2021-012621

原査定において引用文献３として引用した、本願の優先日（２０１４年１１月１９日）前である２０１４年６月１２日に公知となった「国際公開第２０１４／０８９４４９号」には、以下の事項が記載されている。なお、英文で記載されているため、当審合議体による訳文で記載し、また、下線は実施例８の標題に元から付されているもの以外については当審合議体が付した。

引ア 特許請求の範囲

「１． 神経変性疾患の治療方法であって、そのような治療を必要とする対象に、治療的有効量のＴＰＰ１のアップレギュレーションを媒介する薬剤を含む組成物を投与することを含む、方法。

２． 神経変性疾患が、神経セロイドリポフスチン症、アルツハイマー病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、パーキンソン病（パーキンソン病＋多系統萎縮症（ＭＳＡ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、皮質基底変性（ＣＢＤ）及びレビー小体を伴う認知症（ＤＬＢ））などの疾患を含む）からなる群から選択される、請求項１記載の方法。

・・・（中略）・・・

５． 神経変性疾患が、神経セロイドリポフスチン症である、請求項２に記載の方法。

６． 薬剤が脂質低下剤である、請求項１－５のいずれかに記載の方法。

７． 脂質低下薬がフィブラートである、請求項６に記載の方法。

８． フィブラートがゲムフィブロジルまたはフェノフィブラートである、請求項７に記載の方法。

・・・（中略）・・・

１１． 組成物が、治療的有効量のオールトランス型レチノイン酸をさらに含む、請求項１－１０のいずれかに記載の方法。

・・・（以下省略）」

引イ ［０００４］、「０００５」

「［０００４］ 神経セロイドリポフスチン症（ＮＣＬ）は、主に典型的な常染色体劣性遺伝のリソソーム蓄積障害からなる神経変性疾患の一群である。神経セロイドリポフスチン症は、神経細胞や他の細胞型に自家蛍光を発する貯蔵物質の蓄積などの組織所見を伴い、進行性の精神低下、認知障害、視覚障害、発作、運動機能の悪化などの臨床症状で特徴付けられる(1)。ＮＣＬは、発症年齢、蓄積物質の超微細構造の違い、各病型に特異的な遺伝子変化などに基づいて、いくつかのグループ（Typel-10）に細分化されている（2,3）。

［０００５］ 後期乳児神経細胞セロイドリポフスチン症（Jansky-Bielschowsky病、ＬＩＮＣＬ、２型）は、典型的には２～４歳で症状が現れ、急速に進行し、８～１５歳で神経細胞とその他の細胞の数が激減する結果、死に至る（2,4）。ＬＩＮＣＬは、第１染色体１１ｐ１５．５にマップされた１３エキソン、１２イントロン、総長６．６５ｋｂのＣｌｎ２遺伝子の変異に関連している。Ｃｌｎ２遺伝子は、リソソームトリペプチダーゼＩ（ＴＰＰ－Ｉまたはペプチン不感受性プロテアーゼ）をコードしており、リソソームの酸性環境下でタンパク質のアミノ末端からトリペプチドを除去する４６ＫＤタンパク質として機能している（5,6）。Ｃｌｎ２遺伝子に変異があると、ＴＰＰ１タンパク質の欠損や機能低下が起こり、セロイドリポフスチンとして知られる自己蛍光性色素がリソソーム内に蓄積される(5)。現在、この疾患に対する確立された治療法や薬剤はなく、すべてのアプローチは単に支持的または対症的であり、新しい治療アプローチの必要性を示している(7)。しかし、Ｃｌｎ２遺伝子変異には様々なバリエーションがあり、ＬＩＮＣＬ患者ではＴＰＰ－Ｉ活性が残存しているとの報告があることから、ＬＩＮＣＬ患者では正常なＣｌｎ２遺伝子が数コピー残存しているものと思われる(8,9)。」

引ウ 実施例８（［００７７］）

「実施例８

フィブラート系薬剤によるＴＰＰ１のアップレギュレーションは、ＰＰＡＲαとＲＸＲαの両方が関与していること

［００７７］ 次に、このアップレギュレーションのメカニズムについて検討した。Ｃｌｎ２遺伝子のプロモーターにはＰＰＡＲ結合部位がなく、代わりにＲＸＲ結合部位が存在することが確認された。ＲＸＲαは脳やアストロサイトに多く存在すること(32,33)、ＰＰＡＲαとＲＸＲαはヘテロ二量体を形成することから、ＰＰＡＲα単独ではなくＰＰＡＲαとＲＸＲαが協調的に作用することがＴＰＰ１発現上昇のメカニズムであると考えられた。この仮説を検証するために、様々な実験を行った。まず、ＲＸＲの活性化因子として知られているオールトランス型レチノイン酸（ＲＡ）でＲＸＲを活性化すると、ＴＰＰ１のｍＲＮＡやタンパク質量に変化が生じるかどうかを確認した。興味深いことに、定量的リアルタイムＰＣＲのデータから、ＲＡ単独でもＣｌｎ２のｍＲＮＡレベルが増強されることがわかった（図６Ａ）。0.5μΜの濃度のＲＡは、Ｃｌｎ２ ｍＲＮＡレベルに約３．５倍の増加をもたらし、これは10μΜのゲムフィブロジル処理の効果（～４倍）に匹敵する（図６Ａ）。さらに、細胞を低用量のゲムフィブロジル（10μΜ）とＲＡ（異なる濃度）で処理した場合、Ｃｌｎ２レベルの大幅な増加が見られ、組み合わせの最適濃度は10μΜ ゲムフィブロジルと0.5μΜ ＲＡ（約１２倍増加）であった（図６Ａ）。これらのｍＲＮＡデータは、同様の処理を用いてマウスのアストロサイトで行ったウェスタンブロットによって検証された（図６Ｂ）。デンシトメトリー分析では、ｍＲＮＡデータから観察されたのと同様のＴＰＰ１のタンパク質レベルの増加パターンが示された（図６Ｃ）。リアルタイムＰＣＲとイムノブロット実験の両方で、ゲムフィブロジル（10μΜ）またはＲＡ（0.5μΜ）単独処理と比較して、組み合わせ処理（ゲムフィブロジル 10μΜおよびＲＡ 0.5μΜ）によるＴＰＰ１発現の増加は、統計的に有意であることが判明した。この結果は、Ｃｌｎ２遺伝子のアップレギュレーションにＲＸＲが関与している可能性を明確に示している。次に、ＲＸＲαの関与を確認するために、ＲＸＲαのｓｉＲＮＡによってアストロサイトのＲＸＲαをノックダウンした後、ゲムフィブロジルおよびＲＡで処理した。このｓｉＲＮＡはＲＸＲαを特異的にノックダウンし、ＲＸＲβもＲＸＲγもノックダウンしないことがわかった（図６Ｄ）。ゲムフィブロジルおよびＲＡの効果は、定量的リアルタイムＰＣＲデータから観察されるように、ＲＸＲαの非存在下で消失することが見出された（図６Ｅ）。スクランブルｓｉＲＮＡでトランスフェクトされていない細胞とトランスフェクトされた細胞の両方でＣｌｎ２レベルがほぼ８～１０倍増加したのに対し、ＲＸＲαをノックダウンした細胞は、ゲムフィブロジルまたはＲＡの単独投与および併用投与に対してほとんど反応しなかった（図６Ｅ）。同様の結果は、タンパク質解析でも得られた。ＴＰＰ１ウェスタンブロットの非測定分析では、ＲＸＲα ｓｉＲＮＡを導入した細胞でＴＰＰ１レベルの増強はほとんど見られなかった（図６Ｆ ＆ ６Ｇ）。最後に、ＰＰＡＲαとＲＸＲαの両方がアップレギュレーションプロセスに関与しているという我々の仮説を検証するために、ＲＸＲα単独の活性化（ＰＰＡＲα非存在下）がＣｌｎ２の発現を誘導できるかどうかを確認した。野生型（ＷＴ）、ＰＰＡＲα－／－およびＰＰＡＲβ－／－マウスのアストロサイトをＲＡ（0.5μΜ）およびゲムフィブロジル（10μΜ）とＲＡ（0.5μΜ）の組み合わせで処理した後、ＴＰＰ１について免疫ブロット分析した。その結果、ＰＰＡＲα－／－細胞ではＲＡ単独でも併用でもＴＰＰ１を誘導できなかったが、ＷＴおよびＰＰＡＲβ－／－細胞ではＴＰＰ１を誘導することが確認された（約５～６倍のＴＰＰ１誘導）（図６Ｈ ＆ ６Ｉ）。これらのデータは、ＰＰＡＲαまたは ＲＸＲαのどちらか一方だけでは、ＴＰＰ１のアップレギュレーションに十分ではないことを示唆している。」

引エ 図６Ａ～Ｃ

「

［図：0001399837000001.jpg］

」