2024-004249

特願２０２０－５５９６４７「脳梗塞発症リスク予測方法」拒絶査定不服審判事件〔令和 ２年 ６月１８日国際公開、ＷＯ２０２０／１２１４８９〕について、次のとおり審決する。

結 論 本件審判の請求は、成り立たない。

理 由 第１ 手続の経緯 本願は、２０１８年（平成３０年）１２月１３日を国際出願日とする特許出願であって、その後の手続の概要は以下のとおりである。 令和３年 ６月 ８日提出：上申書・手続補正書 令和４年 ５月２５日付け：拒絶理由通知書 同年 ８月２５日提出：意見書・手続補正書 同年１２月１９日付け：拒絶理由通知書 令和５年 ５月１０日提出：意見書・手続補正書 同年 ７月２４日付け：拒絶理由通知書 同年１０月 ６日提出：意見書 同年１２月 ５日付け：拒絶査定 令和６年 ３月１１日提出：審判請求書 同年 ５月 １日提出：（審判請求書に対する）手続補正書 第２ 本願発明 本願の請求項１に係る発明は、令和５年５月１０日に提出された手続補正書により補正された特許請求の範囲の請求項１に記載された事項により特定されるものと認められるところ、その請求項１に係る発明（以下、「本願発明」という。）は、以下のとおりである。 「 【請求項１】 脳梗塞未発症の被験者由来のサンプルにおけるＲＮＦ２１３ ｐ．Ｒ４８１０Ｋ遺伝子多型の有無を検出する検出ステップと、 前記検出ステップにおけるＲＮＦ２１３ ｐ．Ｒ４８１０Ｋ遺伝子多型の有無により、当該被験者の脳梗塞発症リスクが高いか否かを判定する判定ステップと、 を含み、 前記検出ステップにおいて、前記ＲＮＦ２１３ ｐ．Ｒ４８１０Ｋ遺伝子多型が検出された場合、前記判定ステップにおいて、前記ＲＮＦ２１３ ｐ．Ｒ４８１０Ｋ遺伝子多型を有する当該被験者は、前記ＲＮＦ２１３ ｐ．Ｒ４８１０Ｋ遺伝子多型を有しない者に比べて、頭蓋内前方循環動脈狭窄によるアテローム血栓性脳梗塞発症のリスクが高く且つ発症の年齢が低いと判断する、脳梗塞未発症の被験者の脳梗塞発症リスクを予測する方法。」 第３ 原査定における拒絶の理由 本願発明に対する原査定の拒絶の理由は、本願の出願前に日本国内又は外国において、頒布された又は電気通信回線を通じて公衆に利用可能となった下記の引用文献４に記載された発明及び引用文献５に記載された技術的事項に基づいて、その出願前にその発明の属する技術の分野における通常の知識を有する者が容易に発明をすることができたものであるから、特許法第２９条第２項の規定により特許を受けることができない、というものである。 ＜引用文献等一覧＞ ４：PLOS ONE，2016年，11(6): e0156607 ５：J. Stroke Cerebrovasc. Dis.，2017年，Vol. 26, No. 11，pp.2638-2644 第４ 当審の判断 １ 引用文献の記載事項及び引用発明並びに引用文献記載の知見 （１）引用文献４及び引用発明 ア 引用文献４の記載事項 原査定の拒絶の理由で引用文献４として引用された、本願出願前に、頒布された又は電気通信回線を通じて公衆に利用可能となったPLOS ONE，2016年，11(6): e0156607には、次の事項が記載されている（下線は当審で付した。以下同様。）。 （引４－ア） 「Abstract Background Both intracranial atherosclerotic stenosis (ICAS) and moyamoya disease (MMD) are prevalent in Asians. We hypothesized that the Ring Finger protein 213 gene polymorphism (RNF213), a susceptibility locus for MMD in East Asians, is also a susceptibility gene for ICAS in patients whose diagnosis had been confirmed by conventional angiography (absence of basal collaterals) and high-resolution MRI (HR-MRI, presence of plaque). ・・・ Results Based on angiographic and HR-MRI findings, 234 patients were diagnosed with ICAS and 288 with MMD. The RNF213 variant was observed in 50 (21.4%) ICAS patients and in 119 (69.1%) MMD patients. The variant was observed in 25.2% of patients with HR-MRI-confirmed ICAS. Similarly, 15.8% of ICAS patients in whom MMD was excluded by angiography had this variant. Among the ICAS patients, RNF213 variant carriers were younger and more likely to have a family history of MMD than non-carriers were. Multivariate testing showed that only the age of ICAS onset was independently associated with the RNF213 variant (odds ratio, 0.97; 95% CI, 0.944-0.99). Conclusions RNF213 is a susceptibility gene not only for MMD but also for ICAS in East Asians. Further studies are needed on RNF213 variants in ICAS patients outside East Asian populations.」（１頁） （当審訳：要約 頭蓋内動脈硬化性狭窄（ＩＣＡＳ）ともやもや病（ＭＭＤ）はいずれもアジア人に多くみられる。我々は、東アジア人におけるＭＭＤの感受性遺伝子座であるリングフィンガータンパク質２１３遺伝子多型（ＲＮＦ２１３）が、従来の血管造影（基底側副血行路の欠如）および高分解能ＭＲＩ（ＨＲ－ＭＲＩ、プラークの存在）によって診断が確定した患者におけるＩＣＡＳの感受性遺伝子でもあるという仮説を立てた。 ・・・ 結果 血管造影および高解像度ＭＲＩ所見に基づき、２３４例の患者がＩＣＡＳと診断され、２８８例がＭＭＤと診断された。ＲＮＦ２１３多型はＩＣＡＳ患者５０例（２１．４％）およびＭＭＤ患者１１９例（６９．1％）に認められた。ＨＲ－ＭＲＩで確認されたＩＣＡＳ患者の２５．２％にこの多型が認められた。同様に、血管造影でＭＭＤが除外されたＩＣＡＳ患者の１５．８％にもこの多型が認められた。ＩＣＡＳ患者において、ＲＮＦ２１３多型保有者は非保有者に比べ若年であり、ＭＭＤの家族歴を有する割合が高かった。多変量解析では、ＩＣＡＳ発症年齢のみがＲＮＦ２１３多型と独立して関連していた（オッズ比０．９７；９５％信頼区間０．９４４－０．９９）。 結論 ＲＮＦ２１３は東アジア人において、ＭＭＤだけでなくＩＣＡＳの感受性遺伝子でもある。東アジア人集団以外のＩＣＡＳ患者におけるＲＮＦ２１３多型に関するさらなる研究が必要である。） （引４－イ） 「Genomic DNA was extracted from peripheral blood leukocytes using a Wizard Genomic DNA Purification kit and following the manufacturer’s instructions (Promega, Madison, WI, USA). The c.14429G>A (p.Arg4810Lys) mutation of the RNF213 gene (GenBank accession number NM_001256071.1) was amplified using primer sets designed by the authors (available upon request). A polymerase chain reaction was performed with a thermal cycler (model 9700; Applied Biosystems, Foster City, CA, USA), and direct sequencing was performed with a BigDye Terminator Cycle Sequencing Ready Reaction kit (Applied Biosystems) on an ABI Prism 3730xl genetic analyzer (Applied Biosystems).」（３頁２９～３６行） （当審訳：末梢血白血球から、Ｗｉｚａｒｄ Ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ精製キットを用い、製造元の指示に従ってゲノムＤＮＡを抽出した（Ｐｒｏｍｅｇａ社、米国ウィスコンシン州マディソン）。ＲＮＦ２１３遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＭ＿００１２５６０７１．１）のｃ．１４４２９Ｇ＞Ａ（ｐ．Ａｒｇ４８１０Ｌｙｓ）多型は、著者らが設計したプライマーセット（要請求）を用いて増幅した。ポリメラーゼ連鎖反応はサーマルサイクラー（モデル９７００；Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社、米国カリフォルニア州フォスターシティ）を用いて実施し、直接シーケンシングはＢｉｇＤｙｅ Ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ Ｃｙｃｌｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ Ｒｅａｄｙ Ｒｅａｃｔｉｏｎキット（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）を用いてＡＢＩ Ｐｒｉｓｍ ３７３０ｘｌ遺伝子解析装置（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）で実施した。） （引４－ウ） 「Table 2 shows characteristics of the patients with ICAS depending on the presence of the RNF213 variant. Among these patients, RNF213 variant carriers were younger (52.6 ± 9.6 vs. 56.9 ± 12.7 years, P = 0.027) and more likely than non-carriers to have a family history of MMD (6.0% vs. 1.1%, P = 0.033). There were no differences among the patients regarding other clinical characteristics, including vascular risk factors, MRA findings (the site of stenosis or presence of tandem lesions) and HR-MRI findings. Multivariate testing was performed to further evaluate factors associated with the presence of RNF213 among 234 patients of the ICAS group. Results showed that the age of ICAS onset was independently associated with the RNF213 variant (odds ratio, 0.97; 95% CI, 0.944-0.99; P = 0.014).」（５頁８行～６頁５行） （当審訳：表２は、ＲＮＦ２１３多型の有無に基づくＩＣＡＳ患者の特徴を示している。これらの患者の中で、ＲＮＦ２１３ 多型保有者は、非保有者よりも年齢が若く（５２．６ ± ９．６ 歳 対 ５６．９ ± １２．７ 歳、Ｐ ＝ ０．０２７）、ＭＭＤ の家族歴がある割合が高かった（６．０％ 対 １．１％、Ｐ ＝ ０．０３３）。血管リスク因子、ＭＲＡ所見（狭窄部位やタンデム病変の有無）、ＨＲ－ＭＲＩ所見を含むその他の臨床的特徴については、患者間で差は認められなかった。ＩＣＡＳ群２３４例を対象に、ＲＮＦ２１３の有無に関連する因子を検討するため多変量解析を実施した。ＩＣＡＳ発症年齢がＲＮＦ２１３多型と独立して関連することが示された（オッズ比 ０．９７； ９５％ ＣＩ ０．９４４－０．９９； Ｐ ＝ ０．０１４）。） （引４－エ） 「 ［図：0001431620000001.jpg］ Table 2. Factors associated with the presence of RNF213 genetic variants among 234 patients with intracranial atherosclerotic stenosis.」（５頁） （当審訳：表２． 頭蓋内動脈硬化性狭窄症患者２３４例におけるＲＮＦ２１３遺伝子多型の存在に関連する因子） （引４－オ） 「In addition, our results showed that ICAS patients with the RNF213 variant were younger than those without this variant. Patients with this variant may be prone to atherosclerosis.[26] The RNF213 variant could lead to vascular fragility, which may render vessels more vulnerable to hemodynamic stress and secondary insults.[26] Besides vascular risk factors, various environmental factors (e.g., autoimmune response and infection/inflammation) are suggested to trigger vascular abnormalities in the presence of the RNF213 variant. Elevated thyroid autoantibodies were associated with MMD[27-29] and recently with ICAS.[30] Serial HR-MRI studies are needed to evaluate the particular effects of these factors on the development and progression of plaque in the RNF213 variant carriers. In the present study, we have investigated the vascular (tandem stenosis or distal ICA involvement) and HR-MRI (remodeling pattern and plaque enhancement for vulnerability of plaque) characteristics in ICAS patients with this variant, but failed to find significant differences depending on the presence or absence of this variant. This could be because the progression of atherosclerosis is possibly influenced by both vascular risk factors and genetic susceptibility.」（７頁８～２１行） （当審訳：さらに、我々の結果は、ＲＮＦ２１３多型を有するＩＣＡＳ患者が、この変異を持たない患者よりも若年であることを示した。この多型を有する患者は動脈硬化症を発症しやすい可能性がある［２６］。ＲＮＦ２１３多型は血管脆弱性を引き起こし、血管を血行動態的ストレスや二次的損傷に対してより脆弱にする可能性がある［２６］。血管リスク因子に加え、様々な環境因子（例：自己免疫反応、感染／炎症）がＲＮＦ２１３多型の存在下で血管異常を引き起こすと考えられている。甲状腺自己抗体の上昇はＭＭＤ［２７－２９］と関連し、最近ではＩＣＡＳ［３０］とも関連が示されている。ＲＮＦ２１３多型保有者におけるプラーク発生・進展へのこれらの因子特有の影響を評価するには、連続的な高解像度ＭＲＩ研究が必要である。本研究では、この多型を有するＩＣＡＳ患者における血管所見（タンデム狭窄または遠位内頸動脈病変）およびＨＲ－ＭＲＩ所見（リモデリングパターンとプラーク脆弱性を示すプラーク造影）を調査したが、この変異の有無による有意な差は認められなかった。これは、動脈硬化の進行が血管リスク因子と遺伝的感受性の両方に影響される可能性があるためと考えられる。） （引４－カ） 「Conclusions In conclusion, our data indicate that RNF213 is a susceptibility gene not only for MMD but also for ICAS, which may in part explain the high prevalence of intracranial atherosclerotic stroke in Asians. We have an ongoing prospective follow-up study of patients with intracranial stenosis involving genetic, protein, and neuroimaging biomarkers (NCT02074111 at Clinical.trial@gov). Further studies are needed on the non-p.Arg4810Lys RNF213 variants in ICAS patients who are not of East Asian descent.」（７頁） （当審訳：結論 結論として、我々のデータはＲＮＦ２１３がＭＭＤだけでなくＩＣＡＳの感受性遺伝子であることを示しており、これはアジア人における頭蓋内アテローム性脳卒中の高い有病率を部分的に説明し得る。我々は現在、遺伝的・タンパク質・神経画像バイオマーカーを組み込んだ頭蓋内狭窄症患者を対象とした前向き追跡研究を実施中である（Ｃｌｉｎｉｃａｌ．ｔｒｉａｌ＠ｇｏｖ登録番号ＮＣＴ０２０７４１１１）。東アジア系以外のＩＣＡＳ患者におけるｐ．Ａｒｇ４８１０Ｌｙｓ以外のＲＮＦ２１３変異体に関するさらなる研究が必要である。） イ 引用文献４の記載に基づく認定事項 （認定事項ア）上記（引４－イ）の記載から、「末梢血白血球から、Ｗｉｚａｒｄ Ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ 精製キットを用い、製造元の指示に従ってゲノムＤＮＡを抽出した」こと、「著者らが設計したプライマーセット（要請求）を用いて」「ＲＮＦ２１３遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＭ＿００１２５６０７１．１）のｃ．１４４２９Ｇ＞Ａ（ｐ．Ａｒｇ４８１０Ｌｙｓ）多型」を「サーマルサイクラー（モデル９７００；Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社、米国カリフォルニア州フォスターシティ）を用いて」「ポリメラーゼ連鎖反応」で「増幅した」こと、増幅した「ＲＮＦ２１３遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＭ＿００１２５６０７１．１）のｃ．１４４２９Ｇ＞Ａ（ｐ．Ａｒｇ４８１０Ｌｙｓ）多型」を含む遺伝子を「シーケンシング」したことが認められる。 （認定事項イ）上記（引４－ウ）、（引４－エ）の記載から、表２において、ＲＮＦ２１３多型の有無（１つ目の列（多型あり）と２つ目の列（多型なし））に基づくＩＣＡＳ患者の特徴を示していることから、（引４－イ）に記載の「シーケンシング」により、「ＲＮＦ２１３遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＭ＿００１２５６０７１．１）のｃ．１４４２９Ｇ＞Ａ（ｐ．Ａｒｇ４８１０Ｌｙｓ）多型」の有無を検出していると認められる。 ウ 引用発明 上記アの記載事項及びイの認定事項を総合すると、引用文献４には、次の発明が記載されていると認められる。 「末梢血白血球からゲノムＤＮＡを抽出し、ＲＮＦ２１３遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＭ＿００１２５６０７１．１）のｃ．１４４２９Ｇ＞Ａ（ｐ．Ａｒｇ４８１０Ｌｙｓ）多型をサーマルサイクラーを用いてポリメラーゼ連鎖反応」で増幅して、シーケンスしＲＮＦ２１３遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＭ＿００１２５６０７１．１）のｃ．１４４２９Ｇ＞Ａ（ｐ．Ａｒｇ４８１０Ｌｙｓ）多型の有無を検出する方法。（引４－イ、認定事項ア、認定事項イ）」（以下、「引用発明」という。） エ 引用文献４記載の知見 上記アで摘記した引用文献４の記載事項から、引用文献４には、以下の知見が記載されていると認められる。 「ＲＮＦ２１３が頭蓋内動脈硬化性狭窄（ＩＣＡＳ）の感受性遺伝子であること（上記引４－カ）」及び 「ＩＣＡＳ患者において、ＲＮＦ２１３多型保有者は非保有者に比べ若年であること（上記引４－ア、上記引４－ウ）」 （２）引用文献５ ア 引用文献５の記載事項 原査定の拒絶の理由で引用文献５として引用された、本願出願前に、頒布された又は電気通信回線を通じて公衆に利用可能となったＪ． Ｓｔｒｏｋｅ Ｃｅｒｅｂｒｏｖａｓｃ． Ｄｉｓ．，２０１７年， Ｖｏｌ．２６， Ｎｏ．１１， ｐｐ．２６３８－２６４４には、次の事項が記載されている。 （引５－ア） 「Background: Intracranial atherosclerosis of the anterior circulation (anterior ICAS) and intracranial atherosclerosis of the posterior circulation (posterior ICAS) are thought to involve different pathogeneses and risk factors. Recently, we identified a genetic variant that has a significant association with ICAS.The variant was ring finger protein 213 (RNF213) c.14576G>A (rs112735431), which was originally identified as a susceptibility genetic variant for moyamoya disease (MMD). The present study investigated the association of RNF213 c.14576G>A with anterior and posterior ICAS. Materials and Methods: A total of 221 study participants (43 with anterior ICAS, 61 with posterior ICAS, 12 with extracranial carotid atherosclerosis [ECAS], 5 with MMD, and 100 control subjects) were recruited from April 2015 to October 2015. A genetic analysis of RNF213 c.14576G>A and an association study with these cerebrovascular diseases were performed. Results: RNF213 c.14576G>A was present in 10 of 43 patients in the anterior ICAS group and 4 of 5 patients in the MMD group, but was not present in the patients in the posterior ICAS and ECAS groups. c.14576G>A was found in 2 of 100 patients in the control group. RNF213 c.14576G>A showed a significant association with anterior ICAS (allele count: P = 3.9 × 10－5, odds ratio [OR] = 13.0, 95% confidence interval [CI] = 2.8-60.8; prevalence of carriers of c.14576G>A: P = 2.6 × 10－5, OR = 14.8, 95% CI = 3.1-71.3). However, RNF213 c.14576G>A showed no association with posterior ICAS. RNF213 c.14576G>A also had a significant association with MMD and had no association with ECAS. Conclusions: The genetic variant RNF213 c.14576G>A is significantly associated with anterior ICAS but not with posterior ICAS. The present findings may indicate factors involved in the pathogenesis of ICASrelated stroke.」（２６３８頁（要約）） （当審訳：背景：頭蓋内前循環アテローム性動脈硬化症（前方ＩＣＡＳ）と頭蓋内後循環アテローム性動脈硬化症（後方ＩＣＡＳ）は、異なる病態機序と危険因子に関与すると考えられている。最近、我々はＩＣＡＳと有意な関連性を示す遺伝子変異を同定した。この変異はリングフィンガータンパク質２１３（ＲＮＦ２１３）ｃ．１４５７６Ｇ＞Ａ（ｒｓ１１２７３５４３１）であり、元々はもやもや病（ＭＭＤ）の感受性遺伝子変異として同定されたものである。本研究では、ＲＮＦ２１３ ｃ．１４５７６Ｇ＞Ａと前方・後方ＩＣＡＳの関連性を検討した。材料と方法：２０１５年４月から２０１５年１０月にかけて、合計２２１名の研究参加者（前部ＩＣＡＳ ４３名、後部ＩＣＡＳ ６１名、頭蓋外頸動脈アテローム性動脈硬化症（ＥＣＡＳ）１２名、ＭＭＤ ５名、対照群１００名）を募集した。ＲＮＦ２１３ ｃ．１４５７６Ｇ＞Ａの遺伝子解析およびこれらの脳血管疾患との関連研究を実施した。結果：ＲＮＦ２１３ ｃ．１４５７６Ｇ＞Ａは、前方ＩＣＡＳ群４３例中１０例、ＭＭＤ群５例中４例に認められたが、後方ＩＣＡＳ群およびＥＣＡＳ群の患者には認められなかった。対照群１００例中２例にｃ．１４５７６Ｇ＞Ａが認められた。ＲＮＦ２１３ ｃ．１４５７６Ｇ＞Ａは前部ＩＣＡＳと有意な関連を示した（アレル数：Ｐ ＝ ３．９ × １０－５、オッズ比［ＯＲ］＝ １３．０、９５％信頼区間［ＣＩ］＝ ２．８－６０．８； ｃ．１４５７６Ｇ＞Ａ保因者有病率：Ｐ ＝ ２．６ × １０－５、ＯＲ ＝ １４．８、９５％ ＣＩ ＝ ３．１－７１．３）。しかし、ＲＮＦ２１３ ｃ．１４５７６Ｇ＞Ａは後方ＩＣＡＳとは関連を示さなかった。ＲＮＦ２１３ ｃ．１４５７６Ｇ＞ＡはまたＭＭＤと有意に関連し、ＥＣＡＳとは関連を示さなかった。結論： 遺伝子多型ＲＮＦ２１３ ｃ．１４５７６Ｇ＞Ａは、後方ＩＣＡＳとは関連しないが前方ＩＣＡＳとは有意に関連している。本知見は、ＩＣＡＳ関連脳卒中の病態に関与する因子を示唆する可能性がある。） （引５－イ） 「Materials and Methods Study Population This case-control study was conducted at the Department of Neurosurgery, Teraoka Memorial Hospital, from April 2015 to October 2015. Patients diagnosed with the following cerebrovascular diseases: anterior ICAS, posterior ICAS, ECAS, and MMD were enrolled among both new and revisiting outpatients in this period. As controls, blood samples for DNA analysis were collected from patients visiting the hospital for brain trauma or screening studies and who had no history of cerebrovascular disease. Most of the control group underwent magnetic resonance (MR) imaging to confirm the absence of cerebrovascular lesions. None of the patients in the control group had any familial history of genetic diseases such as MMD. This cohort is independent from our previous reports.4,5,8」（２６３９頁左欄） （当審訳：材料と方法 研究対象集団 本症例対照研究は、２０１５年４月から２０１５年１０月にかけて寺岡記念病院脳神経外科において実施された。この期間に新規および再診の外来患者の中から、以下の脳血管疾患と診断された患者を登録対象とした：前方ＩＣＡＳ、後方ＩＣＡＳ、外側頭蓋底動脈（ＥＣＡＳ）、およびＭＭＤ。対照群として、脳外傷またはスクリーニング検査で来院した脳血管疾患の既往歴のない患者からＤＮＡ解析用の血液サンプルを採取した。対照群の大半は脳血管病変の有無を確認するため磁気共鳴（ＭＲ）画像検査を受けた。対照群の患者にはＭＭＤなどの遺伝性疾患の家族歴を有する者はいなかった。本コホートは我々の過去の報告とは独立したものである４，５，８。） （引５－ウ） 「Results ・・・ The results of the genetic analysis are shown in Table 2. The minor allele frequency of the A allele of RNF213 c.14576G>A in the control group (1%) was similar to that in previous studies. A heterozygote (AG) was found in 2.0% (2 of 100) of the control group, but in 80% (4 of 5) of the MMD group and in 23.3% (10 of 43) of the anterior ICAS group. The posterior ICAS and ECAS groups all had the wild type (GG) allele. No homozygote (AA) was detected in any of the groups.」（２６４１頁右欄） （当審訳：結果 ・・・ 遺伝子解析の結果を表２に示す。対照群におけるＲＮＦ２１３ ｃ．１４５７６Ｇ＞ＡのＡアレルのマイナーアレル頻度（１％）は、過去の研究結果と同程度であった。対照群ではヘテロ接合体（ＡＧ）が２．０％（１００人中２人）に認められたが、ＭＭＤ群では８０％（５人中４人）、前方ＩＣＡＳ群では２３．３％（４３人中１０人）に認められた。後方ＩＣＡＳ群およびＥＣＡＳ群ではすべて野生型（ＧＧ）アレルが検出された。いずれの群においてもホモ接合体（ＡＡ）は検出されなかった。） （引５－エ） 「Table 1. Clinical characteristics of patients with various cerebrovascular diseases ［図：0001431620000002.jpg］ Abbreviations: anterior ICAS, intracranial arteriosclerosis of the anterior circulation; ECAS, extracranial carotid atherosclerosis; MMD, moyamoya disease; posterior ICAS, intracranial arteriosclerosis of the posterior circulation; SD, standard deviation.」（２６４１頁） （当審訳：表1. 各種脳血管疾患患者の臨床的特徴 ・・・ 略語：頭蓋内前循環アテローム性動脈硬化症（前方ＩＣＡＳ）頭蓋外頸動脈動脈アテローム性動脈硬化症（ＥＣＡＳ、もやもや病（ＭＭＤ）、後頭蓋内後循環アテローム性動脈硬化症（後方ＩＣＡＳ）、標準偏差（ＳＤ）。） （引５－オ） 「Table 2. Distribution of the allele count and genotype of RNF213 c.14576G>A and its association with various cerebrovascular diseases ［図：0001431620000003.jpg］ Abbreviations: anterior ICAS, intracranial arteriosclerosis of the anterior circulation; CI, confidence interval; ECAS, extracranial carotid atherosclerosis; MMD, moyamoya disease; OR, odds ratio; posterior ICAS, intracranial arteriosclerosis of the posterior circulation; RNF213, ring finger protein 213. *P value compares the allele frequency of RNF213 c.14576G>A in each cerebrovascular group with that in the control group by Pearson’s chi-square test. †P value compares the prevalence of carriers of c.14576G>A in each cerebrovascular group with that in the control group by Pearson’s chi-square test.」（２６４２頁） （当審訳：表２． ＲＮＦ２１３ ｃ．１４５７６Ｇ＞Ａのアレル数および遺伝子型の分布と各種脳血管疾患との関連性 ・・・ 略語：頭蓋内前循環アテローム性動脈硬化症（前方ＩＣＡＳ）、信頼区間（ＣＩ）、頭蓋外頸動脈動脈アテローム性動脈硬化症（ＥＣＡＳ）、もやもや病（ＭＭＤ）、オッズ比（ＯＲ）、頭蓋内後循環アテローム性動脈硬化症（後方ＩＣＡＳ）、リングフィンガータンパク質２１３（ＲＮＦ２１３）。 ＊Ｐ値は、ピアソンのカイ二乗検定により、各脳血管疾患群におけるＲＮＦ２１３ ｃ．１４５７６Ｇ＞Ａのアレル頻度を対照群と比較したものである。 †Ｐ値は、ピアソンのカイ二乗検定により、各脳血管疾患群におけるｃ．１４５７６Ｇ＞Ａ保因者の有病率を対照群と比較したものである。） イ 引用文献５記載の知見 前記アで摘記した引用文献５の記載事項を総合すると、引用文献５には、次の知見が記載されていると認められる。 「遺伝子多型ＲＮＦ２１３ ｃ．１４５７６Ｇ＞Ａは、頭蓋内前循環アテローム性動脈硬化症（前方ＩＣＡＳ）と有意に関連している。」 ２ 対比 （１）本願発明と引用発明とを対比する。 引用発明の「RNF213遺伝子（GenBank登録番号NM_001256071.1）のc.14429G>A（p.Arg4810Lys）多型」は、本願発明の「ＲＮＦ２１３ ｐ．Ｒ４８１０Ｋ遺伝子多型」に相当し、引用発明の「末梢血白血球」は、本願発明の「被験者由来のサンプル」に相当する。そうすると、本願発明と引用発明とは、以下の一致点、相違点を有する。 ＜一致点＞ 「被験者由来のサンプルにおけるＲＮＦ２１３ ｐ．Ｒ４８１０Ｋ遺伝子多型の有無を検出する検出ステップを含む方法。」 ＜相違点＞ 相違点１：サンプルについて、本願発明が、「脳梗塞未発症の被験者由来」のものであるのに対して、引用発明は、そのように限定されない点。 相違点２：本願発明が、「脳梗塞未発症の被験者の脳梗塞発症リスクを予測する方法」であり、「前記検出ステップにおけるＲＮＦ２１３ ｐ．Ｒ４８１０Ｋ遺伝子多型の有無により、当該被験者の脳梗塞発症リスクが高いか否かを判定する判定ステップ」を含み、「前記検出ステップにおいて、前記ＲＮＦ２１３ ｐ．Ｒ４８１０Ｋ遺伝子多型が検出された場合、前記判定ステップにおいて、前記ＲＮＦ２１３ ｐ．Ｒ４８１０Ｋ遺伝子多型を有する当該被験者は、前記ＲＮＦ２１３ ｐ．Ｒ４８１０Ｋ遺伝子多型を有しない者に比べて、頭蓋内前方循環動脈狭窄によるアテローム血栓性脳梗塞発症のリスクが高く且つ発症の年齢が低いと判断する」のに対して、引用発明は、脳梗塞未発症の被験者の脳梗塞発症リスクを予測する方法ではなく、そのような判定ステップを備えていない点。 ３ 判断 （１）相違点について 相違点１及び相違点２を合わせて検討する。 引用文献４には、ＲＮＦ２１３が頭蓋内動脈硬化性狭窄（ＩＣＡＳ）の感受性遺伝子であること、及び、ＩＣＡＳ患者において、ＲＮＦ２１３多型保有者は非保有者に比べ若年であること（上記１（１）エ）が記載されている。また、引用文献５には、遺伝子多型ＲＮＦ２１３ ｃ．１４５７６Ｇ＞Ａは、頭蓋内前循環アテローム性動脈硬化症（前方ＩＣＡＳ）と有意に関連していること（上記１（２）イ）が記載されており、アテローム性動脈硬化による動脈の内腔の内膜プラーク（アテローム）が狭窄を引き起こすことは技術常識である。そして、引用文献４の上記知見におけるＲＮＦ２１３多型は、「ＲＮＦ２１３遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＭ＿００１２５６０７１．１）のｃ．１４４２９Ｇ＞Ａ（ｐ．Ａｒｇ４８１０Ｌｙｓ）多型」（上記引４－イ参照。）であり、これは、引用文献５の上記知見における「遺伝子多型ＲＮＦ２１３ ｃ．１４５７６Ｇ＞Ａ」と同一の多型である（本件の明細書の背景技術の「非特許文献１におけるＲＮＦ２１３遺伝子多型についての（ｃ．１４５７６Ｇ＞Ａ，ｐ．Ｒ４８５９Ｋ，ｒｓ１１２７３５４３１）という表記は、東北大学グループによる命名に基づいている。本明細書においては、京都大学グループによる命名に基づいて、同一のＲＮＦ２１３遺伝子多型をｐ．Ｒ４８１０Ｋ多型（ｃ．１４４２９Ｇ＞Ａ，ｒｓ１１２７３５４３１）又は単にｐ．Ｒ４８１０Ｋ多型と表記する。両者は、アミノ酸の数え方の違いによるものであり、同一の多型である。」という記載を参照。）。 そして、疾患に関連するバイオマーカーを用いて、疾患未発症の被験者における疾患のリスクを予測することは、例を挙げるまでもない慣用手段であることを踏まえると、引用発明を、引用文献４および引用文献５で示される知見に基づく上記慣用手段である疾患リスクの予測に用いるように変更して、対象サンプルを脳梗塞未発症の被験者のサンプルとし（相違点１）、ＲＮＦ２１３ ｐ．Ｒ４８１０Ｋ遺伝子多型が検出された場合、当該被験者は、ＲＮＦ２１３ ｐ．Ｒ４８１０Ｋ遺伝子多型を有しない者に比べて、頭蓋内前方循環動脈狭窄によるアテローム血栓性脳梗塞発症のリスクが高く且つ発症の年齢が低いと判断する判定ステップ（相違点２）を具備させることは当業者が容易に想到しうることである。 （２）本願発明の効果について 「脳梗塞未発症の被験者に対して、早期の段階から脳梗塞発症の予測や予防・対策を行うことが可能となる」（段落００１３）という本願発明が奏する効果は、脳梗塞とＲＮＦ２１３ ｐ．Ｒ４８１０Ｋ遺伝子多型との関係を示す引用文献４および引用文献５の記載から当業者が十分に予想しうる範囲内である。 （３）請求人の主張について 請求人は、審判請求書の請求の理由において、 「引用文献５の表１を見ますと、有意なデータとして、前方ＩＣＡＳの発症の平均年齢は７０．６歳であり、後方ＩＣＡＳの発症の平均年齢は７５．１歳であったことが示されています。引用文献５の研究対象のコホートは日本の病院におけるものであり、上述のように、コントロールの平均年齢６８．８歳であり、ＭＭＤの平均年齢４６．４歳であったことも示されています。前方ＩＣＡＳの発症の平均年齢が７０．６歳であったということは、コントロールの平均年齢６８．８歳よりも高かった訳であり、ＲＮＦ２１３のｃ．１４５７６Ｇ＞Ａ変異がＩＣＡＳ関連脳卒中の発症年齢を低くしたとは到底言えません。むしろ、コントロールの平均年齢６８．８歳よりも高かったという逆の結果が示されています。従いまして、ＲＮＦ２１３の多型の有無について、引用文献５の開示事項をそのまま、引用文献４の発明に組み合わせることには阻害要因がある」 と主張している。 上記主張について検討する。 引用文献４には、「ＩＣＡＳ患者において、ＲＮＦ２１３多型保有者は非保有者に比べ若年であ」ることが記載されており、これは、コントロール群との比較ではなく、ＩＣＡＳ患者の群内におけるＲＮＦ２１３多型の有無の群を比較した結果である。そうすると、引用文献４の当該記載と、引用文献５の表１に示される、コントロールの平均年齢が６８．８±１５．８で、前方ＩＣＡＳの発症平均年齢が７０．６±１４．１であり、コントロールの方が平均年齢が高かったこととは、何ら矛盾するものではない。したがって、引用文献４に開示された事項と引用文献５に開示された事項を組み合わせることについて、阻害要因があるとはいえない。 よって、請求人の主張は採用できない。 ４ 小括 よって、本願発明は、引用発明並びに引用文献４及び５に記載の知見に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものである。 第５ むすび 以上のとおり、本願発明は、特許法第２９条第２項の規定により特許を受けることができない。 よって、結論のとおり審決する。