2021-013670

特願２０１８－５２１５７５「リガーゼ支援核酸環状化および増幅」拒絶査定不服審判事件〔平成２９年 ５月１１日国際公開、ＷＯ２０１７／０７９１１４、平成３１年 １月１７日国内公表、特表２０１９－５００８５２〕について、次のとおり審決する。

結 論 本件審判の請求は、成り立たない。

理 由 第１ 手続の経緯 本願は、２０１６年（平成２８年）１１月１日（パリ条約による優先権主張外国庁受理 ２０１５年１１月５日 米国（ＵＳ））を国際出願日とする出願であって、令和３年５月２６日付けで拒絶査定がなされ、同年１０月７日に拒絶査定不服審判の請求がなされると同時に手続補正がなされたものである。 第２ 令和３年１０月７日付け手続補正についての補正却下の決定 ［結論］ 令和３年１０月７日付け手続補正を却下する。 ［理由］ １．本件補正 令和３年１０月７日に提出された手続補正書による手続補正（以下、「本件補正」という。）は、特許請求の範囲の請求項１に、 （補正前）「【請求項１】 核酸増幅のための方法であって、前記方法が、 （ａ）線状染色体ＤＮＡを準備する工程と； （ｂ）一本鎖ＤＮＡ配列の鋳型非依存性分子内ライゲーションの可能なリガーゼとともに前記線状染色体ＤＮＡをインキュベートして一本鎖ＤＮＡ環を生成する工程と； （ｃ）ランダムプライマー混合物を使用するローリングサークル増幅によって前記一本鎖ＤＮＡ環を増幅して増幅ＤＮＡ産物を形成する工程とを含み、 前記ランダムプライマー混合物が、少なくとも１つのヌクレオチド類似体を含むオリゴヌクレオチド配列を含み、かつ 前記方法の前記工程の全てが、介在する単離および精製工程を含まずに、単一の反応器で実施される、 方法。」とあったものを、 （補正後）「【請求項１】 核酸増幅のための方法であって、前記方法が、 （ａ）線状染色体ＤＮＡを準備する工程と、 （ｂ）一本鎖ＤＮＡ配列の鋳型非依存性分子内ライゲーションの可能なリガーゼとともに前記線状染色体ＤＮＡをインキュベートして一本鎖ＤＮＡ環を生成する工程と、 （ｃ）ランダムプライマー混合物を使用するローリングサークル増幅によって前記一本鎖ＤＮＡ環を増幅して増幅ＤＮＡ産物を形成する工程と を含み、 前記ランダムプライマー混合物が、少なくとも１つのヌクレオチド類似体を含むオリゴヌクレオチド配列を含み、 前記方法の前記工程の全てが、介在する単離又は精製工程を含まずに、単一の反応器で実施され、 前記方法が、前記増幅ＤＮＡ産物を配列決定することをさらに含む、 方法。」とする補正事項を含むものである。 なお、下線は補正された部分である。 ２．本件補正の目的 本件補正により、補正前の請求項１に、補正前の請求項２１に記載されていた「前記増幅ＤＮＡ産物を配列決定することをさらに含む」ことが追加されたので、補正前の方法が限定された。 そして、補正前の請求項１に記載された発明と補正後の請求項１に記載される発明は、産業上の利用分野及び解決しようとする課題が同一である。 そうすると、本件補正は、特許法第１７条の２第５項第２号に掲げる特許請求の範囲の限定的減縮を目的とするものを含むと認められる。 そこで、本件補正により補正された特許請求の範囲の請求項１に記載された事項により特定される発明（以下、「補正発明」という。）が、特許出願の際独立して特許を受けることができるものであるか（特許法第１７条の２第６項において準用する同法第１２６条第７項の規定に適合するか）（以下、「独立特許要件」という。）について、以下で検討する。 ３．独立特許要件の検討 （１）引用文献１の記載 拒絶査定において引用文献１として引用された、本願の優先日（２０１５年（平成２７年）１１月５日）より前の２０１５年１月２９日に公知となった国際公開第２０１５／０１３６０４号には、次の事項が記載されている。 なお、引用文献１は、英文であるから、引用文献１のパテントファミリーである特表２０１６－５２５３６０号公報の記載事項を翻訳文として使用する。また、下線は当審で付したものである。 引１ア． 「請求の範囲 １．線状ＤＮＡから一本鎖ＤＮＡ環を生成するための方法であって、 （ａ）線状ＤＮＡを準備する工程と、 （ｂ）線状ＤＮＡをリン酸供与体の存在下でポリヌクレオチドキナーゼとともにインキュベートして、５’末端にリン酸基を有し、３’末端にヒドロキシル基を有するライゲーション可能なＤＮＡ配列を生成する工程と、 （ｃ）ライゲーション可能なＤＮＡ配列を、一本鎖ＤＮＡ配列の鋳型非依存性分子内ライゲーションが可能なリガーゼとともにインキュベートして、一本鎖ＤＮＡ環を生成する工程と を含んでおり、当該方法の工程の全てが、単離もしくは精製工程を介さずに単一の反応器で実施される、方法。 ・・・ １４．等温条件下で一本鎖ＤＮＡ環を増幅する工程をさらに含む、請求項１に記載の方法。 １５．一本鎖ＤＮＡ環が、ローリングサークル増幅を介して増幅される、請求項１４に記載の方法。 １６．ローリングサークル増幅が、ヌクレアーゼ耐性プライマーを用いて実施される、請求項１５に記載の方法。 １７．ヌクレアーゼ耐性プライマーが、１以上の修飾ヌクレオチドを含む、請求項１６に記載の方法。 １８．一本鎖ＤＮＡ環が、ランダムプライマー混合物を用いて増幅される、請求項１５に記載の方法。」（特許請求の範囲） 引１イ． 「技術分野 [0001] 本発明は、一般に、鋳型非依存性一本鎖ＤＮＡライゲーションによって一本鎖もしくは二本鎖線状ＤＮＡから一本鎖ＤＮＡ環を生成することを伴う核酸アッセイに関する。それはさらに、ローリングサークル増幅による一本鎖ＤＮＡ環の増幅及び／又は検出に関する。一本鎖ＤＮＡ環の生成及びその後のＤＮＡ増幅は、単離及び／又は精製工程を介さずに単一の反応器で実施される。これらの方法を実施するためのキットも提供される。」 引１ウ． 「[0025] 本明細書において、用語「ヌクレオチド類似体」とは、天然に存在するヌクレオチドに構造的に類似する化合物をさす。ヌクレオチド類似体は、変更されたリン酸主鎖、糖部分、ヌクレオベース、又はその組合せを有してよい。ヌクレオチド類似体は、天然ヌクレオチド、合成ヌクレオチド、修飾ヌクレオチド、又は代替置換部分（例えば、イノシン）であってよい。一般に、変更されたヌクレオベースをもつヌクレオチド類似体は、とりわけ、異なる塩基対形成及び塩基スタッキング特性を付与する。本明細書において、用語「ＬＮＡ（ロックド核酸）ヌクレオチド」とは、ヌクレオチドの糖部分がリボ核酸（ＲＮＡ）を模倣する糖コンホメーションにロックされた二環式フラノース単位を含有するヌクレオチド類似体をさす。デオキシリボヌクレオチド（又はリボヌクレオチド）からＬＮＡヌクレオチドへの構造変化は、化学的見地から限られている、つまり、２’位と４’位の炭素原子間のさらなる結合の導入である（例えば、２’－Ｃ，４’－Ｃ－オキシメチレン結合、例えば、Ｓｉｎｇｈ，Ｓ．Ｋ．，ｅｔ．ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍ．，４，４５５－４５６，１９９８、又はＫｏｓｈｋｉｎ，Ａ．Ａ．，ｅｔ．ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，５４，３６０７－３６３０，１９９８参照）。ＬＮＡヌクレオチドにおいてフラノ－ス単位の２’位及び４’位は、Ｏ－メチレン（例えば、オキシ－ＬＮＡ：２’－Ｏ、４’－Ｃ－メチレン－β－Ｄ－リボフラノシルヌクレオチド）、Ｓ－メチレン（チオ－ＬＮＡ）、又はＮＨ－メチレン部分（アミノ－ＬＮＡ）、及び同類のものによって結合されてよい。そのような結合は、フラノ－ス環のコンホメ－ションの自由度を制限する。ＬＮＡオリゴヌクレオチドは、相補的一本鎖ＲＮＡ、及び相補的一本鎖もしくは二本鎖ＤＮＡに対するハイブリダイゼ－ション親和性の向上を示す。ＬＮＡオリゴヌクレオチドは、Ａ型（ＲＮＡ様）の二重鎖コンホメ－ションを誘導することができる。改変されたリン酸塩－糖骨格（例えば、ＰＮＡ、ＬＮＡ）を有するヌクレオチド類似体は、多くの場合、とりわけ、二次構造形成などの鎖の性質を修飾する。文字呼称の前の星（＊）記号は、その文字で指定されるヌクレオチドがホスホロチオエ－ト修飾ヌクレオチドであることを示す。例えば、＊Ｎは、ホスホロチオエ－ト修飾ランダムヌクレオチドを表す。文字呼称の前のプラス（＋）記号は、その文字で指定されるヌクレオチドがＬＮＡヌクレオチドであることを示す。例えば、＋Ａは、アデノシンＬＮＡヌクレオチドを表し、＋Ｎは、ロックドランダムヌクレオチド（すなわちランダムＬＮＡヌクレオチド）を表す。 ・・・ [0028] 本明細書において、用語「ランダムプライマ－」とは、オリゴヌクレオチド配列の任意の所与位置で、該所与位置が可能性のあるヌクレオチド又はそれらの類似体のいずれからも構成されうるような方法（完全ランダム化）でヌクレオチドをランダム化することによって生成されたプライマ－配列の混合物をさす。従ってランダムプライマ－は、配列内のヌクレオチドのあらゆる可能性のある組合せからなる、オリゴヌクレオチド配列のランダムな混合物である。例えば、六量体のランダムプライマ－は、配列ＮＮＮＮＮＮ又は（Ｎ）６で表すことができる。六量体ランダムＤＮＡプライマ－は、４つのＤＮＡヌクレオチド、Ａ、Ｃ、Ｇ及びＴのあらゆる可能性のある六量体の組合せからなり、結果として４６（４，０９６）の特有の六量体ＤＮＡオリゴヌクレオチド配列を含むランダム混合物となる。ランダムプライマ－は、標的核酸の配列が不明である場合か、又は全ゲノム増幅反応のために、核酸合成反応を開始させるために効果的に使用することができる。」 引１エ． 「[0037] 線状ＤＮＡは、天然もしくは合成起源の二本鎖又は一本鎖ＤＮＡであってよい。ＤＮＡは、生体試料から得てもよいし（例えば、生物学的被験体から得た試料）、或いは、インビボ又はインビトロで未知の物体から見出してもよい（例えば、法医学調査中に得たＤＮＡ） 例えば、それは、限定されるものではないが、生物学的被験体の体液（例えば、血液、血漿、血清、尿、乳、脳脊髄液、胸腔内液、リンパ液、涙、痰、唾液、便、肺吸引液、咽頭もしくは生殖器スワブ）、器官、組織、細胞培養、細胞分画、切片（例えば、器官又は組織の断面部分）或いは生物学的被験体から、又は特定領域（例えば、疾患細胞、又は血中循環腫瘍細胞を含有する領域）から単離した細胞から得ることができる。標的線状ＤＮＡ（すなわち目的の線状ＤＮＡ）を含有するか含有すると思われる生体試料は、真核生物起源、原核生物起源、ウイルス起源又はバクテリオファ－ジ起源の試料であってよい。例えば、標的線状ＤＮＡは、昆虫、原虫、鳥類、魚類、爬虫類、哺乳類（例えば、ラット、マウス、ウシ、イヌ、モルモット、又はウサギ）、又は霊長類（例えば、チンパンジ－又はヒト）から得ることができる。線状ＤＮＡは、ゲノムＤＮＡ又はｃＤＮＡ（相補ＤＮＡ）であってよい。ｃＤＮＡは、逆転写酵素を用いてＲＮＡ鋳型（例えば、ｍＲＮＡ、リボソ－ムＲＮＡ）から生成することができる。線状ＤＮＡは、断片化されたＤＮＡであってよく、ライゲ－ションできない末端ヌクレオチドを有してよい。例えば、線状ＤＮＡは、ＤＮＡリガ－ゼが分子内ライゲ－ション反応を実施することができないように、５’ヒドロキシル基及び／又は３’リン酸基を含むことがある。線状ＤＮＡは、溶液中に分散させてもよいし、固相支持体、例えばブロット、アッセイ、アレイ、スライドガラス、マイクロタイタ－プレ－ト又はＥＬＩＳＡプレ－トの上に固定化されていてもよい。例えば、線状ＤＮＡは、プライマ－を通じて基板の上に固定化されていてよく、その後環状化され増幅されてよい。」 引１オ． 「[0042] ライゲ－ション反応混合物中のｓｓＤＮＡ環は、ロ－リングサ－クル増幅（ＲＣＡ）方法によって等温条件下で増幅させることができる。ＤＮＡポリメラ－ゼ、プライマ－及びｄＮＴＰを含む増幅試薬を同じ反応器に添加して増幅反応混合物を生成し、ＲＣＡ反応を開始させてよい。増幅反応混合物には、一本鎖ＤＮＡ結合タンパク質などの試薬及び／又は適した増幅反応緩衝液がさらに含まれてよい。ｓｓＤＮＡ環の増幅は、ライゲ－ションが実施されている同じ反応器で実施される。ｓｓＤＮＡ環の単離又は精製及び／又はリガ－ゼの除去は、増幅反応の前に必要ではない。増幅されたＤＮＡは、ＤＮＡ検出のための現在公知の方法のいずれかによって検出されてよい。 [0043] ＲＣＡは、Ｐｈｉ２９ＤＮＡポリメラ－ゼなどの当技術分野で公知のＤＮＡポリメラ－ゼのいずれかを使用することによって実施されてよい。それは、ランダムプライマ－混合物を用いて、又は特異的プライマ－を用いることにより実施されてよい。一部の実施形態では、ランダムプライマ－がＲＣＡ反応に使用される。１又は複数のヌクレオチド類似体（例えば、ＬＮＡヌクレオチド、２－アミノ－Ａ、又は２－チオＴ修飾）を含むプライマ－配列を使用してもよい。・・・ [0044] ・・・環状化及び増幅反応は、ともに中間の精製もしくは単離工程を含まずに単一の反応器で実施することができ、それにより汚染の機会を減らし、増幅ワ－クフロ－を単純化することができる。リガ－ゼ支援全ゲノム増幅法は、限定されるものではないが、循環血漿ＤＮＡ、ホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）試料から単離された断片化されたＤＮＡ、環境条件にさらされた法医学ＤＮＡ試料又は非常に古いＤＮＡ試料を分析するために用いることができる。増幅されたライブラリ－は、ｑＰＣＲ又は塩基配列決定法によって、増幅された配列の標的検出にさらに使用することができる。」 引１カ． 「[0058] 実施例１：血漿由来の循環核酸の全ゲノム増幅： [0059] Ｗａｋｏ ＤＮＡ抽出器ＳＰキット（和光純薬株式会社）を用いて、明らかに健康な個体の、クエン酸塩－リン酸塩－デキストロ－ス（ＣＰＤ）で安定化させた血漿から循環ＤＮＡを単離した。約１．３ｎｇを、ＴＢＥ緩衝液を用いる２％アガロ－スゲルによる電気泳動により分析し、ＳＹＢＲ Ｇｏｌｄで染色し、Ｔｙｐｈｏｏｎイメ－ジャで可視化した。図２に示されるように、循環ＤＮＡの大部分は約１８０ｂｐの長さであった。さらなるそれよりも少ない量の配列は約３７０ｂｐの長さであり、さらにそれよりもかなり少ない量のそれよりも高分子量の配列があった。 [0060] ３５０ｐｇの血漿由来の循環ＤＮＡを９５℃で加熱して鋳型を変性させた。次に、変性した一本鎖ＤＮＡ鋳型をＲＮＡ又はＤＮＡリガ－ゼで処理して一本鎖ＤＮＡ環を生成した。ＡＴＰ依存性Ｔ４ ＤＮＡリガ－ゼ、細胞にコ－ドされたＮＡＤ依存性大腸菌ＤＮＡリガ－ゼ又は熱安定性ＲＮＡリガ－ゼ（ＣｉｒｃＬｉｇａｓｅ ＩＩ）をライゲ－ション反応に使用した。次に、１００ｐｇのＤＮＡを連結した一本鎖ＤＮＡ環を、Ｐｈｉ２９ＤＮＡポリメラ－ゼを用いるＧｅｎｏｍｉＰｈｉキット（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）を用いる全ゲノム増幅に供した。「ａｔ Ｎ」が、２－アミノ ｄＡ、２－チオ－ｄＴ、正常なＧ及び正常なＣを含有するランダム混合物を表す、プライマ－混合物＋Ｎ＋Ｎ（ａｔ Ｎ）（ａｔ Ｎ）（ａｔ Ｎ）＊Ｎを用いて増幅を実施した。リアルタイム増幅は、少量のＳＹＢＲグリ－ンＩを増幅混合物に添加し、Ｔｅｃａｎプレ－トリ－ダ－（Ｔｅｃａｎ ＳＮｉＰｅｒ，Ａｍｅｒｓｈａｍ－Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ）で経時的に蛍光シグナル増加をモニタ－することによって実施した。比較のために、当量濃度の未処理ゲノムＤＮＡ、未処理血漿ＤＮＡ、及びＤＮＡ鋳型を含まない（鋳型増幅のない）試料を含めた。 [0061] 図３に示されるように、同等量の高分子量ゲノムＤＮＡと比較した場合に、未処理の断片化された血漿ＤＮＡの増幅速度は、はるかに低く、増幅の欠陥を示した。しかし、断片化された血漿ＤＮＡが前処理され、ＣｉｒｃＬｉｇａｓｅ ＩＩ（商標）を用いて一本鎖ＤＮＡ環に変換された場合、急速な増幅速度が実現された（図３Ａ）。ＡＴＰ依存性Ｔ４ ＤＮＡリガ－ゼ（図３Ｂ）及び細胞にコ－ドされたＮＡＤ依存性大腸菌ＤＮＡリガ－ゼ（図３Ｃ）を含むリガ－ゼも効果的であったが、断片化された血漿ＤＮＡの増幅速度を回復させるには効率が低かった。これらの実施例では、増幅速度の相対的な増加は、一本鎖ＤＮＡ鋳型の分子内ライゲ－ションを促進する際のリガ－ゼの各々の有効性を示す。」 （２） 引用発明 引用文献１の請求の範囲１には、 「（ａ）線状ＤＮＡを準備する工程と、 （ｂ）線状ＤＮＡをリン酸供与体の存在下でポリヌクレオチドキナ－ゼとともにインキュベ－トして、５’末端にリン酸基を有し、３’末端にヒドロキシル基を有するライゲ－ション可能なＤＮＡ配列を生成する工程と、 （ｃ）ライゲ－ション可能なＤＮＡ配列を、一本鎖ＤＮＡ配列の鋳型非依存性分子内ライゲ－ションが可能なリガ－ゼとともにインキュベ－トして、一本鎖ＤＮＡ環を生成する工程と を含」み、「当該方法の工程の全てが、単離もしくは精製工程を介さずに単一の反応器で実施される、方法。」が記載されており、同請求の範囲１４には、一本鎖ＤＮＡ環を生成する工程の後に「等温条件下で一本鎖ＤＮＡ環を増幅する工程をさらに含」むこと、同請求の範囲１５には、かかる増幅は、「ロ－リングサ－クル増幅を介して増幅され」ること、同請求項１６～１８には、「ロ－リングサ－クル増幅が、ヌクレア－ゼ耐性プライマ－を用いて実施され」、「ヌクレア－ゼ耐性プライマ－が、１以上の修飾ヌクレオチドを含」む「ランダムプライマ－混合物」であることが記載されている（引１ア）。 また、引用文献１の[0001]には、「一本鎖ＤＮＡ環の生成及びその後のＤＮＡ増幅は、単離及び／又は精製工程を介さずに単一の反応器で実施される。」（引１イ）、[0044]には、「環状化及び増幅反応は、ともに中間の精製もしくは単離工程を含まずに単一の反応器で実施することができ、それにより汚染の機会を減らし、増幅ワ－クフロ－を単純化することができる。」ことが記載されている（引１オ）。 そして、上記の事項を裏付けるものとして、引用文献１の実施例１には、「一本鎖ＤＮＡ鋳型をＲＮＡ又はＤＮＡリガ－ゼで処理して一本鎖ＤＮＡ環を生成した」こと、「ＡＴＰ依存性Ｔ４ ＤＮＡリガ－ゼ、細胞にコ－ドされたＮＡＤ依存性大腸菌ＤＮＡリガ－ゼ又は熱安定性ＲＮＡリガ－ゼ（ＣｉｒｃＬｉｇａｓｅ ＩＩ）をライゲ－ション反応に使用した」こと、「ＤＮＡを連結した一本鎖ＤＮＡ環を、Ｐｈｉ２９ＤＮＡポリメラ－ゼを用いるＧｅｎｏｍｉＰｈｉキット（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）を用いる全ゲノム増幅に供した」こと、「「ａｔ Ｎ」が、２－アミノ ｄＡ、２－チオ－ｄＴ、正常なＧ及び正常なＣを含有するランダム混合物を表す、プライマ－混合物＋Ｎ＋Ｎ（ａｔ Ｎ）（ａｔ Ｎ）（ａｔ Ｎ）＊Ｎを用いて増幅を実施した」こと（引１カ）、引用文献１の[0025]には、「文字呼称の前のプラス（＋）記号は、その文字で指定されるヌクレオチドがＬＮＡヌクレオチドであること」や「文字呼称の前の星（＊）記号は、その文字で指定されるヌクレオチドがホスホロチオエ－ト修飾ヌクレオチドであること」（引１ウ）が記載されている。 そうすると、引用文献１の以上の記載からすると、引用文献１には、次の発明（以下、「引用発明」という。）が記載されていると認められる。 「線状ＤＮＡから一本鎖ＤＮＡ環を生成し、一本鎖ＤＮＡ環を増幅する方法であって、 （ａ）線状ＤＮＡを準備する工程、 （ｂ）線状ＤＮＡをリン酸供与体の存在下でポリヌクレオチドキナ－ゼとともにインキュベ－トして、５’末端にリン酸基を有し、３’末端にヒドロキシル基を有するライゲ－ション可能なＤＮＡ配列を生成する工程、 （ｃ）ライゲ－ション可能なＤＮＡ配列を、一本鎖ＤＮＡ配列の鋳型非依存性分子内ライゲ－ションが可能なリガ－ゼとともにインキュベ－トして、一本鎖ＤＮＡ環を生成する工程、 （ｄ）等温条件下で、修飾ヌクレオチドを含むランダムプライマ－混合物である、「「ａｔ Ｎ」が、２－アミノ ｄＡ、２－チオ－ｄＴ、正常なＧ及び正常なＣを含有するランダム混合物を表す、プライマ－混合物＋Ｎ＋Ｎ（ａｔ Ｎ）（ａｔ Ｎ）（ａｔ Ｎ）＊Ｎ」を用いて、ロ－リングサ－クル増幅を介して一本鎖ＤＮＡ環を増幅する工程を含み、 一本鎖ＤＮＡ環の生成及びその後のＤＮＡ環の増幅は、単離及び／又は精製工程を介さずに単一の反応器で実施される、方法。」 （３）対比 補正発明と引用発明を対比する。 引用発明の「線状ＤＮＡ」と補正発明の「線状染色体ＤＮＡ」は、「線状ＤＮＡ」である限りにおいて一致する。 引用発明の（ｃ）工程は、補正発明の（ｂ）工程に相当する。 引用発明の（ｄ）工程と補正発明の（ｃ）工程は、ランダムプライマ－混合物を使用するロ－リングサ－クル増幅によって一本鎖ＤＮＡ環を増幅して増幅ＤＮＡ産物を形成する限りにおいて一致する。 引用発明の「一本鎖ＤＮＡ環の生成及びその後のＤＮＡ環の増幅は、単離及び／又は精製工程を介さずに単一の反応器で実施される」ことは、補正発明の「前記方法の前記工程の全てが、介在する単離又は精製工程を含まずに、単一の反応器で実施され」ることに相当する。 なお、補正後の請求項１９によれば、補正発明は、「線状染色体ＤＮＡを前記リガ－ゼとともにインキュベ－トする前に、前記線状染色体ＤＮＡをリン酸供与体の存在下でポリヌクレオチドキナ－ゼで処理して、リン酸基を５’末端に有しヒドロキシル基を３’末端に有するライゲ－ション可能なＤＮＡ配列を生成する」態様を含むものであるから、引用発明が（ｂ）工程を含むことは、補正発明との相違点にならない。 したがって、補正発明と引用発明は、 「核酸増幅のための方法であって、前記方法が、 （ａ）線状ＤＮＡを準備する工程と、 （ｂ）一本鎖ＤＮＡ配列の鋳型非依存性分子内ライゲ－ションの可能なリガ－ゼとともに前記線状染色体ＤＮＡをインキュベ－トして一本鎖ＤＮＡ環を生成する工程と、 （ｃ）ランダムプライマ－混合物を使用するロ－リングサ－クル増幅によって前記一本鎖ＤＮＡ環を増幅して増幅ＤＮＡ産物を形成する工程と を含み、 前記方法の前記工程の全てが、介在する単離又は精製工程を含まずに、単一の反応器で実施される方法。」で一致し、以下の点で相違している。 （相違点１） 補正発明では、一本鎖ＤＮＡ環の原料が「線状染色体ＤＮＡ」であるのに対して、 引用発明では、「線状ＤＮＡ」である点。 （相違点２） 補正発明では、ランダムプライマ－混合物が、「少なくとも１つのヌクレオチド類似体を含むオリゴヌクレオチド配列を含」むものであるのに対して、 引用発明では、修飾ヌクレオチドを含むランダムプライマ－混合物である、「「ａｔ Ｎ」が、２－アミノ ｄＡ、２－チオ－ｄＴ、正常なＧ及び正常なＣを含有するランダム混合物を表す、プライマ－混合物＋Ｎ＋Ｎ（ａｔ Ｎ）（ａｔ Ｎ）（ａｔ Ｎ）＊Ｎ」である点。 （相違点３） 補正発明では、「増幅ＤＮＡ産物を配列決定することをさらに含む」のに対して、 引用発明では、増幅ＤＮＡ産物を配列決定することが特定されていない点。 （４）判断 ア．相違点１について 本願明細書の【００２６】には、「線状ＤＮＡは、ゲノムＤＮＡ（例えば、線状染色体ＤＮＡ）」と記載されるところ、引用文献１の[0037]には、「線状ＤＮＡは、天然もしくは合成起源の二本鎖又は一本鎖ＤＮＡであってよい。ＤＮＡは、生体試料から得てもよい」とされ、「線状ＤＮＡは、ゲノムＤＮＡ・・・であってよい。」と記載されているので（引１エ）、補正発明の「線状染色体ＤＮＡ」が、引用発明の「線状ＤＮＡ」に含まれる一般的なＤＮＡであることは明らかである。 したがって、相違点１は実質的な相違点とはいえない。 イ．相違点２について 本願明細書の実施例１及び８では、補正発明の「少なくとも１つのヌクレオチド類似体を含むオリゴヌクレオチド配列を含」む「ランダムプライマ－混合物」を具体化したものとして、「（ａｔ Ｎ）」が、２－アミノ ｄＡ、２－チオ－ｄＴ、正常なＧおよび正常なＣを含有するランダム混合物を表す、プライマ－混合物＋Ｎ＋Ｎ（ａｔ Ｎ）（ａｔ Ｎ）（ａｔ Ｎ）＊Ｎ」及び「「ａｔ Ｎ」が２－アミノ ｄＡ、２－チオ－ｄＴ、正常なＧおよび正常なＣを含有するランダム混合物を表す、配列＋Ｎ＋Ｎ（ａｔ Ｎ）（ａｔ Ｎ）（ａｔ Ｎ）＊Ｎ（ＡＴランダム六量体）を有するランダムプライマ－混合物」（これらは同じランダムプライマ－混合物を異なる表現で言い換えたものである。）が記載されている。 一方、引用発明で使用されているプライマ－混合物は、「「ａｔ Ｎ」が、２－アミノ ｄＡ、２－チオ－ｄＴ、正常なＧ及び正常なＣを含有するランダム混合物を表す、プライマ－混合物＋Ｎ＋Ｎ（ａｔ Ｎ）（ａｔ Ｎ）（ａｔ Ｎ）＊Ｎ」というものであり、星（＊）記号及びプラス（＋）記号の定義は本願明細書（【００１２】）と引用文献１（[0025]、引１ウ）で同じであるから、引用発明のプライマ－混合物と本願明細書の実施例１及び８で使用されているプライマ－混合物は同じものである。 そうすると、補正発明の「少なくとも１つのヌクレオチド類似体を含むオリゴヌクレオチド配列を含」む「ランダムプライマ－混合物」は、引用発明の「修飾ヌクレオチドを含むランダムプライマ－混合物である、「「ａｔ Ｎ」が、２－アミノ ｄＡ、２－チオ－ｄＴ、正常なＧ及び正常なＣを含有するランダム混合物を表す、プライマ－混合物＋Ｎ＋Ｎ（ａｔ Ｎ）（ａｔ Ｎ）（ａｔ Ｎ）＊Ｎ」を上位概念化して表現したものであり、相違点２は実質的な相違点ではない。 ウ．相違点３について 引用文献１の[0042]には、「増幅されたＤＮＡはＤＮＡ検出のための現在公知の方法のいずれかによって検出されてよい」ことが記載されている（引１オ）。 一方、[0044]には、塩基配列決定法等により増幅された配列の検出を行うことが記載されるところ（引１オ）、増幅したＤＮＡ産物の塩基配列を決定すること自体は、引用文献１の[0044]の記載に限らず、当業者がごく一般的に行うものである。 してみると、相違点３は実質的な相違点とはいえない。 なお、相違点１～３が実質的な相違点であったとしても、引用文献１の記載によれば、相違点１～３として挙げた補正発明の発明特定事項に至ることは当業者が容易になし得ることである。 エ．小括 以上のとおり、補正発明は、引用発明、すなわち、引用文献１に記載された発明であるか、引用文献１に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものである。 ４．審判請求人の主張について 審判請求人は、審判請求書において、本願明細書の実施例８の段落【００７２】及び図１４には、本願発明の顕著な効果が示されている旨を主張し、また、審判請求人は、令和４年４月１８日付け上申書において、現在の請求項１に現在の請求項７の記載に基づき「前記ランダムプライマ－混合物が、一般構造＋Ｎ＋Ｎ（ａｔ Ｎ）（ａｔ Ｎ）（ａｔ Ｎ）＊Ｎを有するオリゴヌクレオチド配列を含む六量体である」という記載を追加する補正案を示し、補正案の発明は進歩性を有する旨を主張する。 そこで、以下、上記の審判請求人の主張について、検討する。 本願明細書の実施例８及び図１４には、血漿ＤＮＡを単離し、変性した一本鎖ＤＮＡをリガ－ゼで処理して一本鎖ＤＮＡ環とし、＋Ｎ＋Ｎ（ａｔ Ｎ）（ａｔ Ｎ）（ａｔ Ｎ）＊Ｎ六量体のランダムプライマ－混合物（ＡＴランダム六量体プライマ－混合物）を用いたロ－リングサ－クル増幅を行ったことが記載され、標準的なランダム六量体プライマ－混合物を用いた場合と比較して、ＡＴランダム六量体プライマ－混合物を用いた場合の方が、増幅速度が速く、増幅産物収率が高いことが示されている。また、実施例９、表２及び図１６には、標準的なランダム六量体プライマ－混合物を用いた場合と比較して、ＡＴランダム六量体プライマ－混合物を用いた場合の方が、カバレッジが高いことが示されている。 しかるところ、引用発明の「修飾ヌクレオチドを含むランダムプライマ－混合物である、「「ａｔ Ｎ」が、２－アミノ ｄＡ、２－チオ－ｄＴ、正常なＧ及び正常なＣを含有するランダム混合物を表す、プライマ－混合物＋Ｎ＋Ｎ（ａｔ Ｎ）（ａｔ Ｎ）（ａｔ Ｎ）＊Ｎ」は、上記の３（４）イで示したとおり、実施例８で使用されている「＋Ｎ＋Ｎ（ａｔ Ｎ）（ａｔ Ｎ）（ａｔ Ｎ）＊Ｎ六量体のランダムプライマ－混合物」と同じものであり、引用文献１の[0061]によると、引用発明のランダムプライマ－混合物は急速な増幅速度に寄与するものであるから（引１カ）、引用発明は、補正発明と同様に、標準的なランダム六量体プライマ－混合物を用いた場合と比べ、増幅速度が速い、増幅産物収率が高い、カバレッジが高いという効果を備えるものと認められる。 もっとも、引用発明が、これらの効果を備えていない場合には、これらの効果は、補正発明の発明特定事項以外の技術的事項に基づき奏されるものといえ、当該効果が、補正発明の全体に亘り奏される効果であるとは認められない。 また、補正案で示された、一般構造Ｎ＋Ｎ（ａｔ Ｎ）（ａｔ Ｎ）（ａｔ Ｎ）＊Ｎを有するオリゴヌクレオチド配列を含む六量体であるランダムプライマ－混合物は、引用発明のランダムプライマ－混合物と同じものであるから、補正案の発明が新規性、進歩性を有するとは認められない。 したがって、審判請求人の主張は、いずれも理由がない。 ５．小活 以上のとおり、本件補正は、特許法第１７条の２第６項において準用する同法第１２６条第７項の規定に適合しないから、同法第１５９条第１項において読み替えて準用する同法第５３条第１項の規定により却下されるべきものである。 第３ 本願発明について １．本願に係る発明 本件補正は上記のとおり却下されたので、本願の請求項１～２９に係る発明は、平成３０年 ６月１８日に提出された請求の範囲の翻訳文の請求項１～２９に記載の事項により特定されるものであると認める。 ２．原査定の理由 令和３年５月２６日付け拒絶査定は、この出願の請求項１に係る発明は、その優先日前に日本国内又は外国において頒布された又は電気通信回線を通じて公衆に利用可能となった引用文献１に記載された発明であるから、特許法第２９条第１項第３号に該当し、または、引用文献１に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものであるから、同法同条第２項の規定により、特許を受けることができない、との理由を含むものである。 ３．当審の判断 本願の請求項１に係る発明は、上記第２の１．に（補正前）として記載したものであり、本願の請求項１に係る発明は、上記第２の３（３）において（相違点１）（相違点２）とした相違点を含み、（相違点３）とした相違点を含まないものと認められる。 そうすると、本願の請求項１に係る発明は、補正発明について述べた上記の３（４）ア、イと同様の理由により、引用文献１に記載された発明であるか、引用文献１に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものである。 第４ むすび 以上のとおり、本願の請求項１に係る発明は、特許法第２９条第１項第３号に該当し、または、同法同条第２項の規定により、特許を受けることができないものであるであるから、他の請求項に係る発明について言及するまでもなく、本願は拒絶すべきものである。 よって、結論のとおり審決する。