに対する特異的抗体を検出し、定量化する方法およびシステムを提供する。従来、アレルギーの体外検査では、アレルゲン群の検査を可能にするために静脈から血液を採取する必要がある免疫測定法が採用されていた。通常、５種類以上のアレルゲン群に対する特異的抗体レベルを測定する現行手法の血液の検体必要量は、１～３ミリリットルである。従来技術と比較して、本発明は必要なサンプル容積を１０マイクロリットル以下に制限し、これにより２種類以上のアレルゲン、好ましくは１０、２０、４０種類以上のアレルゲンに対する検査が可能となる。必要な検体量が十分に少ないため、個人が指先穿刺法や類似の手順を用いて遠隔で血液サンプルを採取することが可能である。本発明は、診療所、病院検査室、または臨床検査室における静脈採血による血液サンプルの採取を不要とする。

［００５０］ 本発明の好ましい実施形態において、血液検査を受ける個人には、血液サンプルを採取し郵送、またはその他の方法で提出するためのキットが提供される。キットには通常、指やその他の部位の皮膚を穿刺するための装置（例えば、「フィンガープリック」又は「フィンガースティック」装置）、穿刺部位を消毒するためのアルコールまたはその他の消毒用綿棒、採取した血液を密封するためのバイアルまたはその他の小型容器、そして検査のために血液サンプルを検査室へ郵送するための適切な容器が含まれる。キットには、創傷保護用接着剤、取扱説明書、検体用個別識別番号（例えば、ＰＩＮ）ラベルなどの追加品が含まれる場合がある。いずれにせよ、当該キットの正確な形態および内容は検査室の要望に応じて異なる可能性があり、本発明の一部を構成するものではない。こうしたキット用の多数の部品は、様々な目的で血液を採取および／または検査するために（例えば家庭で）容易に入手可能である。）

原査定の拒絶の理由で周知技術を示す文献として引用され、本願の最先の優先権主張の日前の２０１１年４月２８日に電気通信回線を通じて公衆に利用可能となった引用文献である、国際公開第２０１１／０５０１１０号（以下「引用文献５」という。）には、図面と共に以下の記載事項がある。なお、括弧内に当審による翻訳文を記載するとともに、周知技術の認定に用いた箇所に下線を付した。

（ア）技術分野

「[0001] Disclosed herein are methods and systems related to sample collection, assays, and fluid control and management.」

（［０００１］ 試料収集、分析、および流体制御及び管理に関する方法及びシステムを開示する。）

（イ）詳細な説明

「[0047] Example methods and systems are disclosed herein with respect to point-of-care, user-initiated fluidic assay methods and systems, for illustrative purposes. Methods and systems disclosed herein are not, however, limited to the assay methods and systems disclosed herein. Based on the teachings herein, one skilled in the art will understand that methods and system disclosed herein may be implemented with respect to other assay systems, including diagnostic assays and chemical assays.」

（［００４７］ 例示的な方法およびシステムは、ポイントオブケア、ユーザ起動流体分析方法及びシステムに関連して本明細書で開示され、例示の目的のためのものである。本明細書に開示する方法及びシステムは、本明細書に開示される分析方法及びシステムに限定されるものではない。本明細書の教示に基づいて、当業者であれば、本明細書に開示する方法及びシステムは、他のアッセイ系、診断アッセイおよび化学的アッセイを含むに対して実施することができることを理解するであろう。）

「[0048] An immunoassay is a biochemical test to detect a substance, or measure a concentration of a substance, in a biological sample such as blood, saliva, or urine, using a reaction between an antibody and an antigen specific to the antibody.」

（［００４８］ 免疫学的測定法は、物質を検知するものや、物質の濃度を測定し、血液、唾液、尿等の生物学的サンプル中、抗体に特異的な抗体と抗原との反応を使用する生化学検査である。）

「[00193] Methods and systems to collect samples are described below with respect to FIGS. 24-27.」

（［００１９３］ サンプルを収集する方法およびシステムについて、図２４～２７を参照して以下に説明する。）

［図：0001435900000002.jpg］

「[00194] FIG. 24 is a perspective view of a sample collection system 2400, including a body 2402, a cover 2404, and a plunger 2406.」

（［００１９４］ 図２４は、試料収集システム２４００の斜視図であり、本体２４０２と、カバー２４０４と、プランジャ２４０６を備えている。）

「[00195] FIG. 25 is another perspective view of sample collection system 2400, wherein body 2402 includes a sample collection region 2502, and cover 2404 includes an inner surface 2504 sized to slideably enclose sample collection region 2502.」

（［００１９５］ 図２５は、試料収集システム２４００の他の斜視図であり、本体２４０２は、サンプル収集領域２５０２とを備えており、カバー２４０４は、サンプル収集領域２５０２をスライド可能に囲むサイズの内面２５０４が含まれている。）

「[00196] Sample collection system 2400 may include O-rings 2506 and 2508 to sealingly enclose or isolate sample collection region 2502 from an exterior environment.」

「[00198] Sample collection region 2502 may be configured to receive a sample collection pad, which may include a glass fiber pad or other material to absorb an amount of sample. The sample collection pad may be sized to hold or absorb a relatively small amount of sample, such as, for example approximately 250 micro-liters (μl) or less, which is approximately a volume of a drop of blood from a finger puncture.」

（［００１９８］ サンプル収集領域２５０２は、サンプル収集パッドを受け入れるように構成することができ、サンプル収集パッドには、一定量のサンプルを吸収するためのガラス繊維パッドまたはその他の材料を含めることができる。サンプル収集パッドは、比較的少量のサンプル、例えば、約２５０マイクロリットル（μｌ）以下（指を穿刺して採取した一滴の血液の量程度）を保持または吸収できるサイズにすることができる。）

「[00203] In FIG. 26A, a finger 2600 is lanced to expel a drop of blood 2602 to a blood collection pad 2604 within sample collection region 2502 of FIG. 25. Finger 2600 is subsequently withdrawn from sample collection region 2502 and cover 2404 is slid over sample collection region 2502.」

（［００２０３］ 図２６Ａでは、指２６００を穿刺し、図２５のサンプル収集領域２５０２内の血液収集パッド２６０４に血液２６０２を一滴排出する。その後、指２６００をサンプル収集領域２５０２から引き抜き、カバー２４０４をサンプル収集領域２５０２の上にスライドさせる。）

「[00204] In FIG. 26B, plunger 2406 is pushed towards a fluid passage 2606. Fluid 2608 within fluid chamber 2614 is forced into a fluid passage 2616 to entry lumen 2510. The fluid flows through sample collection pad 2604, where it mixes with or dislodges blood from sample 2602. Resultant blood containing fluid exits sample collection region 2502 through exit lumen 2512, and passes through a fluid passage 2618 to fluid passage 2606, from where it can exit the sample collection system 2400, such as for assay and/or storage.」

（［００２０４］ 図２６Ｂでは、プランジャー２４０６が流体通路２６０６に向かって付勢されている。流体室２６１４内の流体２６０８は、流体通路２６１６を通って入口管腔２５１０に押し出される。液体はサンプル収集パッド２６０４を通過し、そこでサンプル２６０２において、血液が混合又は除去される。得られた血液を含む流体は、出口管腔２５１２を通ってサンプル収集領域２５０２から排出され、流体通路２６１８を通過して流体通路２６０６に送られ、そこから分析および／または保管のためにサンプル収集システム２４００から排出される。）

原査定の拒絶の理由で周知技術を示す文献として引用され、本願の最先の優先権主張の日前の２０１７年１１月３０日に頒布され、又は、電気通信回線を通じて公衆に利用可能となった引用文献である、米国特許出願公開第２０１７／０３４３４６６号明細書（以下「引用文献６」という。）には、以下の記載事項がある。なお、括弧内に当審による翻訳文を記載するとともに、周知技術の認定に用いた箇所に下線を付した。

（ア）発明の概要

「[0003] Provided herein are systems, detection methods, and kits for assaying multiple antigens, analytes or other microparticulates from patient samples. In one embodiment, provided herein is a system for detecting analytes in a sample comprising: one or more housing units; a bead array, wherein the bead array comprises at least one detection bead labelled with a detectable signal and a capture probe attached to the detection bead surface and wherein the bead array is capable of detecting more than two analytes in a sample; an analyte detection molecule; a fluidic chip, the fluidic chip incorporating at least one microfluidic channel that one or more detection beads flows through within the fluidic chip; a detection window incorporated in one of the one or more housings, the detection window being operable to facilitate the capture of one or more images of one or more detection beads flowing within the detection window; and a detection module, the detection module comprising an optical imaging system and software for image analysis, that allows communication to and from a central database.」

（［０００３］ 本明細書では、患者のサンプルから複数の抗原、分析対象物、またはその他の微粒子を分析するためのシステム、検出方法、およびキットが提供される。一実施形態では、本明細書では、サンプル中の分析対象物を検出するためのシステムが提供され、このシステムは、１つ以上のハウジングユニットと、検出可能な信号で標識された少なくとも１つの検出ビーズと、検出ビーズ表面に付着した捕捉プローブとを含み、サンプル中の２つ以上の分析対象物を検出することができるビーズアレイと、分析対象物検出分子と、流体チップと、流体チップ内を１つ以上の検出ビーズが流通する少なくとも１つのマイクロ流体チャネルとを組み込んだ流体チップと、１つ以上のハウジングの１つに組み込まれた検出ウィンドウと、検出ウィンドウ内を流通する１つ以上の検出ビーズの１つ以上の画像の捕捉を容易にするように動作可能な検出モジュールと、中央データベースとの通信を可能にする光学画像システムおよび画像解析用ソフトウェアとを含む検出モジュールとを備える。）

「[0010] In some embodiments, all reagents required for the test are supplied and sealed in the cartridge. In further embodiments, the reagents are dried in the cartridge or device. In further embodiments, the reagents are lyophilized. In further embodiments, the reagents on the cartridge have a shelf life of at least 12 months at 0℃. to 40℃., at least 12 months at 10℃. to 40℃., at least 12 months at 10℃. to 30℃., at least 12 months at 20℃. to 30℃., at least 12 months at 10℃., at least 12 months at 20℃., at least 12 months at 30℃., at least 12 months at 40℃. In further embodiments, the reagents on the apparatus have a shelf life of at least 48 hours with fluctuations between 0℃. and 50℃. In some embodiments, the cartridge holds a maximum volume of 50 microliters. In other embodiments, the cartridge holds a maximum volume of 10 microliters to 50 microliters. In yet other embodiments, the cartridge holds a maximum volume of 20 microliters to 40 microliters. In still other embodiments, the cartridge holds a maximum volume of 25 microliters to 30 microliters. In some embodiments, the cartridge requires a minimum of 2 microliters for analysis. In some embodiments the cartridge requires a minimum of 2 microliters to 15 microliters for analysis. In some embodiments, the cartridge requires a minimum of 2 microliters to 10 microliters for analysis. In some embodiments, the cartridge requires a minimum of 2 microliters to 5 microliters for analysis. In some embodiments, the cartridge has a system for metering the amount of blood to be analyzed.」

（［００１０］ いくつかの実施形態では、試験に必要な全ての試薬は、カートリッジ内に供給され、封止されている。さらなる実施形態では、試薬は、カートリッジまたは装置の中で乾燥される。さらなる実施形態では、試薬を凍結乾燥する。さらなる実施形態では、カートリッジ上の試薬の保存期間は、０℃～４０℃で少なくとも１２ヶ月間、１０℃～４０℃で少なくとも１２ヶ月間、１０℃～３０℃で少なくとも１２ヶ月間、２０℃～３０℃で少なくとも１２ヶ月間、１０℃で少なくとも１２ヶ月間、２０℃で少なくとも１２ヶ月間、３０℃で少なくとも１２ヶ月間、４０℃で少なくとも１２ヶ月間である。さらなる実施形態では、装置上の試薬は、０℃から５０℃の間で変動する条件下で少なくとも４８時間の保存期間を有する。いくつかの実施形態では、カートリッジは最大５０マイクロリットルの容量を保持する。他の実施形態では、カートリッジは最大１０マイクロリットルから５０マイクロリットルの容量を保持する。さらに他の実施形態では、カートリッジは、最大２０マイクロリットル～４０マイクロリットルの容量を保持する。さらに他の実施形態では、カートリッジは、最大２５マイクロリットル～３０マイクロリットルの容量を保持する。いくつかの実施形態では、カートリッジは分析に最低２マイクロリットルを必要とする。いくつかの実施形態では、カートリッジは分析のために最低２マイクロリットルから１５マイクロリットルを必要とする。いくつかの実施形態では、カートリッジは分析のために最低２マイクロリットルから１０マイクロリットルを必要とする。いくつかの実施形態では、カートリッジは分析のために最低２マイクロリットルから５マイクロリットルを必要とする。いくつかの実施形態では、カートリッジは分析される血液の量を計測するためのシステムを有する。）

（イ）流体チップ

「[0034] In some embodiments, the systems, methods, and kits described herein include fluidic chip, or use of the same. In further embodiments, the fluidic chip may be a fluidic cartridge, a microfluidic cartridge, a fluidic cartridge, a microfluidic cartridge, a microfluidic chip, or some other applicable element. ・・・」

（［００３４］ いくつかの実施形態において、本明細書に記載のシステム、方法、およびキットは、流体チップの使用を含む。さらなる実施形態では、流体チップは、流体カートリッジは、マイクロ流体カートリッジの流体カートリッジ、マイクロ流体チップ、または他の適用可能な素子であってもよい。・・・）

「[0035] In some embodiments, the fluidic chip may incorporate one or more areas, such as a sample loading compartment, a mixing chamber, a reaction chamber, a fluidic channel, an analysis chamber, and a waste collection chamber. In further embodiments, the fluidic chip may contain a sample loading compartment, where the sample is transferred by pipette into a port. In further embodiments, the sample loading compartment is treated with EDTA. In some embodiments, the cartridge accommodates a blood sample, for example from a finger prick collected using a pipette. In some embodiments, from about 1 to about 100 microliters, from about 1 to about 50 microliters, from about 1 to about 25 microliters, from about 1 microliters, from about 5 microliters, from about 10 microliters, from about 15 microliters, from about 20 microliters, from about 25 microliters, from about 30 microliters, from about 35 microliters, from about 40 microliters, from about 45 microliters, from about 50 microliters, from about 55 microliters, from about 60 microliters, from about 65 microliters, from about 70 microliters, from about 75 microliters, from about 80 microliters, from about 85 microliters, from about 90 microliters, from about 95 microliters, from about 100 microliters will be transferred to the microfluidic cartridge using the pipette. In another embodiment, the microfluidic cartridge can have a sample collection port where a blood sample, for example from a finger prick, can be directly collected and loaded on to the cartridge.」

（［００３５］ いくつかの実施形態では、流体チップは、１つ以上の領域、試料充填室、混合室、反応室、流体チャネル、分析チャンバ、および廃棄物収集室を組み込んでもよい。さらなる実施形態では、流体チップは、サンプル添加区画は、サンプルをピペットへ転送される場合を含んでもよい。さらなる実施形態において、試料液装填室がＥＤＴＡで処理される。いくつかの実施形態では、カートリッジは、ピペットを使用して集められた指穿刺血液サンプルを収容している。いくつかの実施形態では、約１～約１００マイクロリットル、約１～約５０マイクロリットル、約１～約２５マイクロリットル、約１マイクロリットル、約５マイクロリットル、約１０マイクロリットル、約１５マイクロリットル、約２０マイクロリットル、約２５マイクロリットル、約３０マイクロリットル、約３５リットル、約４０マイクロリットル、約４５マイクロリットル、約５０マイクロリットル、約５５マイクロリットル、約６０マイクロリットル、約６５マイクロリットル、約７０から約７５マイクロリットル、約８０マイクロリットル、約８５マイクロリットル、約９０マイクロリットル、約９５マイクロリットル、約１００マイクロリットルピペットを使用して微小流体カートリッジに移される。別の実施形態では、微小流体カートリッジは、例えば指を刺すことにより、血液サンプルを直接カートリッジに収集および挿入可能なサンプル回収ポートを有することができる。）

原査定の拒絶の理由で周知技術を示す文献として引用され、本願の最先の優先権主張の日前の１９８２年２月２日に頒布された引用文献である、米国特許第０４３１３９２７号明細書（以下「引用文献７」という。）には、以下の記載事項がある。なお、括弧内に当審による翻訳文を記載するとともに、周知技術の認定に用いた箇所に下線を付した。

（ア）第１欄第８～１９行 発明の背景

「1. Field of the Invention

This invention relates to immunoassay methods for detecting the presence of antibodies to viral antigens in test samples derived from human blood. The detection of viral antibodies in a patient's blood is indicative of past or current viral infection. Such information can be of great clinical value, particularly in prenatal screens to determine risks from infections due to such viral agents as cytomegalovirus, Rubella virus, herpesvirus, and the like or to determine success obtained with vaccinations against viral diseases such as measles, Rubella, mumps, polio and the like.」

（１．発明の分野

本発明は、ヒト血液由来の試験サンプル中のウイルス抗原に対する抗体の存在を検出するためのイムノアッセイ法に関する。患者の血中におけるウイルス抗体の検出は、過去又は現在の感染を示す。このような情報は、大きな臨床的価値、特に出生前スクリーニングサイトメガロウイルス、風疹ウイルス、ヘルペスウイルスなどのウイルス因子による感染からの危険性を決定するために、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、ポリオウイルス等のようなウイルス性疾患に対するワクチン接種で得られた成功を決定するためのものとすることもできる。）

（イ）第２欄第３７～５６行 発明の概要

「 It has now been discovered that the prior art indirect, solid-phase immunoassays for detecting viral antibodies can be applied directly to whole human blood samples. The qualitative and quantitative results using whole blood samples are virtually the same as those using serum samples as required by the prior art. In accordance with the present invention, the test sample employed in the assay is whole human blood diluted at least 1:20 by volume with an isotonic (i.e., having the same osmotic pressure as human blood) aqueous solution. Whole blood samples can be obtained by a simple finger prick or by conventional venipuncture and the assay run on the diluted sample without removal of red blood cells. The present assay is particularly applicable to the detection of antibodies to cytomegalovirus and/or Rubella antigens. Antibodies of various immune globulin classes, including IgG and IgM particularly, can be detected. Any conventional label may be used, including radioactive and enzyme labels.」

（ ウイルス抗体を検出するための従来の間接固相免疫測定法が、ヒトの全血サンプルに直接適用できることが発見された。全血サンプルを使用した定性的および定量的結果は、従来技術で要求されている血清サンプルを使用した場合と実質的に同じである。本発明によれば、アッセイに用いられる試験サンプルは、等張性（すなわち、ヒトの血液と同じ浸透圧を有する）水溶液で少なくとも１：２０の体積に希釈されたヒトの全血である。全血サンプルは、指先を刺すだけの簡単な操作又は従来の静脈穿刺によって採取することができ、赤血球を除去せずに希釈サンプルで検査を実施する。本発明のアッセイは、特にサイトメガロウイルスおよび／または風疹の抗原に対する抗体の検出にも適用可能である。特にＩｇＧおよびＩｇＭを含むさまざまな免疫グロブリンクラスの抗体を検出できる。放射性ラベルや酵素ラベルなど、従来のラベルも使用できる。）

（ウ）第５欄第３２～４８行 実施例６

「Radioimmunoassay for CMV Antibody in Finger Prick Whole Human Blood

Approximately 10 microliters (μｌ) of finger prick blood were diluted with 0.5 ml PBS (described in Example 1) containing 1% bovine serum albumin (approximately a 1:50 dilution). A 0.2 ml aliquot of the diluted sample was added to a CMV antigen coated tube (prepared as in Example 3) and incubated 1 hour at 37℃. After aspirating the sample by vacuum, the tube was washed twice with approximately 3 ml PBS. A 0.2 ml volume of 125I-anti-human IgG (300,000 counts per minute; prepared as in Example 5) in PBS containing 1% bovine serum albumin was added to the tube and incubated 1 hour at 37℃. After aspirating the liquid by vacuum, the tube was washed twice with approximately 3 ml PBS. The radioactivity remaining in the tube was measured in a gamma-counter.」

（フィンガープリックヒト全血中ＣＭＶ抗体の放射免疫測定法

約１０マイクロリットル(μｌ)のフィンガープリックの血液を、１％ウシ血清アルブミン（約１：５０希釈）を含む０．５ｍｌのＰＢＳ(実施例１に記載)で希釈した。希釈したサンプルの０．２ｍｌの画分を、ＣＭＶ抗原コートチューブ（実施例３と同様に調製）に添加し、３７℃で１時間インキュベートした。サンプルを真空により吸引した後、管を約３ｍｌのＰＢＳで２回洗浄した。１％ウシ血清アルブミンを含むＰＢＳ中の１２５Ｉ抗ヒトＩｇＧ（３００，０００カウント／分、実施例５と同様に調製）０．２ｍｌをチューブに加え、３７℃で１時間インキュベートした。真空により液体を吸引した後、管を約３ｍｌのＰＢＳで２回洗浄した。チューブ内に残った放射能をガンマカウンターで測定した。）

原査定の拒絶の理由で周知技術を示す文献として引用され、本願の最先の優先権主張の日前の２０１５年に電気通信回線を通じて公衆に利用可能となった引用文献である、Jasna Lenicek Krleza，Capillary blood sampling: national recommendations on behalf of the Croatian Society of Medical Biochemistry and Laboratory Medicine，Biochemia Medica，2015年，Vol.25 No.3，Page.335-358（以下「引用文献８」という。）には、以下の記載事項がある。なお、括弧内に当審による翻訳文を記載するとともに、周知技術の認定に用いた箇所に下線を付した。

（ア）要約

「Capillary blood sampling is a medical procedure aimed at assisting in patient diagnosis, management and treatment, and is increasingly used worldwide, in part because of the increasing availability of point-of-care testing. It is also frequently used to obtain small blood volumes for laboratory testing because it minimizes pain. The capillary blood sampling procedure can influence the quality of the sample as well as the accuracy of test results, highlighting the need for immediate, widespread standardization. A recent nationwide survey of policies and practices related to capillary blood sampling in medical laboratories in Croatia has shown that capillary sampling procedures are not standardized and that only a small proportion of Croatian laboratories comply with guidelines from the Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI) or the World Health Organization (WHO). The aim of this document is to provide recommendations for capillary blood sampling. This document has been produced by the Working Group for Capillary Blood Sampling within the Croatian Society of Medical Biochemistry and Laboratory Medicine. Our recommendations are based on existing available standards and recommendations (WHO Best Practices in Phlebotomy, CLSI GP42-A6 and CLSI C46-A2), which have been modified based on local logistical, cultural, legal and regulatory requirements. We hope that these recommendations will be a useful contribution to the standardization of capillary blood sampling in Croatia.」

（毛細管血液サンプリングは、患者の診断、管理、治療を支援することを目的とした医療処置であり、ポイントオブケア検査の利用可能性が高まっていることもあって、世界中でますます使用されている。また、痛みを最小限に抑えられるため、臨床検査のために少量の血液を採取するのにもよく使用される。毛細血管採血手順は検体の質と検査結果の正確性に影響を及ぼすため、即時かつ広範な標準化の必要性が強調されている。クロアチアの医療検査室における毛細血管採血に関連する方針と実施状況に関する最近の全国調査では、毛細血管採血手順が標準化されておらず、クロアチアの検査室のうち臨床検査標準化機構（ＣＬＳＩ）または世界保健機関（ＷＨＯ）のガイドラインに準拠しているのはごく一部であることが明らかになった。この文書の目的は、毛細血管血液採取に関する推奨事項を提供することである。この文書は、クロアチア医学生化学および臨床検査医学会内の毛細管血液サンプリング作業部会によって作成された。我々の推奨事項は、既存の入手可能な基準及び推奨事項（ＷＨＯ採血優良事例、ＣＬＳＩ ＧＰ４２－Ａ６及びＣＬＳＩ Ｃ４６－Ａ２）に基づき、現地の物流、文化、法的および規制上の要件に応じて修正を加えたものである。これらの推奨事項がクロアチアにおける毛細管血液サンプル採取の標準化に役立つことを期待する。）

（イ）第３３５頁左欄第１～３行 序論

「Capillary blood sampling, which refers to sampling blood from a puncture on the finger, heel or an earlobe, is increasingly common in medicine.」

（毛細血管採血は、指、かかと、または耳たぶの穿刺から血液を採取することを指し、医療の分野でますます一般的になりつつある。）

原査定の拒絶の理由で周知技術を示す文献として引用され、本願の最先の優先権主張の日前の２０１３年６月３０日に電気通信回線を通じて公衆に利用可能となったウェブサイトである、CRCグループＴＯＰ ＞ シー・アール・シー ＞ よくある検査のご質問 ＞ 質問 採血後、全血のまま保，CRC CORPORATION，https://web.archive.org/web/20130630024235/http://www.crc-group.co.jp/crc/q_and_a/149.html（以下「引用文献１２」という。）には、以下の記載事項がある。なお、技術常識の認定に用いた箇所に下線を付した。

（ア）回答 第１～５行

「採血後、できるだけ速やかに検査することが原則ですが、やむを得ず保存する場合は適切な環境下で保存します。多くの場合血液は血清（血漿）の凍結保存が最も安定していることから、検体採取後、速やかに血清（血漿）分離し、凍結保存します。ただし、やむを得ず保存する場合は通常の生化学検査では常温で保存します。」

（イ）採血した検体の取り扱い

「（２）抗凝固剤など添加物入り全血:測定まで４～１０℃下で保存します。」

原査定の拒絶の理由で周知技術を示す文献として引用され、本願の最先の優先権主張の日前の２０１１年に電気通信回線を通じて公衆に利用可能となったウェブサイトである、ご提出材料の保存条件見直しのお知らせ，株式会社エスアールエル，2011年，https://www.srl.info/srlinfo/srlnews/2011/2011-27.html（以下「引用文献１３」という。）には、以下の記載事項がある。なお、周知技術の認定に用いた箇所に下線を付した。

「弊社ではご提出時の保存条件を、従来は「凍結」を基本としておりましたが、検査データへの影響を改めて検討いたしました結果、「冷蔵」を標準的な保存条件とさせて頂きました。」