2023-008081

特願２０２１－５１２８３５「セルロース合成酵素様酵素及びその使用」拒絶査定不服審判事件〔令和 ２年 ３月１２日国際公開、ＷＯ２０２０／０４９５７２、令和 ４年 １月 ４日国内公表、特表２０２２－５０００２３〕について、次のとおり審決する。

結 論 本件審判の請求は、成り立たない。

理 由 第１ 手続の経緯 本願は、令和１年９月５日（パリ条約による優先権主張 ２０１８年９月６日（ＵＳ）アメリカ合衆国 ２０１９年７月２５日（ＩＬ）イスラエル）を国際出願日とする出願であって、その主な手続の経緯は以下のとおりである。 令和 ４年 ４月１４日付け：拒絶理由通知書 令和 ４年１０月２６日 ：意見書、誤訳訂正書の提出 令和 ５年 １月 ６日付け：拒絶査定 令和 ５年 ５月１７日 ：審判請求書、手続補正書の提出 第２ 令和５年５月１７日付け手続補正についての補正の却下の決定 [補正の却下の決定の結論] 令和５年５月１７日付け手続補正（以下、「本件補正」という。）を却下する。 [理由] １．本件補正 本件補正は、特許請求の範囲の請求項１を以下のように補正することを含むものである（下線部は補正箇所である。）。 補正前： 「【請求項１】 植物またはその少なくとも一部の少なくとも１つの細胞における、少なくとも１つのステロイド系サポニン、または、少なくとも１つのトリテルペノイド系サポニンの含有量を低減させる方法であって、 前記少なくとも１つの細胞の遺伝子を組み換える遺伝子組換えステップを含み、 前記遺伝子組換えステップは、 （ａ）セルロース合成酵素様Ｇ（ＣＳＬＧ）酵素をコードする核酸遺伝子配列を標的とする少なくとも１つのサイレンシング分子を用いて前記少なくとも１つの植物細胞を形質転換するステップであって、前記ＣＳＬＧ酵素をコードする前記核酸遺伝子配列は、配列番号３０に記載の核酸配列を含むか、または、配列番号３０に記載の核酸配列に対して少なくとも９０％の同一性及び少なくとも５５％のカバレッジを有するそのホモログである、該ステップ、または、 （ｂ）前記ＣＳＬＧ酵素をコードする前記少なくとも１つの核酸遺伝子配列を突然変異させるステップであって、前記ＣＳＬＧ酵素をコードする前記少なくとも１つの核酸遺伝子配列は、配列番号３０に記載の核酸配列を含むか、または、配列番号３０に記載の核酸配列に対して少なくとも９０％の同一性及び少なくとも５５％のカバレッジを有するそのホモログを含み、前記突然変異が、（１）前記核酸配列内に１以上の点突然変異を導入すること、（２）前記核酸配列内に欠失を導入すること、（３）前記核酸配列内に挿入を導入すること、または、（４）それらの任意の組み合わせを含み、前記導入が、コード配列または非コード配列を突然変異させることを含む、該ステップ、を含み、 遺伝子が組み換えられた遺伝子組換え細胞における前記ＣＳＬＧ酵素をコードする遺伝子の発現は、対応する非組換え植物の細胞における発現と比較して減少し、 前記遺伝子組換え細胞を含む植物は、少なくとも１つのステロイド系サポニン、または、少なくとも１つのトリテルペノイド系サポニンの含有量が、対応する非組換え植物と比較して減少する、方法。」とあったものを、 補正後： 「【請求項１】 植物またはその少なくとも一部の少なくとも１つの細胞における少なくとも１つのトリテルペノイド系サポニンの含有量を低減させる方法であって、 前記少なくとも１つの細胞の遺伝子を組み換える遺伝子組換えステップを含み、 前記遺伝子組換えステップは、 （ａ）セルロース合成酵素様Ｇ（ＣＳＬＧ）酵素をコードする核酸遺伝子配列を標的とする少なくとも１つのサイレンシング分子を用いて前記少なくとも１つの植物細胞を形質転換するステップであって、前記ＣＳＬＧ酵素をコードする前記核酸遺伝子配列は、配列番号３０に記載の核酸配列を含むか、または、配列番号３０に記載の核酸配列に対して少なくとも９０％の同一性及び少なくとも５５％のカバレッジを有するそのホモログである、該ステップ、または、 （ｂ）前記ＣＳＬＧ酵素をコードする前記少なくとも１つの核酸遺伝子配列を突然変異させるステップであって、前記ＣＳＬＧ酵素をコードする前記少なくとも１つの核酸遺伝子配列は、配列番号３０に記載の核酸配列を含むか、または、配列番号３０に記載の核酸配列に対して少なくとも９０％の同一性及び少なくとも５５％のカバレッジを有するそのホモログを含み、前記突然変異が、（１）前記核酸配列内に１以上の点突然変異を導入すること、（２）前記核酸配列内に欠失を導入すること、（３）前記核酸配列内に挿入を導入すること、または、（４）それらの任意の組み合わせを含み、前記導入が、コード配列または非コード配列を突然変異させることを含む、該ステップ、を含み、 遺伝子が組み換えられた遺伝子組換え細胞における前記ＣＳＬＧ酵素をコードする遺伝子の発現は、対応する非組換え植物の細胞における発現と比較して減少し、 前記遺伝子組換え細胞を含む植物は、少なくとも１つのトリテルペノイド系サポニンの含有量が、対応する非組換え植物と比較して減少する、方法。」 ２．補正の適否 上記補正は、補正前の請求項１に記載された発明を特定するために必要である「少なくとも１つのステロイド系サポニン、または、少なくとも１つのトリテルペノイド系サポニンの含有量」という択一的記載から、「少なくとも１つのステロイド系サポニン」「の含有量」という要素を削除し、「少なくとも１つのトリテルペノイド系サポニンの含有量」と限定するものであるから、特許法第１７条の２第５項第２号に掲げる特許請求の範囲の減縮を目的とするものに該当する。 そこで、補正後の請求項１に記載された発明が、特許出願の際独立して特許を受けることができるものであるか（特許法第１７条の２第６項において準用する同法第１２６条第７項に規定する要件を満たすか）否かについて以下に検討する。 （１）特許法第３６条第６項第１号に規定する要件（いわゆるサポート要件）及び同法第３６条第４項第１号に規定する要件（いわゆる実施可能要件）について ア 本願補正発明 補正後の請求項１に係る発明（以下、「本願補正発明」という。）は、前記１．で示したとおりのものである。 イ 本願明細書及び図面の記載事項 本願明細書及び図面（以下、「本願明細書等」という。）には、次の事項が記載されている。 （ア）背景技術 「【０００３】 サポニン－アルカロイド化合物の広範なグループは、植物界に広く分布し、サイトゾルのメバロン酸イソプレノイド生合成経路に由来する。サポニン及びステロイドアルカロイド（ＳＡ）は、植物が産生する特異的代謝物（ＳＭ）の２つの大きなクラスである。 【０００４】 サポニンは、無数の植物種と１００以上の科に見られる特異的代謝物（ＳＭ）の大きなグループであり、１以上のグリコシド部分で修飾された親油性トリテルペノイドまたはステロイド骨格（アグリコン）を表す。 【０００５】 サポニンは、その名前（ラテン語で石鹸を意味する）が示唆しているように、両親媒性構造を有するため、水溶液中では石鹸のような性質を示す。サポニンのユニークな物理化学的特性は、植物界において、抗真菌性、抗菌性及び殺虫性を含む幅広い機能を提供する。サポニンの活性は、アグリコンの構造に依存するが、多くの場合、結合した糖にさらに依存する。例えば、オレアノール酸やメジカゲン酸（ＭＡ）由来のサポニンは、Ｃ－２８位にカルボキシルが存在することに起因して溶血作用を示すが、アベナシンＡ－１は、殺菌性を示すためには、Ｃ－３位にＬ－アラビノースが結合していることを必要とする。さらに、コレステロール由来のステロイドサポニンは、植物界に広く存在し、その構造は非常に多様であり、Ｃ－５、６位が飽和しているもの（例えば、サラサポゲニン）もあるし、Ｃ－５、６位が不飽和のもの（例えば、ジオスゲニン）もある。 【０００６】 多くの報告が、抗炎症及び免疫増強（アジュバント）から抗癌特性に至るまでの、ヒトの健康及び医療用途に対するサポニンの利点を強調している。糖活性酵素（ＣＡＺＹ）糖転移酵素１（ＧＴ１）スーパーファミリーに属するＵＤＰ糖転移酵素（ＵＧＴ）メンバーは、サポニン及び他のすべての特異的代謝物（ＳＭ）クラスにおいて糖転移反応を行う。サポニンを装飾する最も一般的な糖類としては、Ｄ－グルコース、Ｄ－ガラクトース、Ｌ－アラビノース、Ｄ－グルクロン酸、Ｄ－キシロース、Ｌ－ラムノース、及びＤ－フコースが挙げられる。 【０００７】 サポゲニンのＣ－３位に結合したグルクロン酸の存在は、ナデシコ目の種で特に一般的であるが、それに関与する酵素は依然として不明である。 【０００８】 したがって、トリテルペノイドサポニンを含むサポニン類を産生するための代謝経路に関与する酵素に関する知識、例えば、キレイン酸などにグルクロン酸を結合させるセルロース合成酵素様Ｇに関する知識に対する満たされていないニーズが依然として存在する。上記の知識が得られれば、自然に産生される産物の含有量を改変させるために、植物において鍵となる酵素を制御することができる。例えば、酵素を過剰に発現させたり、安定性を高めたりすることによって、天然の甘味料を大量に産生することができる。また、酵素を遺伝子レベルで下方制御することによって、植物産物（例えば、キノア）に苦味を加える化合物の産生を減少させることができる。さらに、高価値のサポニン（これに限定しないが、例えば、トリテルペノイドサポニン）を商業量で提供するために、異種系でこれらのサポニンを産生する方法に対する満たされていないニーズが依然として存在する。これらの高価値サポニンは、これに限定しないが、例えば、甘味料、発泡剤、乳化剤、防腐剤、抗発癌剤、コレステロール低下剤、抗炎症剤、抗酸化剤、生物学的アジュバント、抗微生物剤、殺虫剤、摂食阻害剤、抗真菌剤、またはそれらの任意の組み合わせとして使用することができる。 【０００９】 加えて、アルカロイドなどの一部の特異的代謝物（ＳＭ）は、それらを産生する細胞にとって不可欠ではなく、生物の全体的な適応度に寄与するため、しばしば二次代謝産物と呼ばれる。アルカロイドは、一般的には複素環構造を有する、低分子量の窒素含有有機化合物であり、植物におけるそれらの生合成は、発生段階では、ストレス及び病原体に応答して厳密に制御されている。 【００１０】 例えば、ステロイドアルカロイド（ＳＡ）は、ナス目（Solanales order）の多数の植物に多く含まれていることから「ソラマメアルカロイド」とも呼ばれており、幅広い範囲の科の多数の植物に共通して存在することが分かっている。ステロイドアルカロイド（ＳＡ）は、多様な構造組成及び生物活性を有する。これらは低分子量の窒素含有コレステロール由来有機化合物であり、一般的には、Ｃ－２７コレスタン骨格と複素環窒素成分とから成る複素環構造を有する。 ・・・ 【００１２】 Ｃ－２７コレスタン骨格と複素環窒素成分とから成るステロイドアルカロイド（ＳＡ）は、サイトゾル内でコレステロールから合成されると考えられている。・・・ 【００１３】 ステロイド系グリコアルカロイド（ＳＧＡ）は、ナス科の数多くの植物、及び他の多くの植物科によって産生される。ＳＧＡの例としては、トマト（Solanum lycopersicu）のα－トマチン及びデヒドロトマチン、ジャガイモ（Solanum tuberosum）のα－カコニン及びα－ソラニン、ナス（Solanum melongena）のα－ソラマルギン及びα－ソラソニンが挙げられる。また、ＳＧＡは、トウガラシ属の様々な種類のコショウにも見られる。トマトでは１００種類以上のＳＧＡが確認されており（Itkin et al. , 2011, Plant Cell 23:4507-4525）、ジャガイモでは５０種類以上のＳＧＡが確認されている（Shakya and Navarre, 2008, J. Agric. Food Chem. 56:6949-6958）。ナスにも、少なくとも１種類のＳＧＡが含まれている（Friedmann, 2006, J. Agric. Food Chem. 54:8655-8681）。 ・・・ 【００２８】 すべての動物が産生する主要なステロールであるコレステロールは、ＳＧＡの生合成において重要な構成要素である。コレステロールから始まるＳＧＡ生合成の中核に関与するトマト及びジャガイモの一連の遺伝子であるＧＬＹＣＯＡＬＫＡＬＯＩＤＭＥＴＡＢＯＬＩＳＭ（ＧＡＭＥ）が、近年報告された。トマトのＳＧＡ生合成経路は、２つの主要部分に分けられる。第１の主要部分では、ＧＡＭＥ６、ＧＡＭＥ８、ＧＡＭＥ１１、ＧＡＭＥ４、及びＧＡＭＥ１２酵素の作用により、コレステロールからＳＡアグリコンが形成されると考えられる。第２の主要部分では、ＵＤＰ－糖転移酵素（ＵＧＴ）の作用により、ＳＧＡが産生される（トマトではＧＡＭＥ１、ＧＡＭＥ２、ＧＡＭＥ１７、ＧＡＭＥ１８、ジャガイモでは、ステロールアルカロイド・グリコシルト・ランスフェラーゼ（ＳＧＴ１）、ＳＧＴ２、ＳＧＴ３）」 （イ）発明の概要 「【課題を解決するための手段】 【００３７】 一態様によれば、本開示は、セルロース合成酵素様Ｇ（ＣＳＬＧ）酵素をコードする少なくとも１つの異種遺伝子の発現が、対応する非組換え細胞と比較して増加した遺伝子組換え細胞であって、少なくとも１つのステロイド系アルカロイド、その誘導体、その代謝物、またはその生合成中間体、少なくとも１つのステロイド系サポニン、その誘導体、その代謝物、またはその生合成中間体、または、少なくとも１つのトリテルペノイド系サポニン、その誘導体、その代謝物、またはその生合成中間体の含有量が、対応する非組換え細胞と比較して増加した、遺伝子組換え細胞を提供する。 【００３８】 別の態様によれば、本開示は、セルロース合成酵素様Ｇ（ＣＳＬＧ）酵素をコードする少なくとも１つのＣＳＬＧ遺伝子の発現が、対応する非組換え植物における前記ＣＳＬＧ遺伝子の発現と比較して改変された少なくとも１つの細胞を含む遺伝子組換え植物であって、少なくとも１つのステロイド系アルカロイド、その誘導体、その代謝物、またはその生合成中間体、少なくとも１つのステロイド系サポニン、その誘導体、その代謝物、またはその生合成中間体、または、少なくとも１つのトリテルペノイド系サポニン、その誘導体、その代謝物、またはその生合成中間体の含有量が、対応する非組換え植物と比較して改変された、遺伝子組換え植物を提供する。 【００３９】 さらに別の態様によれば、本開示は、遺伝子組換え細胞内にステロイド系アルカロイド、ステロイド系サポニン、またはトリテルペノイド系サポニンを産生する方法であって、（ａ）前記細胞内に少なくとも１つの異種遺伝子を導入する導入ステップであって、前記少なくとも１つの異種遺伝子がセルロース合成酵素様Ｇ（ＣＳＬＧ）酵素をコードしており、前記少なくとも１つの異種遺伝子が任意選択でベクターに含まれている、該ステップと、（ｂ）前記細胞内で前記少なくとも１つの異種遺伝子を発現させる発現ステップと、を含み、前記細胞は、少なくとも１つのステロイド系アルカロイド、少なくとも１つのステロイド系サポニン、または少なくとも１つのトリテルペノイド系サポニンの含有量が、対応する非組換え細胞と比較して増加する、方法を提供する。 【００４０】 さらに別の態様によれば、本開示は、植物またはその少なくとも一部の少なくとも１つの細胞における、少なくとも１つのステロイド系アルカロイド、その誘導体、その代謝物、またはその生合成中間体、少なくとも１つのステロイド系サポニン、その誘導体、その代謝物、またはその生合成中間体、または、少なくとも１つのトリテルペノイド系サポニン、その誘導体、その代謝物、またはその生合成中間体の含有量を低減させる方法であって、前記少なくとも１つの細胞の遺伝子を組み換える遺伝子組換えステップを含み、前記遺伝子組換えステップは、（ａ）セルロース合成酵素様Ｇ（ＣＳＬＧ）酵素をコードする少なくとも１つの遺伝子を標的とする少なくとも１つのサイレンシング分子を用いて前記少なくとも１つの植物細胞を形質転換するステップ、または、（ｂ）前記ＣＳＬＧ酵素をコードする前記少なくとも１つの遺伝子の核酸配列を突然変異させるステップであって、前記突然変異が、（１）前記核酸配列内に１以上の点突然変異を導入すること、（２）前記核酸配列内に欠失を導入すること、（３）前記核酸配列内に挿入を導入すること、または、（４）それらの任意の組み合わせを含み、前記導入が、コード配列または非コード配列を突然変異させることを含む、該ステップと、を含み、遺伝子が組み換えられた遺伝子組換え細胞における前記ＣＳＬＧ酵素をコードする遺伝子の発現は、対応する非組換え植物の細胞と比較して減少し、前記遺伝子組換え細胞を含む植物は、少なくとも１つのステロイド系アルカロイド、その誘導体、その代謝物、またはその生合成中間体、少なくとも１つのステロイド系サポニン、その誘導体、その代謝物、またはその生合成中間体、または、少なくとも１つのトリテルペノイド系サポニン、その誘導体、その代謝物、またはその生合成中間体の含有量が、対応する非組換え植物と比較して減少する、方法を提供する。 【００４１】 さらに別の態様によれば、本開示は、植物またはその少なくとも一部の少なくとも１つの細胞における、少なくとも１つのステロイド系アルカロイド、その誘導体、その代謝物、またはその生合成中間体、少なくとも１つのステロイド系サポニン、その誘導体、その代謝物、またはその生合成中間体、または、少なくとも１つのトリテルペノイド系サポニン、その誘導体、その代謝物、またはその生合成中間体の含有量を増加させる方法であって、前記少なくとも１つの細胞の遺伝子を組み換える遺伝子組換えステップを含み、前記遺伝子組換えステップは、（ａ）セルロース合成酵素様Ｇ（ＣＳＬＧ）酵素をコードする少なくとも１つの遺伝子の核酸配列を突然変異させるステップであって、前記突然変異が、（１）前記核酸配列内に１以上の点突然変異を導入すること、（２）前記核酸配列内に欠失を導入すること、（３）前記核酸配列内に挿入を導入すること、または、（４）それらの任意の組み合わせを含み、前記導入が、コード配列または非コード配列を突然変異させることを含む、該ステップと、を含み、（ｂ）前記ＣＳＬＧ酵素をコードする前記核酸配列を発現させるステップと、を含み、遺伝子が組み換えられた遺伝子組換え細胞を含む植物は、少なくとも１つのステロイド系アルカロイド、その誘導体、その代謝物、またはその生合成中間体、少なくとも１つのステロイド系サポニン、その誘導体、その代謝物、またはその生合成中間体、または、少なくとも１つのトリテルペノイド系サポニン、その誘導体、その代謝物、またはその生合成中間体の含有量が、対応する非組換え植物にと比較して増加する、方法を提供する。」 （ウ）発明を実施するための形態 「【００５８】 「ＣＳＬＧ」という用語は、Ｇファミリー由来のセルロース合成酵素様酵素を包含する。セルロース合成酵素様（ＣＳＬ）ファミリーには、例えばＡ、Ｂ、Ｅ、Ｇなどの、それぞれ異なる接尾辞を有するものがある。各ファミリーの接尾辞は、事前に特徴付けられたシロイヌナズナ由来のタンパク質に対する酵素の類似性に応じて基づいて付けられる。異なるファミリーのＣＳＬ酵素は、異なる技術的特徴を有する。本明細書を通じて使用される、Ａ、Ｂ、またはＥの接尾辞が付いていない用語「ＣＳＬ」は、いくつかの実施形態では、「ＣＳＬＧ」という用語と、互換的に使用することができ、すべて同一の意味及び性質を有する。 【００５９】 「ＣＳＬＧ」タンパク質は、いくつかの実施形態では、「ＧＡＭＥ１５」タンパク質及び「ＳＯＡＰ５」タンパク質を包含する。 【００６０】 本明細書では、６つの検査済みＣＳＬＧ遺伝子について説明する。いくつかの実施形態では、それらには、ＧＡＭＥ１５遺伝子と、それらがコードする酵素（トマト、野生トマト、ジャガイモ、野生ポテト、ナス、ピーマンの６種に由来する６つの酵素）が含まれる。これらは、グルクロン酸または他の糖部分を転移してステロイド系アルカロイドを産生するか、あるいは、グルクロン酸または他の糖部分をフロスタノール型サポニン（アグリコン）上に転移してステロイド系サポニンまたはその前駆体を産生するか、またはステロイド系アルカロイドまたはその前駆体を産生する（例えば、図１を参照）。 【００６１】 本明細書では、グルクロン酸をトリテルペノイドアグリコン上に転移する７つの検査済みＣＳＬＧ遺伝子（ＳＯＡＰ５遺伝子としても知られている）と、それがコードする酵素（ホウレンソウ、ウラルカンゾウ、レッドビート、キノア、アルファルファ、ダイズ、及びミヤコグサの７種に由来する７つの酵素）について説明する。「トリテルペノイドアグリコン」という用語は、いくつかの実施形態では、β－アミリンから誘導される化合物群を包含する。したがって、本明細書に開示されるＣＳＬＧ酵素は、ユニークな活性を提供する。 【００６２】 当業者であれば、細胞、例えば、植物細胞、酵母細胞、藻類細胞、細菌細胞におけるステロイド系アルカロイド、ステロイド系サポニン、またはトリテルペノイド系サポニンのうちの少なくとも１つの含有量を改変することは、内在性ＣＳＬＧ遺伝子を変異させることを含むか、ＣＳＬＧ遺伝子発現を調節することを含むか、あるいは、ＣＳＬＧ酵素を発現しない細胞に、または異種細胞で発現するＣＳＬＧ酵素の活性を補うために、異種ＣＳＬＧを添加することを含むことを理解できるであろう。いくつかの実施形態では、植物細胞は、植物またはその一部に含まれている。」 「【００８５】 いくつかの実施形態では、（ａ）植物細胞がナデシコ目の植物の細胞を含む場合、植物は、ホウレンソウ、ビーツ、及びキノアからなる群から選択される、（ｂ）植物細胞がナス目の植物の細胞を含む場合、植物は、トマト、野生型トマト、ジャガイモ、野生型ポテト、ナス、ペッパー、ピーマン、トウガラシ、チリペッパー、パプリカ、タバスコペッパー、グランドチェリー、タバコ、及びビタースイートからなる群から選択される、あるいは、（ｃ）植物細胞がマメ目の植物の細胞を含む場合、植物は、アルファルファ、大豆、ミヤコグサ、及び甘草からなる群から選択される。」 （エ）実施例１～１３ ａ ナス科植物では、トマトに関する図１３の概略図に示すような生合成経路が提案され、コレステロールから変換される反応において、種々のＧＡＭＥ酵素が関与する（実施例５）。 ｂ トマト、ジャガイモ、及びナスにおけるＣＬＳＧ酵素であるＧＡＭＥ１５酵素は、そのグルクロン酸トランスフェラーゼ活性によって、ステロイド系グリコアルカロイドの生合成に関与し、トマト（Solanum lycopersicum）由来のＧＡＭＥ１５酵素をコードする核酸配列、そのアミノ酸配列は、それぞれ配列番号３０、配列番号３１に示されるものとして同定された（実施例６）。 ｃ トマト、ジャガイモ、及びナスについて、ＧＡＭＥ１５遺伝子に対してサイレンシングを行うＧＡＭＥ１５－ＲＮＡｉベクターを作製し、当該ベクターを用いて各植物を形質転換したところ、α－トマチン等、ステロイド系グリコアルカロイドの著しい低下が見られ（実施例６～９）、さらに、トマトにおいては、野生型に比べて、ステロイド系グリコアルカロイド前駆体であるコレステロールの約１５～２０倍の増加が認められた（実施例１０）。 ｄ トマト、ジャガイモ、ナスにおいて、α－トマチン等、ステロイド系グリコアルカロイドの産生を増加させるため、ＧＡＭＥ１５を過剰発現させた（実施例１２）。 （オ）実施例１４～２５ ａ ホウレンソウの葉におけるトリテルペノイド系サポニンについて、その構造分析とその生合成経路に関与する酵素を同定する研究を行い、図２０Ａ等に示される生合成経路とこれに関与するＳＯＡＰ酵素の関係を示した（実施例１５～１６）。 ｂ ベンサミアナタバコにおいて、ホウレンソウ由来のＳＯＡＰ１～４及び６～１０を一過性発現させると、図２０Ａに示されるメディカゲン酸が産生された一方、ホウレンソウの葉で検出されたいずれのサポニンも産生されず、さらにホウレンソウ由来のＣＬＳＧ酵素であるＳＯＡＰ５を発現させると、図２０Ａに示されるメディカゲン酸３－Ｏ－グルクロニド、ヨッソシドＶが産生され、当該ＳＯＡＰ５は、ホウレンソウサポニングルクロン酸トランスフェラーゼとして同定され、当該酵素をコードする塩基配列、そのアミノ酸配列は、それぞれ配列番号６５、６６に示されるものである（実施例１８、１９）。 ｃ ホウレンソウにおいてＣＳＬＧ酵素であるＳＯＡＰ５をサイレンシングしたところ、ホウレンソウの葉においてメディカゲン酸の高い蓄積が認められた（実施例１９）。 ｄ 酵素において、ホウレンソウ由来のＳＯＡＰ１～４を発現させたところ、メディカゲン酸が産生し、さらにホウレンソウ由来のＳＯＡＰ５、及びＳＯＡＰ５に活性化糖を提供するＵＤＰ－グルコース６－デヒドロゲナーゼ１を発現させたところ、メディカゲン酸３－Ｏ－グルクロニドが産生された（実施例２１）。 ｅ 非ホウレンソウ植物種である、ダイズ（Glycine max）、アルファルファ（Medicago sativa）、ミヤコグサ（Lotus japonicus）、カンゾウ（ウラルカンゾウ（Glycyrrhiza uralensis））、ビートルート（Beta vulgaris）、及びキノア（Chenopodium quinoa）において、ホウレンソウＳＯＡＰ５酵素と最も近いホモログをクローニングし、ベンサミアナタバコにおいて、ＳＯＡＰ１～４と共に一過性で発現させたところ、メディカゲン酸３－Ｏ－グルクロニドが産生された（実施例２２）。 ｆ 上記ｅに記載されるとおりクローニングされた、カンゾウ由来のＣＳＬＧ酵素が、カンゾウで産生されるトリテルペノイド系サポニンであるグリチルリチンの生合成における、アグリコンへのグルクロン酸の付加に関与することが示された（実施例２３）。 ｇ ホウレンソウ由来のＣＳＬＧ酵素であるＳＯＡＰ５酵素を古典的なセルロース合成酵素Ａ（ＣＥＳＡ）と比較し、これらが約３０％のアミノ酸配列類似性であり進化的に異なることが示され、さらに、ＳＯＡＰ５酵素は、ＣＥＳＡの特定のアミノ酸モチーフが保存されていないことが示された（実施例２４）。 ｈ 蛍光レポーターを用いた実験により、ＳＯＡＰ１～５タンパク質は、小胞体中で互いに近接して局在化していることが示された（実施例２５）。 （カ）図面（図面の簡単な説明を含む） 「【図１】 ［図：0001427134000001.jpg］ 【図１】ナス科の植物のトリテルペノイド生合成経路において、コレステロールからα－トマチンに至るまでのステロイド系グリコアルカロイドの生合成経路を提案している。破線及び実線の矢印は、それぞれ、経路中の複数または単一の酵素反応を表す。」 「【図１３】 ［図：0001427134000002.jpg］ 【図１３】シクロアルテノール（Ｐａｒｔ Ｉ）から、コレステロール（Ｐａｒｔ ＩＩ）、トマチジン（Ｐａｒｔ ＩＩＩ）、α－トマチンを含むステロイド系グリコアルカロイドを経てリコペロシド／エスクレオシド（Ｐａｒｔ ＩＶ）に至る、ナス科植物における拡大された生合成経路の提案を示している。破線の矢印は、経路中の複数の酵素反応を表す。」 「図１４Ｄ ［図：0001427134000003.jpg］ 【図１４Ｄ】トマチジンからトマチジン３－Ｏ－グルクロニドの生成までの、ナス科植物におけるＳＧＡ生合成経路の提案部分を示す図である。ＧＡＭＥ１５セルロース合成酵素様Ｇ酵素が、トマチジンの水酸基の位置にグルクロン酸の付加を触媒している。」 「【図２０Ａ】 ［図：0001427134000004.jpg］ 【図２０Ａ】共発現したサポニンβ－アミリン合成酵素（ＳＯＡＰ）遺伝子を含む、ホウレンソウのサポニンの生合成経路を示す図である。Ｃ－２０位（赤で強調）にグルクロン酸が結合したアセチル化トリテルペノイドサポニンであるＹｏｓｓｏｓｉｄｅ Ｖの生成に至る完全な生合成経路。ＳＯＡＰ酵素の活性による各生成物は緑色で表示されている。ＳＯＡＰ酵素は、ホウレンソウのサポニン生産に関与する酵素である。」 ウ 判断 （ア）本願補正発明が解決しようとする課題 本願明細書の前記イ（イ）に示す「【課題を解決するための手段】」として記載された事項（特に【００４０】）から、本願補正発明が解決しようとする課題は、本願補正発明の発明特定事項にも反映されているとおり、セルロース合成酵素様Ｇ（ＣＳＬＧ）酵素の発現の制御、又はその遺伝子の配列改変により、少なくとも１つのトリテルペノイド系サポニンの含有量を低減させる方法を提供すること、であると認められる。 そして、本願補正発明には、「セルロース合成酵素様Ｇ（ＣＳＬＧ）酵素をコードする核酸遺伝子配列」について、「配列番号３０に記載の核酸配列を含むか、または、配列番号３０に記載の核酸配列に対して少なくとも９０％の同一性及び少なくとも５５％のカバレッジを有するそのホモログ」であること、ＣＳＬＧ酵素の発現の制御として、「少なくとも１つのサイレンシング分子を用い」ること、ＣＳＬＧ酵素の遺伝子の配列改変として、「突然変異させる」ことが特定されている。 したがって、本願補正発明がサポート要件を満たすには、本願明細書等において、「セルロース合成酵素様Ｇ（ＣＳＬＧ）酵素をコードする核酸遺伝子配列」である「配列番号３０に記載の核酸配列を含むか、または、配列番号３０に記載の核酸配列に対して少なくとも９０％の同一性及び少なくとも５５％のカバレッジを有するそのホモログ」に対して、「少なくとも１つのサイレンシング分子を用い」ること、又は「突然変異させる」ことによって、「少なくとも１つのトリテルペノイド系サポニンの含有量を低減させる」ことができ、上記課題を解決できると当業者が認識できるように記載されている必要がある。 （イ）ステロイド系サポニンとトリテルペノイド系サポニンについて 本願明細書等の【０００４】（前記イ（ア））に記載されているように、サポニンは、１以上のグリコシド部分（糖部分）とトリテルペノイド又はステロイド骨格のアグリコン部分とからなる化合物の総称であるところ、本願明細書等に記載される「ステロイド系サポニン」、「トリテルペノイド系サポニン」は、それぞれ、アグリコン部分がステロイド骨格であるサポニン、アグリコン部分がトリテルペノイド骨格であるサポニンである。 さらに、ナス科植物における生合成経路の例として、トマトにおける生合成が示された図１３から、「ステロイド系サポニン」は、シクロアルテノールからコレステロールを経由して生合成されるのに対して、「トリテルペノイド系サポニン」は、シクロアルテノールから直接生合成されるものである。 （ウ）セルロース合成酵素様Ｇ（ＣＳＬＧ）酵素について 本願の実施例には、ＣＳＬＧ酵素として、トマト、ジャガイモ、及びナス由来のＧＡＭＥ１５（前記イ（エ））、並びにホウレンソウ、及び非ホウレンソウ植物種由来のＳＯＡＰ５（前記イ（オ））が記載されている。両者は、共に、サポニン生合成において、アグリコンに糖を結合させる反応を触媒するが、基質とするアグリコンが、ＧＡＭＥ１５ではステロイド骨格であり、ＳＯＡＰ５ではトリテルペノイド骨格である点で異なり、その結果、生合成するサポニンの種類も、ＧＡＭＥ１５では「ステロイド系サポニン」である一方、ＳＯＡＰでは「トリテルペノイド系サポニン」であり異なる（ＧＡＭＥ１５酵素：前記イ（エ）、前記イ（カ）図１４Ｄ／ＳＯＡＰ５酵素：前記イ（オ）、図２０Ａ）。 酵素は、基質特異性を有するタンパク質であるから、上記のとおり基質が異なるＧＡＭＥ１５とＳＯＡＰ５は、関与する触媒反応が異なる、別の種類の酵素であるといえる。本願の実施例で代表的に示されているトマト由来のＧＡＭＥ１５とホウレンソウ由来のＳＯＡＰ５について、これらのアミノ酸配列（前者は配列番号３１に示され、後者は配列番号６６に示されるもの）の配列同一性を当審が算出したところ、確かに５０％未満と低く、構造的にも類似性のないものである。 （エ）サポート要件、及び実施可能要件についての判断 前記（ウ）のとおり、ＧＡＭＥ１５とＳＯＡＰ５は、基質が異なり、関与する触媒反応も異なる別の酵素と解され、ＧＡＭＥ１５は基質であるステロイド骨格を糖に結合させてステロイド系サポニンを生合成すものであるところ、本願の実施例には、ＧＡＭＥ１５がトリテルペノイド系サポニンの生合成にも関与することは、何ら具体的に示されていない。そうすると、本願補正発明において「配列番号３０に記載の核酸配列」（上記のとおりトマト由来のＣＳＬＧ酵素であるＧＡＭＥ１５をコードする核酸配列）により特定される「セルロース合成酵素様Ｇ（ＣＳＬＧ）酵素」と本願補正発明の「トリテルペノイド系サポニン」の生合成との関係は何ら具体的な開示がないといえる。 本願明細書等の実施例以外の記載について検討しても、ステロイド系サポニン及びトリテルペノイド系サポニンが、ＣＳＬＧ酵素との関係で同列に一般的に記載されている箇所が多数存在する（前記イ（イ）【００３７】～【００４０】、前記イ（ウ）【００６２】等）一方で、トリテルペノイド系サポニンの生合成においてＧＡＭＥ１５が機能する、又は機能する蓋然性が高い、といえることの具体的な根拠は何ら示されていない。 そうすると、本願補正発明で特定される「配列番号３０に記載の核酸配列」は、トマトのＧＡＭＥ１５酵素をコードするものであるから、「セルロース合成酵素様Ｇ（ＣＳＬＧ）酵素をコードする核酸遺伝子配列」である「配列番号３０に記載の核酸配列を含むか、または、配列番号３０に記載の核酸配列に対して少なくとも９０％の同一性及び少なくとも５５％のカバレッジを有するそのホモログ」に対して、「少なくとも１つのサイレンシング分子を用い」ること、又は「突然変異させる」ことによってステロイド系サポニンの含有量を低減できることは把握できるとしても、「少なくとも１つのトリテルペノイド系サポニンの含有量を低減させる」ことができることは、当業者といえども把握できるとは認められない。 したがって、本願補正発明は、前記（ア）に示す課題が解決できることを当業者が認識できるように本願明細書等に記載された範囲を超えているから、本願は、特許法第３６条第６項第１号に規定する要件を満たしていない。 また、上記のとおり、実施例を含む本願明細書等には、トリテルペノイド系サポニンの生合成においてＧＡＭＥ１５が機能することが何ら具体的に記載されておらず、本願出願時の技術常識を参酌しても、当業者がそのように把握できるともいえず、トマトのＧＡＭＥ１５酵素に対して「サイレンシング分子を用い」る、又は「突然変異させる」ことにより、「トリテルペノイド系サポニンの含有量を低減させる」実施態様に係る本願補正発明について、これを実施することができる程度に本願の発明の詳細な説明が明確かつ十分に記載したものとは認められないから、本願は、特許法第３６条第４項第１号に規定する要件を満たしていない。 エ 請求人の主張について 請求人は、令和５年５月１７日付け審判請求書において、概ね以下の点を主張している。 （ア）本願の発明の詳細な説明には、ＳＯＡＰ５の過剰発現及びサイレンシングによるトリテルペノイド系サポニンの調節、及びＧＡＭＥ１５のサイレンシングによるエスクレオシド、α－ソラニン及びα－チャコニンの減少が実験的証拠に基づいて示されていること。 （イ）追加で提出する出願後データでは、エンドウのＣＳＬ遺伝子を遺伝子編集によって変異させたエンドウ植物を作製したところ、ソヤサポニンβｇ及びソヤサポニンＢｂがほぼ完全に消失したことが示されていること。 しかしながら、上記（ア）の主張について、前記ウ（エ）に示すとおり、本願明細書等において、ステロイド系サポニン及びステロイド系グリコアルカロイドの生合成においてＧＡＭＥ酵素が機能すること、及びトリテルペノイド系サポニンの生合成においてＳＯＡＰ酵素が機能することが具体的に開示されていることは、当審で認めるところであり、この点を主張するにすぎないものである。 また、上記（イ）の主張について、本願補正発明で「配列番号３０に記載の核酸配列」によって特定される「セルロース合成酵素様Ｇ（ＣＳＬＧ）酵素」の遺伝子とエンドウのＣＳＬ遺伝子との構造的な関係性は何ら示されておらず、本願明細書等のいずれの記載内容を補足するデータが不明であるところ、当該データを参酌することはできない。仮に、当該データが、カンゾウ等のマメ目の植物について具体的に開示する実施例１４～２５（前記イ（オ））を補足するものであるとしても、トリテルペノイド系サポニンの生合成においてＳＯＡＰ酵素が機能することの根拠をさらに提示するものにすぎない。 以上のとおり、請求人の上記（ア）、（イ）の主張は、トリテルペノイド系サポニンの生合成においてＧＡＭＥ酵素が機能することの根拠を示すものではなく、採用できるものではない。 （２）補正の適否のまとめ したがって、前記（１）に記載したとおり、本願補正発明は、特許出願の際独立して特許を受けることができるものではないから、特許法第１７条の２第６項において準用する同法第１２６条第７項の規定に適合しないものである。 ４．補正の却下の決定のむすび 以上のとおり、本件補正は、特許法第１７条の２第６項において準用する同法第１２６条第７項の規定に適合しないものであるから、本件補正は、同法第１５９条第１項において読み替えて準用する同法第５３条第１項の規定により却下すべきものである。 よって、［補正の却下の決定の結論]のとおり決定する。 第３ 本願発明 本件補正は上記のとおり却下されたので、この出願の請求項１～１５に係る発明は、令和４年１０月２６日付け誤訳訂正書により補正された特許請求の範囲の請求項１～１５に記載の事項により特定される発明であり、そのうち、請求項１に係る発明（以下、「本願発明」という。）は、以下のとおりのものと認める。 「【請求項１】 植物またはその少なくとも一部の少なくとも１つの細胞における、少なくとも１つのステロイド系サポニン、または、少なくとも１つのトリテルペノイド系サポニンの含有量を低減させる方法であって、 前記少なくとも１つの細胞の遺伝子を組み換える遺伝子組換えステップを含み、 前記遺伝子組換えステップは、 （ａ）セルロース合成酵素様Ｇ（ＣＳＬＧ）酵素をコードする核酸遺伝子配列を標的とする少なくとも１つのサイレンシング分子を用いて前記少なくとも１つの植物細胞を形質転換するステップであって、前記ＣＳＬＧ酵素をコードする前記核酸遺伝子配列は、配列番号３０に記載の核酸配列を含むか、または、配列番号３０に記載の核酸配列に対して少なくとも９０％の同一性及び少なくとも５５％のカバレッジを有するそのホモログである、該ステップ、または、 （ｂ）前記ＣＳＬＧ酵素をコードする前記少なくとも１つの核酸遺伝子配列を突然変異させるステップであって、前記ＣＳＬＧ酵素をコードする前記少なくとも１つの核酸遺伝子配列は、配列番号３０に記載の核酸配列を含むか、または、配列番号３０に記載の核酸配列に対して少なくとも９０％の同一性及び少なくとも５５％のカバレッジを有するそのホモログを含み、前記突然変異が、（１）前記核酸配列内に１以上の点突然変異を導入すること、（２）前記核酸配列内に欠失を導入すること、（３）前記核酸配列内に挿入を導入すること、または、（４）それらの任意の組み合わせを含み、前記導入が、コード配列または非コード配列を突然変異させることを含む、該ステップ、を含み、 遺伝子が組み換えられた遺伝子組換え細胞における前記ＣＳＬＧ酵素をコードする遺伝子の発現は、対応する非組換え植物の細胞における発現と比較して減少し、 前記遺伝子組換え細胞を含む植物は、少なくとも１つのステロイド系サポニン、または、少なくとも１つのトリテルペノイド系サポニンの含有量が、対応する非組換え植物と比較して減少する、方法。」 第４ 原査定の理由 令和５年１月６日付け拒絶査定（原査定）は、本願の請求項１～１５に係る発明は、特許法第３６条第６項第１号、及び同法第３６条第４項第１号に規定する要件を満たしておらず、特許を受けることができない、という理由を含むものである。 第５ 当審の判断 本願発明の解決しようとする課題は、請求項１及び本願明細書の記載からみて、セルロース合成酵素様Ｇ（ＣＳＬＧ）酵素の発現の制御、又はその遺伝子の配列改変により、少なくとも１つのステロイド系サポニン、又は少なくとも１つのトリテルペノイド系サポニンの含有量を低減させる方法を提供すること、であると認められる。 そして、本願発明における「少なくとも１つのステロイド系サポニン、または、少なくとも１つのトリテルペノイド系サポニンの含有量を低減させる方法」は、本願補正発明（前記第２の２．（１）ア）における「少なくとも１つのトリテルペノイド系サポニンの含有量を低減させる方法」を含むものである。 したがって、前記第２の２．（１）と同様の理由により、本願発明は、発明の詳細な説明において発明の課題が解決できることを当業者が認識できるように記載された範囲を超えており、発明の詳細な説明は、本願発明を実施することができる程度に明確かつ十分に記載したものではない。 よって、本願発明は、特許法第３６条第６項第１号、及び同法第３６条第４項第１号に規定する要件を満たしておらず、特許を受けることができない。 第６ むすび 以上のとおり、この出願の請求項１に係る発明は、特許法第３６条第６項第１号、及び同法第３６条第４項第１号に規定する要件を満たしておらず、特許を受けることができないものであるから、他の請求項に係る発明について言及するまでもなく、本願は拒絶すべきものである。 よって、結論のとおり審決する。