2020-002044

第２　原査定の概要

原査定（令和元年１２月２５日付け拒絶査定）の概要は次のとおりである。

本願請求項１～１９に係る発明は、以下の引用文献Ａ～Ｇに基づいて、その発明の属する技術の分野における通常の知識を有する者（以下、「当業者」という。）が容易に発明できたものであるから、特許法第２９条第２項の規定により特許を受けることができない。

引用文献等一覧

Ａ．特表２０１０－５２６５９９号公報

Ｂ．特開平６－８２４５９号公報（周知技術を示す文献）

Ｃ．特表平６－５００３９０号公報（周知技術を示す文献）

Ｄ．特開２０００－１９１７２号公報（周知技術を示す文献）

Ｅ．Kristin Weidemaier，Multi-day pre-clinical demonstration of glucose/galactose binding protein-based fiber optic sensor，Biosensors and Bioelectronics，２０１１年　６月１５日，Vol.26/Iss.10，PP.4117-4123（周知技術を示す文献）

Ｆ．特表平１１－５０８７９２号公報（周知技術を示す文献）

Ｇ．特表２０１３－５１４８０９号公報（周知技術を示す文献）

第３　当審拒絶理由の概要

当審拒絶理由の概要は次のとおりである。

理由１

本願請求項１～１９に係る特許請求の範囲の記載が、発明の詳細な説明から把握できる「センサ使用の間に自己較正を動的に行い、センサの寿命にわたって較正を安定的に維持できるようにする」という課題（【０００６】、【０１０２】）を解決するための手段を反映していない点で、特許法第３６条第６項第１号に規定する要件を満たしていない。

理由２

本願請求項１～１９に係る発明は、以下の引用文献１～３に基づいて、当業者が容易に発明できたものであるから、特許法第２９条第２項の規定により特許を受けることができない。

引用文献等一覧

１．Kristin Weidemaier，Multi-day pre-clinical demonstration of glucose/galactose binding protein-based fiber optic sensor，Biosensors and Bioelectronics，２０１１年　６月１５日，Vol.26/Iss.10，PP.4117-4123（拒絶査定時の引用文献Ｅ）

２．特開平６－８２４５９号公報（拒絶査定時の引用文献Ｂ）

３．特表平６－５００３９０号公報（拒絶査定時の引用文献Ｃ）

第４　本願発明

本願請求項１～９に係る発明（以下、それぞれ「本願発明１」～「本願発明９」という。）は、令和２年１０月１９日付けの手続補正で補正された特許請求の範囲の請求項１～９に記載された事項により特定される発明であり、本願発明１～９は以下のとおりの発明である。

「　　【請求項１】

マトリクスに内包される蛍光標識されたグルコース結合タンパク質の蛍光スペクトル測定に基づいてグルコース濃度を推定するためのセンサであって、前記センサは、

第１の基礎状態と第２の基礎状態との間で最大限に不変である最も大きな範囲を参照帯域に設定することであって、前記第１の基礎状態は、前記グルコース結合タンパク質が閉構造のコンホメーションをとっている状態であり、前記第２の基礎状態は、前記グルコース結合タンパク質が開構造のコンホメーションをとっている状態である、ことと、

前記第１の基礎状態と前記第２の基礎状態との間で最大限に変化している最も大きな範囲を信号帯域に設定することと、

続きを表示（全34行）

前記信号帯域における蛍光スペクトル信号の積分値を、前記参照帯域における蛍光スペクトル信号の積分値で除算して得た値に基づいて前記グルコース濃度を推定することと、

を実行する、センサ。

【請求項２】

前記センサはインビトロセンサである

請求項１に記載のセンサ。

【請求項３】

前記センサはインビボセンサである

請求項１に記載のセンサ。

【請求項４】

前記センサは連続センサである

請求項１に記載のセンサ。

【請求項５】

マトリクスに内包される蛍光標識されたグルコース結合タンパク質の蛍光スペクトル測定に基づいてグルコース濃度を推定するためのセンサと、インスリン注入デバイスとを備える糖尿病管理システムであって、前記センサは、

第１の基礎状態と第２の基礎状態との間で最大限に不変である最も大きな範囲を参照帯域に設定することであって、前記第１の基礎状態は、前記グルコース結合タンパク質が閉構造のコンホメーションをとっている状態であり、前記第２の基礎状態は、前記グルコース結合タンパク質が開構造のコンホメーションをとっている状態である、ことと、

前記第１の基礎状態と前記第２の基礎状態との間で最大限に変化している最も大きな範囲を信号帯域に設定することと、

前記信号帯域における蛍光スペクトル信号の積分値を、前記参照帯域における蛍光スペクトル信号の積分値で除算して得た値に基づいて前記グルコース濃度を推定することと、

を実行するプロセッサを含む、

糖尿病管理システム。

【請求項６】

前記プロセッサはインスリン要件をさらに決定し、前記インスリン注入デバイスに送信される信号は、前記決定されたインスリン要件に基づくインスリン要件を備える

請求項５に記載の糖尿病管理システム。

【請求項７】

前記センサはインビトロセンサである

請求項５に記載の糖尿病管理システム。

【請求項８】

前記センサはインビボセンサである

請求項５に記載の糖尿病管理システム。

【請求項９】

前記センサは連続センサである

請求項５に記載の糖尿病管理システム。」

第５　引用文献、引用発明等

１　引用文献１について

（１）引用文献１の記載

令和２年９月２日付けの拒絶の理由に引用された引用文献１（拒絶査定時の引用文献Ｅ）には、図面とともに次の事項が記載されている。なお、下線は、当審において付与した。以下同様。

ア　「ABSTRACT

We report here the first pre-clinical demonstration of continuous glucose tracking by fluorophore- labeled and genetically engineered glucose/galactose binding protein (GGBP). Acrylodan-labeled GGBP was immobilized in a hydrogel matrix at the tip of a small diameter optical fiber contained in a stainless steel needle. The fiber optic biosensors were inserted subcutaneously into Yucatan and Yorkshire swine, and the sensor response to changing glucose levels was monitored at intervals over a 7-day period. Sensor mean percent error on day 7 was 16.4 ± 5.0% using a single daily reference blood glucose value to calibrate the sensor. The GGBP sensor’s susceptibility to common interferents was tested in a well-plate system using human sera. No significant interference was observed from the tested interferents except for tetracycline at the drug’s maximum plasma concentration. The robust performance of the GGBP-based fiber optic sensor in swine models and resistance to interferents indicates the potential of this technology for continuous glucose monitoring in humans.」

「概要

本研究では、蛍光物質で標識され、遺伝子操作されたグルコース／ガラクトース結合タンパク質（ＧＧＢＰ）による連続的なグルコース追跡の初の前臨床実証を報告します。アクリルダンで標識されたＧＧＢＰは、ステンレス製の針に入った小径の光ファイバーの先端でヒドロゲルマトリックスに固定化されています。光ファイバーバイオセンサーは、ユカタンとヨークシャー豚に皮下挿入され、変化するグルコースレベルへのセンサーの応答を、７日間の間隔で監視しました。７日目の平均誤差は１６．４±５．０％であり、１日１回の基準血糖値を用いてセンサーを校正しました。一般的な干渉因子に対するＧＧＢＰセンサーの感受性は、ヒト血清を用いたウェルプレートシステムでテストされました。血漿中最大濃度のテトラサイクリンを除いて、テストされた干渉因子による有意な干渉は観察されなかった。豚モデルにおけるＧＧＢＰベースの光ファイバーセンサーの堅牢な性能と干渉因子に対する耐性は、ヒトにおける連続的なグルコースモニタリングのためのこの技術の可能性を示しています。」

イ　「2.1. Acrylodan-labeled GGBP

Wild type E. coli GGBP (NCBI 230520) was modified via sitedirected mutagenesis to replace the tryptophan at the 183 position with a cysteine for fluorophore labeling. The mutant W183C GGBP was labeled with acrylodan and purified using previously published protocols (de Lorimier et al., 2002; Amiss et al., 2007). In addition, a more thermally stable variant of W183C GGBP (SM4 GGBP) was developed that incorporated additional mutations beyond the 183 position (U.S. Patent Application No. 20080044856 A1). The SM4 GGBP mutant retained the same glucose affinity as W183C, but with a 10°higher melting temperature. For both W183C acrylodan- labeled GGBP and SM4-acrylodan-labeled GGBP, the acrylodan spectrum changes intensity and shifts to longer wavelengths with increasing glucose concentration (Fig. 1B). Fluorescence intensity can then be measured at two wavelengths, and the ratio of signal intensities at these wavelengths (R) will depend on glucose concentration ([G]) according to Eq. (1). In Eq. (1), R0 is the ?uorescence ratio in the absence of glucose, R∞ is the ?uorescence ratio in the presence of saturating glucose, and Kd is an apparent dissociation constant.

・・・

Since fluorescence intensity ?uctuations typically affect both measured wavelength bands in the same manner, the calculated ratio, R, is inherently self-referenced and largely insensitive to the overall intensity of the fluorescence signal. This self-referencing capability of the acrylodan-GGBP sensor is highly advantageous in that the sensor retains accuracy even if overall signal intensity is reduced, provided that the overall signal:noise ratio remains within the capabilities of the optical detector.」

「２．１． アクリルダン標識ＧＧＢＰ

野生型大腸菌ＧＧＢＰ（ＮＣＢＩ　２３０５２０）は、１８３位のトリプトファンをフルオロフォア標識のためのシステインで置換するために、部位特異的変異誘発により修飾された。変異体Ｗ１８３Ｃ　ＧＧＢＰは、アクリロダンで標識され、以前に公開されたプロトコル（デ・ロリミエら、２００２；Ａｍｉｓｓら、２００７）を使用して精製された。さらに、Ｗ１８３Ｃ ＧＧＢＰのより熱的に安定な変異体（ＳＭ４ ＧＧＢＰ）が、１８３の位置を超える追加の変異を組み込んだものとして開発された（米国特許出願第２００８０４４８５６号Ａ１）。ＳＭ４ ＧＧＢＰ突然変異体は、Ｗ１８３Ｃと同じグルコースの結合性を保持したが、融解温度が１０°高くなった。Ｗ１８３Ｃアクリロダン標識ＧＧＢＰおよびＳＭ４アクリロダン標識ＧＧＢＰの両方について、アクリロダンのスペクトルは、グルコース濃度の増加に伴って強度が変化し、より長い波長にシフトする（図１Ｂ）。次いで、蛍光強度を２つの波長で測定することができ、これらの波長でのシグナル強度の比（Ｒ）は、式（１）に従ってグルコース濃度（［Ｇ］）に依存する。式（１）において、Ｒ０はグルコース非存在下での蛍光比、Ｒ∞は飽和グルコース存在下での蛍光比、Ｋｄは見かけ上の解離定数である。

・・・

蛍光強度の変動は通常、測定された両方の波長帯域に同じように影響を与えるため、計算された比Ｒは本質的に自己参照され、蛍光信号の全体的な強度の影響をほとんど受けません。アクリロダン-ＧＧＢＰセンサーのこの自己参照機能は、全体の信号強度が低下しても、全体の信号：ノイズ比が光検出器の能力の範囲内であれば、センサーの精度を維持できるという点で非常に有利です。」

ウ　「2.2. Sensor construction

The fiber optic sensors were formed by covalent attachment of a GGBP-containing Polyethyleneglycol dimethacrylate:Methacrylic acid (PEGDMA:MAA) hydrogel matrix to the surface of a glass optical fiber.

・・・

The fluorescence response of the sensors was read via a custom instrument. Sensor excitation was at 420 nm (Brite-LED Optoelectronics BL-LBVT5N18C series). The fluorescence signal was monitored with photodiodes (Hamamatsu, S9270) at two wavelength regions: 465 nm (bandpass filter XF3078, Omega Optical, 30 nm FWHM) and 560 nm (bandpass filterXF1067, Omega Optical, 55 nm FWHM).」

「２．２ センサーの構造

ＧＧＢＰを含むポリエチレングリコールジメタクリレート：メタクリル酸（ＰＥＮＧＤＭＡ：ＭＡＡ）ハイドロゲルマトリックスをガラス製の光ファイバーの表面に共有結合させることにより、光ファイバーセンサーを形成した。

・・・

センサーの蛍光応答は、特注の装置で読み取った。センサーの励起は４２０ｎｍ（Ｂｒｉｔｅ－ＬＥＤ Ｏｐｔｏｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ ＢＬ－ＬＢＶＴ５Ｎ１８Ｃシリーズ）でした。蛍光信号は、４６５ｎｍ（バンドパスフィルタＸＦ３０７８，Ｏｍｅｇａ　Ｏｐｔｉｃａｌ，３０ｎｍ半値全幅）と５６０ｎｍ（バンドパスフィルタＸＦ１０６７，Ｏｍｅｇａ Ｏｐｔｉｃａｌ，５５ｎｍ半値全幅）の２つの波長領域で、フォトダイオード（浜松，Ｓ９２７０）を用いてモニターしました。」

エ　「Importantly, while the absolute fluorescence intensity was observed to decline during the 7-day monitoring of the sensor, the ratio of signals in the 560 and 465 nm wavelength bands was substantially more stable. This key observation may indicate that optical based sensors like GGBP, with signals that are inherently self-referenced, may have calibration parameters that are largely immune to biofouling of the sensor. This in turn could translate into greater accuracy and improved stability when compared to electrochemical sensors.」(４１２２頁右欄１１行～１９行)

「重要なことは、センサーの７日間のモニタリング中に絶対的な蛍光強度が低下することが観察された一方で、５６０ｎｍと４６５ｎｍの波長帯の信号の比率は実質的に安定していたことです。この重要な観察結果は、ＧＧＢＰのような光学ベースのセンサーは、本質的に自己参照可能な信号を持つため、センサーのバイオファウリングの影響をほとんど受けない口径パラメータを持っている可能性があることを示していると考えられます。このことは、電気化学センサと比較した場合、より高い精度と安定性の向上につながる可能性があります。」

オ　「4.Conclusions

Fluorophore-labeled GGBP offers a simple, direct, equilibrium- based method for continuously measuring blood glucose. The GGBP-based fiber optic biosensor described in this work uses a fluorophore-labeled GGBP immobilized in a hydrogel matrix to produce an optical signal in the presence of glucose. The sensor was operational in a variety of media, including buffer, serum, and interstitial fluid, and provided quantitative episodic and continuous measurement of glucose. The sensor was stable and accurate over 7 days of continuous monitoring in swine and was robust against tested interferents. The data presented here represent the first in vivo demonstration of continuous and reversible tracking of glucose by GGBP and indicate the potential of GGBP-based sensors for continuous glucose monitoring in humans.」

「４． 結論

フルオロフォア標識ＧＧＢＰは、血糖値を連続的に測定するためのシンプルで直接的な平衡ベースの方法を提供します。本研究で説明するＧＧＢＰベースの光ファイバーバイオセンサーは、フルオロフォア標識ＧＧＢＰをヒドロゲルマトリックスに固定化し、グルコースの存在下で光信号を生成するために使用します。このセンサーは、緩衝液、血清、間質性浮動体を含む様々な媒体で動作し、グルコースの定量的なエピソード的および連続的な測定を提供しました。センサーは、豚の連続モニタリングの７日間にわたって安定して正確であり、テストされた干渉因子に対して堅牢でした。ここで発表されたデータは、ＧＧＢＰによるグルコースの連続的かつ可逆的な追跡を初めて生体内で実証したものであり、ヒトにおける持続的なグルコースモニタリングのためのＧＧＢＰベースのセンサーの可能性を示しています。」

カ　Ｆｉｇ．１

「Fig. 1. (A) Ribbon structures depicting the glucose-mediated conformational change of glucose/galactose binding protein (GGBP). Left: Open unliganded conformation of GGBP using Protein Data Bank structure file 2FW0. Right: the closed or glucose-bound structure of GGBP using Protein Data Bank structure file 2FVY. (B) Fluorescence response of acrylodan-labeled GGBP to glucose. The shaded regions show wavelength bands monitored by the optical system.」

「図１：グルコース/ガラクトース結合タンパク質（ＧＧＢＰ）の構造変化を示すリボン構造（Ａ）グルコース／ガラクトース結合タンパク質（ＧＧＢＰ）のグルコース介在型構造変化を示すリボン構造。左：プロテインデータバンクの構造式２ＦＷＯを使用したオープンな非二重結合のコンホメーションのＧＧＢＰ。右：プロテインデータバンクの構造式２ＦＶＹを使用したグルコース結合の閉構造のＧＧＢＰ。（Ｂ）アクリルダンで標識したＧＧＢＰのグルコースに対する蛍光応答。網掛け領域は、光学系でモニターした波長帯を示す。」

（２）引用文献１に記載された発明

上記（１）から次のことが理解できる。

ＧＧＢＰは、グルコース濃度に応じて、開構造のコンホメーションをとる状態と閉構造のコンホメーションをとる状態があること。

４６５±３０ｎｍ及び５６０±５５ｎｍの波長帯域の蛍光強度の比（Ｒ）からグルコース濃度を求めること。

４６５±３０ｎｍはグルコース濃度に応じて蛍光強度の変化が大きな信号帯域であること。

５６０±５５ｎｍはグルコース濃度に応じて蛍光強度の変化が小さな参照帯域であること。

上記（１）から、引用文献１には、次の発明（以下「引用発明」という。）が記載されていると認められる。

「　蛍光物質のアクリルダンで標識されたグルコース／ガラクトース結合タンパク質（ＧＧＢＰ）が、光ファイバーの先端でヒドロゲルマトリックスに固定化されている光ファイバーバイオセンサーであって、

ＧＧＢＰは、グルコース濃度に応じて、開構造のコンホメーションをとる状態と閉構造のコンホメーションをとる状態があり、

４６５±３０ｎｍ及び５６０±５５ｎｍの波長帯域の蛍光強度の比（Ｒ）からグルコース濃度を求め、

４６５±３０ｎｍはグルコース濃度に応じて蛍光強度の変化が大きな信号帯域であり、５６０±５５ｎｍはグルコース濃度に応じて蛍光強度の変化が小さな参照帯域である、光ファイバーバイオセンサー。」

２　引用文献２について

令和２年９月２日付けの拒絶の理由に引用された引用文献２（拒絶査定時の引用文献Ｂ）には、図面とともに次の事項が記載されている。

（１）「【０００２】

【従来の技術】生きている細胞内に存在するカルシウムイオン等の遊離イオン濃度の定量には、Ｆｕｒａ－２、Ｉｎｄｏ－１などの蛍光性プローブ試薬が用いられている。これらの試薬の合成法及び特性については、下記の文献“The Journal of Biological Chemistry(1985),Issue of March 25,p.3440-3450 ”“Biophysical Journal, Vol.54, (1988) p.1089-1104 ”に示されている。これらのプローブ試薬は、特定のイオンとの結合・解離によって、その蛍光特性が変化する性質を持つ。したがって、プローブ試薬を細胞内に導入し、ある波長の励起光により生じた蛍光の強度を測定することにより、細胞内のイオン濃度を測定することができる。

【０００３】しかし、励起光、蛍光とも１波長のみの測定では、細胞内でのプローブ試薬の濃度が不明、または分布が不均一である場合には正確な測定値を得ることができない。また、蛍光の退色などのイオン濃度に依存しない蛍光強度の変化も合わせて測定している可能性もある。

【０００４】そこで、これらを補正するために等吸収点を持つ蛍光プローブ試薬を用い、異なる波長をもつ２つの励起光における蛍光強度または１つの励起光における２種類の波長の蛍光強度をそれぞれ測定し、その比を測定する方法がとられている。

【０００５】図２は、上述の測定法に用いる蛍光プローブ試薬の励起スペクトルと蛍光スペクトルを示す図である。同図（ａ）では、細胞内に存在するカルシウムイオンの濃度を測定するＦｕｒａ－２（蛍光プローブ試薬）の励起スペクトルを示しており、スペクトルを示すそれぞれの曲線上の数字は、細胞内のカルシウムイオン濃度を表している。図示されるように、Ｆｕｒａ－２はカルシウムイオンとの結合により、波長３４０ｎｍの励起光での蛍光強度が増大し、逆に波長３８０ｎｍの励起光では蛍光強度は減少する性質を持つ。さらに、波長３６０ｎｍ励起による蛍光強度は、カルシウムイオン濃度に依存せず一定であるという性質がある。このため、Ｆｕｒａ－２では例えば３４０ｎｍと３８０ｎｍ、または３４０ｎｍと３６０ｎｍの励起波長での蛍光強度の比と、予め作成した検量線とから、細胞内のカルシウムイオン濃度を求めていた。蛍光強度の比の値を濃度の絶対値に変換する検量線は、既知の濃度のカルシウムイオンを含む試料をあらかじめ調製して蛍光プローブ試薬を加え、その蛍光強度比を測定することで作成される。

【０００６】同図（ｂ）は、同じくＩｎｄｏ－１（蛍光プローブ試薬）の蛍光スペクトルを示したものであり、波長３５５ｎｍの励起光を細胞に照射した場合に生じる蛍光の各波長でのスペクトルを示している。蛍光波長４４０ｎｍ付近では、Ｆｕｒａ－２同様、等吸収点を持つ。このため、１波長の励起光によって生じる蛍光の２波長それぞれの蛍光強度の比から、Ｆｕｒａ－２を用いた前述の方法と同様にして、細胞内のカルシウムイオン濃度を求めることができる。　」

（２）図２

３　引用文献３について

令和２年９月２日付けの拒絶の理由に引用された引用文献３（拒絶査定時の引用文献Ｃ）には、図面とともに次の事項が記載されている。

（１）「　二、三の場合には、分析体と検出試薬との相互作用の結果、新しい吸収バンドまたは発光バンドを成長させ、同時にオリジナルバンドの崩壊を生じる。２つの相異なる種の存在は、明確に限定される等吸収点の出現によって表示される。第３実施態様において、等吸収点は内部標準として使用される。図４はコンゴレッドと塩素との反応を示す。コンゴレッドとその塩素との錯体の吸収スペクトル曲線５１，５２，５３，５４，５５，５６は、それぞれ無塩素、５０，１００，２００，４００，８００ｐｐｂ塩素から生じる。コンゴレッドは、５００ｎｍのピーク５７を含む可視波長範囲において強い吸収バンドを示す。塩素が添加されると、５００ｎｍでの吸収が低減するが、他の吸収バンドが６５０ｎｍをピーク５８として成長する。図４に図示のように、５６０ｎｍと８００ｎｍの吸収は不変である。これらが等吸収点と呼ばれる（それぞれ５９、６０）。塩素の正確な決定のため、５００ｎｍと５６０ｎｍの吸収または６５０ｎｍと５６０ｎｍの吸収の比率が求められる。８００ｎｍの等吸収点も同様に使用することができる。５００ｎｍまたは６５０ｎｍにおける検出器応答の方が５６０ｎｍにより近接しているので、５６０ｎｍの選択がより正確である。５６０ｎｍと８００ｎｍの吸収は外部作用のみで変動する。５００ｎｍおよび６５０ｎｍにおいては、吸収は外部作用と塩素の存在によって同様に影響される。従って、比率は塩素濃度に対してのみ感性である。」（６頁右下欄２行～７頁左上欄２行）

（２）ＦＩＧ．４

４　引用文献Ａについて

原査定の拒絶の理由に引用された引用文献Ａには、図面とともに次の事項が記載されている。

（１）「【０１２２】

＜例１＞

図３は蛍光色素の励起／吸収スペクトルの例を示し、この場合、ＨＰＴＳである。異なるｐＨにおいて取得された蛍光色素の吸収スペクトルより、λ酸、λ塩基およびλ等吸収点を決定できる。より低いｐＨ（例えば、より酸性な条件）において４０５ｎｍ近傍におけるピークは４６０ｎｍ近傍におけるピークより高く、従って、蛍光色素の酸性型による吸収最大である。より高いｐＨ（例えば、より塩基性な条件）において４６０ｎｍ近傍におけるピークは４０５ｎｍ近傍におけるピークより高く、従って、蛍光色素の塩基性型による吸収最大である。λ等吸収点は吸収がｐＨに依存しない波長であり、例えば、ＨＰＴＳの場合、４２２ｎｍ近傍となる。

【０１２３】

次いで、第１の励起波長（例えば、λ酸、λ塩基またはλ等吸収点）における照射の結果生じる発光波長における第１の蛍光発光強度（Ｉｘで、Ｉ酸、Ｉ塩基またはＩ等吸収点でよい）を検出器で測定し、結果を電子的制御で貯える。次いで、第２の励起波長においてセンサーを再び照射する。第２の励起波長は第１の励起波長とは異なり、また、λ酸、λ塩基またはλ等吸収点より選択できる。次いで、第２の励起波長（例えば、λ酸、λ塩基またはλ等吸収点）における照射の結果生じる第２の蛍光発光強度（Ｉｙで、Ｉ酸、Ｉ塩基またはＩ等吸収点でよい）を検出器が検出／測定する。次いで、第１および第２の蛍光発光の比（Ｉｘ／Ｉｙ）を計算できる。Ｉｘ／Ｉｙはポリヒドロキシル濃度には依存しないため、ポリヒドロキシル濃度の効果を考慮せずｐＨ標準曲線（Ｉｘ／Ｉｙ対ｐＨ）をプロットできる。」

（２）図３

５　引用文献Ｄについて

原査定の拒絶の理由に引用された引用文献Ｄには、図面とともに次の事項が記載されている。

（１）「【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明は、試料中の２種類以上の測定対象物を分析するための多波長蛍光偏光法であって、次の工程：(a)２種類以上の蛍光標識物質であって、異なる測定対象物にそれぞれ特異的に結合する物質と測定対象物ごとに異なる蛍光色素とが共有結合した蛍光標識物質を提供する工程、(b)該蛍光標識物質を２種類以上の測定対象物と結合させる工程、および(c)それぞれの測定対象物が結合した蛍光標識物質の蛍光偏光度変化を測定する工程、を包含する多波長蛍光偏光法に関する。

【０００８】本発明の方法において、上記測定対象物は、生体内物質、微生物、ウイルス、医薬品、環境汚染物質または乱用薬物であり得る。生体内物質は、ペプチド、タンパク質、脂質、糖類または核酸類であり得る。生体内物質としてのタンパク質は、抗体、ホルモン、炎症マーカ、凝固因子、アポリポタンパク質、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、糖化アルブミン、糖化ヘモグロビン、ヘモグロビンまたは酵素であり得る。」

６　引用文献Ｆについて

原査定の拒絶の理由に引用された引用文献Ｆには、図面とともに次の事項が記載されている。

（１）「　図１は、患者12に外科手術で埋め込めるセンサ及びインシュリンポンプを具備する血液グルコース監視制御システム10を示す。」（２８頁１１～１２行）

７　引用文献Ｇについて

原査定の拒絶の理由に引用された引用文献Ｇには、図面とともに次の事項が記載されている。

（１）「【００４４】

検出されるであろう放出される光の波長は、少なくとも部分的に、特定の蛍光検出可能な生成物に依存する場合がある。図１Ｃに見られるように、蛍光検出可能な生成物（例えば、４－ＭＵ等）は、様々な量で、広い範囲の波長にわたって、光を放出する。実施形態において、放出は、最大放出に近い波長で検出される場合がある。あるいは、他の波長（最大放出の波長に加えてか、又はそれに替わって）が、放出される光を検出するために監視されてもよい。Ｅｍλ１は、あらゆる所望の波長であってもよく、様々な波長における放出の強度、利用され得る特定の検出器（費用等）、サンプル内の他の化合物（例えば、酵素基質）からの干渉、あるいはその組み合わせに部分的に基づいて選択されてもよい。実施形態において、Ｅｍλ１は、蛍光検出可能な生成物がその最大強度の放出を有する波長であってもよい。そのようなＥｍλ１は、背景信号からの干渉を最小化するため、検出限度を減少させるため、又はそれらの組み合わせのために有用である場合がある。放出を監視するために選択される波長が何であれ、本明細書には放出波長、又はＥｍλ１として称される。」

（２）「【００５１】

別の任意選択の工程である工程２０９が、工程２０５の後にそのような方法に追加されてもよい。工程２０９は、試験サンプル内の微生物を定量化する工程を含み、上述のように、そのような定量化は、例えば、既知濃度の微生物のサンプルの使用を含んでもよく、あるいは相対比較（つまり、より高いか、より低いかの結果を得る工程）であってもよい。」

第６　対比・判断

当審拒絶理由の特許法第２９条第２項について

１　本願発明１について

（１）対比

本願発明１と引用発明とを対比する。

ア　引用発明の「ヒドロゲルマトリックス」及び「蛍光物質のアクリルダンで標識されたグルコース／ガラクトース結合タンパク質（ＧＧＢＰ）」は、本願発明１の「マトリクス」及び「蛍光標識されたグルコース結合タンパク質」に相当するところ、引用発明の「蛍光物質のアクリルダンで標識されたグルコース／ガラクトース結合タンパク質（ＧＧＢＰ）が、光ファイバーの先端でヒドロゲルマトリックスに固定化され」、「４６５±３０ｎｍ及び５６０±５５ｎｍの波長帯域の蛍光強度の比（Ｒ）からグルコース濃度を求め」る「光ファイバーバイオセンサー」は、本願発明１の「マトリクスに内包される蛍光標識されたグルコース結合タンパク質の蛍光スペクトル測定に基づいてグルコース濃度を推定するためのセンサ」に相当する。

イ　引用発明の「閉構造のコンホメーションをとる状態」及び「開構造のコンホメーションをとる状態」は、本願発明１の「グルコース結合タンパク質が閉構造のコンホメーションをとっている状態であ」る「第１の基礎状態」及び「前記グルコース結合タンパク質が開構造のコンホメーションをとっている状態である」「第２の基礎状態」に相当するところ、引用発明の「５６０±５５ｎｍの波長帯域」を「グルコース濃度に応じて蛍光強度の変化が小さな参照帯域」とすることと、本願発明１の「第１の基礎状態と第２の基礎状態との間で最大限に不変である最も大きな範囲を参照帯域に設定すること」とは、「第１の基礎状態と第２の基礎状態との間でほぼ最大限に不変である所定の波長帯域の範囲を参照帯域に設定すること」の点で共通する。

ウ　引用発明の「４６５±３０ｎｍ」「の波長帯域」を「グルコース濃度に応じて蛍光強度の変化が大きな信号帯域」とすることと、本願発明１の「前記第１の基礎状態と前記第２の基礎状態との間で最大限に変化している最も大きな範囲を信号帯域に設定すること」とは、「前記第１の基礎状態と前記第２の基礎状態との間でほぼ最大限に変化している所定の波長帯域の範囲を信号帯域に設定すること」の点で共通する。

エ　引用発明の「信号帯域」「４６５±３０ｎｍ及び」「参照帯域」「５６０±５５ｎｍの波長帯域の蛍光強度」は、それぞれの「波長帯域の蛍光強度」を総和したものであることが明らかであるから、引用発明の「信号帯域」「４６５±３０ｎｍ及び」「参照帯域」「５６０±５５ｎｍの波長帯域の蛍光強度の比（Ｒ）からグルコース濃度を求め」ことは、本願発明１の「前記信号帯域における蛍光スペクトル信号の積分値を、前記参照帯域における蛍光スペクトル信号の積分値で除算して得た値に基づいて前記グルコース濃度を推定すること」に相当する。

したがって、本願発明１と引用発明とは、次の点で一致し、次の点で相違する。

（一致点）

「　マトリクスに内包される蛍光標識されたグルコース結合タンパク質の蛍光スペクトル測定に基づいてグルコース濃度を推定するためのセンサであって、前記センサは、

第１の基礎状態と第２の基礎状態との間でほぼ最大限に不変である所定の波長帯域の範囲を参照帯域に設定することであって、前記第１の基礎状態は、前記グルコース結合タンパク質が閉構造のコンホメーションをとっている状態であり、前記第２の基礎状態は、前記グルコース結合タンパク質が開構造のコンホメーションをとっている状態である、ことと、

前記第１の基礎状態と前記第２の基礎状態との間でほぼ最大限に変化している所定の波長帯域の範囲を信号帯域に設定することと、

前記信号帯域における蛍光スペクトル信号の積分値を、前記参照帯域における蛍光スペクトル信号の積分値で除算して得た値に基づいて前記グルコース濃度を推定することと、

を実行する、センサ。」

（相違点）

設定する参照帯域と信号帯域を、本願発明１では、「最大限に不変である最も大きな範囲」と「最大限に変化している最も大きな範囲」にするのに対し、引用発明では、「蛍光強度の変化が小さ」い「５６０±５５ｎｍ」と「蛍光強度の変化が大き」い「４６５±３０ｎｍ」にする点。

（２）相違点についての判断

上記相違点について検討する。

原査定及び令和２年９月２日付けの当審の拒絶理由に引用された引用文献（上記第５参照。）には、いずれも上記相違点に係る本願発明１の構成についての記載も示唆もなく、この構成が周知である証拠もない。よって、上記相違点に係る本願発明１の構成は、引用発明に基づいて当業者が容易に想到し得ることでない。

そして、本願発明１は、センサ使用の間に自己較正を動的に行い、センサの寿命にわたって較正を安定的に維持できるという作用効果を奏するもの（本願明細書【０００６】、【０１０２】参照。）であり、本願発明１が奏する作用効果は、当業者が引用文献１の記載から予測し得ることでない。

してみると、本願発明１は、当業者であっても、引用発明に基づいて容易に発明できたものとはいえない。

２　本願発明２～９について

本願発明２～９は、上記相違点に係る本願発明１の構成を備えるものであるから、本願発明１と同様の理由により、当業者であっても、引用発明に基づいて容易に発明できたものとはいえない。

第７　原査定についての判断

令和２年１０月１９日付けの補正により、補正後の本願発明１～９では、設定する参照帯域と信号帯域を、最大限に不変である最も大きな範囲と最大限に変化している最も大きな範囲にすることが特定された。この特定された事項は、原査定における引用文献Ａ～Ｇに記載されておらず周知でもないので、本願発明１～９は、当業者であっても、原査定における引用文献Ａ～Ｇに基づいて容易に発明できたものではない。したがって、原査定を維持することはできない。

第８　当審拒絶理由について

特許法第３６条第６項第１号について

当審では、本願請求項１～１９に係る特許請求の範囲の記載が、発明の詳細な説明から把握できる「センサ使用の間に自己較正を動的に行い、センサの寿命にわたって較正を安定的に維持できるようにする」という課題（【０００６】、【０１０２】）を解決するための手段を反映していないとの拒絶の理由を通知しているが、令和２年１０月１９日付けの補正において、補正後の本願発明１～９では、設定する参照帯域と信号帯域を、最大限に不変である最も大きな範囲と最大限に変化している最も大きな範囲にすることが特定された結果、この拒絶の理由は解消した。

第９　むすび

以上のとおり、本願発明１～９は、当業者が引用発明に基づいて容易に発明をすることができたものではない。したがって、原査定の拒絶理由及び当審で通知した拒絶理由によっては、本願を拒絶することができない。

また、他に本願を拒絶すべき理由を発見しない。

よって、結論のとおり審決する。