2019-800091

上記当事者間の特許第５９８１９１４号発明「ＰＩＶＫＡ－ＩＩに関する抗体およびその使用」の特許無効審判事件について、次のとおり審決する。

結 論 特許第５９８１９１４号の特許請求の範囲を、令和３年７月１９日付け訂正請求書に添付された訂正特許請求の範囲のとおり、訂正後の請求項［３－５、４０－４１、５２－５４］、［１３－２１］、［２２－３０］、［３１－３７］、［４５－５１］、［５５－６７］、［６８－７０］、［７１－７５］について訂正することを認める。 特許第５９８１９１４号の請求項３～５、１３、１５～２２、２５～３１、３３～３８、４０、４５～５３、５５、５７～６９、７１、７２に係る発明についての無効審判請求は、成り立たない。 特許第５９８１９１４号の請求項７３及び７４に係る発明についての無効審判請求を却下する。 審判費用は、請求人の負担とする。

理 由 第１ 手続の経緯 特許第５９８１９１４号（請求項の数は７５。以下、「本件特許」という。）についての出願は、平成２３年７月８日（パリ条約による優先権主張 平成２２年７月２６日 米国）を国際出願日とする特願２０１３－５２１７９８号であって、平成２８年８月５日に特許権の設定登録がなされたものである。 請求人は、令和１年１０月２９日付けで当該特許の請求項３～５、１３、１５～２２、２５～３１、３３～３８、４０、４５～５３、５５、５７～６９及び７１～７４に係る発明の特許について、甲第１～１４号証を提出し、特許無効審判請求を行った。本件無効審判の手続の経緯は以下のとおりである。 令和１年１０月２９日 審判請求書の提出 令和２年 ３月２７日 審判事件答弁書、訂正請求書、及び乙第１号証の提出 令和２年 ５月２９日 審判事件弁駁書の提出 令和２年 ７月１４日付け 審理事項通知書 令和２年 ８月２７日 口頭審理陳述要領書の提出（被請求人） 令和２年 ９月１０日 口頭審理陳述要領書、及び甲第１５～１６号証の提出（請求人） 令和２年 ９月２４日 口頭審尋 令和２年１０月 ８日 上申書、及び乙第２号証の提出（被請求人） 令和２年１０月 ８日 上申書、及び甲第１７号証の提出（請求人） 令和３年 ２月１０日付け 審決の予告 令和３年 ７月１９日 訂正請求書、上申書（被請求人）、及び乙第３号証の提出 令和３年 ９月２９日 審判事件弁駁書、及び甲第１８号証の提出 第２ 補正の許否の決定 １ 決定の結論 審判請求人が令和３年９月２９日に提出した弁駁書による請求の理由の補正については、特許法第１３１条の２第２項の規定により、許可することを決定する。 ２ 決定の理由 令和３年９月２９日提出の弁駁書において、請求人は訂正後の請求項３～５、１３、１５～２２、２５～３１、３３～３７、４０、４５～５３、５５、５７～６９、７１、７２に係る発明は、実施可能要件（特許法第３６条第４項第１号）、サポート要件（同法第３６条第６項第１号）、及び明確性要件（同法第３６条第６項第２号）の無効理由を有している旨を主張するが、これは令和３年７月１９日にされた訂正の請求により請求の理由を補正する必要が生じたものと認められる。 第３ 訂正請求について １ 訂正請求の趣旨及び訂正の内容 被請求人が令和３年７月１９日付け訂正請求書により請求する訂正（以下、「本件訂正」という。）は、本件特許の特許請求の範囲を、訂正請求書に添付した訂正特許請求の範囲のとおりに訂正することを求めるものである。 その請求の内容は、請求項３～５、１３～３７、４０、４１、４５～７５、及び、明細書に係る訂正であって、一群の請求項ごと（［３－５、４０、４１、５２－５４］、［１３－２１］、［２２－３０］、［３１－３７］、［４５－５１］、［５５－６７］、［６８－７０］、［７１－７５］）になされた、以下のとおりのものである（下線部が訂正箇所である。）。 なお、令和２年３月２７日にされた訂正の請求は、特許法第１３４条の２第６項の規定により、取り下げられたものとみなされる。 （１）訂正事項１ 特許請求の範囲の請求項３に「プロトロンビン誘導ビタミンＫアンタゴニストＩＩ（ＰＩＶＫＡ－ＩＩ）のアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を含む、単離された結合性タンパク質」とあるのを、「プロトロンビン誘導ビタミンＫアンタゴニストＩＩ（ＰＩＶＫＡ－ＩＩ）のアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を含み、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する、単離された結合性タンパク質」に訂正する。 （２）訂正事項２ 特許請求の範囲の請求項３に「単離された結合性タンパク質」とあるのを、「単離された結合性タンパク質（但し、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５９で特定されるハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体を除く）」に訂正する。 （３）訂正事項３ 特許請求の範囲の請求項１３に「ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を有する抗体」とあるのを、「ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を有し、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する抗体」に訂正する。 （４）訂正事項４ 特許請求の範囲の請求項１３に「抗体」とあるのを、「抗体（但し、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５９で特定されるハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体を除く）」に訂正する。 （５）訂正事項５ 特許請求の範囲の請求項２２に「ｂ）第２の抗体がＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を有し、」とあるのを、「ｂ）ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を有し、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合し、」に訂正する。 （６）訂正事項６ 特許請求の範囲の請求項２２に「第２の抗体」とあるのを、「第２の抗体（但し、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５９で特定されるハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体を除く）」に訂正する。 （７）訂正事項７ 特許請求の範囲の請求項２９に「請求項２８に記載の方法」とあるのを、「請求項２７に記載の方法」に訂正する。 （８）訂正事項８ 特許請求の範囲の請求項３１に「抗体がＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３に結合する抗原結合ドメインを含み」とあるのを、「抗体がＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３に結合する抗原結合ドメインを含み、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合するものであり」に訂正する。 （９）訂正事項９ 特許請求の範囲の請求項３１に「結合する」とあるのを、「結合するもの（但し、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５９で特定されるハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体を除く）であり」に訂正する。 （１０）訂正事項１０ 特許請求の範囲の請求項４５に「ＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原のアミノ酸１－１３に抗原結合性ドメインを有し」とあるのを、「ＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原のアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性ドメインを有し」に訂正する。 （１１）訂正事項１１ 特許請求の範囲の請求項４５に「検出可能な標識に付着している第２の抗体」とあるのを、「ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合し、検出可能な標識に付着している第２の抗体」に訂正する。 （１２）訂正事項１２ 特許請求の範囲の請求項４５に「第２の抗体」とあるのを、「第２の抗体（但し、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５９で特定されるハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体を除く）」に訂正する。 （１３）訂正事項１３ 特許請求の範囲の請求項４５のステップｄ）に「前記試験試料中に存在する」とあるのを、「前記生物学的試料中に存在する」に訂正する。 （１４）訂正事項１４ 特許請求の範囲の請求項５５に「ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を有する抗体」とあるのを、「ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を有し、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する抗体」に訂正する。 （１５）訂正事項１５ 特許請求の範囲の請求項５５に「抗体」とあるのを、「抗体（但し、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５９で特定されるハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体を除く）であり」に訂正する。 （１６）訂正事項１６ 特許請求の範囲の請求項６８に「ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を含む第２の単離された結合性タンパク質」とあるのを、「ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を含み、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する第２の単離された結合性タンパク質」に訂正する。 （１７）訂正事項１７ 特許請求の範囲の請求項６８に「第２の単離された結合性タンパク質」とあるのを、「第２の単離された結合性タンパク質（但し、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５９で特定されるハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体を除く）」に訂正する。 （１８）訂正事項１８ 特許請求の範囲の請求項７１に「各結合性タンパク質」とあるのを、「前記結合性タンパク質の各々」に訂正する。 （１９）訂正事項１９ 特許請求の範囲の請求項７１に「ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－３３の異なるサブセットに結合する」とあるのを、「ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－３３の異なるサブセットに結合し、前記結合性タンパク質の少なくとも一つは、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を含み、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合するものである」に訂正する。 （２０）訂正事項２０ 特許請求の範囲の請求項７１に「結合する」とあるのを、「結合するもの（但し、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５９で特定されるハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体を除く）である」に訂正する。 （２１）訂正事項２１ 特許請求の範囲の請求項７３を削除する。 （２２）訂正事項２２ 特許請求の範囲の請求項７４を削除する。 （２３）訂正事項２３ 特許請求の範囲の請求項７５を削除する。 （２４）訂正事項２４ 願書に添付した明細書の段落【００２８】における「第２の抗体は、ＰＩＶＫＡの脱炭酸されたアミノ酸残基と強力に反応することができ、脱炭酸された（通常の）アミノ酸残基と中程度に反応することができる。」という記載のうち、「脱炭酸された（通常の）アミノ酸残基」を「カルボキシル化された（通常の）アミノ酸残基」に訂正する。 （２５）訂正事項２５ 明細書の段落【０１６６】における「プロトロンビン（ＩＩ因子）はアミノ酸長１７個のペプチド中に脱炭酸されたグルタミン酸（ＧＬＡ）を４個有していた。」という記載のうち、「脱炭酸されたグルタミン酸（ＧＬＡ）」を「カルボキシル化されたグルタミン酸（ＧＬＡ）」に訂正する。 （２６）訂正事項２６ 明細書の段落【０１８２】における「プロトロンビン（ＩＩ因子）はアミノ酸長１５個のペプチド中に脱炭酸されたグルタミン酸（ＧＬＡ）６個を有していた。」という記載のうち、「脱炭酸されたグルタミン酸（ＧＬＡ）」を「カルボキシル化されたグルタミン酸（ＧＬＡ）」に訂正する。 ２ 訂正の適否 （１）訂正事項１、３、８、１１、１４、１６について 訂正事項１は、訂正前の請求項３において、結合性タンパク質を、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を含むことで特定していたものを、さらにＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合するように限定したものであるから、特許法第１３４条の２第１項ただし書き第１号に掲げる「特許請求の範囲の減縮」を目的とするものである。 そして、本件明細書の段落【００２９】には、「本開示の結合性タンパク質または抗体は、約１×１０－９Ｍまたはそれを超える、好ましくは約１×１０-1０Ｍまたはそれを超える、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸領域１－１３に対する解離定数（Ｋｄ）を有する。抗体はこのように、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識し結合することができる。」と記載されており、本件明細書には、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を有し、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識し結合することができる抗体等が記載されていることが明らかであるから、訂正事項１は、願書に添付した明細書に記載した事項の範囲内であり、実質上特許請求の範囲を拡張し、又は変更するものでもない。 そうすると、訂正事項１は、特許法第１３４条の２第９項で準用する同法第１２６条第５項及び第６項の規定に適合する。 訂正事項３、８、１１、１４、１６も、それぞれ訂正前の請求項１３、３１、４５、５５、６８において、抗体等をＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を含むこと等で特定していたものを、さらにＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合するように限定したものであるから、特許法第１３４条の２第１項ただし書き第１号に掲げる「特許請求の範囲の減縮」を目的とするものである。 そして、これらの訂正事項も、訂正事項１と同様、特許法第１３４条の２第９項で準用する同法第１２６条第５項及び第６項の規定に適合する。 （２）訂正事項５について 訂正事項５のうち「第２の抗体が」を削除する訂正は、訂正前の請求項２２において、「第２の抗体」の重複記載を除くものであるから、特許法第１３４条の２第１項ただし書第３号に規定する「明瞭でない記載の釈明」を目的とするものである。 また、訂正事項５のうち「ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合し」を追加する訂正は、訂正前の請求項２２において、抗体を、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を含むこと等で特定していたものを、さらにＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合するように限定したものであるから、特許法第１３４条の２第１項ただし書き第１号に掲げる「特許請求の範囲の減縮」を目的とするものである。 そして、上記（１）と同様に、訂正事項５は、特許法第１３４条の２第９項で準用する同法第１２６条第５項及び第６項の規定に適合する。 （３）訂正事項２、４、６、９、１２、１５、１７、２０について 訂正事項２は、訂正前の請求項３において、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を含む結合性タンパク質から、受託番ＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５９で特定されるハイブリドーマにより産生されモノクローナル抗体を除くものであるから、特許法第１３４条の２第１項ただし書き第１号に掲げる「特許請求の範囲の減縮」を目的とするものである。 そして、受託番ＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５９で特定されるハイブリドーマにより産生される特定のモノクローナル抗体は、訂正前の請求項３の結合性タンパク質に含まれる具体的かつ特定の抗体にすぎず、これを除いたとしても、除かれたあとの発明において、新たな技術的特徴が導入されるとは認められない。 したがって、この訂正事項は、願書に添付した明細書に記載した事項の範囲内であり、実質上特許請求の範囲を拡張し、又は変更するものでもないから、特許法第１３４条の２第９項で準用する同法第１２６条第５項及び第６項の規定に適合する。 訂正事項４、６、９、１２、１５、１７、２０も、受託番ＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５９で特定されるハイブリドーマにより産生されモノクローナル抗体を単に除くものであるから、訂正事項２と同様に、特許法第１３４条の２第１項ただし書き第１号に掲げる「特許請求の範囲の減縮」を目的とするものであり、特許法第１３４条の２第９項で準用する同法第１２６条第５項及び第６項の規定にも適合する。 （４）訂正事項７について 訂正事項７は、訂正前の請求項２９において、請求項２８を引用していたが、請求項２８に記載の化合物と、請求項２９の化合物との従属関係が明瞭ではなかったため、引用する請求項を請求項２８から請求項２７に変更することで、従属関係を明瞭にするものである。 したがって、訂正事項７は、特許法第１３４条の２第１項ただし書第３号に規定する「明瞭でない記載の釈明」を目的とするものである。 また、この訂正事項は、願書に添付した明細書に記載した事項の範囲内であり、実質上特許請求の範囲を拡張し、又は変更するものでもないから、特許法第１３４条の２第９項で準用する同法第１２６条第５項及び第６項の規定に適合する。 （５）訂正事項１０について 訂正事項１０は、訂正前の請求項４５において、「ＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原のアミノ酸１－１３」と「抗原結合性ドメイン」の修飾関係が明瞭でなかったため、「ＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原のアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性ドメイン」とするものである。 したがって、訂正事項１０は、特許法第１３４条の２第１項ただし書第３号に規定する「明瞭でない記載の釈明」を目的とするものである。 また、この訂正事項は、願書に添付した明細書に記載した事項の範囲内であり、実質上特許請求の範囲を拡張し、又は変更するものでもないから、特許法第１３４条の２第９項で準用する同法第１２６条第５項及び第６項の規定に適合する。 （６）訂正事項１３について 訂正事項１３は、訂正前の請求項４５において、「前記試験試料」と、その前に記載された「生物学的試料」の関係性が明瞭でなかったため、「試験試料」を「生物学的試料」に統一するものである。 したがって、訂正事項１３は、特許法第１３４条の２第１項ただし書第３号に規定する「明瞭でない記載の釈明」を目的とするものである。 また、この訂正事項は、願書に添付した明細書に記載した事項の範囲内であり、実質上特許請求の範囲を拡張し、又は変更するものでもないから、特許法第１３４条の２第９項で準用する同法第１２６条第５項及び第６項の規定に適合する。 （７）訂正事項１８について 訂正事項１８は、訂正前の請求項７１において、「各結合性タンパク質」と、その前に記載された「少なくとも２つの異なる結合性タンパク質」の関係性が明瞭でなかったため、「各結合性タンパク質」を「前記結合性タンパク質の各々」とするものである。 したがって、訂正事項１８は、特許法第１３４条の２第１項ただし書第３号に規定する「明瞭でない記載の釈明」を目的とするものである。 また、この訂正事項は、願書に添付した明細書に記載した事項の範囲内であり、実質上特許請求の範囲を拡張し、又は変更するものでもないから、特許法第１３４条の２第９項で準用する同法第１２６条第５項及び第６項の規定に適合する。 （８）訂正事項１９について 訂正事項１９は、訂正前の請求項７１において、少なくとも２つの異なる結合性タンパク質のうち、一つをＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を含み、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合するものに限定するものであるから、特許法第１３４条の２第１項ただし書き第１号に掲げる「特許請求の範囲の減縮」を目的とするものである。 そして、本件明細書段落【００２６】及び【００２９】には、次のように記載されている。 「別の一態様において、本開示は、少なくとも２つの異なる結合性タンパク質の使用を含む、試料中のＰＩＶＫＡ－ＩＩの量を決定するための方法を提供し、・・・各結合性タンパク質の抗原結合性部分は、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－３３の異なるサブセットに結合する。結合性タンパク質は、モノクローナル抗体であることができる。・・・第２のモノクローナル抗体は、例えば、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を有することができる。」（段落【００２６】）。 「本開示の結合性タンパク質または抗体は、約１×１０－９Ｍまたはそれを超える、好ましくは約１×１０－１０Ｍまたはそれを超える、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸領域１－１３に対する解離定数（Ｋｄ）を有する。抗体はこのように、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識し結合することができる。」（段落【００２９】）。 したがって、ＰＩＶＫＡ－ＩＩの量を決定するために利用する２種の抗体のうち、第２の抗体に、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を有し、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識し結合することができる抗体が含まれることは明らかであるから、訂正事項１９は、上述のとおり、願書に添付した明細書に記載した事項の範囲内であり、実質上特許請求の範囲を拡張し、又は変更するものでもない。 そうすると、訂正事項１９は、特許法第１３４条の２第９項で準用する同法第１２６条第５項及び第６項の規定に適合する。 （９）訂正事項２１～２３について 訂正事項２１～２３は、訂正前の請求項７３～７５を削除するものであるから、特許法第１３４条の２第１項ただし書き第１号に掲げる「特許請求の範囲の減縮」を目的とするものである。 また、訂正事項２１～２３は、訂正前の請求項７３～７５を削除するものであるから、願書に添付した明細書に記載した事項の範囲内であり、実質上特許請求の範囲を拡張し、又は変更するものでもなく、特許法第１３４条の２第９項で準用する同法第１２６条第５項及び第６項の規定にも適合する。 （１０）訂正事項２４～２６について 訂正事項２４～２６は、いずれも本件明細書の誤訳を訂正するものであるから、特許法第１３４条の２第１項ただし書第２号に規定する「誤訳の訂正」を目的とするものである。 また、訂正事項２４～２６は、いずれも願書に添付した明細書に記載されているといえるから、特許法第１８４条の１９で読み替えて準用する特許法第１２６条第５項に適合する。 ３ 本件訂正後の発明の独立特許要件について 上記の「第１ 手続きの経緯」で述べたように、本件特許無効の申し立ては、本件請求項１～７４に係る特許のうち請求項３～５、１３、１５～２２、２５～３１、３３～３８、４０、４５～５３、５５、５７～６９及び７１～７４に係る特許について申立てられたものであるから、上記の請求項に係る発明は、独立特許要件の判断を要しない。 一方、上記の請求項と一群の請求項の関係であることにより、訂正がなされることになる請求項１４、２３～２４、３２、４１、５４、５６、７０に係る特許に対しては、本件特許無効の申し立てはなされていない。 そして、請求項１４、２３～２４、３２、４１、５４、５６、７０に係る発明は、いずれも上記の「１ 訂正請求の趣旨及び訂正の内容」で示した訂正により、これらの請求項が直接又は間接的に引用する請求項と連動して訂正を受けるものであり、特許請求の範囲の減縮を目的とした訂正がなされることになるものである。 しかるところ、下記の「第７ 当審の判断」で示されるように、請求項１４、２３～２４、３２、４１、５４、５６、７０に係る発明が、直接的に引用する請求項１３、２２、３１、４０、５３、５５、６９に係る発明には無効理由がなく、他に無効とする理由も発見されないから、本件訂正後の請求項１４、２３～２４、３２、４１、５４、５６、７０に係る発明は、特許出願の際独立して特許を受けることができるものであるといえる。 ４ 訂正請求についての結論 以上のとおり、本件訂正は、特許法第１３４条の２第１項ただし書き第１号ないし第３号に掲げる事項を目的とするものであり、同法第１３４条の２第９項で準用する同法第１２６条第５項及び第６項、並びに、同法第１８４条の１９で読み替えて準用する同法第１２６条第５項の規定に適合するので、本件訂正を認める。 第４ 本件訂正発明 本件特許の請求項１～７５に係る発明は、本件訂正特許請求の範囲の請求項１～７５に記載された事項により特定される、以下のとおりのものである（以下、それぞれ「本件訂正発明１」、「本件訂正発明２」等といい、まとめて「本件訂正発明」ということもある。なお、下線部が訂正箇所である。） 「 【請求項１】 アメリカ培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）受託番号ＰＴＡ－１０５４１によって表される、ハイブリドーマ細胞系統。 【請求項２】 請求項１に記載のハイブリドーマ細胞系統によって生成されるモノクローナル抗体。 【請求項３】 プロトロンビン誘導ビタミンＫアンタゴニストＩＩ（ＰＩＶＫＡ－ＩＩ）のアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を含み、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する、単離された結合性タンパク質（但し、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５９で特定されるハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体を除く）。 【請求項４】 ４．０×１０－９またはそれより低い結合解離定数（Ｋｄ）を有する、請求項３に記載の単離された結合性タンパク質。 【請求項５】 １．０×１０－９から１．０×１０－１０までの結合解離定数（Ｋｄ）を有する、請求項３に記載の単離された結合性タンパク質。 【請求項６】 結合性タンパク質が可変重鎖領域を有し、可変重鎖領域のアミノ酸配列が請求項２に記載のモノクローナル抗体のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有する、ＰＩＶＫＡ－ＩＩに結合する結合性タンパク質をコードする単離された核酸分子。 【請求項７】 結合性タンパク質がＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を含む、請求項６に記載の単離された核酸分子。 【請求項８】 請求項２に記載のモノクローナル抗体のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有する、精製されたポリペプチド。 【請求項９】 請求項６に記載の単離された核酸分子を含むベクター。 【請求項１０】 請求項９に記載のベクターを含む単離された宿主細胞。 【請求項１１】 ａ）調節エレメントに操作可能に連結している請求項７に記載の核酸分子を含むベクターを構築するステップ、ｂ）得られたベクターを宿主細胞中に形質転換で導入するステップ、ｃ）結合性タンパク質を生成するのに十分な時間および条件下、前記宿主細胞を培養するステップを含む、ＰＩＶＫＡ－ＩＩに結合することができる結合性タンパク質を生成する方法。 【請求項１２】 請求項１１に記載の方法にしたがって生成される、単離された結合性タンパク質。 【請求項１３】 ａ）試験試料を、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を有し、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する抗体（但し、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５９で特定されるハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体を除く）と、抗体－抗原複合体の形成に十分な時間および条件下、接触させるステップ、およびｂ）前記抗体－抗原複合体の存在が前記試験試料中のＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原の存在を示す、前記抗体－抗原複合体の存在を検出するステップ、を含む、試験試料中のＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原を検出する方法。 【請求項１４】 前記抗体が、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１０５４１を有するハイブリドーマ細胞系統によって生成されるモノクローナル抗体である、請求項１３に記載の方法。 【請求項１５】 試験試料が、全血、血清、または血漿である、請求項１３に記載の方法。 【請求項１６】 抗体が検出可能な標識で標識化されており、（ｂ）が、検出可能な標識によって生成され、または検出可能な標識から放射されるシグナルを測定するステップ、および試験試料中のＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原を検出するステップを含む、請求項１３に記載の方法。 【請求項１７】 検出可能な標識が、放射性標識、酵素標識、化学発光標識、蛍光標識、温度測定標識、および免疫－ポリメラーゼ連鎖反応標識からなる群から選択される、請求項１６に記載の方法。 【請求項１８】 検出可能な標識がアクリジニウム化合物である、請求項１６に記載の方法。 【請求項１９】 ａ）過酸化水素の源を生成し、または抗体－抗原複合体に提供するステップ、ｂ）塩基性溶液をステップ（ａ）の混合物に加えるステップ、およびｃ）ステップ（ｂ）において生成され、または放射される光シグナルを測定し、試料中のＰＩＶＫＡ－ＩＩを検出するステップをさらに含む、請求項１８に記載の方法。 【請求項２０】 アクリジニウム化合物が、式Ｉ： 【化１】 ［図：0001416847000001.jpg］ ［式中、Ｒ１およびＲ２は各々独立に、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはアラルキル、スルホアルキル、カルボキシアルキル、およびオキソアルキルからなる群から選択され、Ｒ３からＲ１５は各々独立に、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはアラルキル、アミノ、アミド、アシル、アルコキシル、ヒドロキシル、カルボキシル、ハロゲン、ハロゲン化物、ニトロ、シアノ、スルホ、スルホアルキル、カルボキシアルキル、およびオキソアルキルからなる群から選択され、場合によって、存在する場合は、 【化２】 ［図：0001416847000002.jpg］ は陰イオンである］ による構造を有するアクリジニウム－９－カルボキサミドである、請求項１８に記載の方法。 【請求項２１】 アクリジニウム化合物が、式ＩＩ： 【化３】 ［図：0001416847000003.jpg］ ［式中、Ｒ１は、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはアラルキル、スルホアルキル、カルボキシアルキル、およびオキソアルキルであり、Ｒ３からＲ１５は各々独立に、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはアラルキル、アミノ、アミド、アシル、アルコキシル、ヒドロキシル、カルボキシル、ハロゲン、ハロゲン化物、ニトロ、シアノ、スルホ、スルホアルキル、カルボキシアルキル、およびオキソアル キルからなる群から選択され、場合によって、存在する場合は、 【化４】 ［図：0001416847000004.jpg］ は陰イオンである］ による構造を有するアクリジニウム－９－カルボキシレートアリールエステルである、請求項１８に記載の方法。 【請求項２２】 試験試料中のＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原を検出する方法であって、 ａ）試験試料を、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１３－２７に結合する抗原結合性部分を有する第１の抗体と、第１の抗体－抗原複合体の形成に十分な時間および条件下、接触させるステップ、ｂ）ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を有し、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合し、検出可能な標識にコンジュゲートしている、第２の抗体（但し、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５９で特定されるハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体を除く）を第１の抗体／抗原複合体に、第１の抗体／抗原／第２の抗体の複合体を形成するのに十分な時間および条件下、加えるステップ、ならびにｃ）検出可能な標識によって生成され、または検出可能な標識から放射されるシグナルを測定し、試験試料中のＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原を検出するステップを含む、試験試料中のＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原を検出する前記方法。 【請求項２３】 第１の抗体が、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－９６３８を有するハイブリドーマ細胞系統によって生成されるモノクローナル抗体である、請求項２２に記載の方法。 【請求項２４】 第２の抗体が、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１０５４１を有するハイブリドーマ細胞系統によって生成されるモノクローナル抗体である、請求項２２に記載の方法。 【請求項２５】 試験試料が、全血、血清、または血漿である、請求項２２に記載の方法。 【請求項２６】 検出可能な標識が、放射性標識、酵素標識、化学発光標識、蛍光標識、温度測定標識、および免疫－ポリメラーゼ連鎖反応標識からなる群から選択される、請求項２２に記載の方法。 【請求項２７】 検出可能な標識がアクリジニウム化合物である、請求項２２に記載の方法。 【請求項２８】 アクリジニウム化合物が、式Ｉ： 【化５】 ［図：0001416847000005.jpg］ ［式中、Ｒ１およびＲ２は各々独立に、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはアラルキル、スルホアルキル、カルボキシアルキル、およびオキソアルキルからなる群から選択され、Ｒ３からＲ１５は各々独立に、水素、アルキル、アルケニル、アルキニ ル、アリールまたはアラルキル、アミノ、アミド、アシル、アルコキシル、ヒドロキシル、カルボキシル、ハロゲン、ハロゲン化物、ニトロ、シアノ、スルホ、スルホアルキル、カルボキシアルキル、およびオキソアルキルからなる群から選択され、場合によって、存在する場合は、 【化６】 ［図：0001416847000006.jpg］ は陰イオンである］ による構造を有するアクリジニウム－９－カルボキサミドである、請求項２７に記載の方法。 【請求項２９】 アクリジニウム化合物が、式ＩＩ： 【化７】 ［図：0001416847000007.jpg］ ［式中、Ｒ１は、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはアラルキル、スルホアルキル、カルボキシアルキル、およびオキソアルキルであり、Ｒ３からＲ１５は各々独立に、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはアラルキル、アミノ、アミド、アシル、アルコキシル、ヒドロキシル、カルボキシル、ハロゲン、ハロゲン化物、ニトロ、シアノ、スルホ、スルホアルキル、カルボキシアルキル、およびオキソアルキルからなる群から選択され、場合によって、存在する場合は、 【化８】 ［図：0001416847000008.jpg］ は陰イオンである］ による構造を有するアクリジニウム－９－カルボキシレートアリールエステルである、請求項２７に記載の方法。 【請求項３０】 第１の抗体が固相上に、第１の抗体－抗原複合体の形成の前または後のいずれかに固定化される、請求項２２に記載の方法。 【請求項３１】 試験試料中のＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原を検出する方法であって、 ａ）試験試料を、１）検出可能なシグナルを生成することができる検出可能な標識に付いている、ＰＩＶＫＡ－ＩＩレファレンス抗原、および２）ＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原に対する抗体と、ＰＩＶＫＡ－ＩＩレファレンス抗原／抗体複合体を形成するのに十分な時間および条件下、接触させるステップ、ｂ）検出可能な標識によって生成されるシグナルを検出するステップであって、抗体がＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３に結合する抗原結合ドメインを含み、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合するもの（但し、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５９で特定されるハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体を除く）であり、試験試料中に検出されるＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原の量が、抗体に結合しているＰＩＶＫＡ－ＩＩレファレンス抗原の量に逆比例する、ステップを含む、試験試料 中のＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原を検出する前記方法。 【請求項３２】 抗体が、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１０５４１を有するハイブリドーマ細胞系統によって生成される、請求項３１に記載の方法。 【請求項３３】 試験試料が、全血、血清、または血漿である、請求項３１に記載の方法。 【請求項３４】 検出可能な標識が、放射性標識、酵素標識、化学発光標識、蛍光標識、温度測定標識、および免疫－ポリメラーゼ連鎖反応標識からなる群から選択される、請求項３１に記載の方法。 【請求項３５】 検出可能な標識がアクリジニウム化合物である、請求項３１に記載の方法。 【請求項３６】 アクリジニウム化合物が、式Ｉ： 【化９】 ［図：0001416847000009.jpg］ ［式中、Ｒ１およびＲ２は各々独立に、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはアラルキル、スルホアルキル、カルボキシアルキル、およびオキソアルキルからなる群から選択され、Ｒ３からＲ１５は各々独立に、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはアラルキル、アミノ、アミド、アシル、アルコキシル、ヒドロキシル、カルボキシル、ハロゲン、ハロゲン化物、ニトロ、シアノ、スルホ、スルホアルキル、カルボキシアルキル、およびオキソアルキルからなる群から選択され、場合によって、存在する場合は、 【化１０】 ［図：0001416847000010.jpg］ は陰イオンである］ による構造を有するアクリジニウム－９－カルボキサミドである、請求項３５に記載の方法。 【請求項３７】 アクリジニウム化合物が、式ＩＩ： 【化１１】 ［図：0001416847000011.jpg］ ［式中、Ｒ１は、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはアラルキル、スルホアルキル、カルボキシアルキル、およびオキソアルキルであり、Ｒ３からＲ１５は各々独立に、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはアラルキル、アミノ、アミド、アシル、アルコキシル、ヒドロキシル、カルボキシル、ハロゲン、ハロゲン化物、ニトロ、シアノ、スルホ、スルホアルキル、カルボキシアルキル、およびオキソアルキルからなる群から選択され、場合によって、存在する場合は、 【化１２】 ［図：0001416847000012.jpg］ は陰イオンである］ による構造を有するアクリジニウム－９－カルボキシレートアリールエステルである、請求項３５に記載の方法。 【請求項３８】 ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性ドメインを含む結合性タンパク質を発現するハイブリドーマ細胞系統を生成する方法であって、 ａ）ＧＡＮＰマウスを、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１７を含む抗原で、前記マウスが前記抗原に対する抗体を生成するのに十分な時間および条件下、免疫化するステップ、ｂ）前記マウスの脾臓から８つの細胞を収集し、精製するステップ、ｃ）ハイブリドーマを生成するために、前記脾臓細胞をミエローマと融合するステップ、ならびにｄ）ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性ドメインを含む前記結合性タンパク質を発現するハイブリドーマ細胞系統を選択するステップを含む、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性ドメインを含む結合性タンパク質を発現するハイブリドーマ細胞系統を生成する前記方法。 【請求項３９】 ハイブリドーマ細胞系統がＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１０５４１を有する、請求項３８に記載の方法。 【請求項４０】 請求項３に記載の結合性タンパク質および薬学的に許容される担体を含む、薬剤組成物。 【請求項４１】 結合性タンパク質が、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１０５４１を有するハイブリドーマ細胞系によって生成されるモノクローナル抗体を含む、請求項４０に記載の薬剤組成物。 【請求項４２】 肝細胞癌（ＨＣＣ）または肝癌を有することが疑われる患者におけるＨＣＣまたは肝癌の存在を決定する方法であって、 ａ）患者に由来する生物学的試料を、ＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原／抗体複合体の形成に十分な時間および条件下、ＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原のアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を含む抗体と接触させるステップ、ｂ）ＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原／抗体複合体の存在を検出するステップ、ｃ）前記複合体中に存在する前記ＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原を、前記複合体中に存在する前記抗体から解離するステップ、ならびにｄ）予め決定されたレベルを超える解離されたＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原の量が、前記患者における肝細胞癌（ＨＣＣ）または肝癌の存在を示す、解離したＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原の量を測定するステップを含む、ＨＣＣまたは肝癌を有することが疑われる患者におけるＨＣＣまたは肝癌の存在を決定する前記方法。 【請求項４３】 予め決定されたレベルが４０ｍＡＵ／ｍＬである、請求項４２に記載の方法。 【請求項４４】 生物学的試料が、全血、血清、または血漿である、請求項４２に記載の方法。 【請求項４５】 肝細胞癌（ＨＣＣ）または肝癌を有することが疑われる患者におけるＨＣＣまたは肝癌の存在を決定する方法であって、 ａ）患者に由来する生物学的試料を、ＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原／抗体複合体の形成に十分な時間および条件下、ＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原のアミノ酸１３－２７に結合する抗原結合性ドメインを有する第１の抗体と接触させるステップ、ｂ）検出可能なシグナルを産生することができるＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原のアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性ドメインを有し、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合し、検出可能な標識に付着している第２の抗体（但し、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５９で特定されるハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体を除く）を含むコンジュゲートを、得られたＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原／抗体複合体に、結合しているＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原に前記コンジュゲートを結合させるのに十分な時間および条件下、加えるステップ、ｃ）前記検出可能な標識によって産生されるシグナルを検出することによって、前記生物学的試料中に存在する可能性があるＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原の存在を検出するステップ、ならびにｄ）予め決定されたレベルを超えるＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原の量が、前記患者におけるＨＣＣまたは肝癌の存在を示す、前記シグナルの強度を測定することによって前記生物学的試料中に存在するＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原の量を測定するステップを含む、ＨＣＣまたは肝癌を有することが疑われる患者におけるＨＣＣまたは肝癌の存在を決定する前記方法。 【請求項４６】 予め決定されたレベルが４０ｍＡＵ／ｍＬである、請求項４５に記載の方法。 【請求項４７】 生物学的試料が、全血、血清、または血漿である、請求項４５に記載の方法。 【請求項４８】 検出可能な標識が、放射性標識、酵素標識、化学発光標識、蛍光標識、温度測定標識、および免疫－ポリメラーゼ連鎖反応標識からなる群から選択される、請求項４５に記載の方法。 【請求項４９】 検出可能な標識がアクリジニウム化合物である、請求項４５に記載の方法。 【請求項５０】 アクリジニウム化合物が、式Ｉ： 【化１３】 ［図：0001416847000013.jpg］ ［式中、Ｒ１およびＲ２は各々独立に、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはアラルキル、スルホアルキル、カルボキシアルキル、およびオキソアルキルからなる群から選択され、Ｒ３からＲ１５は各々独立に、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはアラルキル、アミノ、アミド、アシル、アルコキシル、ヒドロキシル、カルボキシル、ハロゲン、ハロゲン化物、ニトロ、シアノ、スルホ、スルホアルキル、カルボキシアルキル、およびオキソアルキルからなる群から選択され、場合によって、存在する場合は、 【化１４】 ［図：0001416847000014.jpg］ は陰イオンである］ による構造を有するアクリジニウム－９－カルボキサミドである、請求項４９に記載の方法。 【請求項５１】 アクリジニウム化合物が、式ＩＩ： 【化１５】 ［図：0001416847000015.jpg］ ［式中、Ｒ１は、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはアラルキル、スルホアルキル、カルボキシアルキル、およびオキソアルキルであり、Ｒ３からＲ１５は各々独立に、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはアラルキル、アミノ、アミド、アシル、アルコキシル、ヒドロキシル、カルボキシル、ハロゲン、ハロゲン化 物、ニトロ、シアノ、スルホ、スルホアルキル、カルボキシアルキル、およびオキソアルキルからなる群から選択され、場合によって、存在する場合は、 【化１６】 ［図：0001416847000016.jpg］ は陰イオンである］ による構造を有するアクリジニウム－９－カルボキシレートアリールエステルである、請求項４９に記載の方法。 【請求項５２】 請求項２に記載のモノクローナル抗体または請求項３に記載の結合性タンパク質を含有する容器を含む、試験試料中のＰＩＶＫＡ－ＩＩの量を検出および／または定量するためのキット。 【請求項５３】 ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１３－２７に結合する抗原結合性部分を有する結合性タンパク質を含有する容器をさらに含む、請求項５２に記載のキット。 【請求項５４】 結合性タンパク質が、アメリカ培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）受託番号ＰＴＡ－９６３８によって表されるハイブリドーマ細胞系統によって生成されるモノクローナル抗体を含む、請求項５３に記載のキット。 【請求項５５】 ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を有し、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する抗体（但し、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５９で特定されるハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体を除く）を含む検出試薬、ならびに試験試料中のＰＩＶＫＡ－ＩＩの量を検出および／または定量するための指示書を含む、試験試料中のＰＩＶＫＡ－ＩＩの量を検出および／または定量するためのキット。 【請求項５６】 ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を有する抗体が、アメリカ培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）受託番号ＰＴＡ－１０５４１によって表されるハイブリドーマ細胞系統によって生成されるモノクローナル抗体である、請求項５５に記載のキット。 【請求項５７】 抗体に付いている検出可能な標識をさらに含み、検出可能な標識が、検出可能なシグナルを生成することができる、請求項５５に記載のキット。 【請求項５８】 検出可能な標識が、放射性標識、酵素標識、化学発光標識、蛍光標識、温度測定標識、および免疫－ポリメラーゼ連鎖反応標識からなる群から選択される、請求項５７に記載のキット。 【請求項５９】 検出可能な標識がアクリジニウム化合物である、請求項５８に記載のキット。 【請求項６０】 アクリジニウム化合物が、式Ｉ： 【化１７】 ［図：0001416847000017.jpg］ ［式中、Ｒ１およびＲ２は各々独立に、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはアラルキル、スルホアルキル、カルボキシアルキル、およびオキソアルキルからなる群から選択され、Ｒ３からＲ１５は各々独立に、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはアラルキル、アミノ、アミド、アシル、アルコキシル、ヒドロキシル、カルボキシル、ハロゲン、ハロゲン化物、ニトロ、シアノ、スルホ、スルホアルキル、カルボキシアルキル、およびオキソアルキルからなる群から選択され、場合によって、存在する場合は、 【化１８】 ［図：0001416847000018.jpg］ は陰イオンである］ による構造を有するアクリジニウム－９－カルボキサミドである、請求項５９に記載のキット。 【請求項６１】 アクリジニウム化合物が、式ＩＩ： 【化１９】 ［図：0001416847000019.jpg］ ［式中、Ｒ１は、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはアラルキル、スルホアルキル、カルボキシアルキル、およびオキソアルキルであり、Ｒ３からＲ１５は各々独立に、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはアラルキル、アミノ、アミド、アシル、アルコキシル、ヒドロキシル、カルボキシル、ハロゲン、ハロゲン化物、ニトロ、シアノ、スルホ、スルホアルキル、カルボキシアルキル、およびオキソアルキルからなる群から選択され、場合によって、存在する場合は、 【化２０】 ［図：0001416847000020.jpg］ は陰イオンである］ による構造を有するアクリジニウム－９－カルボキシレートアリールエステルである、請求項５９に記載のキット。 【請求項６２】 塩基性溶液をさらに含む、請求項５９に記載のキット。 【請求項６３】 塩基性溶液が少なくとも１０のｐＨを有する溶液である、請求項６２に記載のキット。 【請求項６４】 過酸化水素の源をさらに含む、請求項５９に記載のキット。 【請求項６５】 過酸化水素の源が、過酸化水素を含むバッファーまたは溶液を含む、請求項６４に記載のキット。 【請求項６６】 過酸化水素の源が過酸化水素生成酵素を含む、請求項６４に記載のキット。 【請求項６７】 過酸化水素生成酵素が、（Ｒ）－６－ヒドロキシニコチンオキシダーゼ、（Ｓ）－２－ヒドロキシ酸オキシダーゼ、（Ｓ）－６－ヒドロキシニコチンオキシダーゼ、３－ａｃｉ－ニトロプロパン酸オキシダーゼ、３－ヒドロキシアントラニル酸オキシダーゼ、４－ヒドロキシマンデル酸オキシダーゼ、６－ヒドロキシニコチン酸デヒドロゲナーゼ、アブシジン酸－アルデヒドオキシダーゼ、アシル－ＣｏＡオキシダーゼ、アルコールオキシダーゼ、アルデヒドオキシダーゼ、アミンオキシダーゼ、アミンオキシダーゼ（銅含有）、アミンオキシダーゼ（フラビン含有）、アリール－アルコールオキシダーゼ、アリール－アルデヒドオキシダーゼ、カテコールオキシダーゼ、コレステロールオキシダーゼ、コリンオキシダーゼ、コルンバミンオキシダーゼ、シクロヘキシルアミンオキシダーゼ、チトクロームｃオキシダーゼ、Ｄ－アミノ酸オキシダーゼ、Ｄ－アラビノノ－１、４－ラクトンオキシダーゼ、Ｄ－アラビノノ－１、４－ラクトンオキシダーゼ、Ｄ－アスパラギン酸オキシダーゼ、Ｄ－グルタミン酸オキシダーゼ、Ｄ－グルタミン酸（Ｄ－アスパラギン酸）オキシダーゼ、ジヒドロベンゾフェナントリジンオキシダーゼ、ジヒドロオロテートオキシダーゼ、ジヒドロウラシルオキシダーゼ、ジメチルグリシンオキシダーゼ、Ｄ－マンニトールオキシダーゼ、エクジソンオキシダーゼ、エタノールアミンオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、グルタチオンオキシダーゼ、グリセロール－３－リン酸オキシダーゼ、グリシンオキシダーゼ、グリオキシル酸オキシダーゼ、ヘキソースオキシダーゼ、ヒドロキシフィタン酸オキシダーゼ、インドール－３－アセトアルデヒドオキシダーゼ、乳酸オキシダーゼ、Ｌ－アミノ酸オキシダーゼ、Ｌ－アスパラギン酸オキシダーゼ、Ｌ－ガラクトノラクトンオキシダーゼ、Ｌ－グルタミン酸オキシダーゼ、Ｌ－グロノラクトンオキシダーゼ、Ｌ－リジン６－オキシダーゼ、Ｌ－リジンオキシダーゼ、長鎖アルコールオキシダーゼ、Ｌ－ピペコリン酸オキシダーゼ、Ｌ－ソルボースオキシダーゼ、リンゴ酸オキシダーゼ、メタンチオールオキシダーゼ、モノアミノ酸オキシダーゼ、Ｎ６－メチルリジンオキシダーゼ、Ｎ－アシルヘキソサミンオキシダーゼ、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈオキシダーゼ、ニトロアルカンオキシダーゼ、Ｎ－メチル－Ｌ－アミノ酸オキシダーゼ、ヌクレオシドオキシダーゼ、シュウ酸オキシダーゼ、ポリアミンオキシダーゼ、ポリフェノールオキシダーゼ、ポリビニルアルコールオキシダーゼ、プレニルシステインオキシダーゼ、タンパク質－リジン６－オキシダーゼ、プトレシンオキシダーゼ、ピラノースオキシダーゼ、ピリドキサール５’－リン酸合成酵素、ピリドキシン４－オキシダーゼ、ピロロキノリンキノン合成酵素、ピルビン酸オキシダーゼ、ピルビン酸オキシダーゼ（ＣｏＡ－アセチル化）、レチクリンオキシダーゼ、レチナールオキシダーゼ、リファマイシン－Ｂオキシダーゼ、サルコシンオキシダーゼ、２級アルコールオキシダーゼ、亜硫酸オキシダーゼ、スーパーオキシドジスムターゼ、スーパーオキシドレダクターゼ、 テトラヒドロベルベリンオキシダーゼ、チアミンオキシダーゼ、トリプトファンα、β－オキシダーゼ、尿酸オキシダーゼ（ウリカーゼ、尿酸オキシダーゼ）、バニリルアルコールオキシダーゼ、キサンチンオキシダーゼ、キシリトールオキシダーゼ、およびこれらの組合せからなる群から選択される、請求項６６に記載のキット。 【請求項６８】 ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１３－２７に結合する抗原結合性部分を含む第１の単離された結合性タンパク質、およびＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を含み、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する第２の単離された結合性タンパク質（但し、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５９で特定されるハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体を除く）を含む、試験試料中のＰＩＶＫＡ－ＩＩの量を検出および／または定量するためのキット。 【請求項６９】 第１および第２の単離された結合性タンパク質がモノクローナル抗体である、請求項６８に記載のキット。 【請求項７０】 第１のモノクローナル抗体が、アメリカ培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）受託番号ＰＴＡ－９６３８によって表されるハイブリドーマ細胞系統によって生成される抗体であり、第２のモノクローナル抗体が、アメリカ培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）受託番号ＰＴＡ－１０５４１によって表されるハイブリドーマ細胞系統によって生成される抗体である、請求項６９に記載のキット。 【請求項７１】 少なくとも２つの異なる結合性タンパク質の使用を含み、前記結合性タンパク質の各々が、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－３３のサブセットに特異的に結合する抗原結合性部分を含み、前記結合性タンパク質の各々の抗原結合性部分が、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－３３の異なるサブセットに結合し、前記結合性タンパク質の少なくとも一つは、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を含み、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合するもの（但し、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５９で特定されるハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体を除く）である、試料中のＰＩＶＫＡ－ＩＩの量を決定するための方法。 【請求項７２】 結合性タンパク質がモノクローナル抗体である、請求項７１に記載の方法。 【請求項７３】（削除） 【請求項７４】（削除） 【請求項７５】（削除） 」 第５ 当事者の主張及び証拠方法 １ 請求人の主張及び証拠方法 請求人は、「特許第５９８１９１４号の特許請求の範囲の請求項３～５、１３、１５～２２、２５～３１、３３～３８、４０、４５～５３、５５、５７～６９、７１～７４に係る発明についての特許を無効とする、審判費用は被請求人の負担とする」との審決を求め、その理由として以下の（１）～（６）の無効理由を主張し、証拠方法として以下の（７）に記載の書証を提出している。 （１）無効理由１（新規性欠如） 本件特許の訂正前の請求項３に係る発明は、本件特許の優先日前に日本国内又は外国において頒布された刊行物である甲第４号証に記載された発明であり、特許法２９条第１項第３号に該当し、特許を受けることができないものであるから、当該発明についての特許は、同法１２３条第１項２号に該当し、無効とすべきものである。 （２）無効理由２（進歩性欠如） 本件特許の訂正前の請求項３～５、１３、１５～２２、２５～３１、３３～３８、４０、４５～５３、５５、５７～６９、７１～７４に係る発明は、本件特許の優先日前に日本国内又は外国において頒布された刊行物である甲第４号証及び甲第１、５～１０号証に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものであり、当該発明は、特許法２９条第２項の規定により特許を受けることができないものであるから、当該発明についての特許は、同法１２３条第１項２号に該当し、無効とすべきものである。 （３）無効理由３（拡大先願） 本件特許の訂正前の請求項３～５、１３、１５～２２、２５～３１、３３～３８、４０、４５～５３、５５、５７～６９、７１～７４は、本件特許の出願の日前の特許出願であって、その出願後に出願公開がされた他の特許出願であるＰＣＴ／ＪＰ２０１１／０６４７２４の願書に最初に添付された明細書、特許請求の範囲又は図面（甲第１１号証）に記載された発明と同一でり、しかも、本件特許の出願に係る発明の発明者が当該他の特許出願に係る発明の発明者と同一ではなく、また本件特許の出願時の出願人が当該他の特許出願の出願人と同一でもないので、特許法第２９条の２の規定により、特許を受けることができないものであり、同法第１２３条第１項第２号に該当し、無効とすべきものである。 （４）無効理由４（サポート要件違反） 本件特許の訂正前の請求項４５～５１及び訂正後の請求項３～５、１３、１５～２２、２５～３１、３３～３７、４０、４５～５３、５５、５７～６９、７１、７２に係る発明についての特許は、特許法第３６条第６項第１号に規定する要件を満たしていない特許出願に対してされたものであるから、同法第１２３条第１項第２号に該当し、無効とすべきものである。 （５）無効理由５（実施可能要件違反） 本件特許の訂正前の請求項２２、２５～３０、４５～５１、７４及び訂正後の請求項３～５、１３、１５～２２、２５～３１、３３～３７、４０、４５～５３、５５、５７～６９、７１、７２に係る発明についての特許は、特許法第３６条第４項第１号に規定する要件を満たしていない特許出願に対してされたものであるから、同法第１２３条第１項第２号に該当し、無効とすべきものである。 （６）無効理由６（明確性要件違反） 本件特許の訂正前の請求項２９、４５～５１及び訂正後の請求項３～５、１３、１５～２２、２５～３１、３３～３７、４０、４５～５３、５５、５７～６９、７１、７２に係る発明についての特許は、特許法第３６条第６項第２号に規定する要件を満たしていない特許出願に対してされたものであるから、同法第１２３条第１項第２号に該当し、無効とすべきものである。 （７）証拠方法 甲第１号証：Biochimica et Biophysica Acta (2002) 1586:287-298 甲第２号証：動脈硬化 (1996) 23(10):567-571 甲第３号証：特開平５－２４９１０８号公報 甲第４号証：Journal of Biological Chemistry (1988) 263(13):6259-6267 甲第５号証：国際公開第０２／０７９３７７号 甲第６号証：免疫生物学 原書第５版 南江堂 ２００５年７月１５日発行、６１９～６２８頁 甲第７号証：特公平８－１６１０３号公報 甲第８号証：国際公開第２００９／０２６４０１号 甲第９号証：国際公開第２００８／１２４７４９号 甲第１０号証：特表平９－５０１２３３号公報 甲第１１号証：国際公開第２０１２／００２３４５号 甲第１２号証：特願２０１０－１４７７８４号の優先権証明書 甲第１３号証：Cancer Sci (2012) 103(5):921-925 甲第１４号証：実験報告書（Ｄｒ．クラウス ヒルツェル氏作成の実験報告書） 甲第１５号証：免疫学用語辞典第三版 最新医学社 １９９３年１２月１日発行、４７頁 甲第１６号証：免疫学ハンドブック オーム社 ２００５年１０月２５日発行、１１～１３頁 甲第１７号証：口頭審尋用資料 甲第１８号証：Blood (1989) 74(7):2418-2425 ２ 被請求人の主張及び証拠方法 被請求人は、本件審判請求は成り立たない旨主張し、証拠方法として、以下の書証を提出している。 ＜証拠方法＞ 乙第１号証：甲４（Journal of Biological Chemistry (1988) 263(13):6259-6267）の訳文 乙第２号証：口頭審尋に用いた資料 乙第３号証：生物学事典第４版 岩波書店、２０００年３月８日発行、５５１頁、１０４９頁 第６ 証拠の記載事項 各号証には、それぞれ以下の事項が記載されている。 １ 甲第１号証 ２００２年に発行された甲第１号証（以下、「甲１」という。）には、以下の事項が記載されている（翻訳は当審による。）。 （１）標題 「肝細胞がんに関連するデス－γ－カルボキシプロトロンビンにおけるγ－カルボキシグルタミン酸の含有量」（第２８７頁） （２）要約 「血清デス－γ－カルボキシプロトロンビン（ＤＣＰ）は、肝細胞がん（ＨＣＣ）の有益な診断用マーカーであるが、その正確な合成メカニズムと肝疾患における構造的な特徴は不明である。ＤＣＰはモノクローナル抗体ＭＵ－３により測定される。この研究の目的は、ＭＵ－３のエピトープを分析し、ＨＣＣと良性の肝疾患との間のＤＣＰの違いを明らかにすることである。」（第２８７頁第１～４行） （３）本文 （ア）「肝臓内で合成される血液凝固タンパク質であるプロトロンビンは、Ｇｌａドメインにおける位置６、７、１４、１６、１９、２０、２５、２６、２９と３２位の１０のＧｌｕ残基が、ビタミンＫ依存性γ－グルタミルカルボキシラーゼによってＧｌａへとγ－カルボキシル化された後、活性化型に変換される。肝細胞がんや肝硬変を含む肝疾患を有する患者では、プロトロンビンの合成が減少し、そのγ－カルボキシル化は減少するため、デス－γ－カルボキシプロトロンビン又はビタミンＫ欠乏状態で誘導されるタンパク質（ＰＩＶＫＡ－ＩＩ）が代わりに形成される。」（第２８７頁左欄第１行－右欄第８行） （イ）「ＭＵ－３抗体は、Motohataらによって作成されたＤＣＰに対するモノクローナル抗体である。医療研究で、ＭＵ－３抗体を使用する免疫試験はＨＣＣにおけるＤＣＰに対して高い感度と特異性を有すること、ＤＣＰ測定がＨＣＣの早期検出に有用であることが証明されている。」（第２８８頁左欄第３４－４０行） （ウ）「２．５ 直接結合ＥＬＩＳＡ ＭＵ－３抗体のデカルボキシル化タンパク質及び合成ペプチドに対する反応性は、９６ウェルマイクロタイタープレート（Ｎａｌｇｅ Ｎｕｎｃ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、 Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ、 ＮＹ、 ＵＳＡ）を使用したＥＬＩＳＡによって測定した。ＴＢＳ（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、 ０．１Ｍ ＮａＣｌ、 ｐＨ８．０）に溶解したデカルボキシル化タンパク質及び合成ペプチドを、室温で ５時間インキュベートすることによりマイクロタイタープレートのウェルにコートした。ＴＢＳで３回洗浄した後、ウェルを１％ウシ血清アルブミン－ＴＢＳ（ＢＳＡ－ＴＢＳ）で１時間ブロッキングした。ＴＢＳで洗浄した後、０．１％Ｔｗｅｅｎ２０－ＢＳＡ－ＴＢＳで様々な濃度に希釈したＭＵ－３抗体の溶液を各ウェルに添加した。室温で２時間インキュベートして洗浄した後、ＭＵ－３抗体と反応したウェルを西洋ワサビペルオキシダーゼで標識したウサギ抗マウスＩｇＧ抗体（ＩＣＮ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、 Ｉｒｖｉｎｅ、 ＣＡ、 ＵＳＡ）の溶液でさらに室温で１時間インキュベートした。さらなる洗浄の後、ウェルは１ｍｇ／ｍｌのｏ－フェニレンジアミンと０．１ｍＭクエン酸緩衝液に溶解した２ｍＭの過酸化水素とｐＨ５．５でインキュベートした。反応は２Ｎの硫酸を加えて停止させ、マイクロプレート光度計を使用して４９２ｎＭの吸光度を測定した。」（第２８９頁左欄第２５行ー右欄第７行） （エ）「２．６ サンドイッチＥＬＩＳＡ サンドイッチＥＬＩＳＡは、デカルボキシル化プロテインに代えてＭＵ－３抗体をウェルにコートした点、西洋ワサビペルオキシダーゼで標識したウサギ抗マウスＩｇＧ抗体に代えて、西洋ワサビペルオキシダーゼで標識した、親和性精製されたウサギ抗プロトロンビン抗体のＦａｂを使用した点を除き、直接結合ＥＬＩＳＡで使用した方法で実施した。３％ＢＳＡ－ＴＢＳで希釈したデカルボキシル化プロトロンビンは参照標準タンパク質として用いられた。」（第２８９頁右欄第８－１７行） （オ）「患者及び健常者の血清を１０倍量の０．２％ＢＳＡ－ＴＢＳに希釈して、炭酸バリウムを１０％で添加し、混合物を完全に撹拌した。遠心分離によって沈殿物を除去して、上清を得た。このバリウム吸収上清は３％ＢＳＡ－ＴＢＳで希釈して、プロトロンビン抗原濃度（全ＤＣＰという。）を抗プロトロンビン抗体でコートしたウェルを使用するサンドイッチＥＬＩＳＡで測定した。標準曲線は３％ＢＳＡ－ＴＢＳで希釈した既知濃度の精製プロトロンビンを使用して作成した。」（第２８９頁右欄第２３－３５行） （カ）「ＭＵ－３抗体と反応するＤＣＰの量は次のように測定した。第１に、４×１０８ビーズあたり１ｍｇのＭＵ－３抗体の濃度で、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ Ｍ４５０（Ｄｙｎａｌ、 Ｏｓｌｏ、 Ｎｏｒｖａｙ）を使用してＭＵ－３抗体でコートした固相を得た。ＭＵ－３抗体でコートされたビーズは、バリウム沈殿で得られた上清５０μｌあたりに２×１０７で加えられ、室温で２時間インキュベートした後、磁気分離でビーズを除去した。サンプルに添加されたＭＵ－３抗体の量は、５０μｇ（３１２ｐｍоｌ）であり、一方５０μｌの上清は、サンプル中の全てのプロトロンビンがＤＣＰに変換されているときであっても、０．５μｇ（７ｐｍоｌ）のＤＣＰを含有するだけであるから、全てのＤＣＰを吸収するのに十分であった。全ＤＣＰ測定する方法と同じ方法でビーズ除去後の溶液のＤＣＰ濃度を測定した。」（第２８９頁右欄第３６行－第２９０頁左欄第１０行） （キ）「ＭＵ－３抗体エピトープの決定 ペプチド－２のエピトープをさらに詳細に特定するために、より小さなペプチドの試験が必要であったが、ペプチド－２より小さなペプチドはウェルに結合させるのが困難であった。そのため、ＭＵ－３抗体エピトープは、ＭＵ－３抗体をコートしたウェルを使用するサンドイッチＥＬＩＳＡによって、デカルボキシル化プロトロンビンに対する競合ペプチドで試験した。それぞれのペプチドと競合した後、ＭＵ－３と反応したデカルボキシル化プロトロンビンの結合活性が、相対的な活性として表示される。ペプチド－５（残基１３－２７）とペプチド－６（残基１７－２７）は、ＭＵ－３抗体との反応を阻害し、ペプチド－２と同様の活性を示した。しかし、ペプチド－７（残基１７－２４）はＭＵ－３抗体とは弱く反応した（図４）。これらの結果から、ＭＵ－３抗体のエピトープは少なくとも残基１７－２７から構成されることが明らかとなる。」（第２９１頁右欄第１－１８行） （ク）「表３は、プロトロンビン、全ＤＣＰ、ＥＬＩＳＡで測定されるＤＣＰ濃度、ＭＵ－３抗体吸収後のＤＣＰ濃度と百分率を示している。ＨＣＣにおける全ＤＣＰ濃度は３９．５ｎｇ／ｍｌから４１３．６ｎｇ／ｍｌの範囲であり、良性の肝疾患における濃度は３５．１ｎｇ／ｍｌから３６８．６ｎｇ／ｍｌの範囲である。したがって、ＨＣＣと良性の肝疾患の間に差異はなかった。一方で、ＭＵ－３抗体と反応するＤＣＰの百分率は、ＨＣＣ患者において４１．０－７６．８％であるのに対して、良性の肝疾患の患者においては０～４２．１％であった。ＭＵ－３抗体は、Ｇｌａが４つより少ないＤＣＰと主に反応するため、ＨＣＣにおいて優先的に合成されるＤＣＰ変異体はＧｌａが４つより少なく、良性の肝疾患においては豊富に見られるＤＣＰ変異体はＧｌａが４つより多い。」（第２９３頁右欄第８－２３行） （４）表及び図面 （ア）図２ 「 ［図：0001416847000021.jpg］ 図２．Ｇｌａドメイン及びエピトープ決定に使用したペプチドのアミノ酸配列。アミノ酸を、一文字コードで示す。Ｇｌａ残基をγで示す。Ｋｄを、図３、４及び７を使用して計算する。」 （イ）表１ 「 ［図：0001416847000022.jpg］ （翻訳） 表１ ＭＵ－３抗体と脱カルボキシル化ヒトプロトロンビン、脱カルボキシル化Ｇｌａドメイン、およびペプチド－２の解離定数 ＜１行目＞脱カルボキシル化タンパク質 Ｋｄａ（ｎＭ） ＜１列目＞ 脱カルボキシル化プロトロンビン 脱カルボキシル化Ｇｌａドメイン（残基１－４１） ペプチド－２（残基１１－３０） ＜脚注＞ ａ解離定数（Ｋｄ）は、ＭＵ－３抗体濃度の逆数に対するＯＤ ４９２ｎｍの逆数に図３のデータをフィットさせて算出した。」 （ウ）図３ 「 ［図：0001416847000023.jpg］ （翻訳） 図３ 脱カルボキシル化プロトロンビン、脱カルボキシル化Ｇｌａドメイン、ペプチド－１、ペプチド－２、およびペプチド－３へのＭＵ－３抗体の反応性。脱カルボキシル化プロトロンビン（◯）、脱カルボキシル化Ｇｌａドメイン（×）、ペプチド－２（１１－３０：ＧＮＬＥＲＥＣＶＥＥＴＣＳＹＥＥＡＦＥＡ、△）、ペプチド－１（１－１６：ＡＮＴＦＬＥＥＶＲＫＧＮＬＥＲＥ、□）、またはペプチド－３（２３－４１：ＳＹＥＥＡＦＥＡＬＥＳＳＴＡＴＤＶＦＷ、●）で被覆したウェル内でＭＵ－３抗体をインキュベートし、反応したＭＵ－３抗体を直接結合ＥＬＩＳＡ法で測定した。」 （エ）表３ 「 ［図：0001416847000024.jpg］ 」 ２ 甲第４号証 １９８８年に発行された甲第４号証（以下、「甲４」という。）には、以下の事項が記載されている（翻訳は当審による。）。 （１）標題 「いくつかのヒトビタミンＫ依存性タンパク質における保存されたエピトープ」（第６２５９頁） （２）要約 （ア）「精製したヒトプロテインＣをマウスに注射することによって生産されたマウスモノクローナル抗体（Ｈ－１１と表す。）は、いくつかのヒトビタミンＫ依存性タンパク質と結合することがわかった。マイクロタイタープレート上に固相化された抗体での固相競合放射性標識免疫アッセイにより、１２５Ｉ標識したプロテインＣの抗体への結合は、１×１０－８から１×１０－６Ｍの範囲を超えて増量するプロテインＣ、プロトロンビンと第１０因子と第７因子によって阻害された。」（第６２５９頁左欄第１～９行） （イ）「プロトロンビンのキモトリプシン消化、及びプロトロンビンのＮ末端１－４４残基を示すペプチドのＱＡＥ－セファデックス上での分離は、モノクローナル抗体による抗原認識サイトが、高度に保存されたγ－カルボキシグルタミン酸保存ドメインであることを特定した。Ｈ－１１抗体の正確な抗原決定基の位置は、合成ペプチドを使用して立証された。Ｈ－１１抗体は、第ＶＩＩ因子の１－１２残基と、プロテインＣの１－２２残基に対応する合成ペプチドに特異的に結合した。ウシとヒトのビタミンＫ依存性タンパク質の配列比較は、Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ｇｌｕ－Ｘａａ－Ａｒｇ／Ｌｙｓの配列が抗体の結合に必要とされることを示唆している。」（第６２５９頁左欄第２７－４１行） （３）本文 （ア）「ハイブリドーマＨ－１１の調製－ＢＡＬＢ／ｃマウスを、完全フロイントアジュバント中の５０μｇのプロテインＣで複数部位で皮下的に免疫した。完全フロイントアジュバント中の５０μｇのブースター注射を、４、８、及び１２週に行った。最後の注射の６週後、血清力価を、プロテインＣ抗体の存在について決定し、最も高い抗プロテインＣ力価を有するマウスは、生理食塩水中の１００μｇのプロテインＣを静脈内的に受けた。４日後、マウスを、クロロホルムで殺傷し、脾臓を摘出した。２匹のマウスからの脾臓細胞（３×１０８細胞）を、３×１０７のミエローマ細胞と混合し、遠心分離した。細胞ペレットを、３ｍｌの５０％ポリエチレングリコール１０００に注意深く懸濁し、３分間穏やかに混合した。次いで、懸濁物を、１０００ｒｐｍで３分間遠心分離し、上清を廃棄し、ペレットを、１５ｍｌの胎仔血清に再懸濁した。容量を、培養培地で７２ｍｌまで上げ、０．１ｍｌの細胞混合物を、９６ウェルマイクロタイタープレートの各ウェルにピペッティングした。次の日、各ウェルに、２０％胎仔血清及びヒポキサンチン／アミノプテリン／チミジンを含む０．１ｍｌの培養培地を加えた。融合の２日後、胸腺細胞を、フィーダー細胞として供するために添加した。抗プロテインＣ抗体についてのハイブリドーマ上清のスクリーニングを、ハイブリドーマが目視できるときに実施した。ハイブリドーマ産生抗プロテインＣ抗体を、限界希釈により３回クローニングした。 ハイブリドーマスクリーニングアッセイ－抗プロテインＣ抗体についてのハイブリドーマのスクリーニングを、プロテインＣコートマイクロタイタープレートを用いた固相酵素免疫測定法により実施した。」（第６２６０頁右欄第９－３３行） （イ）「固相免疫アッセイ－ビタミンＫ依存性タンパク質に対するＨ－１１抗体の結合は、プラスチック９６ウェルマイクロタイタープレート（Ｄｙｎａｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、 Ｉｎｃ．、Ｒｅｍｏｖａｗｅｌｌｓ）で、プレート表面上に直接吸着させるか、精製したウサギ抗マウス免疫グロブリンで間接的に吸着したＨ－１１抗体を使用して実施した。プレートは、ｐＨ９．０の５０ｍＭ炭酸ナトリウム緩衝液中のＨ－１１抗体か精製したウサギ抗マウス免疫グロブリンで一晩コートされた。続いてプレートはＴＢＳ（１０ｍＭＴｒｉｓ、０．１５ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ７．４）で洗浄した。非特異的タンパク質の結合サイトは、ＴＢＳ中１％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ／ＴＢＳ）を添加して室温で１－２時間ブロックした。プレートはまた－２０℃でＢＳＡ／ＴＢＳ中で保存した。ウサギ抗マウス免疫グロブリンでコートしたプレートはＨ－１１抗体で室温で２時間インキュベートしてコートし、放射性標識したプロテインＣを添加する前にウェルをＴＢＳで３回洗浄した。プロテインＣは以前記述されたようにクロラミンＴを使用して放射性標識した。２０μＣｉ／μｇタンパク質の特異的活性はこの手順で通常に得られる。放射性標識した抗原（典型的には５０００ｃｐｍ）は、ＴＢＳ中の０．５％ＢＳＡでウェル中で２－４時間室温でインキュベートした。その後ＴＢＳで３回洗浄し、ウェルに関連する放射性活性は、ベックマン バイオガンマ カウンターで決定した。 免疫染色－タンパク質は、Ｌａｅｍｍｌｉによって記述されたように、５－１５％ポリアクリルアミドゲル上で電気泳動され、Ｔｏｗｂｉｎらによって記述されたように、電気的にニトロセルロースに転写された。転写に続き、ニトロセルロースはＢＳＡ／ＴＢＳ中で１－２時間室温でインキュベートした。それからニトロセルロースブロットはＴＢＳ中の０．２％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ中の５μｇ／ｍｌの抗体溶液中に２時間室温で置いた。ニトロセルロースブロットは氷冷した０．５％（ｖ／ｖ）Ｎｏｎｉｄｅｔ Ｐ－４０界面活性剤を含有するＴＢＳで３回、全部で３０分間で洗浄し、１：２０００で０．２％ＢＳＡ／ＴＢＳ中に希釈した、西洋ワサビペルオキシダーゼで標識したヤギ抗マウス免疫グロブリンの溶液中に置いた。シェーカーで１時間室温で第２のインキュベーションを行った後、ブロットは再びＮｏｎｉｄｅｔ Ｐ－４０を含むＴＢＳで３回洗浄した。結合した抗体の位置は、０．８ｍＭо－ジアニシジンジハイドロクロライドと０．００１％過酸化水素又は０．６ｍｇ／ｍｌ ４－クロロ－１－ナフトールと０．１％過酸化水素を含むＴＢＳ中でブロットをインキュベートすることで可視化した。反応は０．２％（ｗ／ｖ）アジ化ナトリウムを含むＴＢＳ中でブロットを洗浄し、フィルター紙のいくつかのシートの間でブロットを乾燥することにより停止した。免疫染色は、ドット又はスロット型を用いてニトロセルロース上に直接タンパク質をブロットすることにより実施された。５０μｌ中２～０．０５μｇの全タンパク質量を含むそれぞれのタンパク質サンプルのいくつかの希釈物は、それぞれのウェルにブロットされ、上述のように免疫検出された。ブロットは島津ＣＳ－９３０スキャナーを使用した濃度測定により分析された。」（第６２６０頁右欄第４９行－第６２６１頁左欄第１７行） （ウ）「プロトロンビンはＢａｊａｊらによって記述された方法で脱カルボキシル化された。」（第６２６１頁左欄第４６－４７行） （エ）「図２に示されるデータは、抗体Ｈ－１１のニトロセルロースに固定したウシプロテインＣ、ウシプロトロンビン及びウシ第ＩＸ因子への結合を示し、いくつかの他のウシタンパク質並びに化学的及び酵素的に改変したプロトロンビン誘導体への結合についてのデータを、表Ｉにまとめる。陽性の反応性は、抗体Ｈ－１１が、図２に示されるデータに例示されるように用量依存性様式で固定した抗原と反応したことを示す。 プロトロンビン上の抗原性部位は、ＳＤＳによる変性、メルカプトエタノールを用いたジスルフィドの還元又は還元後のカルボキシメチル化、シトラコン酸でのリジン残基の標識、ＣＮＢｒでのメチオニン残基での切断、及びＧｌａ残基の熱脱カルボキシル化等の種々の処理の後に反応性であった。」（第６２６２頁左欄第５～１９行） （オ）「脱カルボキシル化タンパク質からのデータは、また、グルタミン酸残基のγ－カルボキシル化が抗体認識に必要とされないことを示す。」（第６２６２頁右欄第１４～１６行） （カ）「図３に示したデータは、抗体Ｈ－１１が、プロトロンビンと第ＶＩＩ因子で見出された決定基と同様に、プロテインＣの軽鎖、第Ｘ因子の決定基に結合することを示す。」（第６２６２頁右欄第２３－２６行） （キ）「抗体Ｈ－１１により認識される決定因子をタンパク質構造のより小さな断片にさらに局在化させる試みにおいて、プロトロンビンを、キモトリプシンで消化し、消化産物を、ＳＤＳ－ＰＡＧＥで分離し、ニトロセルロースに電気泳動転写し、その後、抗体Ｈ－１１を用いてブロッティングした。このアプローチは、全てのビタミンＫ依存性タンパク質において保存され（５３－５５）、ヒトプロトロンビンのＴｙｒ４４に位置する（４５）高度に感受性のキモトリプシン消化部位の存在に基づく。プロトロンビンにおけるこの部位での切断により、生成物として、Ｇｌａドメイン及びデス－１－４４－プロトロンビン（４５）が得られる。図４Ａに示すデータは、時間の関数として、ヒトプロトロンビンのキモトリプシン消化を示す。上パネルは、種々のインキュベーション時間での消化混合物のＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルのクマシーブルー染色を示し、より小さな分子量種であるデス－１－４４－プロトロンビンへのプロトロンビンの切断が明らかである。切断されたＧｌａドメイン断片は、この電気泳動系では分離されず、観察されない。同じセットの試料のニトロセルロースへの電気泳動転写及び抗体Ｈ－１１でのブロッティングは、インタクトなプロトロンビンのみが抗体に対する抗原性部位を保持し、デス－１－４４－プロトロンビンは保持しないことを示す（図４Ａ、下パネル）。」（第６２６３頁左欄第６行～右欄第１０行） （ク）「直接的な証拠とＨ－１１抗体の抗原決定基のＧｌａドメインのより小さな領域へのさらなる特定は、ビタミンＫ依存性タンパク質の既知の配列を含む合成ペプチドによって得られた。第ＶＩＩ因子の１－１２残基を含むペプチド、第ＶＩＩ因子の１３－２９残基を含むペプチド、プロテインＣ軽鎖の１―２２残基を示すペプチドが合成された。Ｇｌａドメイン配列におけるペプチドの位置は図５に示される。図５に示される配列は、ヒトプロテインＣ、プロトロンビン、そしてＸ、ＶＩＩ、ＩＸ因子の配列である。アスタリスクは抗体Ｈ－１１が結合するその４つのタンパク質で同一である残基を示す。精製した合成ペプチドは９６ウェルマイクロタイタープレートの底に固定化した。Ｈ－１１抗体のペプチドへの結合は、西洋ワサビペルオキシダーゼで標識したウサギ抗マウス免疫グロブリンと発色基質を使用して決定された。図６に示すように、固定化されたプロトロンビン、第ＶＩＩ因子－（１－１２）－ペプチド、そして、プロテインＣ－（１－２２）－ペプチドにＨ－１１抗体が結合するが、第ＶＩＩ因子－（１３－２９）－ペプチドには結合しなかった。このアッセイの対照としては、他の任意の配列のペプチドや、ビタミンＫ依存性タンパク質でないタンパク質に対する他のモノクローナル抗体をそれぞれのペプチドとインキュベートしたものを含んだ。これらの対照ウェルのいずれも、同一のインキュベーション、アッセイ条件下で、発色は見られなかった。これらのデータは、Ｈ－１１抗体が第ＶＩＩ因子－（１－１２）－ペプチドとプロテインＣ－（１－２２）－ペプチドの両方に特異的に結合することから、Ｈ－１１抗体はＧｌａドメインのＮ末端領域に存在する残基に結合することを裏付けている。このデータはまた、ペプチドはグルタミン酸で合成されているから、γ－カルボキシグルタミン酸は、直接的に抗体結合に必要がないという、脱カルボキシル化されたプロトロンビンに関する見解を確認するものである。」（第６２６３頁右欄第２４行～第６２６４頁左欄第９行） （ケ）「本報告のデータは、抗体Ｈ－１１が、ヒトおよびウシのプロテインＣ、プロトロンビン、ならびに第Ｘ因子および第ＶＩＩ因子のＧｌａドメインのアミノ末端に位置する進化的に保存された抗原決定基を認識することを示す。」（第６２６４頁右欄第２７－３０行） （コ）「タンパク質と合成ペプチド化学の組み合わせにより、我々はＨ－１１抗体の抗原決定基をＧｌａドメインのＮ末端１２アミノ酸のペプチドにマッピングした。この領域におけるヒト及びウシのビタミンＫ依存性タンパク質の比較を図８に示す。表１に要約した情報と併せて、そのような既知のタンパク質の配列の比較は、Ｈ－１１抗体の結合場所のアミノ酸のさらなる特定を可能にする。図８に示すように、Ｈ－１１に結合するそれらのタンパク質で共有される最小のコンセンサス配列は、ＦＬＥＥである。天然のタンパク質では、グルタミン酸はビタミンＫ依存性カルボキシラーゼによってカルボキシル化される場所である。シトラコニル化ヒトプロトロンビンのトリプシンによる切断は、抗原部位がＡｒｇも含む可能性を示している。各タンパク質は、ＦＬＥＥのカルボキシル末端から２残基の位置に、塩基性アミノ酸（ＡｒｇまたはＬｙｓのいずれか）を有している。これは抗原決定基内の残基の最小配列がＦＬＥＥＸＲ／Ｋである可能性を示唆している。抗体Ｈ－１１に結合しないタンパク質、特にウシおよびヒトの第ＩＸ因子およびプロテインＳは、保存されたトリペプチドＬＥＥのアミノ末端にフェニルアラニン残基を含まず、この残基が抗体Ｈ－１１結合に必要であることを示唆する。」（第６２６４頁右欄第４５行－第６２６５頁左欄第２行） （４）表及び図面 （ア）図２ 「 ［図：0001416847000025.jpg］ （翻訳） 図２ 固定化されたウシビタミンＫ依存性タンパク質への抗体Ｈ－１１の結合。スロットブロット装置を使用して、漸減量の精製ウシビタミンＫ依存性タンパク質をニトロセルロースに固定化した。ニトロセルロースシートを抗体Ｈ－１１（５μｇ／ｍｌ）とインキュベートした後、西洋ワサビペルオキシダーゼとコンジュゲートしたヤギ抗マウス免疫グロブリンと発色基質を用いて抗原抗体複合体を可視化した。ニトロセルロースの着色領域の密度をＳｈｉｍａｚｕ ＣＳ－９３０デンシトメーターを用いて定量した。デンシトメータートレースの相対面積を、各スロット中にブロットされたタンパク質の総質量に対してプロットする。プロトロンビン（●）、プロテインＣ（■）、第ＩＸ因子（〇）の代表的なデータを示す。同様に得られたデータを表Ｉに要約する。 」 （イ）表１ 「 ［図：0001416847000026.jpg］ 」 （ウ）図３ 「 ［図：0001416847000027.jpg］ （翻訳） 図３ 抗体Ｈ－１１によるヒトビタミンＫ依存性タンパク質のイムノブロット。タンパク質を２％のＳＤＳの存在下で２％β－メルカプトエタノールで還元し、１００℃で加熱した。Ａ：タンパク質試料のクマシーブルー染色（８μｇ）；Ｂ：５～１５％のＳＤＳポリアクリルアミドゲルでの電気泳動、ニトロセルロースへの電気泳動転写、および抗体Ｈ－１１によるブロッティング後のタンパク質試料（６μｇ）のイムノブロット。抗原－抗体複合体の検出は、西洋ワサビペルオキシダーゼとコンジュゲートしたヤギ抗マウス免疫グロブリン二次抗体ならびに基質としてのｏ－ジアニシジンおよび過酸化水素を用いて行った。 」 （エ） 図４（Ａのみ） 「 ［図：0001416847000028.jpg］ 図４．キモトリプシン消化プロトロンビンの抗体Ｈ－１１での免疫ブロット及びＱＡＥ－セファロース上でのプロトロンビンＧｌａドメインの単離。Ａ、キモトリプシンによるプロトロンビン消化の時間経過。示された時間において、試料を取り出し、２％ ＳＤＳに配置し、１００℃で２分間加熱した。上パネル、１０％ ＳＤＳ－ポリアクリルアミドゲル上での電気泳動後の試料（６μｇ）のクマシーブルー染色；下パネル、ＳＤＳ－ＰＡＧＥでの電気泳動及びニトロセルロースへの電気泳動転写後の同じ試料（３μｇ）の抗体Ｈ－１１での免疫ブロット。上パネルについての分子量標準は、ホスホリラーゼｂ（９７、０００）、ウシ血清アルブミン（６８、０００）、及びオボアルブミン（４３、０００）である。 」 （オ）図５ 「 ［図：0001416847000029.jpg］ （翻訳） 図５ ヒトビタミンＫ依存性タンパク質のＧｌａドメインの配列の比較。配列は、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｄａｔａ Ｂａｓｅに掲載されている。グルタミン酸残基はＧｌｕ（Ｅ）として示され、天然に存在するアミノ酸であるＧｌａではない。番号はプロテインＣに対応する。アスタリスクは、プロテインＣ、プロトロンビン、ならびに第Ｘ因子および第ＶＩＩ因子において同一である残基を示す。プロテインＣ配列の下線および第ＶＩＩ因子配列の上線および下線は、合成されたペプチドの位置を示す。 」 （カ）図６ 「 ［図：0001416847000030.jpg］ （翻訳） 図６ 抗体Ｈ－１１の合成ペプチドへの結合。様々な量のペプチドを、炭酸塩緩衝液中でマイクロタイタープレートのウェル上にコーティングした。抗体Ｈ－１１（ＢＳＡ／ＴＢＳ中２０μｇ／ｍｌ）をウェル中でインキュベートし、ウェルをＴＢＳで洗浄し、抗体－ペプチド複合体の存在を、西洋ワサビペルオキシダーゼとコンジュゲートしたヤギ抗マウス免疫グロブリンおよび基質としてｏ－フェニレンジアミンと過酸化水素を用いて決定した。４ＮのＨ２ＳＯ４で反応を停止させた後、酵素結合免疫吸着アッセイプレートリーダーを用いて４９０ｎｍでの吸光度測定により発色を定量した。ヒトプロトロンビン（ＩＩ）および第ＶＩＩ因子（ＦＶＩＩ）の残基１～１２および１３～２９、ならびにプロテインＣ（ＰＣ）の残基１～２２に相当するペプチドへのＨ－１１結合のデータを示す。 」 （キ）図８ 「 ［図：0001416847000031.jpg］ 図８．ビタミンＫ依存性タンパク質のアミノ末端配列のアライメント。ヒト及びウシビタミンＫ依存性タンパク質についてのアミノ末端配列を、これらが、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｄａｔａ Ｂａｓｅに現れるとおりに列挙する。太字の残基は、抗体Ｈ－１１の結合に必要とされ得るこれらのアミノ酸を示す。 」 ３ 甲第５号証 甲第５号証（以下、「甲５」という。）には、以下の事項が記載されている（翻訳は当審による。）。 （１）特許請求の範囲 （ア）「請求項１６． 抗体が、 （ａ）１０－７Ｍから１０－８Ｍの解離定数（ＫＤ）； （ｂ）１０－８Ｍから１０－９Ｍの解離定数（ＫＤ）； （ｃ）１０－９Ｍから１０－１０Ｍの解離定数（ＫＤ）； （ｄ）１０－１０Ｍから１０－１１Ｍの解離定数（ＫＤ）； （ｅ）１０－１１Ｍから１０－１２Ｍの解離定数（ＫＤ）；及び （ｆ）１０－１２Ｍから１０－１３Ｍの解離定数（ＫＤ） からなる群から選択される解離定数（ＫＤ）を有する、請求項３の抗体。」（請求項１６） （イ）「請求項１７． 検出可能な標識をコンジュゲートされた抗体である、請求項３の抗体。」（請求項１７） （ウ）「請求項１８． 検出可能な標識が放射性標識である、請求項３の抗体。」（請求項１８） （エ）「請求項２０． 検出可能な標識が酵素、蛍光標識、発光標識又は生物発光標識である、請求項１７の抗体。」（請求項１９） （オ）「請求項４０． 薬学的に許容される担体を含む請求項２の抗体。」（請求項２０） ４ 甲第６号証 甲第６号証（以下、「甲６」という。）には、以下の事項が記載されている。 （１）「Ａ－６ ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）および競合阻害反応 ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）および酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）はいずれも、抗体もしくは抗原への直接結合を測定する目的で使われる手法であり、原理は同じであるが特異的結合を測定する手段が異なる。ラジオイムノアッセイは血液や組織液中のホルモンを測定する際に使われる。 一方、ＥＬＩＳＡはＨＩＶ感染の有無を調べるなどのウイルス性疾患を検出する際に頻用される。これらの方法を施行するには、検出結果を定量的に評価するために既知の抗原と抗体のいずれか、または両者がよく精製されている必要がある。ここでは、より使用頻度の高い、精製抗体を用いた場合の例について解説するが、精製抗原を用いた場合でも原理は同じである。ラジオイムノアッセイでは、精製された抗原または抗体が放射性同位元素（通常１２５Ｉが使われる）で標識されている。ＥＬＩＳＡでは、酵素が抗体に化学的に結合されている。標識されていない状態の抗体または抗原は、マルチウェルプラスチックプレートにある孔のような特定量の蛋白を吸着する固相支持体に付着させて使用する。非特異的吸着が阻止された状態で、標識抗体は標識していない抗原に結合し、結合しなかったものは洗浄して除く。ラジオイムノアッセイでは、残った放射活性により、ＥＬＩＳＡでは、無色の基質が有色の反応産物に変換されることにより抗体の結合を測定する（図Ａ．６）。色の変化は測定器で読み取られ、そのデータは容易に得られる。またＥＬＩＳＡは被曝の危険がない。これらの理由からＥＬＩＳＡは多くの直接結合検査法として好んで使われる。未標識の抗体が未標識抗原を接着させたプレートに結合するのを検出する目的には標識された抗免疫グロブリン抗体を用いることもできる（Ａ－１０節参照）。この場合、標識された抗免疫グロブリン抗体はいわゆる二次応答に用いられる。このような二次応答を行う場合には、検出感度が増強される。なぜならば、少なくとも２分子以上の標識された抗免疫グロブリン抗体が個々の未標識抗体に結合することができるからである。ラジオイムノアッセイおよびＥＬＩＳＡでは未標識抗体をプレー卜に結合させ、そこへ標識抗原を加えることでも反応を検出することが可能である。 サイトカインのような分泌蛋白を検出する際には、ＥＬＩＳＡを改良した捕獲あるいはサンドイッチＥＬＩＳＡ（より一般的には抗原捕獲反応と呼ぶ）が使われる。これらの検出系では抗原ではなく抗原特異的抗体を先にプレートに結合させる。この場合、高い特異性が期待できるため、たとえ試料の中にごく少量の抗原しか存在していなくても高感度に検出が可能である。特異的に捕獲された抗原を検出するのには、当該抗原の他のエピトープを認識する抗体を標識して用いればよい。 これらの検査法は次の２点において厳密に行わなければならない。第一に、検査する試料（抗原と抗体）の少なくとも一つはよく精製され検出可能なかたちになっていないと量的情報は得られない。第二に、結合した標識物質と結合していない標識物質がきちんと分離できる手段が必要で、そうすれば特異的結合の割合が算出できる。分離するためには、標識していない相手の物質をプラスチックに付着させることが多い。結合しなかった標識分子は洗浄して除けば、結果として結合した標識分子のみがプレート上に残る。図Ａ．６にあるように、標識していない抗原はプラスチック孔に付着し、標識した抗体は抗原に結合して孔に残る。非結合物から結合物を分離するこの方法は、抗体を用いた検査法の基本的手段である。 ラジオイムノアッセイおよびＥＬＩＳＡでは、成分が未知の試料における抗原または抗体の量を直接測定はできない。両者は精製した標識抗体か抗原の結合に依存するからである。しかし、この問題は解決できないわけではない。その一つが、図Ａ．７に示したような競合阻害試験である。この方法では、未知の試料中のある抗原の存在や量は、プラスチック孔に付着している抗体に既知の標識標準抗原が結合するのを阻止する度合いによって決定される。既知の標識していない標準抗原の量を変えて加えて作製した標準曲線と比較して、未知試料中の抗原量を知るのである。競合結合試験も未知の試料中の抗体を測定するのに使われる。その際、プラスチック孔に抗原を付着させ、そこに標識した特異抗体が結合するのを試料が阻止する割合によって測定を行う。」（第６１９頁第２０行－第６２０頁第４６行） ５ 甲第７号証 甲第７号証（以下、「甲７」という。）には、以下の事項が記載されている。 （１）発明の名称 （ア）「化学発光性アクリジニウム塩」 （２）明細書 （ア）「カルボキシ置換アクリジニウム塩は、免疫検定の標識物として使用されている」（第６頁右欄５～７行） ６ 甲第８号証 甲第８号証（以下、「甲８」という。）には、以下の事項が記載されている。 （１）明細書 （ア）「塩基性溶液は、本明細書で以前に記載したのと同じ塩基性溶液であり、即ち、少なくとも１つの塩基を含み、１０以上のｐＨ、好ましくは１２以上のｐＨを有する溶液である。」（第２８頁１７～１９行） （２）特許請求の範囲 （ア）「ａ）アクリジニウム－９－カルボキサミド－抗体コンジュゲートを試験試料に加えるステップ、ここで、該抗体は、鉄メタロプロテインに特異的に結合する； ｂ）アクリジニウム－９－カルボキサミド－抗体コンジュゲートを加える前又は後に、過酸化水素の源を生成し、又は試験試料に提供するステップ； ｃ）塩基性溶液を試験試料に加え、光シグナルを生成するステップ；及び ｄ）生成される光を定量し、鉄メタロプロテインを検出するステップを含む、試験試料中の鉄メタロプロテインを検出する方法。」（請求項１） （イ）「アクリジニウム－９－カルボキサミド－抗体コンジュゲートが、式Ｉ： ［図：0001416847000032.jpg］ ［式中、Ｒ１及びＲ２は各々独立に、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール又はアラルキル、スルホアルキル、カルボキシアルキル、及びオキソアルキルからなる群から選択され、Ｒ３からＲ１５は各々独立に、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール又はアラルキル、アミノ、アミド、アシル、アルコキシル、ヒドロキシル、カルボキシル、ハロゲン、ハロゲン化物、ニトロ、シアノ、スルホ、スルホアルキル、カルボキシアルキル、及びオキソアルキルからなる群から選択され、場合によって、存在する場合は、 ［図：0001416847000033.jpg］ は陰イオンである］ による構造を有するアクリジニウム－９－カルボキサミドから調製される、請求項１～３いずれか記載の方法。」（請求項５） （ウ）「ａ．少なくとも１つのアクリジニウム－９－カルボキサミド； ｂ．鉄メタロプロテインに特異的に結合する少なくとも１つの抗体； ｃ．少なくとも１つの塩基性溶液； ｄ．過酸化水素の源；及び ｅ．試験試料中の鉄メタロプロテインを検出するための指示書 を含む、試験試料中の鉄メタロプロテインの検出に使用するためのキット。」（請求項１０） （エ）「過酸化水素の源が、過酸化水素を含むバッファー又は溶液である、請求項１０又は１１記載のキット。」（請求項１２） （オ）「過酸化水素をその場所で生成するための手段が、過酸化水素生成酵素である、請求項１３、１４又は１５記載のキット。」（請求項１６） （カ）「過酸化水素生成酵素が、（Ｒ）－６－ヒドロキシニコチンオキシダーゼ、（Ｓ）－２－ヒドロキシ酸オキシダーゼ、（Ｓ）－６－ヒドロキシニコチンオキシダーゼ、３－ａｃｉ－ニトロプロパン酸オキシダーゼ、３－ヒドロキシアントラニル酸オキシダーゼ、４－ヒドロキシマンデル酸オキシダーゼ、６－ヒドロキシニコチン酸デヒドロゲナーゼ、アブシジン酸－アルデヒドオキシダーゼ、アシル－ＣｏＡオキシダーゼ、アルコールオキシダーゼ、アルデヒドオキシダーゼ、アミンオキシダーゼ、アミンオキシダーゼ（銅含有）、アミンオキシダーゼ（フラビン含有）、アリール－アルコールオキシダーゼ、アリール－アルデヒドオキシダーゼ、カテコールオキシダーゼ、コレステロールオキシダーゼ、コリンオキシダーゼ、コルンバミンオキシダーゼ、シクロヘキシルアミンオキシダーゼ、チトクロームｃオキシダーゼ、Ｄ－アミノ酸オキシダーゼ、Ｄ－アラビノノ－１、４－ラクトンオキシダーゼ、Ｄ－アラビノノ－１、４－ラクトンオキシダーゼ、Ｄ－アスパラギン酸オキシダーゼ、Ｄ－グルタミン酸オキシダーゼ、Ｄ－グルタミン酸（Ｄ－アスパラギン酸）オキシダーゼ、ジヒドロベンゾフェナントリジンオキシダーゼ、ジヒドロオロテートオキシダーゼ、ジヒドロウラシルオキシダーゼ、ジメチルグリシンオキシダーゼ、Ｄ－マンニトールオキシダーゼ、エクジソンオキシダーゼ、エタノールアミンオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、グルタチオンオキシダーゼ、グリセロール－３－リン酸オキシダーゼ、グリシンオキシダーゼ、グリオキシル酸オキシダーゼ、ヘキソースオキシダーゼ、ヒドロキシフィタン酸オキシダーゼ、インドール－３－アセトアルデヒドオキシダーゼ、乳酸オキシダーゼ、Ｌ－アミノ酸オキシダーゼ、Ｌ－アスパラギン酸オキシダーゼ、Ｌ－ガラクトノラクトンオキシダーゼ、Ｌ－グルタミン酸オキシダーゼ、Ｌ－グロノラクトンオキシダーゼ、Ｌ－リジン６－オキシダーゼ、Ｌ－リジンオキシダーゼ、長鎖アルコールオキシダーゼ、Ｌ－ピペコリン酸オキシダーゼ、Ｌ－ソルボースオキシダーゼ、リンゴ酸オキシダーゼ、メタンチオールオキシダーゼ、モノアミノ酸オキシダーゼ、Ｎ６－メチルリジンオキシダーゼ、Ｎ－アシルヘキソサミンオキシダーゼ、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈオキシダーゼ、ニトロアルカンオキシダーゼ、Ｎ－メチル－Ｌ－アミノ酸オキシダーゼ、ヌクレオシドオキシダーゼ、シュウ酸オキシダーゼ、ポリアミンオキシダーゼ、ポリフェノールオキシダーゼ、ポリビニルアルコールオキシダーゼ、プレニルシステインオキシダーゼ、タンパク質－リジン６－オキシダーゼ、プトレシンオキシダーゼ、ピラノースオキシダーゼ、ピリドキサール５’－リン酸合成酵素、ピリドキシン４－オキシダーゼ、ピロロキノリンキノン合成酵素、ピルビン酸オキシダーゼ、ピルビン酸オキシダーゼ（ＣｏＡ－アセチル化）、レチクリンオキシダーゼ、レチナールオキシダーゼ、リファマイシン－Ｂオキシダーゼ、サルコシンオキシダーゼ、２級アルコールオキシダーゼ、亜硫酸オキシダーゼ、スーパーオキシドジスムターゼ、スーパーオキシドレダクターゼ、テトラヒドロベルベリンオキシダーゼ、チアミンオキシダーゼ、トリプトファンα、β－オキシダーゼ、尿酸オキシダーゼ（ウリカーゼ、尿酸オキシダーゼ）、バニリルアルコールオキシダーゼ、キサンチンオキシダーゼ、キシリトールオキシダーゼ、及びこれらの組合せからなる群から選択される、請求項１６記載のキット。」（請求項１７） ７ 甲第９号証 甲第９号証（以下、「甲９」という。）には、以下の事項が記載されている。 （１）特許請求の範囲 （ア）「ａ）試験試料を処理して、試験試料中のタンパク質から分析物を分離するステップ； ｂ）アクリジニウム－９－カルボキシレートアリールエステルを処理した試験試料に加えるステップ、ここで、該アクリジニウム－９－カルボキシレートアリールエステルが、式： ［図：0001416847000034.jpg］ ［式中、Ｒ１は、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル、アリール、スルホアルキル又はカルボキシアルキルであり、Ｒ２からＲ８は各々独立に、水素、アルキル、アミノ、アルコキシ、ヒドロキシル、カルボキシル、ハロゲン化物、ニトロ、シアノ、－ＳＯ３、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ、－Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ及び－ＳＣＮからなる群から選択され、Ｒは、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールアルキル、アリール、スルホアルキル又はカルボキシアルキルであり、Ｘは、陰イオンである］を有する； ｃ）塩基性溶液を処理した試験試料に加え、光シグナルを生成するステップ；及び ｄ）該分析物についての標準曲線との比較により、試験試料中で生成される光の量を関連づけることにより、試験試料中の分析物の量を定量するステップを含む、試験試料中の分析物を検出する方法。」（請求項１） ８ 甲第１０号証 甲第１０号証（以下、「甲１０」という。）には、以下の事項が記載されている。 （１）明細書 （ア）「本発明は、検査試料中のテストステロンを検出し定量するためのアッセイも提供する。」（第３３頁１４～１５行） （イ）「抗体に結合したトレーサーの量は、検査試料中に存在するテストステロンの量に反比例して変化する。」（第５２頁１４～１５行） （２）特許請求の範囲 （ア）「検査試料中の対象分析物を定量するための競合イムノアッセイ方法であって、（ａ）前記検査試料を、下記の式： ［図：0001416847000035.jpg］ ［式中、Ｑは検出可能部分であり、Ｗは接続部分であり、ｎは１～１０である］で示される１位が標識された試薬と、前記１位が標識された試薬及び前記対象分析物に結合することができる抗体とに接触させて反応溶液を形成し、（ｂ）前記抗体に結合した前記反応溶液中の前記１位が標識された試薬の量を前記検査試料中の前記対象分析物の量の関数として測定するステップを含む前記競合イムノアッセイ方法。」（請求項２９） ９ 甲第１１号証 ２０１２年１月５日に公開された甲第１１号証（以下、「甲１１」という。）には、以下の事項が記載されている。甲１１は、２０１１年６月２８日を国際出願日とする国際出願ＰＣＴ／ＪＰ２０１１／０６４７２４の国際公開公報であり、その優先権主張の基礎となる出願は、特願２０１０－１４７７８４号（２０１０年６月２９日出願）である。 （１）発明の名称 「ＰＩＶＫＡ－ＩＩの測定方法、ＰＩＶＫＡ－ＩＩの測定試薬及び抗体」 （２）明細書 （ア）「ＰＩＶＫＡ－ＩＩ（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ Ｖｉｔａｍｉｎ Ｋ Ａｂｓｅｎｃｅ ｏｒ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ－ＩＩ）は、ＡＦＰ（α－フェトプロテイン）と並んで肝がんを診断するマーカーとして広く臨床検査室で測定されている。ＰＩＶＫＡ－ＩＩはビタミンＫ依存性血漿タンパク質の一つであるプロトロンビンの前駆物質である。プロトロンビン（血液凝固第ＩＩ因子）は、分子量７１、６００のタンパクで、フラグメント１、２及びトロンビンの３領域から構成されており、アミノ酸配列も明らかにされている（非特許文献１）。フラグメント１は、Ｎ末端から４１個のアミノ酸によって構成されるＧｌａドメインを含む１５６個のアミノ酸からなる。このＧｌａドメイン中の１０個のγ－カルボキシグルタミン酸（Ｇｌａ）残基が正常に合成されたものが正常プロトロンビン、正常に合成されず、その全てあるいは一部がグルタミン酸（Ｇｌｕ）残基のままのものがＰＩＶＫＡ－ＩＩである。従って、ＰＩＶＫＡ－ＩＩとは正常プロトロンビンのγ－カルボキシグルタミン酸残基についての脱カルボキシル化体であるということもでき、異常プロトロンビンと呼ばれることもある。１０個のグルタミン酸残基中いくつがγ－カルボキシル化を受けるかにより数種類のＰＩＶＫＡ－ＩＩが混在した状態で存在している（非特許文献２）。」（［０００２］） （イ）「本発明者らは、鋭意検討を行い、ビタミンＫ欠乏に起因するＰＩＶＫＡ－ＩＩと反応する２種の抗体を用いた二抗体サンドイッチ法によりＰＩＶＫＡ－ＩＩを測定することで、肝がんにおける肝障害度の判定及び予後予測が可能となることを見出した。また、この抗体を用いて得られる測定値と従来の方法で行ったＰＩＶＫＡ－ＩＩ測定値を比較することにより、アルコール性肝炎や肝硬変と肝がんを区別することが可能であり、肝がんの予後予測と、特異性の高い肝がんの検出が可能となることを見出し、本発明を完成した。 すなわち、本発明のＰＩＶＫＡ－ＩＩの測定方法は、（ａ）二抗体サンドイッチ法を利用する免疫学的測定法によってビタミンＫ欠乏に起因するＰＩＶＫＡ－ＩＩを測定し、測定値Ａを得る工程、を含むＰＩＶＫＡ－ＩＩの測定方法であって、前記（ａ）工程の二抗体サンドイッチ法で用いられる抗体として、ビタミンＫ欠乏に起因するＰＩＶＫＡ－ＩＩに特異的な抗体を使用することを特徴とする。」（［００１０］～［００１１］） （ウ）「本発明のＰＩＶＫＡ－ＩＩの測定方法は、（ａ）二抗体サンドイッチ法を利用する免疫学的測定法によってビタミンＫ欠乏に起因するＰＩＶＫＡ－ＩＩを測定し、測定値Ａを得る工程、を含むＰＩＶＫＡ－ＩＩの測定方法であって、前記（ａ）工程の二抗体サンドイッチ法で用いられる抗体として、ビタミンＫ欠乏に起因するＰＩＶＫＡ－ＩＩに特異的な抗体を使用するものである。本願明細書において、前記（ａ）工程で測定されたビタミンＫ欠乏に起因するＰＩＶＫＡ－ＩＩをＮＸ－ＰＶＫＡと称することがある。」（［００２９］） （エ）「前記（ａ）工程における二抗体サンドイッチ法を利用する免疫学的測定法は、例えば、下記方法により実施される。前記方法により、ビタミンＫ欠乏に起因するＰＩＶＫＡ－ＩＩを抗原として２種のモノクローナル抗体を調製し、一方を固相化して用い、他方を標識して用いる。該２種の抗体は、互いに交差反応しない抗体である。抗体を固相化する方法は特に制限はないが、例えば、磁気ビーズやマイクロプレート等の固相に固相化することが好適である。抗体を標識する方法は特に制限はないが、Ｒｕ等の標識物質により標識することが好ましい。前記固相化抗体及び標識抗体を用いて、検体中のビタミンＫ欠乏に起因するＰＩＶＫＡ－ＩＩを測定する。測定は、二抗体サンドイッチ法を利用する免疫学的測定法における通常の手順に従って行えばよい。なお、後述する実施例では、電気化学発光免疫測定法を用いた例を示したが、本発明はこれに限定されるものではなく、例えば、化学発光法や放射性同位元素法等の公知の測定法を広く使用可能である。」（［００３３］～［００３４］） （オ）「（１）ハイブリドーマの調製クマジン血漿（ＵＮＩＧＬＯＢＥ ＲＥＳＥＡＲＣＨ ＣＯＲＰＯＲＡＴＩＯＮ社製）より精製したＰＩＶＫＡ－ＩＩ（１ｍｇ／ｍＬ）とフロイドの完全アジュバント（ＧＩＢＣＯ社製）とを１対１で混和乳化し、５０μｇ／１００μｍＬ（エマルジョン）で８週齢の雌ＢＡＬＢ／Ｃマウス（日本チャールズリバー（株）製）の皮下に２週間間隔で４回投与後、最終免疫の３日後に脾臓を摘出した。摘出した脾臓から得られた脾臓細胞と骨髄腫細胞ＳＰ２／Ｏ－Ａｇ１４とを１０対１の割合で混合し、５０％ポリエチレングリコール１５４０（和光純薬工業（株）製）存在下にて細胞融合させた。融合細胞は脾臓細胞として２．５ｘ１０６／ｍＬになるようにＨＡＴ培地に懸濁し、９６穴培養プレート（ＣＯＲＮＩＮＧ社製）に０．２ｍＬずつ分注した。これを５％ＣＯ２インキュベーター中で３７℃にて培養し、おおよそ２週間後に、ハイブリドーマの生育してきたウェルの培養上清を、次に示すＥＬＩＳＡ法にしたがって評価し、ＰＩＶＫＡ－ＩＩに反応する抗体を産生するハイブリドーマを選択した。」（［００３８］） （カ）「前記の各種ＰＩＶＫＡ－ＩＩのうち、脱炭酸処理時間３０分及び６時間のＰＩＶＫＡ－ＩＩ、及びプロトロンビンを０．１μｇ／ｍＬ固相化したマイクロプレートを用いて、塩化カルシウムを４ｍｍｏｌ／Ｌの濃度で共存させた条件で、選択したハイブリドーマの精製ＩｇＧの反応性を測定した。この条件でプロトロンビンに反応せず、且つ脱炭酸処理時間６時間のＰＩＶＫＡ‐ＩＩに比べて脱炭酸処理時間３０分のＰＩＶＫＡ‐ＩＩに対して高い反応性を示すハイブリドーマを選択し、２種類のモノクローナル抗体産生ハイブリドーマ２４２１１と２４２１６（以下、それぞれ「ハイブリドーマ１１」及び「ハイブリドーマ１６」と表記することがある）を獲得した。前記得られたハイブリドーマ１１及び１６は、独立行政法人産業技術総合研究所 特許生物寄託センター（日本国茨城県つくば市東１丁目１番地１ 中央第６）に寄託され（受領日：２０１０年５月２８日）、ハイブリドーマ１１の受託番号はＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５８であり、ハイブリドーマ１６の受託番号はＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５９である。」（［００４１］） （キ）「脱炭酸処理時間を表１及び図１に示した如く変更した以外は上記と同様の方法でプロトロンビンの脱炭酸処理を行い、５種類のＰＩＶＫＡ－ＩＩを調製した。ハイブリドーマ１１から調製したＰ－１１モノクローナル抗体、ハイブリドーマ１６から調製したＰ－１６モノクローナル抗体、及び従来試薬（ピコルミＰＩＶＫＡ－ＩＩ（エーディア（株）製））の抗ＰＩＶＫＡ－ＩＩモノクローナル抗体の前記５種類のＰＩＶＫＡ－ＩＩ及びプロトロンビン（脱炭酸処理時間０分）に対する反応性を上記と同様の方法で測定した。結果を表１及び図１に示す。表１及び図１において、（１）はＰ－１１モノクローナル抗体、（２）はＰ－１６モノクローナル抗体、（３）は従来試薬の抗ＰＩＶＫＡ－ＩＩモノクローナル抗体（ＭＵ－３）である。なお、Ｐ－１１モノクローナル抗体及びＰ－１６モノクローナル抗体の調製は後述する方法により行った。」（［００４２］） （ク）「（２）モノクローナル抗体の調製ハイブリドーマ１１及びハイブリドーマ１６からそれぞれ下記方法によりＰ－１１モノクローナル抗体及びＰ－１６モノクローナル抗体を調製した。あらかじめ２週間前にプリスタン０．５ｍＬを腹腔内に注射しておいた１２週齢の雌ＢＡＬＢ／Ｃマウスに、ハイブリドーマを細胞数０．５ｘ１０６個の量で腹腔内に投与した。約１４日後に腹水を採取し、遠心処理して上清を得た。上清を等量の吸着用緩衝液（３ｍｏｌ／Ｌ ＮａＣｌ－１．５ｍｏｌ／Ｌ Ｇｌｙｃｉｎｅ－ＮａＯＨ、ｐＨ８．５）と混和後、濾過した。このろ液を吸着用緩衝液で平衡化したプロテインＡカラム（ファルマシア社製）に通して抗体をカラムに吸着させた後、０．１ｍｏｌ／Ｌクエン酸緩衝液（ｐＨ３．０）で溶出させてモノクローナル抗体を精製した。」（［００４４］） （ケ）「（３）ビタミンＫ欠乏に起因するＰＩＶＫＡ－ＩＩの測定前記調製したＰ－１６モノクローナル抗体固相磁気ビーズ及びＲｕ標識Ｐ－１１モノクローナル抗体を用い、電気化学発光免疫測定法により検体中のビタミンＫ欠乏に起因するＰＩＶＫＡ－ＩＩ（ＮＸ－ＰＶＫＡ）の測定値Ａを求めた。検体として、手術を行っておらず、５年後の予後が判明している肝細胞癌患者６３名の血清試料を用い、下記方法に従いＮＸ－ＰＶＫＡ量を測定した。各検体５０μＬにＰ－１６モノクローナル抗体固相磁気ビーズを２５μＬと１μｇ／ｍＬのＲｕ標識Ｐ－１１モノクローナル抗体を含むＲｕ標識抗体液１５０μＬを加え、３０℃で９分間反応させた。反応後、磁気ビーズを磁石でトラップしながらピコルミＢＦ洗浄液（エーディア（株）製）で３回洗浄した。０．１ｍｏｌ／Ｌトリプロピルアミンを含むピコルミ発光電解液（エーディア（株）製）を３００μＬ加えて、電極表面に送り、磁気ビーズに結合したＲｕの発光量を自動分析装置ピコルミＩＩI（エーディア（株）製）で測定し、検体中のＮＸ－ＰＶＫＡ量を求めた。」（［００４７］～［００４８］） （コ）「ピコルミＰＩＶＫＡ－ＩＩ測定キット（エーディア（株）製）を用いて、ＰＩＶＫＡ－ＩＩの測定を行った。結果を表２、図２（ｂ）及び図３に示した。ＲＯＣ分析における曲線下面積は、０．６５３であった。」（［００５１］） （サ）「ＰＩＶＫＡ－ＩＩ測定値をグラフにしたものを図４に示した。ＰＩＶＫＡ－ＩＩ測定値をＮＸ－ＰＶＫＡ測定値で割ったレシオ値の結果をグラフにしたものを図５に示した。表３、図４及び図５において、ＨＣＣは肝細胞癌、ＣＨは慢性肝炎、ＬＣは肝硬変、ＢはＢ型肝炎、ＣはＣ型肝炎、ＮＢＮＣは非Ｂ型非Ｃ型肝炎、ＮＡＳＨは非アルコール性肝障害、ＡＩＨは自己免疫性肝炎、ＡＬＤはアルコール性肝障害である。表３、図４、図５に示した結果から明らかなように、従来の測定方法で得たＰＩＶＫＡ－ＩＩ測定値をＮＸ－ＰＶＫＡ測定値で割ったレシオ値（図５のＮＸ－ＰＶＫＡ－Ｒ）により、従来の測定方法では偽陽性となっていた検体を区別することができ、肝がんに高い特異性を示した。」（［００５７］） （シ）「まず、従来試薬の抗体はＰＩＶＫＡ－ＩＩのみに反応しプロトロンビンには反応しなかったのに対し、Ｐ－１１及びＰ－１６モノクローナル抗体は何れもＰＩＶＫＡ－ＩＩとプロトロンビンに対し同等に反応した。一方、トロンビンに対しては、何れの抗体も反応しなかった。このことから、Ｐ－１１及びＰ－１６モノクローナル抗体はＰＩＶＫＡ－ＩＩとプロトロンビンの一次アミノ酸配列の共通部位即ちＧｌａ残基を含まない部位を認識していることが示唆された。」（［００６３］） （ス）「上記（１）と同様の競合ＥＬＩＳＡで各モノクローナル抗体と各ペプチドの反応性を調べた。その結果を表４に示す。まず、Ｐ－１６モノクローナル抗体はａａ１－１６のペプチドに反応性を示し、ａａ７－２２及び他のペプチドに対しては反応性を示さなかった。一方、Ｐ－１１モノクローナル抗体は何れのペプチドとも反応しないことが判明した。 以上の結果をまとめると、次の通りである。 Ｐ－１６モノクローナル抗体のエピトープは、該抗体の上記（１）と（４）に記載のペプチドに対する反応性、及び上記（２）に記載したＰＩＶＫＡ－ＩＩとプロトロンビンに対する反応性から、プロトロンビンフラグメント１のＮ末端から５残基（配列番号１４で表わすａａ１－５）の範囲であることが判明した。 ａａ１－５のアミノ酸配列 Ａｌａ Ａｓｎ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｌｅｕ （配列番号１４） また、Ｐ－１１モノクローナル抗体のエピトープは、上記（３）でフラグメント１（ａａ１－１５６）に反応すること、及び上記（４）でａａ１－７０に含まれる各ペプチドに反応しないことから、プロトロンビンフラグメント１のａａ６０－１５６の範囲に存在することが考えられた。」（［００６７］～［００７０］） （３）請求の範囲 （ア）「［請求項１］（ａ）二抗体サンドイッチ法を利用する免疫学的測定法によってビタミンＫ欠乏に起因するＰＩＶＫＡ－ＩＩを測定し、測定値Ａを得る工程、を含むＰＩＶＫＡ－ＩＩの測定方法であって、 前記（ａ）工程の二抗体サンドイッチ法で用いられる抗体として、ビタミンＫ欠乏に起因するＰＩＶＫＡ－ＩＩに特異的な抗体を使用することを特徴とするＰＩＶＫＡ－ＩＩの測定方法。」（請求項１） （イ）「［請求項６］二抗体サンドイッチ法を利用する免疫学的測定法によってビタミンＫ欠乏に起因するＰＩＶＫＡ－ＩＩを測定するに当り、ビタミンＫ欠乏に起因するＰＩＶＫＡ－ＩＩに特異的な抗体を使用することを特徴とするＰＩＶＫＡ－ＩＩの測定試薬。」（請求項６） （ウ）「［請求項１４］請求項２記載の方法によって得られた値により、肝がんを判定することを特徴とする肝がんの判定方法。」（請求項１４） （４）表及び図面 （ア）表３ ［図：0001416847000036.jpg］ １０ 甲第１２号証 ２０１０年６月２９日に出願された特願２０１０－１４７７８４号の出願書類である甲第１２号証には、以下の事項が記載されている。 （１）発明の名称 「ＰＩＶＫＡ－ＩＩの測定方法、ＰＩＶＫＡ－ＩＩの測定試薬及び抗体」 （２）明細書 （ア）「ＰＩＶＫＡ－ＩＩ（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ Ｖｉｔａｍｉｎ Ｋ Ａｂｓｅｎｃｅ ｏｒ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ－ＩＩ）は、ＡＦＰ（α－フェトプロテイン）と並んで肝がんを診断するマーカーとして広く臨床検査室で測定されている。 ＰＩＶＫＡ－ＩＩはビタミンＫ依存性血漿タンパク質の一つであるプロトロンビンの前駆物質であって、アミノ末端領域にある１０個のグルタミン酸残基のγ－カルボキシル化の程度が不完全なものを言う。当該カルボキシル化の程度が完全なものを正常プロトロンビンと言う。従って、ＰＩＶＫＡ－ＩＩとは正常プロトロンビンのγ－カルボキシグルタミン酸残基についての脱カルボキシル化体であるということもでき、異常プロトロンビンと呼ばれることもある。１０個のグルタミン酸残基中いくつがγ－カルボキシル化を受けるかにより数種類のＰＩＶＫＡ－ＩＩが混在した状態で存在している（非特許文献１）。」（【０００２】） （イ）「本発明者らは、鋭意検討を行い、ビタミンＫ欠乏に起因するＰＩＶＫＡ－ＩＩと反応する２種の抗体を用いた二抗体サンドイッチ法によりＰＩＶＫＡ－ＩＩを測定することで、肝がんにおける肝障害度の判定及び予後予測が可能となることを見出した。また、この抗体を用いて得られる測定値と従来の方法で行ったＰＩＶＫＡ－ＩＩ測定値を比較することにより、アルコール性肝炎や肝硬変と肝がんを区別することが可能であり、肝がんの予後予測と、特異性の高い肝がんの検出が可能となることを見出し、本発明を完成した。 すなわち、本発明のＰＩＶＫＡ－ＩＩの測定方法は、（ａ）二抗体サンドイッチ法を利用する免疫学的測定法によってビタミンＫ欠乏に起因するＰＩＶＫＡ－ＩＩを測定し、測定値Ａを得る工程、を含むＰＩＶＫＡ－ＩＩの測定方法であって、前記（ａ）工程の二抗体サンドイッチ法で用いられる抗体として、ビタミンＫ欠乏に起因するＰＩＶＫＡ－ＩＩに特異的な抗体を使用することを特徴とする。」（【０００９】～【００１０】） （ウ）「本発明のＰＩＶＫＡ－ＩＩの測定方法は、（ａ）二抗体サンドイッチ法を利用する免疫学的測定法によってビタミンＫ欠乏に起因するＰＩＶＫＡ－ＩＩを測定し、測定値Ａを得る工程、を含むＰＩＶＫＡ－ＩＩの測定方法であって、前記（ａ）工程の二抗体サンドイッチ法で用いられる抗体として、ビタミンＫ欠乏に起因するＰＩＶＫＡ－ＩＩに特異的な抗体を使用するものである。本願明細書において、前記（ａ）工程で測定されたビタミンＫ欠乏に起因するＰＩＶＫＡ－ＩＩをＮＸ－ＰＶＫＡと称することがある。」（【００２４】） （エ）「前記（ａ）工程における二抗体サンドイッチ法を利用する免疫学的測定法は、例えば、下記方法により実施される。 前記方法により、ビタミンＫ欠乏に起因するＰＩＶＫＡ－ＩＩを抗原として２種のモノクローナル抗体を調製し、一方を固相化して用い、他方を標識して用いる。該２種の抗体は、互いに交差反応しない抗体である。 抗体を固相化する方法は特に制限はないが、例えば、磁気ビーズやマイクロプレート等の固相に固相化することが好適である。 抗体を標識する方法は特に制限はないが、Ｒｕ等の標識物質により標識することが好ましい。 前記固相化抗体及び標識抗体を用いて、検体中のビタミンＫ欠乏に起因するＰＩＶＫＡ－ＩＩを測定する。測定は、二抗体サンドイッチ法を利用する免疫学的測定法における通常の手順に従って行えばよい。なお、後述する実施例では、電気化学発光免疫測定法を用いた例を示したが、本発明はこれに限定されるものではなく、例えば、化学発光法や放射性同位元素法等の公知の測定法を広く使用可能である。」（【００２８】～【００２９】） （オ）「１）ハイブリドーマの調製クマジン血漿（UNIGLOBE RESEARCH CORPORATION社製）より精製したＰＩＶＫＡ－ＩＩ（１ｍｇ／ｍＬ）とフロイドの完全アジュバント（GIBCO社製）とを１対１で混和乳化し、５０μｇ／１００μｍＬ（エマルジョン）で８週齢の雌ＢＡＬＢ／Ｃマウス（日本チャールズリバー（株）製）の皮下に２週間間隔で４回投与後、最終免疫の３日後に脾臓を摘出した。摘出した脾臓から得られた脾臓細胞と骨髄腫細胞ＳＰ２／Ｏ－Ａｇ１４とを１０対１の割合で混合し、５０％ポリエチレングリコール１５４０（和光純薬工業（株）製）存在下にて細胞融合させた。融合細胞は脾臓細胞として２．５ｘ１０６／ｍＬになるようにＨＡＴ培地に懸濁し、９６穴培養プレート（CORNING社製）に０．２ｍＬずつ分注した。これを５％ＣＯ２インキュベーター中で３７℃にて培養し、おおよそ２週間後に、ハイブリドーマの生育してきたウェルの培養上清を、次に示すＥＬＩＳＡ法にしたがって評価し、ＰＩＶＫＡ－ＩＩに反応する抗体を産生するハイブリドーマを選択した。」（【００３３】） （カ）「脱炭酸処理時間３０分又は６時間の処理条件で、プロトロンビン（Enzyme Research Laboratories社）の脱炭酸処理を行い（S.Paul Bajah、Paul A. Price、 and William A. Russell、Decarboxylation of γ-Carboxyglutamic Acid Residues in Human Prothrombin、Journal of Biological Chemistry 257(7):3726、1982に記載の方法）、２種類のＰＩＶＫＡ－ＩＩを調製した。前記２種類のＰＩＶＫＡ－ＩＩ及びプロトロンビンを０．１μｇ／ｍＬ固相化したマイクロプレートを用いて、塩化カルシウムを４ｍｍｏｌ／Ｌの濃度で共存させた条件で、選択したハイブリドーマの精製ＩｇＧの反応性を測定した。この条件でプロトロンビンに反応せず、且つ脱炭酸処理時間６時間のＰＩＶＫＡ‐IIに比べて脱炭酸処理時間３０分のＰＩＶＫＡ‐IIに対して高い反応性を示すハイブリドーマを選択し、２種類のモノクローナル抗体産生ハイブリドーマ２４２１１と２４２１６（以下、それぞれ「ハイブリドーマ１１」及び「ハイブリドーマ１６」と表記することがある）を獲得した。前記得られたハイブリドーマ１１及び１６は、独立行政法人産業技術総合研究所 特許生物寄託センター（日本国茨城県つくば市東１丁目１番地１ 中央第６）に寄託され（受領日：２０１０年５月２８日）、ハイブリドーマ１１の受領番号はＦＥＲＭ ＡＢＰ－１１２５８であり、ハイブリドーマ１６の受領番号はＦＥＲＭ ＡＢＰ－１１２５９である。」（【００３５】） （キ）「脱炭酸処理時間を表１及び図１に示した如く変更した以外は上記と同様の方法でプロトロンビンの脱炭酸処理を行い、５種類のＰＩＶＫＡ－ＩＩを調製した。ハイブリドーマ１１から調製したＰ－１１モノクローナル抗体、ハイブリドーマ１６から調製したＰ－１６モノクローナル抗体、及び従来試薬（ピコルミＰＩＶＫＡ－ＩＩ（三光純薬（株）製））の抗ＰＩＶＫＡ－ＩＩモノクローナル抗体の前記５種類のＰＩＶＫＡ－ＩＩ及びプロトロンビン（脱炭酸処理時間０分）に対する反応性を上記と同様の方法で測定した。結果を表１及び図１に示す。表１及び図１において、（１）はＰ－１１モノクローナル抗体、（２）はＰ－１６モノクローナル抗体、（３）は従来試薬の抗ＰＩＶＫＡ－ＩＩモノクローナル抗体である。なお、Ｐ－１１モノクローナル抗体及びＰ－１６モノクローナル抗体の調製は後述する方法により行った。」（【００３６】） （ク）「２）モノクローナル抗体の調製 ハイブリドーマ１１及びハイブリドーマ１６からそれぞれ下記方法によりＰ－１１モノクローナル抗体及びＰ－１６モノクローナル抗体を調製した。 あらかじめ２週間前にプリスタン０．５ｍＬを腹腔内に注射しておいた１２週齢の雌ＢＡＬＢ／Ｃマウスに、ハイブリドーマを細胞数０．５ｘ１０６個の量で腹腔内に投与した。約１４日後に腹水を採取し、遠心処理して上清を得た。上清を等量の吸着用緩衝液（３Ｍ ＮａＣｌ－１．５Ｍ Ｇｌｙｃｉｎｅ－ＮａＯＨ、ｐＨ８．５）と混和後、濾過した。このろ液を吸着用緩衝液で平衡化したプロテインＡカラム（ファルマシア社製）に通して抗体をカラムに吸着させた後、０．１Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ３．０）で溶出させてモノクローナル抗体を精製した。」（【００３８】） （ケ）「３）ビタミンＫ欠乏に起因するＰＩＶＫＡ－ＩＩの測定 前記調製したＰ－１６モノクローナル抗体固相磁気ビーズ及びＲｕ標識Ｐ－１１モノクローナル抗体を用い、電気化学発光免疫測定法により検体中のビタミンＫ欠乏に起因するＰＩＶＫＡ－ＩＩ（ＮＸ－ＰＶＫＡ）の測定値Ａを求めた。 検体として、５年後の予後が判明している肝細胞癌患者８３人の血清試料を用い、下記方法に従いＮＸ－ＰＶＫＡ量を測定した。 各検体５０μＬにＰ－１６モノクローナル抗体固相磁気ビーズを２５μＬと１μｇ／ｍＬのＲｕ標識Ｐ－１１モノクローナル抗体を含むＲｕ標識抗体液１５０μＬを加え、３０℃で９分間反応させた。反応後、磁気ビーズを磁石でトラップしながらピコルミＢＦ洗浄液（三光純薬（株）製）で３回洗浄した。０．１Ｍトリプロピルアミンを含むピコルミ発光電解液（三光純薬（株）製）を３００μＬ加えて、電極表面に送り、磁気ビーズに結合したＲｕの発光量を自動分析装置ピコルミＩＩＩ（三光純薬（株）製）で測定し、検体中のＮＸ－ＰＶＫＡ量を求めた。」（【００４１】～【００４２】） （コ）「ピコルミＰＩＶＫＡ－ＩＩ測定キット（三光純薬（株）製）を用いて、ＰＩＶＫＡ－ＩＩの測定を行った。結果を図２（ｂ）及び図３に示した。ＲＯＣ分析における曲線下面積は、０．６５３であった。」（【００４４】） （サ）「ＰＩＶＫＡ－ＩＩ測定値を図４に示した。ＰＩＶＫＡ－ＩＩ測定値をＮＸ－ＰＶＫＡ測定値で割ったレシオ値の結果を図５に示した。図４及び図５において、ＨＣＣは肝細胞癌、ＣＨは慢性肝炎、ＬＣは肝硬変、ＢはＢ型肝炎、ＣはＣ型肝炎、ＮＢＮＣは非Ｂ型非Ｃ型肝炎、ＮＡＳＨは非アルコール性肝障害、ＡＩＨは自己免疫性肝炎、ＡＬＤはアルコール性肝障害である。 図４、図５に示した結果から明らかなように、従来の測定方法で得たＰＩＶＫＡ－ＩＩ測定値をＮＸ－ＰＶＫＡ測定値で割ったレシオ値（図５のＮＸ－ＰＶＫＡ－Ｒ）により、従来の測定方法では偽陽性となっていた検体を区別することができ、肝がんに高い特異性を示した。」（【００４９】） （３）請求の範囲 （ア）「【請求項１】（ａ）二抗体サンドイッチ法を利用する免疫学的測定法によってビタミンＫ欠乏に起因するＰＩＶＫＡ－ＩＩを測定し、測定値Ａを得る工程、を含むＰＩＶＫＡ－ＩＩの測定方法であって、 前記（ａ）工程の二抗体サンドイッチ法で用いられる抗体として、ビタミンＫ欠乏に起因するＰＩＶＫＡ－ＩＩに特異的な抗体を使用することを特徴とするＰＩＶＫＡ－ＩＩの測定方法。」（請求項１） （イ）「【請求項５】二抗体サンドイッチ法を利用する免疫学的測定法によってビタミンＫ欠乏に起因するＰＩＶＫＡ－ＩＩを測定するに当り、ビタミンＫ欠乏に起因するＰＩＶＫＡ－ＩＩに特異的な抗体を使用することを特徴とするＰＩＶＫＡ－ＩＩの測定試薬。」（請求項５） １１ 甲第１８号証 令和３年９月２９日付弁駁書において請求人が新たに提出したものであって、甲４の技術内容（Ｈ－１１の性質）について説明をするために提出した補助事実、間接証拠としての甲第１８号証（以下、「甲１８」という。）には、以下の事項が記載されている（翻訳は当審による。）。 （１）標題 「種々のビタミンＫ依存タンパク質の共通エピトープに対するカルシウムイオン阻害モノクローナル抗体を利用した、血漿中のプロトロンビンとプロテインＣの、正常及び異常の区別」 （２）要約 （ア）「抗体Ｈ－１１は、ＥＤＴＡの存在下では、完全カルボキシル化プロトロンビン及びプロテインＣに結合するが、結合は、二価金属イオンであるカルシウム、マグネシウム及びマンガンにより阻害される。一方、デス－γ－カルボキシプロトロンビン及びプロテインＣは、ＥＤＴＡの存在下又はカルシウムイオンの存在下で同様にＨ－１１に結合する。」（第２４１８頁要約左欄６－１１行） （イ）「カルシウムイオンの存在下で抗体Ｈ－１１のデス－γ－カルボキシプロトロンビン及びプロテインＣに結合するこの能力により、血漿でこれらのタンパク質に対するイムノアッセイの開発が可能になった。」（第２４１８頁要約左欄１４行及び右欄１－３行） （３）本文 （ア）「最近、我々は、プロテインＣに対して産生され、かつプロトロンビン、第ＶＩ因子及び第Ｘ因子並びにプロテインＣを含むビタミンＫ依存性タンパク質のサブセットに結合するマウスモノクローナル抗体（ＭｏＡｂ、Ｈ－１１と記載される）について記載した１７。」（第２４１８頁本文右欄第７－１１行） （イ）「図２Ｂに示されるアッセイ形式を使用して、精製完全カルボキシル化プロトロンビン（１０Ｇｌａ）及び熱脱カルボキシル化（０Ｇｌａ）を、Ｈ－１１アッセイにおいて測定した。図３Ａ（左パネル）のデータは、カルシウムイオンの存在下では、抗体Ｈ－１１のプロトロンビンへの結合レベルと比べて低下することを示す。以前の実験（データは示さず）では、プロトロンビンの抗プレトロンビン１抗体への結合は１０ｍｍｏｌ／Ｌカルシウム又はＥＤＴＡの存在下で同一であったことが確立された。熱により脱カルボキシル化したプロトロンビンへの抗体Ｈ－１１の結合は、カルシウムイオンの存在下及びＥＤＴＡの存在下の両方で同等であった（図３Ａ、右パネル）。これらのデータは、γ－カルボキシルグルタミン酸の脱カルボキシル化によりプロトロンビンのＧｌａドメインのカルシウムイオンの結合部位が破壊され、タンパク質がコンフォメーション転移できないことによるプロトロンビンへの抗体Ｈ－１１の結合のカルシウムイオン依存性阻害の喪失を生じることを示唆する。」（第２４２０頁本文左欄第２７－３３行及び右欄第１－１２行） （４）図面 （ア）図２ 「 ［図：0001416847000037.jpg］ 図２．抗体Ｈ－１１イムノアッセイの概略図 （Ａ）カルシウムイオンでプロトロンビンのＧｌａドメインに誘導される構造変化の図。示されたドメインはフラグメント１（Ｆ１）、フラグメント２（Ｆ２）、プレトロンビン２（Ｐ２）である。カルシウムイオンがＧｌａを含むフラグメント１に結合することによって、この領域の構造変化がもたらされる。抗体Ｈ－１１の認識部位はプロトロンビンのＦ１領域にある。 （Ｂ）血漿中のビタミンＫ依存タンパク質への抗体Ｈ－１１の結合を測定するためのサンドイッチ型アッセイ。本研究で利用される補足抗体は、プロトロンビンに対してはロバのポリクローナルなプレトロンビン１抗体を、プロテインＣに対してはＭｏＡｂ αＨＰＣ－２が利用される。標識化された抗体Ｈ－１１の結合は、ＥＤＴＡ又はカルシウムイオン存在下で決定される。このアッセイの原理は、ＥＤＴＡ又はカルシウムイオン存在下でＧｌａを含むビタミンＫ依存タンパク質に対する抗体Ｈ－１１の結合性の違いである。 （図中対訳） Metal Free II Binds H-11：金属フリーＩＩはＨ－１１に結合する Metal-protein Complex Does Not Bind H-11：金属－タンパク質複合体はＨ－１１に結合しない Capture antibody：捕捉抗体 Labeled antibody H-11：標識抗体Ｈ－１１ Vitamin K-dependent protein + Ca2+：ビタミンＫ依存タンパク質＋カルシウムイオン Vitamin K-dependent protein、 no Ca2+：ビタミンＫ依存タンパク質、カルシウムイオン無し des-gamma-carboxy vitamin K-dependent protein：デス－γ－カルボキシビタミンＫ依存タンパク質 」（第２４２０頁右欄図２） （イ）図３ＡＢのみ 「 ［図：0001416847000038.jpg］ 図３．正常及びワーファリン血漿中のプロトロンビン及びプロテインＣに対するＨ－１１アッセイ （Ａ）精製１０－Ｇｌａプロトロンビン又は熱により完全に脱カルボキシル化したプロトロンビンを、ポリクローナルロバ抗体プレトロンビン１抗体でコートしたマイクロタイタープレート中でインキュベートした。抗体Ｈ－１１－プロトロンビン－抗プレトロンビン１複合体の存在を、西洋ワサビペルオキシダーゼと連結したヤギ抗マウス免疫グロブリン、ならいに、基質としてｏ－フェニレンジアミンと過酸化水素を使用して決定した。ＥＤＴＡの存在下での抗体Ｈ－１１の結合（●）；カルシウムイオンの存在下での結合（○）。 （Ｂ）正常な血漿（Ｎ）、又は、ワーファリン摂取患者由来の血漿（Ｃ）中において、ＥＤＴＡ（■）又はカルシウムイオン（□）存在下で、抗体Ｈ－１１のプロトロンビン結合を材料と方法に記載した手法で決定した。プロトロンビンの濃度は、プロトロンビンラジオイムノアッセイで決定した。 」（第２４２１頁左欄図３） 第７ 当審の判断 訂正前の請求項７３～７４は、本件訂正により、その内容が削除され、対象を欠くものとなっており、それらの請求項に対して請求人がした審判の請求は、不適法な請求であって、その補正をすることができないものであるから、特許法第１３５条の規定により、請求項７３～７４に係る特許に対する請求は却下すべきものである。 以下では、事案に鑑み、無効理由６、無効理由４、５、無効理由１、２、３の順で検討する。 １ 本件明細書の記載事項 本件明細書には、以下の事項が記載されている。 本ａ．背景技術 「【０００２】 タンパク質プロトロンビンＩＩはＩＩ因子としても知られており、ビタミンＫの存在下、合成後修飾を受け、ＧＬＡ－ドメインにおける１０個のグルタミン酸残基（ＧＬＡ）がｇ－カルボキシグルタミン酸にカルボキシ化されている。カルボキシ化のプロセスは、プロトロンビンがＰＩＶＫＡ－ＩＩ（ビタミンＫ欠乏時誘導蛋白）に変換される病状およびプロセスにおいて異常であり、不完全である。ＰＩＶＫＡ－ＩＩは分子量７２ｋＤａを有する大型の糖タンパク質であり、ＨＣＣ患者の場合に上昇することが知られている・・・。さらに、このような状態を効果的に検出するイムノアッセイにおいて有用であるため、またはこのような状態を処置するために必要とされる結合特異性を有するモノクローナル抗体は殆んど知られていない・・・。したがって、腫瘍学において、ＨＣＣまたは肝癌を検出するのに有効に用いられ得る抗体の開発が極めて必要とされている。」 本ｂ．課題 「【０００２】 ・・・腫瘍学において、ＨＣＣまたは肝癌を検出するのに有効に用いられ得る抗体の開発が極めて必要とされている。」 「【０００１】 本開示は、例えば、肝細胞癌（ＨＣＣ）、肝癌および関連の病状の診断、処置および予防において用いられ得る抗体およびイムノアッセイ方法に関する。」 「【０００５】 別の一態様において、本開示は、プロトロンビン誘導ビタミンＫアンタゴニストＩＩ（ＰＩＶＫＡ－ＩＩ）のアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を含む単離された結合性タンパク質を提供する。・・・」 本ｃ．実施態様 「【００２８】 Ａ．序文および定義 ＰＩＶＫＡ－ＩＩタンパク質のＧＬＡドメインは、１０個のＧＬＡアミノ酸を含む、アミノ酸１－４６（またはプロトロンビン配列の４４－８８）からなる。ＰＩＶＫＡタンパク質は、脱炭酸されたＧＬＡの位置および数に関して変化する複数の形態において存在する。現在利用可能なＰＩＶＫＡ－ＩＩに対するイムノアッセイは一部分のタンパク質だけ（主に、環状ジスルフィド結合のアミノ酸１７－２３の配列）、および周囲の配列、すなわちアミノ酸１３－２７を検出する。その結果、アミノ酸１７－２３のＧＬＡの外側（脱炭酸されたＧＬＡを含む。）は検出されない。本明細書に開示する新たな抗体および方法は、ＰＩＶＫＡのアミノ酸１－１７、およびアミノ酸１７－２３の領域における脱炭酸された残基を検出するための方法を提供する。これは、例えば、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１３－２７に結合する抗原結合性部分を有する第１の抗ＰＩＶＫＡ抗体、およびＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を有する第２の抗ＰＩＶＫＡ抗体を用いることによって実現され得る。第２の抗体は、ＰＩＶＫＡの脱炭酸されたアミノ酸残基と強力に反応することができ、カルボキシル化された（通常の）アミノ酸残基と中程度に反応することができる。アッセイにおいて両方の抗体を用いることで、高レベルの特異性でＰＩＶＫＡ１３－２７およびＰＩＶＫＡ１－２７の両方を検出することができ、したがってＰＩＶＫＡ１３－２７単独を検出することによって生成されるものよりも強力なシグナルを生成する。 【００２９】 本開示は、したがって３７±４ｎＭまたはそれ未満のＫｄで、好ましくは１×１０－９Ｍまたはそれを超える範囲の、好ましくは約１×１０１０Ｍまたはそれを超える、ＰＩＶＫＡ－ＩＩペプチドに対するＫｄで、ＰＩＶＫＡ－ＩＩの１つまたは複数のエピトープに結合する結合性タンパク質、特に、本明細書以後「６Ｈ６」と呼ぶモノクローナル抗体を提供する。特に、本開示の結合性タンパク質または抗体は、約１×１０－９Ｍまたはそれを超える、好ましくは約１×１０－１０Ｍまたはそれを超える、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸領域１－１３に対する解離定数（Ｋｄ）を有する。抗体はこのように、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識し結合することができる。抗体がＰＩＶＫＡ－ＩＩに結合した後は、例えば、プロトロンビンによって置換されない。抗体がＰＩＶＫＡ－ＩＩおよびプロトロンビンに同時に曝露された場合、本開示の６Ｈ６抗体は、ＰＩＶＫＡ－ＩＩよりもプロトロンビンに対して約１０倍から約１０００倍低い親和性を有することは注目すべきことである。・・・」 「【００３５】 本明細書で用いられる「結合」、「特異的結合」または「特異的に結合する」の語は、抗体、タンパク質またはペプチドの、第２の化学種との相互作用に関して、相互作用が化学種上の特定の構造（例えば、抗原性決定基もしくはエピトープ）の存在に依存することを意味し、例えば、抗体は、一般的にタンパク質よりもむしろ特異的なタンパク質構造を認識し、結合する。抗体がエピトープ「Ａ」に特異的である場合、標識化されている「Ａ」および抗体を含む反応における、エピトープＡ（または遊離の、非標識のＡ）を含む分子の存在は、抗体に結合する標識化されているＡの量を低減する。」 本ｄ．実施例 「【０１６６】 ［実施例１]６Ｈ６モノクローナル抗体の開発 免疫原のデザイン：ＰＩＶＫＡ－ＩＩ（すなわち、血液凝固ＩＩ因子の非存在下ビタミンＫによって誘導されるタンパク質）特異的領域のＰＩＶＫＡ－ＩＩ １－１７におけるアミノ酸長１７個のペプチドを免疫原として選択した。ＰＩＶＫＡ－ＩＩにおけるアミノ酸長１７個のペプチド中にグルタミン酸の脱炭酸されたアミノ酸が４個存在し、プロトロンビン（ＩＩ因子）はアミノ酸長１７個のペプチド中にカルボキシル化されたグルタミン酸（ＧＬＡ）を４個有していた。・・・６Ｈ６モノクローナル抗体は、担体としてキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）に連結している以下の合成ペプチド（配列番号１８）を用いて生成された。 【０１６７】 【化９】 ［図：0001416847000039.jpg］ 【０１６８】 免疫化：ペプチドＫＬＨを用いて、図１に示す通り、胚中心関連ＤＮＡプライマーゼ（ＧＡＮＰ）トランスジェニックＢａｌｂ／ｃマウス３匹およびＧＡＮＰトランスジェニックＣ５７ＢＬ／６マウス３匹を免疫化した。・・・各群においてＰＩＶＫＡ－ＩＩに対して最高の反応性を示し、プロトロンビンに対して最小の反応性を示したマウスを、次のステップのために選択した。 【０１６９】 融合：ＧＡＮＰトランスジェニックＢａｌｂ／ｃおよびＧＡＮＰトランスジェニックＣ５７ＢＬ／６の各群から選択したマウス１匹からの脾臓細胞を、Ｓａｋａｇｕｃｈｉら、Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１７４巻（２００５年）、４４８５－４４９４頁において記載されている標準方法でミエローマ細胞に融合した。ハイブリドーマ細胞を限外希釈法によって希釈し、次いで培養上清をハイブリドーマのスクリーニングに用いた。 【０１７０】 ハイブリドーマのスクリーニング：・・・結果を図２に示した。１ＯＤを超える吸光度を示したハイブリドーマを、次のステップのために選んだ。 【０１７１】 クローンの確立：ハイブリドーマ６Ｈ６ハイブリドーマのクローニングを、Ｓａｋａｇｕｃｈｉら、Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１７４巻（２００５年）、４４８５－４４９４頁において記載されている標準手順を用いて行った。次いで６Ｈ６のクローンを確立した。 【０１７２】 ［実施例２］６Ｈ６モノクローナル抗体親和性のキャラクタリゼーション 蛍光相関分光法（ＦＣＳ）を用いて、ｍＡｂ ６Ｈ６およびＰＩＶＫＡ－ＩＩペプチド（１－１３）、ｍＡｂ ６Ｈ６およびプロトロンビンペプチド（１－１３）のＫｄを決定した。・・・ 【０１７３】 ＰＩＶＫＡ－ＩＩペプチド（１－１３）の配列はＡｌｅｘａ４８８－ＣＡＮＴＦＬＥＥＶＲＫＧＮＬ（配列番号１９）であり、プロトロンビンペプチド（１－１３）の配列はＡｌｅｘａ４８８－ＣＡＮＴＦＬＥ＊Ｅ＊ＶＲＫＧＮＬ（配列番号２０）であった。・・・ 【０１７４】 結合性の測定は全て、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、および０．００５％界面活性剤Ｐ２０を含む１０ｍＭ ＨＥＰＥＳバッファーｐＨ７．４中で行った。図３は、ｍＡｂ ６Ｈ６およびＡｌｅｘａ４８８－ＰＩＶＫＡ－ＩＩペプチドの結合曲線を示す。ＰＩＶＫＡ－ＩＩペプチドに対するｍＡｂ ６Ｈ６のＫｄは３７±４ｎＭである。図４は、ｍＡｂ ６Ｈ６およびＡｌｅｘａ４８８－プロトロンビンペプチド（１－１３）の結合曲線を示す。曲線上の各データ点を、各自己相関曲線の適合から抽出した（データは示さず）。６Ｈ６ ｍＡｂおよびプロトロンビンペプチドのＫｄは４．６±０．５ｕＭである。 【０１７５】 ＰＩＶＫＡ－ＩＩペプチドＣｙｓ１－１３の標識化：・・・ 【０１７６】 ［実施例３］イムノアッセイ自動化イムノアッセイにおける６Ｈ６の使用 無血清培地中でハイブリドーマを培養した。培養上清中の抗体を、タンパク質Ａカラムで精製した。精製した３Ｃ１０ ＰＩＶＫＡ－ＩＩ特異的モノクローナル抗体を、磁性微粒子にコーティングした（カルボキシル基を、微粒子（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、ＩＬ）の表面上に、塩酸１－エチル－３－［３－ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド（ＥＤＣ）を用いて共有結合で付けた。）。コーティングした微粒子を、ウシ血清アルブミン（試薬Ａを作成するためのＢＳＡ）を含んでいたバッファー溶液中に分散させた。 【０１７７】 アクリジニウムコンジュゲートを、上記に記載した６Ｈ６モノクローナル抗体から作成した。抗体を、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）活性化したアクリジニウムエステル（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、ＩＬ）を用いて標識化した。標識化した抗体を、ＢＳＡを含むバッファー中に希釈して試薬Ｂを調製した。ＴｒｉｔｏｎＸ－１００を含むバッファー溶液を試薬Ｃとして調製した。イムノアッセイを、ＡＲＣＨＩＴＥＣＴｉ２０００（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、ＩＬ）の自動化イムノアッセイシステムを利用した以下の手順で自動的に行った。・・・ 【０１７８】 ＰＩＶＫＡ－ＩＩ溶液を、磁性微粒子上にコーティングした４つの抗体を用いて、Ａｒｃｈｉｔｅｃｔイムノアッセイで試験した（図２）。・・・ヒトＰＩＶＫＡ－ＩＩ分子の図を抗体反応性の部位とともに図５Ａに示す。アッセイフォーマットの図を図５Ｂに示す。 【０１７９】 アッセイ性能の評価：６つのキャリブレーターを５回繰り返してアッセイし、ヒトプロトロンビン（Ａｂｂｏｔｔ Ｊａｐａｎ、東京、日本）に対する対照のコンジュゲートおよび６Ｈ６コンジュゲートの反応を用いて各キャリブレーターに対するＲＬＵ（相対的な光単位）の平均値を、表Ｂおよび図６に示す通り比較した。両方のコンジュゲートともアッセイにおいて良好な応答をもたらした。 【０１８０】 【表２】 ［図：0001416847000040.jpg］ 【０１８１】 ２つのＡＲＣＨＩＴＥＣＴ ＰＩＶＫＡ－ＩＩアッセイからの結果を、ポリクローナル抗ヒトプロトロンビンコンジュゲートを用いる市販のＰＩＶＫＡ－ＩＩアッセイ（Ｐｉｃｏｌｕｍｉ、ＥＩＳＡＩ、日本）からの結果に比較した。見かけ上健康な人からの試料（ＰｒｏＭｅｄＤｘ ＬＬＣ、Ｎｏｒｔｏｎ、Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）および肝細胞癌患者からの試料（Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｃａｐｅ Ｃｏｄ、Ｗｅｓｔ Ｙａｒｍｏｕｔｈ、Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）を用いた。両方のアッセイフォーマット対Ｐｉｃｏｌｕｍｉに対する相関を図７－８に示す。これらの結果は、ヒト血清中のＰＩＶＫＡ－ＩＩを検出するこれらのアッセイの能力を実証している。」 本ｅ．抗体の調製方法 「【００７３】 Ｂ．モノクローナル抗体の調製 モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ、組換え、およびファージディスプレイ技術、またはこれらの組合せの使用を含む、当技術分野において知られている広範囲の技術を用いて調製され得る。・・・ 【００７５】 ハイブリドーマ技術を用いて特異的な抗体を生成し、スクリーニングするための技術は、当技術分野において日常的であり、よく知られている。・・・ 【００７６】 動物が抗原で免疫化された後、抗体および／または抗体産生細胞は動物から得ることができる。・・・ 【００７７】 例えば、抗原に特異的な抗体がマウス血清中で検出されるなど、免疫反応が検出された後、マウスの脾臓を収集し、脾細胞を単離する。次いで、脾臓細胞を、よく知られている技術によって、アメリカ培養細胞系統保存機関（Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）から入手できる細胞系統ＳＰ２０からの細胞など、あらゆる適切なミエローマ細胞に融合する。ハイブリドーマを選択し、限外希釈法によってクローニングする。次いで、ハイブリドーマクローンを、対象のペプチドまたは抗原に結合することができる抗体を分泌する細胞に対して、当技術分野において知られている方法によってアッセイする。一般的に高レベルの抗体を含んでいる腹水は、ポジティブのハイブリドーマクローンで免疫化したマウスによって産生され得る。 【００７８】 別の実施形態において、抗体生成性の不死化ハイブリドーマは、免疫化した動物から調製され得る。・・・ 【００７９】 抗体生成性ハイブリドーマが選択され、クローニングされ、ハイブリドーマの活発な成長、抗体の高生成性、および下記にさらに論じる所望の抗体の特徴を含めた望ましい性質に対してさらにスクリーニングされる。ハイブリドーマは、ヌードマウスなどの免疫系を欠く動物などの同質遺伝子的な動物においてインビボで、またはインビトロの細胞培養において培養および拡張されてもよい。ハイブリドーマを選択し、クローニングし、拡張する方法は、当業者にはよく知られている。 【００８１】 Ｃ．抗体を生成する他の方法 上記に記述した通り、本開示の抗体は、当技術分野において知られているあらゆる数々の技術によって生成されてよい。・・・ 【００８３】 宿主細胞が、ＦａｂフラグメントまたはｓｃＦｖ分子などの機能的な抗体フラグメントを生成するのに用いられてもよい。上記の手順に対する変形も本開示の範囲内であることが理解される。・・・ 【００８４】 ・・・標準の分子生物学技術を用いて、組換え発現ベクターを調製し、宿主細胞にトランスフェクトし、形質転換体を選択し、宿主細胞を培養し、培地から抗体を回収する。またさらに、本発明は、本開示の組換え抗体が合成されるまで適切な培地中で本開示の宿主細胞を培養することによって、本開示の組換え抗体を合成する方法を提供する。方法は、培地から組換え抗体を単離することをさらに含むことができる。」 本ｆ．抗体を使用する方法 「【０１１４】 Ｅ．抗体を使用する方法 ＰＩＶＫＡ－ＩＩ、またはそのエピトープもしくはその部分に結合する本明細書に記載する抗体の能力を考慮すると、本明細書に記載する抗体は、従来の競合的または非競合的なイムノアッセイ（例えば、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、免疫測定、サンドイッチアッセイもしくは免疫組織化学）を用いて、生物学的試料（例えば、血清、血液、組織もしくは血漿など）中のＰＩＶＫＡ－ＩＩの量を検出および／または定量するのに用いられ得る。次いで、このような検出は、生物学的試料が得られた患者に対するＨＣＣまたは肝癌の診断をもたらし得る。 【０１１５】 生物学的試料中のＰＩＶＫＡ－ＩＩを検出するための方法は、例えば、第１の抗体－抗原複合体の形成に十分な時間および条件下、生物学的試料を本開示の抗体（またはその抗体部分）と接触させ、抗原／抗体複合体の形成を検出することによってＰＩＶＫＡ－ＩＩまたは部分（例えば、そのエピトープ）を検出することを含む。抗体は、結合している抗原もしくは非結合の抗原（すなわち、ＰＩＶＫＡ－ＩＩ）の検出および／または定量を促進するために、検出可能な物質で直接的または間接的に標識化され得る。 【０１１６】 試験試料中のＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原を検出する方法は、ａ）試験試料を、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１３－２７に結合する抗原結合性部分を有する第１の抗体と、第１の抗体－抗原複合体の形成に十分な時間および条件下、接触させるステップ、ｂ）第２の抗体がＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を有し、検出可能な標識にコンジュゲートしている、第２の抗体を第１の抗体／抗原複合体に、第１の抗体／抗原／第２の抗体の複合体を形成するのに十分な時間および条件下、加えるステップ、ならびにｃ）検出可能な標識によって生成され、または検出可能な標識から放射されるシグナルを測定し、試験試料中のＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原を検出するステップを代替的に含むことができる。第１の抗体は、例えば、ｍＡｂ ３Ｃ１０、すなわち、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－９６３８を有するハイブリドーマ細胞系統によって生成されるモノクローナル抗体である。第２の抗体は、例えば、６Ｈ６、すなわち、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－１０５４１を有するハイブリドーマ細胞系統によって生成されるモノクローナル抗体である。 【０１１７】 イムノアッセイに基づく定量方法はよく知られており、例えば、イムノアッセイの出力から決定されたＰＩＶＫＡ－ＩＩの量を、閾値またはカットオフ値など、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのレベルがそれを超えるとＨＣＣもしくは肝癌であることを示す、予め決定されたレベルに比べることを含むことができる。・・・ 【０１２１】 抗体を標識化するのに適切な検出可能な物質は、様々な酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質および放射性物質を含む。・・・ 【０１２２】 抗体の標識化の代替として、検出可能な物質および非標識の抗体で標識化された組換えの標準を利用して、競合的イムノアッセイ（ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｏｎ ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ）によって生体液中の抗原がアッセイされ得る。・・・ 【０１２６】 上記のイムノアッセイによって試験され得る生体液の例は、血漿、尿、全血、乾燥全血、血清、脳脊髄液、唾液、涙液、鼻洗浄液または組織および細胞の水性抽出物を含む。・・・ 【０１２９】 抗原および抗体を同時に検出するために、本開示の目的に用いられ得る他のアッセイフォーマットは、デュアルアッセイストリップブロット（Ｄｕａｌ ａｓｓａｙ ｓｔｒｉｐ ｂｌｏｔ）、迅速試験、ウエスタンブロット、およびＡｒｃｈｉｔｅｃｔ（登録商標）アッセイなどにおける常磁性粒子の使用を含む（Ｆｒａｎｋ Ｑｕｉｎｎ、Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ、第２版、Ｄａｖｉｄ Ｗｉｌｄ編、３６３－３６７頁、２００１年）。このようなフォーマットは当業者には知られている。・・・ 【０１３１】 本明細書におけるあらゆる例示のフォーマット、および本発明によるあらゆるアッセイまたはキットは、米国特許第５，０８９，４２４号および第５，００６，３０９号などに記載されている通り、ならびにそれだけには限定されないが、ＡｂｂｏｔｔのＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）、ＡｘＳＹＭ、ＩＭＸ、ＰＲＩＳＭおよびＱｕａｎｔｕｍ ＩＩプラットフォームおよび他のプラットフォームを含めてＡｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ａｂｂｏｔｔ Ｐａｒｋ、ＩＬ）によって販売されている、自動化および半自動化のシステム（微粒子を含む固相が存在するシステムを含む）の使用に適用または最適化されていてよい。 【０１３２】 さらに、本発明のアッセイおよびキットはＡｂｂｏｔｔ’ｓ Ｐｏｉｎｔ ｏｆ Ｃａｒｅ（ｉ－ＳＴＡＴＩｍ）電気化学的イムノアッセイシステムを含むポイントオブケアアッセイシステムに適用または最適化されていてよい。免疫センサー、および免疫センサーを製造し、使い捨ての試験装置において操作する方法は、例えば、米国特許第５，０６３，０８１号、ならびに公開されている米国特許出願第２００３０１７０８８１号、第２００４００１８５７７号、第２００５００５４０７８号および第２００６０１６０１６４号において記載されている（これらに関する教示に関して本明細書に参照により組み込む）。 【０１３３】 さらに、ＰＩＶＫＡ－ＩＩは腫瘍の悪性度を誘発し得ることが注目されている（Ｓｈｉｒａｈａ、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２００５年２月２５日、２８０巻（８）、６４０９－１５頁）。したがって、本開示は、ＰＩＶＫＡ－ＩＩ活性が関連する疾患または障害（例えば、肝癌もしくはＨＣＣ）に罹患しているヒトにおける、ＰＩＶＫＡ－ＩＩ活性を低減するための方法も提供する。・・・」 ２ 無効理由６（明確性要件違反）について （１）請求人の主張の具体的内容 ア 本件特許の請求項２９は、請求項２８を引用し、請求項２８で特定される化合物をさらに特定しようとするものであるが、請求項２９に記載された化合物は、請求項２８に記載された化合物に含まれないから、従属関係が適切でなく、発明が明確でない。 イ 本件特許の請求項４５には、「ＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原のアミノ酸１－１３に抗原結合性ドメインを有し」と記載されているが、抗原結合ドメインは抗体が有するものであって、抗原が有するものではないから、上記記載は不明確である。 ウ 訂正後の請求項３の「ＰＩＶＫＡ-ＩＩを特異的に認識して結合する」は、不明確である。 次のとおり、ＰＩＶＫＡ-ＩＩの中には、訂正後の請求項３に係る抗原結合性タンパク質が「ＰＩＶＫＡ-ＩＩを特異的に認識して結合する」ことができないものが含まれるから、「ＰＩＶＫＡ-ＩＩを特異的に認識して結合する」を明確なものであるとすることはできない。 すなわち、ＰＩＶＫＡ-ＩＩには、次の４つのタイプがある。 タイプ(ｉ) ６位及び７位にＧｌｕを有するＰＩＶＫＡ－ＩＩ タイプ(ｉｉ) ６位にＧｌｕを有し、７位にＧｌａを有するＰＩＶＫＡ－ＩＩ タイプ(ｉｉｉ) ６位にＧｌａを有し、７位にＧｌｕを有するＰＩＶＫＡ－ＩＩ タイプ(ｉｖ) ６位及び７位にＧｌａを有するＰＩＶＫＡ－ＩＩ（但し、アミノ酸１－１３以外の位置に１つ以上のＧｌｕを有する）。 このうち、タイプ(ｉｖ)のＰＩＶＫＡ-ＩＩは、６位及び／又は７位がＧｌａであって、アミノ酸１－１３の領域はプロトロンビンと同一であるから、「プロトロンビン誘導ビタミンＫアンタゴニストＩＩ(ＰＩＶＫＡ-ＩＩ)のアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を含み」という「結合性タンパク質」は、タイプ(ｉｖ)の「ＰＩＶＫＡ-ＩＩを特異的に認識して結合する」ことはできず、「ＰＩＶＫＡ-ＩＩを特異的に認識して結合する」の意味が不明となる。 したがって、「ＰＩＶＫＡ-ＩＩを特異的に認識して結合する」を明確なものであるとすることはできない。 （２）当審の判断 ア 請求人の主張アについて 請求項２９の「請求項２８に記載の方法」は、本件訂正の訂正事項７により「請求項２７に記載の方法」と訂正され、従属関係が適切となった。したがって、請求人の主張アは理由がない。 イ 請求人の主張イについて 請求項４５の「ＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原のアミノ酸１－１３に抗原結合性ドメインを有し」は、本件訂正の訂正事項１０により「ＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原のアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性ドメインを有し」と訂正され、明確になった。したがって、請求人の主張イは理由がない。本件訂正発明４６～５１についても同様である。 ウ 請求人の主張ウについて 訂正後の請求項３は、上記「第４ 本件訂正発明」のとおり、 「【請求項３】 プロトロンビン誘導ビタミンＫアンタゴニストＩＩ（ＰＩＶＫＡ－ＩＩ）のアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を含み、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する、単離された結合性タンパク質（但し、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５９で特定されるハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体を除く）。」 というものである。ここで、訂正後の請求項３に係る「結合性タンパク質」の「抗原結合性部分」は、「プロトロンビン誘導ビタミンＫアンタゴニストＩＩ（ＰＩＶＫＡ－ＩＩ）のアミノ酸１－１３に結合する」ものなのだから、当該「結合性タンパク質」の特性である「ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する」とは、当該「結合性タンパク質」の「抗原結合性部分」が結合する「抗原結合性部分」の範囲内、すなわち、「プロトロンビン誘導ビタミンＫアンタゴニストＩＩ（ＰＩＶＫＡ－ＩＩ）のアミノ酸１－１３」の範囲内で「ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する」ことを意味することは、技術的に明らかである。 このことは、本件明細書の記載とも矛盾しない。すなわち、 本件明細書の段落【００２８】（本ｃ）には、従来のＰＩＶＫＡの検出方法では、「アミノ酸１７－２３のＧＬＡの外側（脱炭酸されたＧＬＡを含む。）は検出されない。」ため、「本明細書に開示する新たな抗体および方法は、ＰＩＶＫＡのアミノ酸１－１７（中略）の領域における脱炭酸された残基を検出するための方法」を提供するものであることが記載され、その方法は、「ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を有する第２の抗ＰＩＶＫＡ抗体を用いることによって実現され得」、「第２の抗体は、ＰＩＶＫＡの脱炭酸されたアミノ酸残基と強力に反応することができ、カルボキシル化された（通常の）アミノ酸残基と中程度に反応することができる」ものであることが記載されている。 また、本件明細書の段落【００２９】（本ｃ）には、「本開示の結合性タンパク質または抗体は、約１×１０－９Ｍまたはそれを超える、好ましくは約１×１０－１０Ｍまたはそれを超える、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸領域１－１３に対する解離定数（Ｋｄ）を有する。抗体はこのように、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識し結合することができる。抗体がＰＩＶＫＡ－ＩＩに結合した後は、例えば、プロトロンビンによって置換されない。」ことが記載されている。 以上の本件明細書の記載を踏まえると、本件明細書に開示される抗体は、ＰＩＶＫＡ－ＩＩの脱炭酸された残基を検出することを目的としたものであり、その抗体の一つ（第２の抗体、すなわち訂正後の請求項３に係る結合性タンパク質）は、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３の脱炭酸されたアミノ酸残基と強力に反応し、反応後（結合後）は、脱炭酸されていない通常のアミノ酸１－１３、すなわち、プロトロンビンのアミノ酸１－１３により、置換されない特性を有し、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識し、結合することができるものであることが理解できる。そして、プロトロンビンのアミノ酸１－１３の範囲内において、脱炭酸されるアミノ酸残基ＧＬＡは、６位と７位にのみ存在するから（段落【０１７３】（本ｄ）、および、配列番号１９、２０を参照）、ＰＩＶＫＡ-ＩＩにおける６位及び／又は７位のＧｌｕが、プロトロンビンの６位及び７位のＧｌａとは異なる特異的な構造部位であるといえ、訂正後の請求項３に係る「結合性タンパク質」は、当該特異的な構造部位により「ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する」ものであると理解できる。 したがって、訂正後の請求項３は、不明確であるとはいえない。 また、訂正後の請求項４～５、１３、１５～２２、２５～３１、３３～３７、４０、４５～５３、５５、５７～６９、７１、７２は、いずれも、訂正後の請求項３を直接または間接的に引用するか、それと同様の「ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する、単離された結合性タンパク質」を発明特定事項とするものを含むところ、本件訂正発明３の判断で示したとおり、「ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する、単離された結合性タンパク質」は、不明確なものであるとは認められないのだから、同様に、明確性要件を満たすものである。 エ 小括 以上のとおりであるから、請求人が主張する無効理由６は理由がない。 ３ 無効理由４（サポート要件違反）について （１）請求人の主張の具体的内容 ア 本件特許の請求項４５には、「ＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原のアミノ酸１－１３に抗原結合性ドメインを有し」と記載されているが、そもそも抗原結合ドメインは抗体が有するものであって、抗原が有するものではなく、また、抗原結合性ドメインを有する抗原について、本件明細書に記載も示唆もない。 イ 無効理由６で指摘したとおり、ＰＩＶＫＡ－ＩＩの中には、アミノ酸１－１３の領域がプロトロンビンと同一であるから（タイプ（ｉｖ））、訂正後の請求項３に係る「結合性タンパク質」には「ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する」ことができないものも含まれ、そのような結合性タンパク質は、ＰＩＶＫＡ－ＩＩだけでなくプロトロンビンをも検出してしまうから、本件訂正発明の課題（肝細胞癌などの診断、処置、予防において用いられる抗体の提供など）を解決できない。 （２）当審の判断 ア 請求人の主張アについて 請求項４５の「ＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原のアミノ酸１－１３に抗原結合性ドメインを有し」は、本件訂正の訂正事項１０により「ＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原のアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性ドメインを有し」と訂正され、抗原結合性ドメインがＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原が有するものでないことが明確化されたから、本件訂正発明４５は、本件明細書に記載されたものである。本件訂正発明４６～５１についても同様である。したがって、請求人の主張アは理由がない。 イ 請求人の主張イについて 本件明細書によると、「ＰＩＶＫＡ－ＩＩは・・・ＨＣＣ患者の場合に上昇することが知られている」ところ、「腫瘍学において、ＨＣＣまたは肝癌を検出するのに有効に用いられ得る抗体の開発が極めて必要」であることから（いずれも【０００２】）、本件訂正発明３は、ＨＣＣまたは肝癌を検出するための、「ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を含む単離された結合性タンパク質を提供する」（【０００５】）ことを技術課題にするものと認められる。 そのような課題に対して、本件訂正発明３の「結合性タンパク質」は、ＰＩＶＫＡ-ＩＩのアミノ酸１－１３の範囲内（６位及び／又は７位）における特異的な構造を認識して結合するという特徴（結合特異性）を有するものであり、本件明細書の実施例３には、上記「結合性タンパク質」の一つである抗体６Ｈ６が、肝細胞癌などで発生するＰＩＶＫＡ－ＩＩに対して特異的に結合することが実験データにより具体的に裏付けられている。 そうすると、これらの記載から、本件訂正発明３は、当業者が、上記の発明の課題を解決できると認識しうる範囲のものと認められる。 請求人は、請求項３には、アミノ酸１－１３の領域がプロトロンビンと同一のＰＩＶＫＡ－ＩＩ（タイプ（ｉｖ））に対する結合性タンパク質、すなわちＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合するとはいえない結合性タンパク質が含まれ、そのような結合性タンパク質は、ＰＩＶＫＡ－ＩＩだけでなくプロトロンビンをも検出してしまうことを理由に、サポート要件違反を主張する。しかし、上記２（２）イのとおり、訂正後の請求項３に係る「結合性タンパク質」は、「プロトロンビン誘導ビタミンＫアンタゴニストＩＩ（ＰＩＶＫＡ－ＩＩ）のアミノ酸１－１３」の範囲内で「ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する」ものであるのだから、請求人の上記主張は前提において誤りである。 また、訂正後の請求項４～５、１３、１５～２２、２５～３１、３３～３７、４０、４５～５３、５５、５７～６９、７１、７２は、いずれも、訂正後の請求項３を直接または間接的に引用するか、それと同様の「ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する、単離された結合性タンパク質」を発明特定事項とするものを含むところ、本件訂正発明３の判断で示したとおり、本件明細書には、「ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する、単離された結合性タンパク質」を用いることで、本件訂正発明の課題を解決できると当業者が認識し得る記載があるのだから、同様に、サポート要件を満たすものである。 ウ 小括 以上のとおりであるから、請求人が主張する無効理由５は理由がない。 ４ 無効理由５（実施可能要件違反）について （１）請求人の主張の具体的内容 ア 本件特許の請求項２２には、「ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１３－２７に結合する抗原結合性部分を有する第１の抗体」と「ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３に結合する項弦月合成部分を有する第２の抗体」を利用する方法であって、いわゆるサンドイッチＥＬＩＳＡに係る方法が記載されているが、第１及び第２の抗体の抗原結合性部分がアミノ酸１３で重複するので、サンドイッチＥＬＩＳＡ、すなわち請求項２２の方法は実施できない。 イ 無効理由６で指摘したとおり、ＰＩＶＫＡ－ＩＩの中には、アミノ酸１－１３の領域がプロトロンビンと同一であって（タイプ（ｉｖ））、訂正後の請求項３に係る「結合性タンパク質」が「ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する」ことができないものも含まれるから、本件訂正発明３には、「ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する」とはいえない「結合性タンパク質」が含まれる。そのような「結合性タンパク質」は、理解することができないし、本件明細書は、そのような結合性タンパク質は記載していないので、本件訂正発明３について実施することができる程度に記載したものということはできない。 （２）当審の判断 ア 請求人の主張アについて 本件訂正発明２２の「ＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原のアミノ酸１３－２７に結合する抗原結合性ドメインを有する第１の抗体」及び「ＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原のアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性ドメインを有し、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合し、検出可能な標識に付着している第２の抗体」なる記載について検討する。これらの抗体は、一般的な抗体の抗原決定基（エピトープ）の長さは数アミノ酸残基であることをふまえると（必要であれば、免疫学辞典（第１版第１刷１９９３年１１月１５日発行）第１８５－１８６頁「抗原決定基」の項等を参照されたい。）、抗原結合性ドメイン又は抗原結合性部分がＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原のアミノ酸１３－２７の全てのアミノ酸に結合するものであること、すなわち、アミノ酸１３－２７の全てのアミノ酸がその抗体のエピトープであることは技術的に想定できないし、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３の全てのアミノ酸に結合するものであること、すなわち、アミノ酸１－１３の全てのアミノ酸がその抗体のエピトープであることは技術的に想定できない。また、本件明細書においても、３Ｃ１０モノクローナル抗体のＰＩＶＫＡ－ＩＩペプチド（１３－２７）への結合、６Ｈ６モノクローナル抗体のＰＩＶＫＡ－ＩＩペプチド（１－１３）への結合を実験的に確認しただけであり（実施例２、７）、抗原結合性ドメイン又は抗原結合性部分がＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原のアミノ酸１３－２７の全てのアミノ酸をエピトープとすること、及びＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３の全てのアミノ酸をエピトープとすることを確認したものではない。そうすると、当該発明特定事項は、抗原結合性ドメインがＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原のアミノ酸１３－２７の全てのアミノ酸をエピトープとすること、及びＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３の全てのアミノ酸をエピトープとすることを意味するものではなく、抗原結合性部分が結合する抗原のエピトープが含まれる範囲としてＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１３－２７及びアミノ酸１－１３をそれぞれ特定するものと理解できる。そうすると、各モノクローナル抗体のエピトープがＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１３において必然的に重複するものではない。 ここで、サンドイッチＥＬＩＳＡで使用する２つの抗体は、１つの抗原を異なるエピトープで認識する必要があることは、その測定原理から明らかであり、１つの抗原を検出するために２つのモノクローナル抗体を使用するサンドイッチＥＬＩＳＡにおいて、各モノクローナル抗体のエピトープの重要な部位が、同じアミノ酸で重複することがなく、抗体－抗原－抗体の複合体を形成できるように設定することは当業者にとって当然のことであるといえる。また、本件明細書において、２つの抗体を使用する方法について記載した部分で、２つの抗体が、ＰＩＶＫＡ－ＩＩに特異的に結合することができるが異なる抗原結合性ドメインを有し、ＰＩＶＫＡ－ＩＩタンパク質の異なるサブセットのアミノ酸１－３３に結合することによって、単一のモノクローナル抗体の使用よりも極めて高いシグナルを生成することができるとしているのは、これらの抗体が、抗体－抗原－抗体の複合体を形成できるように設定することが前提であるといえ、当業者が第１の抗体と抗原と第２の抗体の複合体が形成できるように材料を選択することができることは明らかである。そうすると、本件訂正発明２２は、明細書及び出願時の技術常識に基づき、当業者がこの方法を使用できるように記載されている。 以上のとおりであるから、請求人の主張アは理由がない。本件訂正発明２５～３０、４５～５１についても同様である。 イ 請求人の主張イについて 上記１の無効理由６の判断で示したとおり、本件訂正発明３の「結合性タンパク質」は、ＰＩＶＫＡ-ＩＩのアミノ酸１－１３の範囲内（６位及び／又は７位）における特異的な構造を認識して結合する（結合特異性）ものである。 そして、本件明細書の段落【００７３】－【００８４】（本ｅ）には、抗原特異的な抗体、すなわち「結合性タンパク質」を産生する方法が日常的なものであることが説明されており、段落【０１６６】－【０１８１】（本ｄ）には、実施例として、ＰＩＶＫＡ－ＩＩの１－１７アミノ酸のペプチドを免疫原として用いて、上記（本ｅ）に記載されたような日常的な方法により、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸６位及び７位のＧｌｕを特異的に検出可能な抗体を得られたことが具体的に記載されている。また、本件訂正発明３の「結合性タンパク質」は、ＰＩＶＫＡ-ＩＩのアミノ酸１－１３の範囲内（６位及び／又は７位）における特異的な構造を認識して結合する（結合特異性）ことで、６位及び／又は７位における特異的な構造を有するＰＩＶＫＡ－ＩＩの検出に使用できることは明らかであり、検出方法についても、本件明細書の段落【０１１４】－【０１３２】（本ｆ）において、従来のアッセイ方法を使用できることが記載されている。 以上の本件明細書の記載からすると、当業者であれば、本件訂正発明３の「結合性タンパク質」を、過度の試行錯誤を要することなく製造し、使用することが可能であると認められる。 請求人は、請求項３には、アミノ酸１－１３の領域がプロトロンビンと同一のＰＩＶＫＡ－ＩＩ（タイプ（ｉｖ））に対する結合性タンパク質、すなわちＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合するとはいえない結合性タンパク質が含まれ、そのような結合性タンパク質は本件明細書に記載されていないことを理由に、本件訂正発明３が実施可能要件に違反している旨を主張する。しかし、上記２（２）イのとおり、訂正後の請求項３に係る「結合性タンパク質」は、「プロトロンビン誘導ビタミンＫアンタゴニストＩＩ（ＰＩＶＫＡ－ＩＩ）のアミノ酸１－１３」の範囲内で「ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する」ものであるのだから、請求人の上記主張は前提において誤りである。 また、訂正後の請求項４～５、１３、１５～２２、２５～３１、３３～３７、４０、４５～５３、５５、５７～６９、７１、７２は、いずれも、訂正後の請求項３を直接または間接的に引用するか、それと同様の「ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する、単離された結合性タンパク質」を発明特定事項とするものを含むところ、本件訂正発明３の判断で示したとおり、本件明細書には、「ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する、単離された結合性タンパク質」について当業者が実施できる程度の記載がなされているのだから、同様に、実施可能要件を満たすものである。 ウ 小括 以上のとおりであるから、請求人が主張する無効理由５は理由がない。 ５ 無効理由１（新規性欠如）について （１）甲４－１発明の認定 甲４は、Ｈ－１１と呼ぶ抗体の性質を論じる論文と認められ、そのＨ－１１とは、「精製したヒトプロテインＣをマウスに注射することによって生産されたマウスモノクローナル抗体（Ｈ－１１と表す。）」であることが記載されている（前記第６の２（２）（ア））。 そうすると、甲４には、次の発明（以下、「甲４－１発明」という。）が記載されているものと認める。 「精製したヒトプロテインＣをマウスに注射することによって生産されたマウスモノクローナル抗体Ｈ－１１。」 （２）本件訂正発明３と甲４－１発明との対比 甲４－１発明の「マウスモノクローナル抗体Ｈ－１１」は、本件訂正発明３の「単離された結合性タンパク質」に相当するので、本件訂正発明３と甲４－１発明との一致点及び相異点は次のとおりのものである。 一致点 「単離された結合性タンパク質（但し、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５９で特定されるハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体を除く）。」 相違点 単離された結合性タンパク質が、本件訂正発明３では、「プロトロンビン誘導ビタミンＫアンタゴニストＩＩ（ＰＩＶＫＡ－ＩＩ）のアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を含み、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する」ものであるのに対して、甲４－１発明では、そのような特定がない点。 （３）判断 上記相違点について検討すると甲４には、Ｈ－１１抗体と各種ビタミンＫ依存性タンパク質（断片）との結合実験の結果から、Ｈ－１１抗体の抗原決定基を当該タンパク質のＮ末端１２アミノ酸領域にマッピング（位置決め）したことが記載され（第６の２（３）（ケ）、（コ））、Ｈ－１１抗体との結合実験が行われた各種ビタミンＫ依存性タンパク質の当該領域のアミノ酸配列がアラインメント（比較）された図８には、ヒトプロトロンビンの１－１２位が記載され、当該図中の太字の残基（ヒトプロトロンビンの場合は、ＦＬＥＥ・Ｒ）がＨ－１１抗体の結合に必要とされ得る（may be required for antibody H-11 binding）ことが記載されている（なお、６位及び７位のＥは、ヒトプロトロンビンについては、γカルボキシル化されたグルタミン酸と認める、第６の２（４）（キ））。そして、甲４には、Ｈ－１１抗体の抗体認識のためには抗原決定基におけるグルタミン酸残基のカルボキシル化を必要としないこと、すなわち、抗原決定基のグルタミン酸残基がカルボキシル化されていてもされていなくてもＨ－１１抗体は認識することが記載されている（第６の２（３）（ウ）～（オ））。 これらのことから、甲４－１に係る抗体Ｈ－１１抗は、ヒトプロトロンビンの１－１２位に含まれるγカルボキシル化グルタミン酸残基（６位及び７位）が、脱カルボキシル化されたもの、すなわち、ＰＩＶＫＡ－ＩＩの１－１２位にも結合するものであって、上記相違点のうち「ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する」という特性は有さないものであると理解される。 したがって、本件訂正発明３は、甲４－１発明に対して新規性を有する。 （４）請求人の主張について ア 請求人の主張 無効理由６で指摘したとおり、ＰＩＶＫＡ－ＩＩの中には、アミノ酸１－１３の領域がプロトロンビンと同一であって（タイプ（ｉｖ））、訂正後の請求項３に係る「結合性タンパク質」が「ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する」ことができないものも含まれるから、本件訂正発明３は、どのように解釈しても、甲４に対して新規性を有しない。 すなわち、本件訂正発明３は、以下の３種類の解釈ができる。 解釈１．本件訂正発明３は、タイプ（ｉｖ）のＰＩＶＫＡ－ＩＩにも結合する抗体を含む。 解釈２．本件訂正発明３は、タイプ（ｉｖ）のＰＩＶＫＡ－ＩＩにも結合する抗体を含むが、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸４－９位において、アミノ酸配列が異なる場合は結合しない。 解釈３．本件訂正発明３は、ＰＩＶＫＡ－ＩＩの６位及び／又は７位のＧｌｕを含む構造と、それとは異なる構造、例えばプロトロンビンの６位及び／又は７位のＧｌａを含む構造、とを識別し、両者に対する反応性が異なる抗体を含む。 解釈１．の場合 甲４の抗体Ｈ－１１は、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３にもプロトロンビンのアミノ酸１－１３にも結合すると認められる。したがって、本件訂正発明３は、甲４発明と同一である。 解釈２．の場合 甲４の抗体Ｈ－１１は、ウシの第ＩＸ因子には結合しないのだから、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３には結合し、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸４－９位において、アミノ酸配列が異なる場合は結合しないものと認められる。したがって、本件訂正発明３は、甲４発明と同一である。 解釈３．の場合 甲１８には、カルシウムイオンの存在下では、抗体Ｈ－１１は、プロトロンビンよりも熱脱カルボキシル化したプロトロンビンに対して親和性が高いことが記載されている。熱脱カルボキシル化したプロトロンビンは、６位及び７位がＧｌｕのＰＩＶＫＡ－ＩＩに相当するため、カルシウムイオン存在下においては、抗体Ｈ－１１は、ＰＩＶＫＡ－ＩＩに特異的に結合する。したがって、本件訂正発明３は、甲４発明と同一である。 イ 判断 上記第７の２（２）イのとおり、本件訂正発明３に係る「結合性タンパク質」は、「プロトロンビン誘導ビタミンＫアンタゴニストＩＩ（ＰＩＶＫＡ－ＩＩ）のアミノ酸１－１３」の範囲内で「ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する」ものであるのだから、請求人の上記主張のうち解釈１及び２に基づく主張は前提において誤りである。 また、請求人は、解釈３に基づいて、甲１８を参酌すると甲４の抗体Ｈ－１１は、カルシウムイオン存在下であれば、ＰＩＶＫＡ－ＩＩに特異的に結合するから、本件訂正発明３と同一である旨主張する。しかし、甲１８において、カルシウムイオン存在下において反応性に違いがあるにしても、カルシウムイオン濃度が１０ｍｍｏｌ／Ｌという特殊な条件下での反応性の違いであって、甲１８の記載のみから抗体Ｈ－１１が「ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する」ものであると認めることができない。 したがって、請求人の主張は、いずれも失当である。 （５）小括 以上のとおりであるから、請求人が主張する無効理由１は理由がない。 ６ 無効理由２（進歩性欠如）について （１）引用発明の認定 ア 甲４発明の認定 （ア）甲４－１発明 上記第７の５（１）に記載したとおり、甲４には、以下のとおりの甲４－１発明が記載されているものと認められる。 「精製したヒトプロテインＣをマウスに注射することによって生産されたマウスモノクローナル抗体Ｈ－１１。」 （イ）甲４－２発明 甲４には、ハイブリドーマＨ－１１の調製方法として、「ＢＡＬＢ／ｃマウスを、完全フロイントアジュバント中の５０μｇのプロテインＣで複数部位で皮下的に免疫した。完全フロイントアジュバント中の５０μｇのブースター注射を、４、８、及び１２週に行った。最後の注射の６週後、血清力価を、プロテインＣ抗体の存在について決定し、最も高い抗プロテインＣ力価を有するマウスは、生理食塩水中の１００μｇのプロテインＣを静脈内的に受けた。４日後、マウスを、クロロホルムで殺傷し、脾臓を摘出した。２匹のマウスからの脾臓細胞（３×１０８細胞）を、３×１０７のミエローマ細胞と混合し、遠心分離した。細胞ペレットを、３ｍｌの５０％ポリエチレングリコール１０００に注意深く懸濁し、３分間穏やかに混合した。次いで、懸濁物を、１０００ｒｐｍで３分間遠心分離し、上清を廃棄し、ペレットを、１５ｍｌの胎仔血清に再懸濁した。容量を、培養培地で７２ｍｌまで上げ、０．１ｍｌの細胞混合物を、９６ウェルマイクロタイタープレートの各ウェルにピペッティングした。次の日、各ウェルに、２０％胎仔血清及びヒポキサンチン／アミノプテリン／チミジンを含む０．１ｍｌの培養培地を加えた。融合の２日後、胸腺細胞を、フィーダー細胞として供するために添加した。抗プロテインＣ抗体についてのハイブリドーマ上清のスクリーニングを、ハイブリドーマが目視できるときに実施した。ハイブリドーマ産生抗プロテインＣ抗体を、限界希釈により３回クローニングした。 ハイブリドーマスクリーニングアッセイ－抗プロテインＣ抗体についてのハイブリドーマのスクリーニングを、プロテインＣコートマイクロタイタープレートを用いた固相酵素免疫測定法により実施した。」と記載されているから（上記第６の２（３）（ア））、甲４には、次の発明（以下、「甲４－２発明」という。）が記載されているものと認められる。 「マウスモノクローナル抗体Ｈ－１１を発現するハイブリドーマ細胞系統を生成する方法であって、ＢＡＬＢ／ｃマウスを、精製したヒトプロテインＣで免疫化し、４、８、１２週に追加免疫を行い、最後の追加免疫の６週後にプロテインＣ抗体の力価を測定する、免疫化ステップ、前記マウスの脾臓から細胞を収集し、精製するステップ、ハイブリドーマを生成するために、前記脾臓細胞をミエローマと融合するステップ、ならびにプロテインＣに結合する抗体を発現するハイブリドーマ細胞系統を選択するステップを含む、マウスモノクローナル抗体Ｈ－１１を発現するハイブリドーマ細胞系統を生成する方法。」 イ 甲１発明の認定 甲１の標題及び要約では、血清デス－γ―カルボキシプロトロンビン（ＤＣＰ、γ―カルボキシル基が脱カルボキシル化されているプロトロンビン）は、肝細胞がん（ＨＣＣ）の有益な診断用マーカーであり、モノクローナル抗体ＭＵ－３により測定されることが記載されており、この論文では、ＭＵ－３のエピトープを分析し、ＨＣＣと良性の肝疾患との間のＤＣＰの違いを明らかにすることが目的であることが記載されている（第６の１（１）及び（２））。そして、その分析手法として直接結合ＥＬＩＳＡについては、「２．５ 直接結合ＥＬＩＳＡ ＭＵ－３抗体のデカルボキシル化タンパク質及び合成ペプチドに対する反応性は、９６ウェルマイクロタイタープレート（Ｎａｌｇｅ Ｎｕｎｃ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、 Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ、 ＮＹ、 ＵＳＡ）を使用したＥＬＩＳＡによって測定した。ＴＢＳ（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、 ０．１Ｍ ＮａＣｌ、 ｐＨ８．０）に溶解したデカルボキシル化タンパク質及び合成ペプチドを、室温で５時間インキュベートすることによりマイクロタイタープレートのウェルにコートした。ＴＢＳで３回洗浄した後、ウェルを１％ウシ血清アルブミン－ＴＢＳ（ＢＳＡ－ＴＢＳ）で１時間ブロッキングした。ＴＢＳで洗浄した後、０．１％Ｔｗｅｅｎ２０－ＢＳＡ－ＴＢＳで様々な濃度に希釈したＭＵ－３抗体の溶液を各ウェルに添加した。室温で２時間インキュベートして洗浄した後、ＭＵ－３抗体と反応したウェルを西洋ワサビペルオキシダーゼで標識したウサギ抗マウスＩｇＧ抗体（ＩＣＮ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、 Ｉｒｖｉｎｅ、 ＣＡ、 ＵＳＡ）の溶液でさらに室温で１時間インキュベートした。さらなる洗浄の後、ウェルは１ｍｇ／ｍｌのо－フェニレンジアミンと０．１ｍＭクエン酸緩衝液に溶解した２ｍＭの過酸化水素とｐＨ５．５でインキュベートした。反応は２Ｎの硫酸を加えて停止させ、マイクロプレート光度計を使用して４９２ｎＭの吸光度を測定した。」と具体的に記載されている（第６の１（３）（ウ））。また、サンドイッチＥＬＩＳＡについても、「２．６ サンドイッチＥＬＩＳＡ サンドイッチＥＬＩＳＡは、デカルボキシル化プロテインに代えてＭＵ－３抗体をウェルにコートした点、西洋ワサビペルオキシダーゼで標識したウサギ抗マウスＩｇＧ抗体に代えて、西洋ワサビペルオキシダーゼで標識した、親和性精製されたウサギ抗プロトロンビン抗体のＦａｂを使用した点を除き、直接結合ＥＬＩＳＡで使用した方法で実施した。３％ＢＳＡ－ＴＢＳで希釈したデカルボキシル化プロトロンビンは参照標準タンパク質として用いられた。」と具体的に記載されている（第６の１（３）（エ））。さらに、使用したＭＵ－３抗体について、「ＭＵ－３抗体のエピトープは少なくとも残基１７－２７から構成されることが明らかとなる。」と記載されている（第６の１（３）（キ））。 そうすると、甲１には次の発明（以下、「甲１－１発明」という。）が記載されているものと認められる。 「試験試料中のデス－γ―カルボキシプロトロンビン（ＤＣＰ）を検出する方法であって、ａ）試験試料を、デス－γ―カルボキシプロトロンビン（ＤＣＰ）のアミノ酸１７－２７に結合する抗原結合部分を有するモノクローナル抗体ＭＵ－３と、接触させるステップ、ｂ）西洋ワサビペルオキシダーゼで標識したウサギ抗プロトロンビン抗体のＦａｂを、ＭＵ－３とデス－γ―カルボキシプロトロンビン（ＤＣＰ）の複合体に、加えるステップ、ならびにｃ）西洋ワサビペルオキシダーゼによって生成される蛍光を測定し、試験試料中のデス－γ―カルボキシプロトロンビン（ＤＣＰ）を検出するステップを含む、試験試料中のデス－γ―カルボキシプロトロンビン（ＤＣＰ）を検出する方法。」 （２）対比・判断 ア 本件訂正発明３～５について （ア）本件訂正発明３と甲４－１発明との対比 本件訂正発明３と甲４－１発明との対比は、上記第７の５（２）の通りである。 （イ）本件訂正発明３についての判断 上記相違点について検討する。 甲４の全体をみても、「プロトロンビン誘導ビタミンＫアンタゴニストＩＩ（ＰＩＶＫＡ－ＩＩ）のアミノ酸１－１３」に対して特異的に認識して結合する抗体を取得することは記載されてないし、甲１、５～１０にも、当該抗体に関する記載や示唆が見当たらないから、甲４－１発明における「マウスモノクローナル抗体Ｈ－１１」を、ＰＩＶＫＡ－ＩＩに対して特異的に認識して結合する抗体とすることが、当業者に容易に動機づけられるとはいえない。 したがって、本件訂正発明３は、甲４－１発明、すなわち、甲４に記載された発明に、甲１、５～１０に記載された事項を組み合わせても当業者が容易に発明することができたものとはいえない。 （ウ）請求人の主張について 請求人は、甲４、要すれば甲１８の記載から「ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する」ものとして捉えることは容易と主張するが、上記５（４）のとおり、甲１８を参酌しても甲４に記載された抗体Ｈ－１１が、ＰＩＶＫＡ-ＩＩのアミノ酸１－１３の６位及び／又は７位における特異的な構造を認識して結合する（結合特異性）ものであるとは認められないから、請求人の主張は失当である。 （エ）本件訂正発明４、５についての判断 本件訂正発明４は、上記本件訂正発明３の結合能を「４．０×１０－９またはそれより低い結合解離定数（Ｋｄ）を有する」ものであることを特定するものであり、本件訂正発明５は、結合解離定数をさらに「１．０×１０－９から１．０×１０－１０までの結合解離定数（Ｋｄ）を有する」ものであることを特定するものである。したがって、本件訂正発明４、５は、上記本件訂正発明３と甲４－１発明との対比結果における相違点に加えて、それぞれ上記の点でさらに相違している。 上記相違点について検討すると、甲４の全体をみても、「プロトロンビン誘導ビタミンＫアンタゴニストＩＩ（ＰＩＶＫＡ－ＩＩ）のアミノ酸１－１３」に対して特異的に認識して結合する抗体を取得することは記載されてないし、甲１、５～１０にも、当該抗体に関する記載や示唆が見当たらないから、本件訂正発明４、５は、甲４及び他の甲号証に記載された発明に基づいて、当業者が容易に発明することができたものとはいえない。 請求人は、本件訂正発明３が進歩性を有さないので、本件訂正発明４、５も進歩性を有さないと主張するが、上述の通り、請求人の主張は失当である。 イ 本件訂正発明１３、１５～２１について （ア）本件訂正発明１３と甲４－１発明との対比 甲４－１発明の「マウスモノクローナル抗体Ｈ－１１」は、本件訂正発明１３の「抗体」に相当するので、本件訂正発明１３と甲４－１発明との一致点及び相違点は次のとおりのものである。 一致点 「抗体（但し、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５９で特定されるハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体を除く）。」 相違点１ 抗体が、本件訂正発明１３では、「プロトロンビン誘導ビタミンＫアンタゴニストＩＩ（ＰＩＶＫＡ－ＩＩ）のアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を含み、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する」ものであるのに対して、甲４－１発明では、そのような特定がない点。 相違点２ 本件訂正発明１３は、試験試料中のＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原を検出する方法であって、その具体的なステップが特定されているのに対して、甲４－１発明は、そのような特定がない点 （イ）本件訂正発明１３についての判断 上記相違点について検討する。 甲４の全体をみても、「プロトロンビン誘導ビタミンＫアンタゴニストＩＩ（ＰＩＶＫＡ－ＩＩ）のアミノ酸１－１３」に対して特異的に認識して結合する抗体を取得すること（相違点１）は記載されてないし、甲１、５～１０にも、当該抗体に関する記載や示唆が見当たらないから、甲４－１発明における「マウスモノクローナル抗体Ｈ－１１」を、ＰＩＶＫＡ－ＩＩに対して特異的に認識して結合する抗体とすることが、当業者に容易に動機づけられるとはいえない。 したがって、相違点２を検討するまでもなく、本件訂正発明１３は、甲４に記載された発明に、甲１、５～１０に記載された事項を組み合わせても当業者が容易に発明することができたものとはいえない。 （ウ）請求人の主張について 請求人は、甲４には、Ｈ－１１が「ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する」抗体であることは実質的に記載されているので、当業者であればその記載から「ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する」も容易に想到し、本件訂正発明１３も容易想到であると主張するが、上述のとおり、いずれの甲各号証にも、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３領域内のアミノ酸６位及び／又は７位のＧｌｕという特異的な構造を認識して結合する（結合特異性）ことについて、記載も示唆もされていない以上、請求人の主張は失当である。 （エ）本件訂正発明１５～２１についての判断 本件訂正発明１５は、本件訂正発明１３において、「試験試料」を「全血、血清、または血漿」に特定するものである。本件訂正発明１６は、本件訂正発明１３において、「抗体が検出可能な標識で標識化され」、「その標識から放射されるシグナルを測定するステップ」を含むことを特定するものである。本件訂正発明１７は、本件訂正発明１６において、「検出可能な標識」が「放射性標識、酵素標識」等であることを特定するものである。本件訂正発明１８は、本件訂正発明１６において、「検出可能な標識」が「アクリジニウム化合物」であることを特定するものである。本件訂正発明１９は、本件訂正発明１８において、「過酸化水素の源を生成」するステップを含む検出ステップであることを特定するものである。本件訂正発明２０は、本件訂正発明１８において、「アクリジニウム化合物」が式Ｉで示される化合物であることを特定するものである。また、本件訂正発明２１は、本件訂正発明１８において、「アクリジニウム化合物」が式ＩＩで示される化合物であることを特定するものである。 このとおり、本件訂正発明１５～２１は、上記本件訂正発明１３と甲４－１発明との対比結果における相違点に加えて、それぞれ上記の点でさらに相違しているのだから、上記（イ）に示したのと同様の理由により、本件訂正発明１５～２１は、甲４及び他の甲号証に記載された発明に基づいて、当業者が容易に発明することができたものとはいえない。 ウ 本件訂正発明２２、２５～３０について （ア）本件訂正発明２２と甲１－１発明との対比 甲１－１発明の「デス－γ―カルボキシプロトロンビン（ＤＣＰ）」は、当該技術分野において「ＰＩＶＫＡ－ＩＩ」と同義で使用される用語であるから（必要であれば、Ｃａｎｃｅｒ，１９８８，Ｖｏｌ．６１，Ｎｏ．８，ｐｐ．１６２１－１６２８の要約等を参照されたい。）、甲１－１発明の「試験試料中のデス－γ―カルボキシプロトロンビン（ＤＣＰ）を検出する方法」は、本件訂正発明２２の「試験試料中のＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原を検出する方法」に相当する。また、甲１－１発明の「試験試料を、デス－γ―カルボキシプロトロンビン（ＤＣＰ）のアミノ酸１７－２７に結合する抗原結合部分を有するモノクローナル抗体ＭＵ－３と、接触させるステップ」は、本件訂正発明２２の「試験試料を、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１３－２７に結合する抗原結合性部分を有する第１の抗体と、・・・接触させるステップ」に相当し、甲１－１発明の「西洋ワサビペルオキシダーゼで標識したウサギ抗プロトロンビン抗体のＦａｂを、ＭＵ－３とデス－γ―カルボキシプロトロンビン（ＤＣＰ）の複合体に、加えるステップ」は、本件訂正発明２２の「検出可能な標識にコンジュゲートしている、第２の抗体を第１の抗体／抗原複合体に、・・・加えるステップ」に相当し、甲１－１発明の「西洋ワサビペルオキシダーゼによって生成される蛍光を測定し、試験試料中のデス－γ―カルボキシプロトロンビン（ＤＣＰ）を検出するステップ」は、本件訂正発明２２の「検出可能な標識によって生成され、または検出可能な標識から放射されるシグナルを測定し、試験試料中のＰＩＶＫＡ―ＩＩ抗原を検出するステップ」に相当する。また、本件訂正発明２２では、試験試料を第１の抗体と接触させる条件について、第１の抗体－抗原複合体の形成に十分な時間および条件で行うことや、第２の抗体と第１の抗体／抗原複合体に加える条件について、第１の抗体／抗原／第２の抗体の複合体を形成するのに十分な時間及び条件で行うことが特定されているが、甲１には、これらに対応するステップの実験条件が詳細に記載されており、その条件については複合体の形成に十分であるとの記載はないものの、サンドイッチＥＬＩＳＡを実施することができていることから、その原理をふまえれば当然に複合体の形成に十分な時間および条件を満たすものであるということができる。 したがって、本件訂正発明２２と甲１－１発明との一致点及び相違点は次のとおりのものである。 一致点 「試験試料中のＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原を検出する方法であって、試験試料を、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１３－２７に結合する抗原結合性部分を有する第１の抗体と接触させるステップ、検出可能な標識にコンジュゲートしている第２の抗体を第１の抗体／抗原複合体に加えるステップ、検出可能な標識によって生成され、または検出可能な標識から放射されるシグナルを測定し、試験試料中のＰＩＶＫＡ―ＩＩ抗原を検出するステップを含む、試験試料中のＰＩＶＫＡ－Ｉ抗原を検出する方法。」 相違点 第２の抗体が、本件訂正発明２２では、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を含み、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合するのに対して、甲１－１発明では、ウサギ抗プロトロンビン抗体のＦａｂであることが特定されるのみで、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を含み、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合することが特定されていない点。 （イ）本件訂正発明２２についての判断 上記相違点について検討する。 甲４の全体をみても、「プロトロンビン誘導ビタミンＫアンタゴニストＩＩ（ＰＩＶＫＡ－ＩＩ）のアミノ酸１－１３」に対して特異的に認識して結合する抗体を取得することは記載されてないし、甲５～１０にも、当該抗体に関する記載や示唆が見当たらないから、甲１－１発明における「ウサギ抗プロトロンビン抗体のＦａｂ」を、ＰＩＶＫＡ－ＩＩに対して特異的に認識して結合する抗体とすることが、当業者に容易に動機づけられるとはいえない。 したがって、本件訂正発明２２は、甲１に記載された発明に、甲４～１０に記載された事項を組み合わせても当業者が容易に発明することができたものとはいえない。 （ウ）請求人の主張について 請求人は、甲４には、Ｈ－１１が「ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する」抗体であることは実質的に記載されているので、当業者であればその記載から「ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する」も容易に想到し、本件訂正発明２２も容易想到であると主張するが、上述のとおり、いずれの甲号証にも、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３の６位及び／又は７位における特異的な構造を認識して結合する（結合特異性）ことについて、記載も示唆もされていない以上、請求人の主張は失当である。 （エ）本件訂正発明２５～３０についての判断 本件訂正発明２５は、本件訂正発明２２において、「試験試料」を「全血、血清、または血漿」に特定するものである。本件訂正発明２６は、本件訂正発明２２において、「検出可能な標識が放射性標識、酵素標識」等であることを特定するものである。本件訂正発明２７は、本件訂正発明２２において、「検出可能な標識がアクリジニウム化合物」であることを特定するものである。本件訂正発明２８は、本件訂正発明２７において、「アクリジニウム化合物」が式Ｉで示される化合物であることを特定するものである。また、本件訂正発明２９は、本件訂正発明２７において、「アクリジニウム化合物」が式ＩＩで示される化合物であることを特定するものである。本件訂正発明３０は、本件訂正発明２２において、「第１の抗体が固相上に、第１の抗体－抗原複合体の形成の前または後のいずれかに固定化される」ことを特定するものである。 このとおり、本件訂正発明２５～３０は、上記本件訂正発明２２と甲１－１発明との対比結果における相違点に加えて、それぞれ上記の点でさらに相違しているのだから、上記（イ）に示したのと同様の理由により、本件訂正発明１５～２１は、甲１及び他の甲号証に記載された発明に基づいて、当業者が容易に発明することができたものとはいえない。 エ 本件訂正発明３１、３３～３７について （ア）本件訂正発明３１と甲４－１発明との対比 甲４－１発明の「マウスモノクローナル抗体Ｈ－１１」は、本件訂正発明３１の「抗体」に相当するので、本件訂正発明３１と甲４－１発明との一致点及び相違点は次のとおりのものである。 一致点 「抗体（但し、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５９で特定されるハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体を除く）。」 相違点１ 本件訂正発明３１は、試験試料中のＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原を検出する方法であって、その具体的なステップが特定されているのに対して、甲４－１発明は、そのような試験試料中のＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原を検出する方法ではなく、具体的なステップが特定されていない点。 相違点２ 本件訂正発明３１では、試験試料中のＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原を検出する際に利用する抗体が、さらに「ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合するもの」であるのに対し、甲４－１発明は、この点が明記されていない点。 （イ）本件訂正発明３１についての判断 上記相違点について検討する。 甲４の全体をみても、「プロトロンビン誘導ビタミンＫアンタゴニストＩＩ（ＰＩＶＫＡ－ＩＩ）のアミノ酸１－１３」に対して特異的に認識して結合する抗体を取得すること（相違点２）は記載されてないし、甲１、５～１０にも、当該抗体に関する記載や示唆が見当たらないから、甲４－１発明における「マウスモノクローナル抗体Ｈ－１１」を、ＰＩＶＫＡ－ＩＩに対して特異的に認識して結合する抗体とすることが、当業者に容易に動機づけられるとはいえない。 したがって、相違点１を検討するまでもなく、本件訂正発明３１は、甲４に記載された発明に、甲１、５～１０に記載された事項を組み合わせても当業者が容易に発明することができたものとはいえない。 （ウ）請求人の主張について 請求人は、甲４には、Ｈ－１１が「ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する」抗体であることは実質的に記載されているので、当業者であればその記載から「ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する」も容易に想到し、本件訂正発明２２も容易想到であると主張するが、上述のとおり、いずれの甲号証にも、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３の６位及び／又は７位における特異的な構造を認識して結合する（結合特異性）ことについて、記載も示唆もされていない以上、請求人の主張は失当である。 （エ）本件訂正発明３３～３７についての判断 本件訂正発明３３は、本件訂正発明３１において、「試験試料」を「全血、血清、または血漿」に特定するものである。本件訂正発明３４は、本件訂正発明３１において、「検出可能な標識が放射性標識、酵素標識」等であることを特定するものである。本件訂正発明３５は、本件訂正発明３１において、「検出可能な標識がアクリジニウム化合物である」ことを特定するものである。本件訂正発明３６は、本件訂正発明３５において、「アクリジニウム化合物」が式Ｉで示される化合物であることを特定するものである。また、本件訂正発明３７は、本件訂正発明３５において、「アクリジニウム化合物」が式ＩＩで示される化合物であることを特定するものである。 このとおり、本件訂正発明３３～３７は、上記本件訂正発明３１と甲４発明との対比結果における相違点に加えて、それぞれ上記の点でさらに相違しているのだから、上記（イ）に示したのと同様の理由により、本件訂正発明３３～３７は、甲４及び他の甲号証に記載された発明に基づいて、当業者が容易に発明することができたものとはいえない。 オ 本件訂正発明３８について （ア）本件訂正発明３８と甲４－２発明との対比 甲４－２発明の「マウスモノクローナル抗体Ｈ－１１」、「４、８、１２週に追加免疫を行い、最後の追加免疫の６週後にプロテインＣ抗体の力価を測定する、免疫化ステップ」は、それぞれ、本件訂正発明３８の「抗原結合性ドメインを含む結合性タンパク質」、「抗原に対する抗体を生成するのに十分な時間および条件下、免疫化するステップ」に相当する。 したがって、本件訂正発明３８と甲４－２発明との一致点及び相違点は次のとおりのものである。 一致点 「抗原結合性ドメインを含む結合性タンパク質を発現するハイブリドーマ細胞系統を生成する方法であって、マウスを、抗原で、前記マウスが前記抗原に対する抗体を生成するのに十分な時間および条件下、免疫化するステップ、前記マウスの脾臓から細胞を収集し、精製するステップ、ハイブリドーマを生成するために、前記脾臓細胞をミエローマと融合するステップ、ならびに抗原に結合する抗体を発現するハイブリドーマ細胞系統を選択するステップを含む、結合性タンパク質を発現するハイブリドーマ細胞系統を生成する方法。」 相違点１ 本件訂正発明３８では、抗原がＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１７を含むものであるのに対し、甲４－２発明は、プロテインＣである点。 相違点２ 本件訂正発明３８では、免疫化するマウスがＧＡＮＰマウスであるのに対し、甲４－２発明は、ＢＡＬＢ／ｃマウスである点。 相違点３ 本件訂正発明３８では、マウスの脾臓から収集する細胞が「８つ」であることを特定しているのに対し、甲４－２発明は、そのことが明記されていない点。 （イ）本件訂正発明３８についての判断 上記相違点について検討する。 甲４全体をみても、ＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗体を取得しようとする思想はなく、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１７を含む抗原でマウスを免疫化すること（相違点１）は、当業者が容易に想到できたものであるとはいえない。 したがって、相違点２、３については検討するまでもなく、本件訂正発明３８は、甲４に記載された発明及びその他の証拠に記載された発明に基いて当業者が容易に発明することができたものとはいえない。 カ 本件訂正発明４０について （ア）本件訂正発明４０と甲４－１発明との対比 甲４－１発明の「マウスモノクローナル抗体Ｈ－１１」は、本件訂正発明４０の「結合性タンパク質」に相当するので、本件訂正発明４０と甲４－１発明との一致点及び相違点は次の通りのものである。 一致点 「結合性タンパク質（但し、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５９で特定されるハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体を除く）。」 相違点１ 単離された結合性タンパク質が、本件訂正発明４０では、「プロトロンビン誘導ビタミンＫアンタゴニストＩＩ（ＰＩＶＫＡ－ＩＩ）のアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を含み、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する」ものであるのに対して、甲４－１発明では、そのような特定がない点。 相違点２ 本件訂正発明４０では、「結合性タンパク質および薬学的に許容される担体を含む、薬剤組成物。」であるが、甲４－１発明では、そのような特定がない点。 （イ）本件訂正発明４０についての判断 上記相違点について検討する。 甲４の全体をみても、「プロトロンビン誘導ビタミンＫアンタゴニストＩＩ（ＰＩＶＫＡ－ＩＩ）のアミノ酸１－１３」に対して特異的に認識して結合する抗体（相違点１）を取得することは記載されてないし、甲１、５～１０にも、当該抗体に関する記載や示唆が見当たらないから、甲４－１発明における「マウスモノクローナル抗体Ｈ－１１」を、ＰＩＶＫＡ－ＩＩに対して特異的に認識して結合する抗体とすることが、当業者に容易に動機づけられるとはいえない。 したがって、相違点２を検討するまでもなく、本件訂正発明４０は、甲４に記載された発明に、甲１、５～１０に記載された事項を組み合わせても当業者が容易に発明することができたものとはいえない。 （ウ）請求人の主張について 請求人は、甲４には、Ｈ－１１が「ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する」抗体であることは実質的に記載されているので、当業者であればその記載から「ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する」も容易に想到し、本件訂正発明４０も容易想到であると主張するが、上述のとおり、いずれの甲号証にも、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３の６位及び／又は７位における特異的な構造を認識して結合する（結合特異性）ことについて、記載も示唆もされていない以上、請求人の主張は失当である。 キ 本件訂正発明４５～５１について （ア）本件訂正発明４５と甲１－１発明との対比 甲１－１発明の「デス－γ―カルボキシプロトロンビン（ＤＣＰ）」は、当該技術分野において「ＰＩＶＫＡ－ＩＩ」と同義で使用される用語であるから（必要であれば、Ｃａｎｃｅｒ，１９８８，Ｖｏｌ．６１，Ｎｏ．８，ｐｐ．１６２１－１６２８の要約等を参照されたい。）、甲１発明の「試験試料中のデス－γ―カルボキシプロトロンビン（ＤＣＰ）を検出する方法」は、本件訂正発明４５の「生物学的試料中に存在する可能性があるＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原の存在を検出するステップ」に相当する。また、甲１－１発明の「試験試料を、デス－γ―カルボキシプロトロンビン（ＤＣＰ）のアミノ酸１７－２７に結合する抗原結合部分を有するモノクローナル抗体ＭＵ－３と、接触させるステップ」は、本件訂正発明４５の「生物学的試料を、・・・ＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原のアミノ酸１３－２７に結合する抗原結合ドメインを有する第１の抗体と接触させるステップ」に相当し、甲１－１発明の「西洋ワサビペルオキシダーゼで標識したウサギ抗プロトロンビン抗体のＦａｂを、ＭＵ－３とデス－γ―カルボキシプロトロンビン（ＤＣＰ）の複合体に、加えるステップ」は、本件訂正発明４５の「検出可能な標識に付着している第２の抗体を含むコンジュゲートを、得られたＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原／抗体複合体に、・・・加えるステップ」に相当し、甲１－１発明の「西洋ワサビペルオキシダーゼによって生成される蛍光を測定し、試験試料中のデス－γ―カルボキシプロトロンビン（ＤＣＰ）を検出するステップ」は、本件訂正発明４５の「検出可能な標識によって産生されるシグナルを検出することによって、前記生物学的試料中に存在する可能性があるＰＩＶＫＡ―ＩＩ抗原の存在を検出するステップ」に相当する。また、本件訂正発明４５では、生物学的試料を抗体と接触させる条件について、ＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原／第１の抗体複合体の形成に十分な時間および条件下で行うことや、第２の抗体とＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原／第１の抗体複合体に加える条件について、結合しているＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原にコンジュゲートを結合させるのに十分な時間および条件下で行うことが特定されているが、甲１には、これらに対応するステップの実験条件が詳細に記載されており、その条件については複合体の形成に十分であるとの記載はないものの、サンドイッチＥＬＩＳＡを実施することができていることから、その原理をふまえれば当然に複合体の形成に十分な時間および条件を満たすものであるということができる。 したがって、本件訂正発明４５と甲１－１発明との一致点及び相違点は次のとおりのものである。 一致点 「試験試料中のＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原を検出する方法であって、試験試料を、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１３－２７に結合する抗原結合性部分を有する第１の抗体と接触させるステップ、検出可能な標識にコンジュゲートしている第２の抗体を第１の抗体／抗原複合体に加えるステップ、検出可能な標識によって生成され、または検出可能な標識から放射されるシグナルを測定し、試験試料中のＰＩＶＫＡ―ＩＩ抗原を検出するステップを含む、試験試料中のＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原を検出する方法。」 相違点１ 第２の抗体が、本件訂正発明４５では、ＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原のアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性ドメインを有し、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合するものであるのに対して、甲１－１発明では、ウサギ抗プロトロンビン抗体のＦａｂであることが特定されるのみで、ＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原のアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性ドメインを有し、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合することが特定されていない点。 相違点２ 本件訂正発明４５は、予め決定されたレベルを超えるＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原の量が、患者におけＨＣＣまたは肝癌の存在を示す、シグナルの強度を測定することによって生物学的試料中に存在するＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原の量を測定するステップを含む、ＨＣＣまたは肝癌を有することが疑われる患者におけるＨＣＣまたは肝癌の存在を決定する方法であるのに対して、甲１発明は、そのようなステップを含む方法ではない点。 （イ）本件訂正発明４５についての判断 上記相違点について検討する。 甲４の全体をみても、「プロトロンビン誘導ビタミンＫアンタゴニストＩＩ（ＰＩＶＫＡ－ＩＩ）のアミノ酸１－１３」に対して特異的に認識して結合する抗体（相違点１）を取得することは記載されてないし、甲１、５～１０にも、そのような記載や示唆は見当たらないから、甲１－１発明における「ウサギ抗プロトロンビン抗体のＦａｂ」を、ＰＩＶＫＡ－ＩＩに対して特異的に認識して結合する抗体とすることが、当業者に容易に動機づけられるとはいえない。 したがって、相違点２を検討するまでもなく、本件訂正発明４５は、甲１に記載された発明に、甲４～１０に記載された事項を組み合わせても当業者が容易に発明することができたものとはいえない。 （ウ）請求人の主張について 請求人は、甲４には、Ｈ－１１が「ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する」抗体であることは実質的に記載されているので、当業者であればその記載から「ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する」も容易に想到し、本件訂正発明４５も容易想到であると主張するが、上述のとおり、いずれの甲号証にも、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３の６位及び／又は７位における特異的な構造を認識して結合する（結合特異性）ことについて、記載も示唆もされていない以上、請求人の主張は失当である。 （エ）本件訂正発明４６～５１についての判断 本件訂正発明４６は、本件訂正発明４５において、「予め決定されたレベルが４０ｍＡＵ／ｍｌである」ことを特定するものである。本件訂正発明４７は、本件訂正発明４５において、「試験試料」を「全血、血清、または血漿」に特定するものである。本件訂正発明４８は、本件訂正発明４５において、「検出可能な標識が放射性標識、酵素標識」等であることを特定するものである。本件訂正発明４９は、本件訂正発明４５において、「検出可能な標識がアクリジニウム化合物である」ことを特定するものである。本件訂正発明５０は、本件訂正発明４９において、「アクリジニウム化合物」が式Ｉで示される化合物であることを特定するものである。また、本件訂正発明５１は、本件訂正発明４９において、「アクリジニウム化合物」が式ＩＩで示される化合物であることを特定するものである。 このとおり、本件訂正発明４６～５１は、上記本件訂正発明４５と甲１発明との対比結果における相違点に加えて、それぞれ上記の点でさらに相違しているのだから、上記（イ）に示したのと同様の理由により、本件訂正発明４６～５１は、甲１及び他の甲号証に記載された発明に基づいて、当業者が容易に発明することができたものとはいえない。 ク 本件訂正発明５２、５３について （ア）本件訂正発明５２と甲４－１発明との対比 甲４－１発明の「マウスモノクローナル抗体Ｈ－１１」は、本件訂正発明５２の「結合性タンパク質」に相当するので、本件訂正発明５２と甲４－１発明との一致点及び相違点は次のとおりのものである。 一致点 「結合性タンパク質（但し、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５９で特定されるハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体を除く）。」 相違点１ 単離された結合性タンパク質が、本件訂正発明５２では、「プロトロンビン誘導ビタミンＫアンタゴニストＩＩ（ＰＩＶＫＡ－ＩＩ）のアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を含み、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する」ものであるのに対して、甲４－１発明では、そのような特定がない点。 相違点２ 本件訂正発明５２では、「結合性タンパク質を含有する容器を含む、試験試料中のＰＩＶＫＡ－ＩＩの量を検出および／または定量するためのキット。」であるが、甲４－１発明では、そのような特定がない点。 （イ）本件訂正発明５２についての判断 上記相違点について検討する。 甲４の全体をみても、「プロトロンビン誘導ビタミンＫアンタゴニストＩＩ（ＰＩＶＫＡ－ＩＩ）のアミノ酸１－１３」に対して特異的に認識して結合する抗体（相違点１）を取得することは記載されてないし、甲１、５～１０にも、当該抗体に関する記載や示唆が見当たらないから、甲４－１発明における「マウスモノクローナル抗体Ｈ－１１」を、ＰＩＶＫＡ－ＩＩに対して特異的に認識して結合する抗体とすることが、当業者に容易に動機づけられるとはいえない。 したがって、相違点２を検討するまでもなく、本件訂正発明５２は、甲４に記載された発明に、甲１、５～１０に記載された事項を組み合わせても当業者が容易に発明することができたものとはいえない。 （ウ）請求人の主張について 請求人は、甲４には、Ｈ－１１が「ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する」抗体であることは実質的に記載されているので、当業者であればその記載から「ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する」も容易に想到し、本件訂正発明５２も容易想到であると主張するが、上述のとおり、いずれの甲号証にも、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３の６位及び／又は７位における特異的な構造を認識して結合する（結合特異性）ことについて、記載も示唆もされていない以上、請求人の主張は失当である。 （エ） 本件訂正発明５３についての判断 本件訂正発明５３は、本件訂正発明５２において、「（ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１３－２７に結合する抗原結合性部分を有する結合性タンパク質を含有する）容器をさらに含むこと」を特定するものである。 このとおり、本件訂正発明５３は、上記本件訂正発明５２と甲４－１発明との対比結果における相違点に加えて、上記の点でさらに相違しているのだから、上記（イ）に示したのと同様の理由により、本件訂正発明５３は、甲４及び他の甲号証に記載された発明に基づいて、当業者が容易に発明することができたものとはいえない。 ケ 本件訂正発明５５、５７～６７ （ア）本件訂正発明５５と甲４－１発明との対比 甲４－１発明の「マウスモノクローナル抗体Ｈ－１１」は、本件訂正発明５５の「抗体」に相当するので、本件訂正発明５５と甲４－１発明との一致点及び相違点は次の通りのものである。 一致点 「抗体（但し、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５９で特定されるハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体を除く）。」 相違点１ 抗体が、本件訂正発明５５では、「ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を含み、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する」ものであるのに対して、甲４－１発明では、そのような特定がない点。 相違点２ 本件訂正発明５５では、「抗体を含む検出試薬、ならびに試験試料中のＰＩＶＫＡ－ＩＩの量を検出および／または定量するための指示書を含む、試験試料中のＰＩＶＫＡ－ＩＩの量を検出および／または定量するためのキット。」であるのに対し、甲４－１発明では、そのような特定がない点。 （イ）本件訂正発明５５についての判断 上記相違点について検討する。 甲４の全体をみても、「プロトロンビン誘導ビタミンＫアンタゴニストＩＩ（ＰＩＶＫＡ－ＩＩ）のアミノ酸１－１３」に対して特異的に認識して結合する抗体（相違点１）を取得することは記載されてないし、甲１、５～１０にも、当該抗体に関する記載や示唆が見当たらないから、甲４－１発明における「マウスモノクローナル抗体Ｈ－１１」を、ＰＩＶＫＡ－ＩＩに対して特異的に認識して結合する抗体とすることが、当業者に容易に動機づけられるとはいえない。 したがって、相違点２を検討するまでもなく、本件訂正発明５５は、甲４に記載された発明に、甲１、５～１０に記載された事項を組み合わせても当業者が容易に発明することができたものとはいえない。 （ウ）請求人の主張について 請求人は、甲４には、Ｈ－１１が「ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する」抗体であることは実質的に記載されているので、当業者であればその記載から「ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する」も容易に想到し、本件訂正発明５５も容易想到であると主張するが、上述のとおり、いずれの甲号証にも、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３の６位及び／又は７位における特異的な構造を認識して結合する（結合特異性）ことについて、記載も示唆もされていない以上、請求人の主張は失当である。 （エ）本件訂正発明５７～６７についての判断 本件訂正発明５７は、本件訂正発明５５において、「抗体に付いている検出可能な標識をさらに含み、検出可能な標識が、検出可能なシグナルを生成することができる」ことを特定するものである。本件訂正発明５８は、本件訂正発明５７において、「検出可能な標識が放射性標識、酵素標識」等であることを特定するものである。本件訂正発明５９は、本件訂正発明５８において、「検出可能な標識がアクリジニウム化合物である」ことを特定するものである。本件訂正発明６０は、本件訂正発明５９において、「アクリジニウム化合物」が式Ｉで示される化合物であることを特定するものである。本件訂正発明６１は、本件訂正発明５９において、「アクリジニウム化合物」が式ＩＩで示される化合物であることを特定するものである。本件訂正発明６２は、本件訂正発明５９において、「塩基性溶液をさらに含む」ことを特定するものである。本件訂正発明６３は、本件訂正発明６２において、「塩基性溶液が少なくとも１０のｐＨを有する溶液である」ことを特定するものである。本件訂正発明６４は、本件訂正発明５９において、「過酸化水素の源をさらに含む」ことを特定するものである。本件訂正発明６５は、本件訂正発明６４において、「過酸化水素の源が、過酸化水素を含むバッファーまたは溶液を含む」ことを特定するものである。本件訂正発明６６は、本件訂正発明６４において、「過酸化水素の源が過酸化水素生成酵素を含む」ことを特定するものである。そして、本件訂正発明６７は、本件訂正発明６６において、「過酸化水素生成酵素」を具体的名称で特定するものである。 このとおり、本件訂正発明５７～６７は、上記本件訂正発明５５と甲４－１発明との対比結果における相違点に加えて、それぞれ上記の点でさらに相違しているのだから、上記（イ）に示したのと同様の理由により、本件訂正発明５７～６７は、甲４及び他の甲号証に記載された発明に基づいて、当業者が容易に発明することができたものとはいえない。 コ 本件訂正発明６８、６９について （ア）本件訂正発明６８と甲１－１発明との対比 甲１－１発明の「デス－γ―カルボキシプロトロンビン（ＤＣＰ）」は、当該技術分野において「ＰＩＶＫＡ－ＩＩ」と同義で使用される用語である（必要であれば、Ｃａｎｃｅｒ，１９８８，Ｖｏｌ．６１，Ｎｏ．８，ｐｐ．１６２１－１６２８の要約等を参照されたい。）。また、甲１－１発明の「モノクローナル抗体ＭＵ－３」は、本件訂正発明６８の「抗原結合性部分を有する結合性タンパク質」に相当する。したがって、甲１－１発明の「試験試料中のデス－γ―カルボキシプロトロンビン（ＤＣＰ）を検出する方法」で使用する「デス－γ―カルボキシプロトロンビン（ＤＣＰ）のアミノ酸１７－２７に結合する抗原結合部分を有するモノクローナル抗体ＭＵ－３」は、本件訂正発明６８の「ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１３－２７に結合する抗原結合性部分を有する結合性タンパク質」といえる。 したがって、本件訂正発明６８と甲１－１発明との一致点及び相違点は次のとおりのものである。 一致点 「ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１３－２７に結合する抗原結合性部分を有する結合性タンパク質。」 相違点１ 本件訂正発明６８は、試験試料中のＰＩＶＫＡ－ＩＩの量を検出および／または定量するためのキットであるのに対して、甲１－１発明は、そのようなキットではない点。 相違点２ 本件訂正発明６８では、使用されるもう１つの抗体が、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を含み、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合するものであるのに対して、甲１－１発明では、ウサギ抗プロトロンビン抗体のＦａｂであることが特定されるのみで、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を含み、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合することが特定されていない点。 （イ）本件訂正発明６８についての判断 上記相違点について検討する。 甲４の全体をみても、「プロトロンビン誘導ビタミンＫアンタゴニストＩＩ（ＰＩＶＫＡ－ＩＩ）のアミノ酸１－１３」に対して特異的に認識して結合する抗体（相違点２）を取得することは記載されてないし、甲１、５～１０にも、そのような記載や示唆は見当たらないから、甲１－１発明における「ウサギ抗プロトロンビン抗体のＦａｂ」を、ＰＩＶＫＡ－ＩＩに対して特異的に認識して結合する抗体とすることが、当業者に容易に動機づけられるとはいえない。 したがって、相違点１を検討するまでもなく、本件訂正発明６８は、甲１に記載された発明に、甲４～１０に記載された事項を組み合わせても当業者が容易に発明することができたものとはいえない。 （ウ）請求人の主張について 請求人は、甲４には、Ｈ－１１が「ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する」抗体であることは実質的に記載されているので、当業者であればその記載から「ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する」も容易に想到し、本件訂正発明６８も容易想到であると主張するが、上述のとおり、いずれの甲号証にも、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３の６位及び／又は７位における特異的な構造を認識して結合する（結合特異性）ことについて、記載も示唆もされていない以上、請求人の主張は失当である。 （エ）本件訂正発明６９についての判断 本件訂正発明６９は、本件訂正発明６８において、「第１および第２の単離された結合性タンパクがモノクローナル抗体である」ことを特定しているが、甲１－１発明のいずれの抗体もモノクローナル抗体であるから、当該発明特定事項は、上記本件訂正発明６８と甲１－１発明との対比結果に、新たに相違点を追加するものではない。 そうすると、上記（イ）に示したとおり、本件訂正発明６９も、甲１に記載された発明に、甲４～１０に記載された事項を組み合わせても当業者が容易に発明することができたものとはいえない。 請求人は、本件訂正発明６８が進歩性を有さないので、本件訂正発明６９も進歩性を有さないと主張するが、上述の通り、請求人の主張は失当である。 サ 本件訂正発明７１、７２について （ア）本件訂正発明７１と甲１－１発明との対比 甲１－１発明の「デス－γ―カルボキシプロトロンビン（ＤＣＰ）」は、当該技術分野において「ＰＩＶＫＡ－ＩＩ」と同義で使用される用語である（必要であれば、Ｃａｎｃｅｒ，１９８８，Ｖｏｌ．６１，Ｎｏ．８，ｐｐ．１６２１－１６２８の要約等を参照されたい。）。また、甲１－１発明の「モノクローナル抗体ＭＵ－３」は、本件訂正発明７１の「結合性タンパク質」に相当する。したがって、甲１－１発明の「試験試料中のデス－γ―カルボキシプロトロンビン（ＤＣＰ）を検出する方法」で使用する「デス－γ―カルボキシプロトロンビン（ＤＣＰ）のアミノ酸１７－２７に結合する抗原結合部分を有するモノクローナル抗体ＭＵ－３」は、本件訂正発明７１の「ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－３３のサブセットに特異的に結合する抗原結合性部分を含む」結合性タンパク質といえる。 したがって、本件訂正発明７１と甲１－１発明との一致点及び相違点は次のとおりのものである。 一致点 「ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－３３のサブセットに特異的に結合する抗原結合性部分を含む結合性タンパク質」を使用する、試料中のＰＩＶＫＡ－ＩＩの量を決定する方法である点。 相違点 本件訂正発明７１では、使用されるもう１つの抗体が、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を含み、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合するものであるのに対して、甲１－１発明では、ウサギ抗プロトロンビン抗体のＦａｂであることが特定されるのみで、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を含み、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合することが特定されていない点。 （イ）本件訂正発明７１についての判断 上記相違点について検討する。 甲４の全体をみても、「プロトロンビン誘導ビタミンＫアンタゴニストＩＩ（ＰＩＶＫＡ－ＩＩ）のアミノ酸１－１３」に対して特異的に認識して結合する抗体を取得することは記載されてないし、甲５～１０にも、当該抗体に関する記載や示唆が見当たらないから、甲１－１発明における「ウサギ抗プロトロンビン抗体のＦａｂ」を、ＰＩＶＫＡ－ＩＩに対して特異的に認識して結合する抗体とすることが、当業者に容易に動機づけられるとはいえない。 したがって、本件訂正発明２２は、甲１に記載された発明に、甲４～１０に記載された事項を組み合わせても当業者が容易に発明することができたものとはいえない。 （ウ）請求人の主張について 請求人は、甲４には、Ｈ－１１が「ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する」抗体であることは実質的に記載されているので、当業者であればその記載から「ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する」も容易に想到し、本件訂正発明７１も容易想到であると主張するが、上述のとおり、いずれの甲号証にも、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１３の６位及び／又は７位における特異的な構造を認識して結合する（結合特異性）ことについて、記載も示唆もされていない以上、請求人の主張は失当である。 （エ）本件訂正発明７２についての判断 本件訂正発明７２は、本件訂正発明７１において、「結合性タンパク質がモノクローナル抗体である」ことを特定しているが、甲１－１発明のいずれの抗体もモノクローナル抗体であるから、当該発明特定事項は、上記本件訂正発明７１と甲１－１発明との対比結果に、新たに相違点を追加するものではない。 そうすると、上記（イ）に示したとおり、本件訂正発明７２も、甲１に記載された発明に、甲４～１０に記載された事項を組み合わせても当業者が容易に発明することができたものとはいえない。 請求人は、本件訂正発明７１が進歩性を有さないので、本件訂正発明７２も進歩性を有さないと主張するが、上述の通り、請求人の主張は失当である。 （３）小括 以上のとおりであるから、請求人が主張する無効理由２は理由がない。 ７ 無効理由３（拡大先願）について （１） 甲１１出願の優先権についての判断 本件出願は、２０１０年７月２６日を優先日とするものであるのに対して、甲１１出願の優先日は、それより前の２０１０年６月２９日であるから、甲１１出願の優先権明細書（甲１２／特願２０１０－１４７７８４号）（以下、「先願明細書」という。）に記載され、且つ、国際公開２０１２／００２３４５号（甲１１）で公開された発明（以下、「先願発明」という。また、甲１１及び甲１２に共通して記載された事項を「先願（優先）明細書（甲１１かつ甲１２）に記載された事項」ということがある。）が、本件訂正発明と同一である場合には、無効理由３は理由があることになる。この観点から、以下、検討する。 まず甲１１の実施例１には、精製したＰＩＶＫＡ－ＩＩで免疫したマウスから脾臓を摘出して骨髄腫細胞と融合させてハイブリドーマを取得し、プロトロンビンに反応せず、脱炭酸処理時間６時間のＰＩＶＫＡ－ＩＩに比べて脱炭酸処理時間３０分のＰＩＶＫＡ－ＩＩに対して高い反応性を示すハイブリドーマを選択し、２種類のハイブリドーマ、すなわち、ハイブリドーマ２４２１１（「ハイブリドーマ１１」、ＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５８）、及びハイブリドーマ２４２１６（「ハイブリドーマ１６」、ＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５９）を取得したことが記載されている（［００３８］－［００４１］）。また、それぞれのハイブリドーマから、Ｐ－１１モノクローナル抗体及びＰ－１６モノクローナル抗体を調製したことが記載されている（［００４４］）。次に、実施例２に、これらの抗体を用いて肝細胞癌患者の血清試料中のビタミンＫ結合に起因するＰＩＶＫ－ＩＩの測定を行ったところ、ＮＸ－ＰＶＫＡのみが肝機能を評価するための分類を反映していたことが記載されている（［００４５］－［００５４］、図２－３）。そして、実施例３では、従来の測定方法で得たＰＩＶＫＡ－ＩＩ測定値をＮＸ－ＰＶＫＡ測定値で割ったレシオ値により、従来の測定方法では偽陽性となっていた検体を区別することができ、肝がんに高い特異性を示したことが記載されている（［００５５］－［００５７］、図４－図５）。さらに実施例４として、Ｐ－１６モノクローナル抗体及びＰ－１１モノクローナル抗体のエピトープの分析が記載されており、競合ＥＬＩＳＡを行ってこれらの抗体の変性ＰＩＶＫＡ－ＩＩ、変性プロトロンビン、及びトロンビンに対する反応性や、プロトロンビンフラグメントに対する反応性や、Ｇｌａ残基非含有ペプチドに対する反応性を検討したことが記載されている（［００５８］－［００７０］、図６－９）。 一方、甲１２には、甲１１と同様に、実施例１～実施例３が記載されている。 しかし、甲１２には、実施例４は記載されておらず、Ｐ－１６モノクローナル抗体及びＰ－１１モノクローナル抗体のエピトープに関する記載も存しないから、実施例４に記載されている箇所は、甲１１発明（先願発明）の認定に組み入れることはできない。 してみれば、甲１１出願の優先権明細書（甲１２／特願２０１０－１４７７８４号）（先願明細書）に記載され、且つ、国際公開２０１２／００２３４５号（甲１１）でその内容が公開された発明（甲１１－１～甲１１－７発明。先願発明ということもある。）は、以下のとおりのものと認定できる。 （２）先願発明の認定 ア 甲１１－１発明 甲１１には、「ＰＩＶＫＡ－ＩＩ（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ Ｖｉｔａｍｉｎ Ｋ Ａｂｓｅｎｃｅ ｏｒ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ－ＩＩ）は、ＡＦＰ（α－フェトプロテイン）と並んで肝がんを診断するマーカーとして広く臨床検査室で測定されている」と記載されている（前記第６の９（２）（ア））。また、甲１１には、「（１）ハイブリドーマの調製クマジン血漿（ＵＮＩＧＬＯＢＥ ＲＥＳＥＡＲＣＨ ＣＯＲＰＯＲＡＴＩＯＮ社製）より精製したＰＩＶＫＡ－ＩＩ（１ｍｇ／ｍＬ）とフロイドの完全アジュバント（ＧＩＢＣＯ社製）とを１対１で混和乳化し、５０μｇ／１００μｍＬ（エマルジョン）で８週齢の雌ＢＡＬＢ／Ｃマウス（日本チャールズリバー（株）製）の皮下に２週間間隔で４回投与後、最終免疫の３日後に脾臓を摘出した。摘出した脾臓から得られた脾臓細胞と骨髄腫細胞ＳＰ２／Ｏ－Ａｇ１４とを１０対１の割合で混合し、５０％ポリエチレングリコール１５４０（和光純薬工業（株）製）存在下にて細胞融合させた。融合細胞は脾臓細胞として２．５ｘ１０６／ｍＬになるようにＨＡＴ培地に懸濁し、９６穴培養プレート（ＣＯＲＮＩＮＧ社製）に０．２ｍＬずつ分注した。これを５％ＣＯ２インキュベーター中で３７℃にて培養し、おおよそ２週間後に、ハイブリドーマの生育してきたウェルの培養上清を、次に示すＥＬＩＳＡ法にしたがって評価し、ＰＩＶＫＡ－ＩＩに反応する抗体を産生するハイブリドーマを選択した。」と記載されている（前記第６の９（２）（オ））。さらに、甲１１には「プロトロンビンに反応せず、且つ脱炭酸処理時間６時間のＰＩＶＫＡ‐ＩＩに比べて脱炭酸処理時間３０分のＰＩＶＫＡ‐ＩＩに対して高い反応性を示すハイブリドーマを選択し、２種類のモノクローナル抗体産生ハイブリドーマ２４２１１と２４２１６（以下、それぞれ「ハイブリドーマ１１」及び「ハイブリドーマ１６」と表記することがある）を獲得した。前記得られたハイブリドーマ１１及び１６は、独立行政法人産業技術総合研究所 特許生物寄託センター（日本国茨城県つくば市東１丁目１番地１ 中央第６）に寄託され（受領日：２０１０年５月２８日）、ハイブリドーマ１１の受託番号はＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５８であり、ハイブリドーマ１６の受託番号はＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５９である。」と記載されており（前記第６の９（２）（カ））、このハイブリドーマ１６からモノクローナル抗体Ｐ－１６が取得されたことが記載されている（前記第６の９（２）（ク））。 したがって、甲１１には、次の発明（以下「甲１１－１発明」という。）が記載されているものと認められる。 「精製したＰＩＶＫＡ－ＩＩをマウスに注射することによって生産されたモノクローナル抗体Ｐ－１６。」 イ 甲１１－２発明 甲１１には、前記甲１１－１発明に関する記載に加えて、ビタミンＫ欠乏に起因するＰＩＶＫＡ－ＩＩの測定方法として、「調製したＰ－１６モノクローナル抗体固相磁気ビーズ及びＲｕ標識Ｐ－１１モノクローナル抗体を用い、電気化学発光免疫測定法により検体中のビタミンＫ欠乏に起因するＰＩＶＫＡ－ＩＩ（ＮＸ－ＰＶＫＡ）の測定値Ａを求めた。検体として、手術を行っておらず、５年後の予後が判明している肝細胞癌患者６３名の血清試料を用い、下記方法に従いＮＸ－ＰＶＫＡ量を測定した。各検体５０μＬにＰ－１６モノクローナル抗体固相磁気ビーズを２５μＬと１μｇ／ｍＬのＲｕ標識Ｐ－１１モノクローナル抗体を含むＲｕ標識抗体液１５０μＬを加え、３０℃で９分間反応させた。反応後、磁気ビーズを磁石でトラップしながらピコルミＢＦ洗浄液（エーディア（株）製）で３回洗浄した。０．１ｍｏｌ／Ｌトリプロピルアミンを含むピコルミ発光電解液（エーディア（株）製）を３００μＬ加えて、電極表面に送り、磁気ビーズに結合したＲｕの発光量を自動分析装置ピコルミＩＩI（エーディア（株）製）で測定し、検体中のＮＸ－ＰＶＫＡ量を求めた。」と記載されているから、甲１１には、次の発明（以下「甲１１－２発明」という。）が記載されているものと認められる。 「血清試料を、精製したＰＩＶＫＡ－ＩＩをマウスに注射することによって生産されたモノクローナル抗体Ｐ－１６と、Ｒｕ標識Ｐ－１１モノクローナル抗体を加え、３０℃で９分間反応させるステップ、およびＲｕの発光量を測定し、検体中のＰＩＶＫＡ－ＩＩを検出する方法。」 ウ 甲１１－３発明 甲１１には、前記甲１１－１発明及び甲１１－２発明に関する記載に加えて、「（ａ）二抗体サンドイッチ法を利用する免疫学的測定法によってビタミンＫ欠乏に起因するＰＩＶＫＡ－ＩＩを測定し、測定値Ａを得る工程、を含むＰＩＶＫＡ－ＩＩの測定方法であって、前記（ａ）工程の二抗体サンドイッチ法で用いられる抗体として、ビタミンＫ欠乏に起因するＰＩＶＫＡ－ＩＩに特異的な抗体を使用することを特徴とするＰＩＶＫＡ－ＩＩの測定方法」が記載されている（前記第６の９（３）（ア））。また、ビタミンＫ欠乏に起因するＰＩＶＫＡ－ＩＩに特異的な抗体として、Ｐ－１１モノクローナル抗体やＰ－１６モノクローナル抗体の他、従来試薬の抗ＰＩＶＫＡ－ＩＩモノクローナル抗体（ＭＵ－３）が記載されている（前記第６の９（２）（キ））。 そうすると、甲１１には、次の発明（以下、「甲１１－３発明」という。）が記載されているものと認められる。 「血清試料中のＰＩＶＫＡ－ＩＩを検出する方法であって、試料を、抗ＰＩＶＫＡ－ＩＩモノクローナル抗体（ＭＵ－３）と、精製したＰＩＶＫＡ－ＩＩをマウスに注射することによって生産されたモノクローナル抗体Ｐ－１６とを使用する二抗体サンドイッチ法を利用する免疫学的測定方法によって検出する方法。」 エ 甲１１－４発明 甲１１には、「ハイブリドーマの調製 クマジン血漿（ＵＮＩＧＬＯＢＥＲＥＳＥＡＲＣＨ ＣＯＲＰＯＲＡＴＩＯＮ社製）より精製したＰＩＶＫＡ－ＩＩ（１ｍｇ／ｍＬ）とフロイドの完全アジュバント（ＧＩＢＣＯ社製）とを１対１で混和乳化し、５０μｇ／１００μｍＬ（エマルジョン）で８週齢の雌ＢＡＬＢ／Ｃマウス（日本チャールズリバー（株）製）の皮下に２週間間隔で４回投与後、最終免疫の３日後に脾臓を摘出した。摘出した脾臓から得られた脾臓細胞と骨髄腫細胞ＳＰ２／Ｏ－Ａｇ１４とを１０対１の割合で混合し、５０％ポリエチレングリコール１５４０（和光純薬工業（株）製）存在下にて細胞融合させた。融合細胞は脾臓細胞として２．５ｘ１０６／ｍＬになるようにＨＡＴ培地に懸濁し、９６穴培養プレート（ＣＯＲＮＩＮＧ社製）に０．２ｍＬずつ分注した。これを５％ＣＯ２インキュベーター中で３７℃にて培養し、おおよそ２週間後に、ハイブリドーマの生育してきたウェルの培養上清を、次に示すＥＬＩＳＡ法にしたがって評価し、ＰＩＶＫＡ－ＩＩに反応する抗体を産生するハイブリドーマを選択した。」と記載されている（前記第６の９（２）（オ））。 そうすると、甲１１には、次の発明（以下、「甲１１－４発明」という。）が記載されているものと認められる。 「ＰＩＶＫＡ－ＩＩに反応する抗体を産生するハイブリドーマ細胞系統を生成する方法であって、ａ）ＢＡＬＢ／Ｃマウスを、クマジン血漿より精製したＰＩＶＫＡ－ＩＩで、皮下に２週間間隔で４回投与して免疫化するステップ、ｂ）マウスの脾臓から脾臓細胞を得るステップ、ｃ）ハイブリドーマを生成するために、脾臓細胞と骨髄腫細胞と融合するステップ、ならびにｄ）ＰＩＶＫＡ－ＩＩに反応する抗体を産生するハイブリドーマを選択するステップを含む方法。」 オ 甲１１－５発明 甲１１には、前記甲１１－１発明に関する記載に加えて、「［請求項６］二抗体サンドイッチ法を利用する免疫学的測定法によってビタミンＫ欠乏に起因するＰＩＶＫＡ－ＩＩを測定するに当り、ビタミンＫ欠乏に起因するＰＩＶＫＡ－ＩＩに特異的な抗体を使用することを特徴とするＰＩＶＫＡ－ＩＩの測定試薬。」が記載されている（前記第６の９（３）（イ））。 そうすると、甲１１には、次の発明（以下、「甲１１－５発明」という。）が記載されているものと認められる。 「精製したＰＩＶＫＡ－ＩＩをマウスに注射することによって生産されたモノクローナル抗体Ｐ－１６を含む測定試薬。」 カ 甲１１－６発明 甲１１には、前記甲１１－１発明及び甲１１－２に関する記載に加えて、「表３、図４、図５に示した結果から明らかなように、従来の測定方法で得たＰＩＶＫＡ－ＩＩ測定値をＮＸ－ＰＶＫＡ測定値で割ったレシオ値（図５のＮＸ－ＰＶＫＡ－Ｒ）により、従来の測定方法では偽陽性となっていた検体を区別することができ、肝がんに高い特異性を示した。」と記載されている（前記第６の９（２）（サ））。また、「［請求項１４］請求項２記載の方法によって得られた値により、肝がんを判定することを特徴とする肝がんの判定方法。」も記載されている。 そうすると、甲１１には、次の発明（以下、「甲１１－６発明」という。）が記載されているものと認められる。 「血清試料中のＮＸ－ＰＶＫＡを検出して肝がんを判定する方法であって、試料を、抗ＰＩＶＫＡ－ＩＩモノクローナル抗体（ＭＵ－３）と、精製したＰＩＶＫＡ－ＩＩをマウスに注射することによって生産されたモノクローナル抗体Ｐ－１６とを使用する二抗体サンドイッチ法を利用する免疫学的測定方法によって検出する方法。」 キ 甲１１－７発明 甲１１には、前記甲１１－１発明、甲１１－２発明、甲１１－３発明に関する記載に加えて、「［請求項６］二抗体サンドイッチ法を利用する免疫学的測定法によってビタミンＫ欠乏に起因するＰＩＶＫＡ－ＩＩを測定するに当り、ビタミンＫ欠乏に起因するＰＩＶＫＡ－ＩＩに特異的な抗体を使用することを特徴とするＰＩＶＫＡ－ＩＩの測定試薬。」が記載されている（前記第６の９（３）（イ））。 そうすると、甲１１には、次の発明（以下、「甲１１－７発明」という。）が記載されているものと認められる。 「抗ＰＩＶＫＡ－ＩＩモノクローナル抗体（ＭＵ－３）と、精製したＰＩＶＫＡ－ＩＩをマウスに注射することによって生産されたモノクローナル抗体Ｐ－１６を含む測定試薬。」 （３）対比・判断 ア 本件訂正発明３～５について （ア）本件訂正発明３と甲１１－１発明との対比 甲１１－１発明の「モノクローナル抗体Ｐ－１６」は、本件訂正発明３の「単離された結合性タンパク質」に相当するので、本件訂正発明３と甲１１－１発明との一致点及び相違点は次の通りのものである。 一致点 「単離された結合性タンパク質。」 相違点 本件訂正発明３では、単離された結合性タンパク質が、「プロトロンビン誘導ビタミンＫアンタゴニストＩＩ（ＰＩＶＫＡ－ＩＩ）のアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を含み、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する（但し、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５９で特定されるハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体を除く）。」ものであるのに対し、甲１１－１発明は、この点が明記されていない点。 （イ）本件訂正発明３についての判断 上記相違点について検討する。 上記第７の７（１）のとおり、先願（優先）明細書（甲１１かつ甲１２）には、「モノクローナル抗体Ｐ－１６」のエピトープはおろか、当該抗体の変性ＰＩＶＫＡ－ＩＩ、変性プロトロンビン、トロンビン、プロトロンビンフラグメント、Ｇｌａ残基非含有ペプチドに対する反応性についての記載もない。 また、上記第６の９（２）（ス）のとおり、甲１１－１の「モノクローナル抗体Ｐ－１６」のエピトープは、「プロトロンビンフラグメント１のＮ末端から５残基（配列番号１４で表わすａａ１－５）の範囲であ」り、「プロトロンビン誘導ビタミンＫアンタゴニストＩＩ（ＰＩＶＫＡ－ＩＩ）のアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を含み、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する」抗体が、甲１１に記載されているに等しい事項であるとも認められない。 さらに、甲１１－１発明の「モノクローナル抗体Ｐ－１６」は、「受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５９で特定されるハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体」であり、当該抗体は、本件訂正発明３から明示的に除かれてもいる。 以上のことから、上記相違点が、先願（優先）明細書（甲１１かつ甲１２）に記載、または、記載されているに等しい事項であるとは認められない。 したがって、本件訂正発明３は、甲１１－１発明、すなわち、先願発明と同一ではない。 （ウ）請求人の主張について 請求人は、甲１１には、段落［００６９］の記載を根拠に、ＰＩＶＫＡ－ＩＩの１～５位に結合する抗体という技術思想が記載されていると主張するが、上記第７の６（１）の通り、当該段落は、甲１１出願の優先権明細書（甲１２）に存しないものであるから、優先権主張の利益を受けることができないものである。 したがって、請求人の主張は失当である。 もっとも、上記の段落の記載が、甲１２に記載されていたとしても、本件訂正発明３の結合性タンパク質は、ＰＩＶＫＡ-ＩＩのアミノ酸１－１３の６位及び／又は７位における特異的な構造を認識して結合する（結合特異性）ものであるから、甲１２のＰＩＶＫＡ－ＩＩの１～５位に結合する抗体に係る技術思想と本件訂正発明３の技術思想は異なるものであり、いずれにしても請求人の主張は理由がない。 （エ）本件訂正発明４、５についての判断 本件訂正発明４、５は、いずれも、本件訂正発明３と同様に、「ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する、単離された結合性タンパク質」を発明特定事項とするものを含むものであるから、これらの発明も、先願発明と同一ではない。 イ 本件訂正発明１３、１５～２１について （ア）本件訂正発明１３と甲１１－２発明との対比 甲１１－２発明の「血清試料」は、本件訂正発明１３の「試験試料」に相当する。また、甲１１－２発明の「Ｒｕ標識Ｐ－１１モノクローナル抗体を加え、３０℃で９分間反応させるステップ、およびＲｕの発光量を測定し、検体中のＰＩＶＫＡ－ＩＩを検出する方法」は、本件訂正発明１３の「抗体－抗原複合体の形成に十分な時間および条件下、接触させるステップ、前記抗体－抗原複合体の存在が前記試験試料中のＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原の存在を示す、前記抗体－抗原複合体の存在を検出するステップ、を含む、試験試料中のＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原を検出する方法」に相当する。 したがって、本件訂正発明１３と甲１１－２発明との一致点及び相違点は次のとおりのものである。 一致点 「試験試料を抗体と、抗体－抗原複合体の形成に十分な時間および条件下、接触させるステップ、前記抗体－抗原複合体の存在が前記試験試料中のＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原の存在を示す、前記抗体－抗原複合体の存在を検出するステップ、を含む、試験試料中のＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原を検出する方法。」 相違点 本件訂正発明３では、試験試料中のＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原を検出する際に使用する抗体が、「プロトロンビン誘導ビタミンＫアンタゴニストＩＩ（ＰＩＶＫＡ－ＩＩ）のアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を含み、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する（但し、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５９で特定されるハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体を除く）。」ものであるのに対し、甲１１－２発明は、この点が明記されていない点。 （イ）本件訂正発明１３についての判断 上記相違点について検討する。 上記第７の７（３）ア（イ）と同様、上記相違点については、先願（優先）明細書（甲１１かつ甲１２）甲１１に記載されておらず、記載されているに等しい事項であるとも認められない。 したがって、本件訂正発明１３は、甲１１－２発明、すなわち、先願発明と同一ではない。 （ウ）請求人の主張について 上記第７の７（３）ア（ウ）のとおり、請求人の主張は失当である。 （エ）本件訂正発明１５～２１についての判断 本件訂正発明１５～２１は、いずれも、本件訂正発明１３と同様に、「ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する抗体」を発明特定事項とするものを含むものであるから、これらの発明も、先願発明と同一ではない。 ウ 本件訂正発明２２、２５～３０について （ア）本件訂正発明２２と甲１１－３発明との対比 甲１１－３発明の「血清試料」は、本件訂正発明２２の「試験試料」に相当する。また、甲１１－３発明の「抗ＰＩＶＫＡ－ＩＩモノクローナル抗体（ＭＵ－３）」は、甲第１号証に記載されているとおり、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１７－２７に結合する抗原結合部分を有するモノクローナル抗体であることが知られており、本件訂正発明２２の「ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１３－２７に結合する抗原結合性部分を有する第１の抗体」であるといえる。 したがって、本件訂正発明２２と甲１１－３発明との一致点及び相違点は次のとおりのものである。 一致点 「試験試料中のＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原を検出する方法であって、試験試料を、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１３－２７に結合する抗原結合性部分を有する第１の抗体、及び、第２の抗体を使用する方法。」 相違点１ 本件訂正発明２２は、第２の抗体が、「プロトロンビン誘導ビタミンＫアンタゴニストＩＩ（ＰＩＶＫＡ－ＩＩ）のアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を含み、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する（但し、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５９で特定されるハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体を除く）。」ものであるのに対し、甲１１－３発明は、この点が明記されていない点 相違点２ 具体的な検出方法について、本件訂正発明２２は、試験試料を第１の抗体と接触させるステップ、検出可能な標識にコンジュゲートしている第２の抗体を、第１の抗体／抗原複合体に加えるステップ、検出可能な標識によるシグナルを測定してＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原を検出するステップであることを特定しているのに対して、甲１１－３発明では、二抗体サンドイッチ法を利用する免疫学的測定方法であることのみが特定されている点。 （イ）本件訂正発明２２についての判断 上記相違点について検討する。 上記第７の７（３）ア（イ）と同様、「プロトロンビン誘導ビタミンＫアンタゴニストＩＩ（ＰＩＶＫＡ－ＩＩ）のアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を含み、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する（但し、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５９で特定されるハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体を除く）。」点（相違点１）については、先願（優先）明細書（甲１１かつ甲１２）に記載されておらず、記載されているに等しい事項であるとも認められない。 したがって、相違点２を検討するまでもなく、本件訂正発明２２は、甲１１－３発明、すなわち、先願発明と同一ではない。 （ウ）請求人の主張について 上記第７の７（３）ア（ウ）のとおり、請求人の主張は失当である。 （エ）本件訂正発明２５～３０についての判断 本件訂正発明２５～３０は、いずれも、本件訂正発明２２と同様に、「ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する抗体」を発明特定事項とするものを含むものであるから、これらの発明も、先願発明と同一ではない。 エ 本件訂正発明３１、３３～３７について （ア）本件訂正発明３１と甲１１－２発明との対比 甲１１－２発明の「血清試料」は、本件訂正発明３１の「試験試料」に相当するので、本件訂正発明３１と甲１１－２発明との一致点及び相違点は次の通りのものである。 一致点 「試験試料を、抗体を使用し、試験試料中のＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原を検出する方法。」 相違点１ 本件訂正発明３１は、試験試料中のＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原を検出する際に使用する抗体が、「プロトロンビン誘導ビタミンＫアンタゴニストＩＩ（ＰＩＶＫＡ－ＩＩ）のアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を含み、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する（但し、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５９で特定されるハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体を除く）。」ものであるのに対し、甲１１－２発明は、この点が明記されていない点。 相違点２ 具体的な検出方法について、本件訂正発明３１は、試験試料を、検出可能なシグナルを生成することができる検出可能な標識に付いている、ＰＩＶＫＡ－ＩＩレファレンス抗原、及びＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原に対する抗体と、ＰＩＶＫＡ－ＩＩレファレンス抗原／抗体複合体を形成するのに十分な時間および条件下、接触させるステップ、検出可能な標識によって生成されるシグナルを検出するステップ、試験試料中に検出されるＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原の量が、抗体に結合しているＰＩＶＫＡ－ＩＩレファレンス抗体の量に逆比例するステップを含むのに対して、甲１１－２発明では、二抗体サンドイッチ法を利用する免疫学的測定方法であることのみが特定されている点。 （イ）本件訂正発明３１についての判断 上記相違点について検討する。 上記第７の７（３）ア（イ）と同様、「プロトロンビン誘導ビタミンＫアンタゴニストＩＩ（ＰＩＶＫＡ－ＩＩ）のアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を含み、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する（但し、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５９で特定されるハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体を除く）。」点（相違点１）については、先願（優先）明細書（甲１１かつ甲１２）に記載されておらず、記載されているに等しい事項であるとも認められない。 したがって、相違点２を検討するまでもなく、本件訂正発明３１は、甲１１－２発明、すなわち、先願発明と同一ではない。 （ウ）請求人の主張について 上記第７の７（３）ア（ウ）のとおり、請求人の主張は失当である。 （エ）本件訂正発明３３～３７についての判断 本件訂正発明３３～３７は、いずれも、本件訂正発明３１と同様に、「ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する抗体」を発明特定事項とするものを含むものであるから、これらの発明も、先願発明と同一ではない。 オ 本件訂正発明３８について （ア）本件訂正発明３８と甲１１－４発明との対比 甲１１－４発明の「ＰＩＶＫＡ－ＩＩに反応する抗体」、「皮下に２週間間隔で４回投与して免疫化するステップ」、「（マウスの脾臓から脾臓細胞を）得る」「骨髄腫細胞」は、それぞれ、本件訂正発明３８の「抗原結合性ドメインを含む結合性タンパク質」、「抗原に対する抗体を生成するのに十分な時間および条件下、免疫化するステップ」、「（マウスの脾臓から細胞を）収集し」、「ミエローマ」に相当する。 したがって、本件訂正発明３８と甲１１－４発明との一致点及び相違点は次のとおりのものである。 一致点 「抗原結合性ドメインを含む結合性タンパク質を発現するハイブリドーマ細胞系統を生成する方法であって、マウスを、抗原で、前記マウスが前記抗原に対する抗体を生成するのに十分な時間および条件下、免疫化するステップ、前記マウスの脾臓から細胞を収集するステップ、ハイブリドーマを生成するために、前記脾臓細胞をミエローマと融合するステップ、ならびに抗原に結合する抗体を発現するハイブリドーマ細胞系統を選択するステップを含む、結合性タンパク質を発現するハイブリドーマ細胞系統を生成する方法。」 相違点１ マウスを免疫化するステップにおいて、本件訂正発明３８では、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－１７を含む抗原を使用するのに対して、甲１１－４発明では、クマジン血漿より精製したＰＩＶＫＡ－ＩＩを抗原として使用する点。 相違点２ 本件訂正発明３８では、免疫化するマウスがＧＡＮＰマウスであるのに対し、甲１１－４発明は、ＢＡＬＢ／ｃマウスである点。 相違点３ 本件訂正発明３８では、マウスの脾臓から得る細胞が「８つ」であり、さらに精製するステップを含むことが特定されているのに対し、甲１１－４発明は、そのことが明記されていない点。 （イ）本件訂正発明３８についての判断 上記相違点のうち、少なくとも相違点１は、課題解決のための具体化手段における微差（周知技術、慣用技術の追加、削除、転換等であって、新たな効果を奏するものではないもの）とはいえないから、両者は実質同一であるとはいえない。 よって、本件訂正発明３８と甲１１－４発明、すなわち、先願発明と同一ではない。 カ 本件訂正発明４０について （ア）本件訂正発明４０と甲１１－５発明との対比 甲１１－５発明の「モノクローナル抗体」は、本件訂正発明４０の「結合性タンパク質」に相当し、甲１１－５発明の「測定試薬」は、本件訂正発明４０の「薬剤組成物」に相当するので、本件訂正発明４０と甲１１－５発明との一致点及び相違点は次の通りのものである。 一致点 「結合性タンパク質を含む薬剤組成物。」 相違点１ 本件訂正発明４０は、結合性タンパク質が、「プロトロンビン誘導ビタミンＫアンタゴニストＩＩ（ＰＩＶＫＡ－ＩＩ）のアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を含み、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する（但し、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５９で特定されるハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体を除く）。」ものであるのに対し、甲１１－５発明は、この点が明記されていない点。 相違点２ 本件訂正発明４０では、薬剤組成物に含まれるものが、薬学的に許容される担体を含むのに対して、甲１１－５発明ではそのような特定がない点。 （イ）本件訂正発明４０についての判断 上記相違点について検討する。 上記第７の７（３）ア（イ）と同様、「プロトロンビン誘導ビタミンＫアンタゴニストＩＩ（ＰＩＶＫＡ－ＩＩ）のアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を含み、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する（但し、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５９で特定されるハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体を除く）。」点（相違点１）については、先願（優先）明細書（甲１１かつ甲１２）に記載されておらず、記載されているに等しい事項であるとも認められない。 したがって、相違点２を検討するまでもなく、本件訂正発明４０は、甲１１－５発明、すなわち、先願発明と同一ではない。 （ウ）請求人の主張について 上記第７の７（３）ア（ウ）のとおり、請求人の主張は失当である。 キ 本件訂正発明４５～５１について （ア）本件訂正発明４５と甲１１－６発明との対比 甲１１－６発明の「血清試料」は、本件訂正発明４５の「試験試料」に相当する。また、甲１１－６発明の「抗ＰＩＶＫＡ－ＩＩモノクローナル抗体（ＭＵ－３）」は、甲第１号証に記載されているとおり、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１７－２７に結合する抗原結合部分を有するモノクローナル抗体であることが知られており、本件訂正発明４５の「ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１３－２７に結合する抗原結合性部分を有する第１の抗体」であるといえる。また、甲１１－６発明の「肝がんを判定する方法」は、本件訂正発明４５の「肝細胞癌（ＨＣＣ）または肝癌を有することが疑われる患者におけるＨＣＣまたは肝癌の存在を決定する方法」に相当する。 したがって、本件訂正発明４５と甲１１－６発明との一致点及び相違点は次のとおりのものである。 一致点 「肝癌を有することが疑われる患者における肝癌の存在を決定する方法であって、試験試料を、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１３－２７に結合する抗原結合性部分を有する第１の抗体、及び、第２の抗体を使用してＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原の量を測定する方法。」 相違点１ 本件訂正発明３１は、第２の抗体が、「プロトロンビン誘導ビタミンＫアンタゴニストＩＩ（ＰＩＶＫＡ－ＩＩ）のアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を含み、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する（但し、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５９で特定されるハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体を除く）。」ものであるのに対し、甲１１－６発明は、この点が明記されていない点。 相違点２ 具体的な検出方法について、本件訂正発明４５は、試験試料を第１の抗体と接触させるステップ、検出可能な標識にコンジュゲートしている第２の抗体を、第１の抗体／抗原複合体に加えるステップ、検出可能な標識によるシグナルを測定してＰＩＶＫＡ－ＩＩ抗原を検出するステップであることを特定しているのに対して、甲１１－６発明では、二抗体サンドイッチ法を利用する免疫学的測定方法であることのみが特定されている点。 （イ）本件訂正発明４５についての判断 上記相違点について検討する。 上記第７の７（３）ア（イ）と同様、「プロトロンビン誘導ビタミンＫアンタゴニストＩＩ（ＰＩＶＫＡ－ＩＩ）のアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を含み、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する（但し、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５９で特定されるハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体を除く）。」点（相違点１）については、先願（優先）明細書（甲１１かつ甲１２）に記載されておらず、記載されているに等しい事項であるとも認められない。 したがって、相違点２を検討するまでもなく、本件訂正発明４５は、甲１１－６発明、すなわち、先願発明と同一ではない。 （ウ）請求人の主張について 上記第７の７（３）ア（ウ）のとおり、請求人の主張は失当である。 （エ）本件訂正発明４６～５１についての判断 本件訂正発明４６～５１は、いずれも、本件訂正発明４５と同様に、「ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する抗体」を発明特定事項とするものを含むものであるから、これらの発明も、先願発明と同一ではない。 ク 本件訂正発明５２、５３について （ア）本件訂正発明５２と甲１１－５発明との対比 甲１１－５発明の「モノクローナル抗体」、「測定試薬」は、それぞれ、本件訂正発明５２の「結合性タンパク質」、「試験試料中のＰＩＶＫＡ－ＩＩの量を検出および／または定量するためのキット」に相当する。 一致点 「結合性タンパク質を含有する、試験試料中のＰＩＶＫＡ－ＩＩの量を検出および／または定量するためのキット。」 相違点１ 本件訂正発明５２は、結合性タンパク質が、「プロトロンビン誘導ビタミンＫアンタゴニストＩＩ（ＰＩＶＫＡ－ＩＩ）のアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を含み、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する（但し、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５９で特定されるハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体を除く）。」ものであるのに対し、甲１１－５発明は、この点が明記されていない点。 相違点２ 本件訂正発明５２が、結合性タンパク質を含有する容器を含むものであるのに対して、甲１１－５発明は容器を含むものであることが特定されていない点。 （イ）本件訂正発明５２についての判断 上記相違点について検討する。 上記第７の７（３）ア（イ）と同様、「プロトロンビン誘導ビタミンＫアンタゴニストＩＩ（ＰＩＶＫＡ－ＩＩ）のアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を含み、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する（但し、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５９で特定されるハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体を除く）。」点（相違点１）については、先願（優先）明細書（甲１１かつ甲１２）に記載されておらず、記載されているに等しい事項であるとも認められない。 したがって、他の相違点を検討するまでもなく、本件訂正発明５２は、甲１１－５発明、すなわち、先願発明と同一ではない。 （ウ）請求人の主張について 上記第７の７（３）ア（ウ）のとおり、請求人の主張は失当である。 （エ）本件訂正発明５３についての判断 本件訂正発明５３は、いずれも、本件訂正発明５２と同様に、「ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する抗体」を発明特定事項とするものを含むものであるから、これらの発明も、先願発明と同一ではない。 ケ 本件訂正発明５５、５７～６７について （ア）本件訂正発明５５と甲１１－５発明との対比 甲１１－５発明の「測定試薬」は、本件訂正発明５５の「試験試料中のＰＩＶＫＡ－ＩＩの量を検出および／または定量するためのキット」に相当するので、本件訂正発明５５と甲１１－５発明との一致点及び相違点は次の通りのものである。 一致点 「抗体を含む、試験試料中のＰＩＶＫＡ－ＩＩの量を検出および／または定量するためのキット。」 相違点１ 本件訂正発明５５は、検出試薬中の抗体が、「プロトロンビン誘導ビタミンＫアンタゴニストＩＩ（ＰＩＶＫＡ－ＩＩ）のアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を含み、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する（但し、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５９で特定されるハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体を除く）。」ものであるのに対し、甲１１－５発明は、この点が明記されていない点。 相違点２ 本件訂正発明５５が、「試験試料中のＰＩＶＫＡ－ＩＩの量を検出および／または定量するための指示書を含む」ものであるのに対して、甲１１－５発明は、そのような指示書を含むものであることが特定されていない点。 （イ）本件訂正発明５５についての判断 上記相違点について検討する。 上記第７の７（３）ア（イ）と同様、「プロトロンビン誘導ビタミンＫアンタゴニストＩＩ（ＰＩＶＫＡ－ＩＩ）のアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を含み、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する（但し、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５９で特定されるハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体を除く）。」点（相違点１）については、先願（優先）明細書（甲１１かつ甲１２）に記載されておらず、記載されているに等しい事項であるとも認められない。 したがって、相違点２を検討するまでもなく、本件訂正発明５５は、甲１１－５発明、すなわち、先願発明と同一ではない。 （ウ）請求人の主張について 上記第７の７（３）ア（ウ）のとおり、請求人の主張は失当である。 （エ）本件訂正発明５７～６７についての判断 本件訂正発明５７～６７は、いずれも、本件訂正発明５５と同様に、「ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する、（検出試薬中の）抗体」を発明特定事項とするものを含むものであるから、これらの発明も、先願発明と同一ではない。 コ 本件訂正発明６８～６９について （ア）本件訂正発明６８と甲１１－７発明との対比 甲１１－７発明の「抗ＰＩＶＫＡ－ＩＩモノクローナル抗体（ＭＵ－３）」は、甲第１号証に記載されているとおり、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１７－２７に結合する抗原結合部分を有するモノクローナル抗体であることが知られており、本件訂正発明６８の「ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１３－２７に結合する抗原結合性タンパク質」であるといえる。また、甲１１－７発明の「測定試薬」は、本件訂正発明６８の「試験試料中のＰＩＶＫＡ－ＩＩの量を検出および／または定量するためのキット」に相当する。 したがって、本件訂正発明６８と甲１１－７発明との一致点及び相違点は次のとおりのものである。 一致点 「（ＰＩＶＫＡ－ＩＩに対する）第１の結合性タンパク質、及び、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１３－２７に結合する第２の結合性タンパク質を含む、試験試料中のＰＩＶＫＡ－ＩＩの量を検出および／または定量するためのキット。」 相違点 本件訂正発明６８は、第１の結合性タンパク質が、「プロトロンビン誘導ビタミンＫアンタゴニストＩＩ（ＰＩＶＫＡ－ＩＩ）のアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を含み、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する（但し、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５９で特定されるハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体を除く）。」ものであるのに対し、甲１１－７発明は、この点が明記されていない点。 （イ）本件訂正発明６８についての判断 上記相違点について検討する。 上記第７の７（３）ア（イ）と同様、「プロトロンビン誘導ビタミンＫアンタゴニストＩＩ（ＰＩＶＫＡ－ＩＩ）のアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を含み、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する（但し、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５９で特定されるハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体を除く）。」点については、先願（優先）明細書（甲１１かつ甲１２）に記載されておらず、記載されているに等しい事項であるとも認められない。 したがって、本件訂正発明６８は、甲１１－７発明、すなわち、先願発明と同一ではない。 （ウ）請求人の主張について 上記第７の７（３）ア（ウ）のとおり、請求人の主張は失当である。 （エ）本件訂正発明６９についての判断 本件訂正発明６９は、本件訂正発明６８と同様に、「ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する、単離された結合性タンパク質」を発明特定事項とするものを含むものであるから、これらの発明も、先願発明と同一ではない。 サ 本件訂正発明７１、７２について （ア）本件訂正発明７１と甲１１－３発明との対比 甲１１－３発明の「モノクローナル抗体Ｐ－１６」は、上記第６の９（２）（ス）のとおり「エピトープ」が「プロトロンビンフラグメント１のＮ末端から５残基（配列番号１４で表わすａａ１－５）の範囲であ」り、「抗ＰＩＶＫＡ－ＩＩモノクローナル抗体（ＭＵ－３）」は、甲第１号証に記載されているとおり、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１７－２７に結合する抗原結合部分を有するモノクローナル抗体であることが知られているから、それぞれ本件訂正発明７１の「ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－３３のサブセットに特異的に結合する抗原結合性部分を含」む結合性タンパク質といえる。そして、モノクローナル抗体Ｐ－１６とモノクローナル抗体ＭＵ－３は、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－３３の異なるサブセットに結合するものである。 したがって、本件訂正発明７１と甲１１－３発明との一致点及び相違点は次のとおりのものである。 一致点 「少なくとも２つの異なる結合性タンパク質の使用を含み、前記結合性タンパク質の各々が、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－３３のサブセットに特異的に結合する抗原結合性部分を含み、前記結合性タンパク質の各々の抗原結合性部分が、ＰＩＶＫＡ－ＩＩのアミノ酸１－３３の異なるサブセットに結合する、試料中のＰＩＶＫＡ－ＩＩの量を決定するための方法。」 相違点 本件訂正発明７１は、結合性タンパク質の少なくとも１つが、「プロトロンビン誘導ビタミンＫアンタゴニストＩＩ（ＰＩＶＫＡ－ＩＩ）のアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を含み、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する（但し、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５９で特定されるハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体を除く）。」ものであるのに対し、甲１１－３発明は、この点が明記されていない点。 （イ）本件訂正発明７１についての判断 上記相違点について検討する。 上記第７の７（３）ア（イ）と同様、「プロトロンビン誘導ビタミンＫアンタゴニストＩＩ（ＰＩＶＫＡ－ＩＩ）のアミノ酸１－１３に結合する抗原結合性部分を含み、ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する（但し、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ－１１２５９で特定されるハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体を除く）。」点については、先願（優先）明細書（甲１１かつ甲１２）に記載されておらず、記載されているに等しい事項であるとも認められない。 したがって、本件訂正発明７１は、甲１１－７発明、すなわち、先願発明と同一ではない。 （ウ）請求人の主張について 上記第７の７（３）ア（ウ）のとおり、請求人の主張は失当である。 （エ）本件訂正発明７２についての判断 本件訂正発明７２は、本件訂正発明７１と同様に、「ＰＩＶＫＡ－ＩＩを特異的に認識して結合する結合性タンパク質」を発明特定事項とするものを含むものであるから、これらの発明も、先願発明と同一ではない。 （４）小括 以上のとおりであるから、請求人が主張する無効理由３は理由がない。 第８ むすび 以上のとおり、本件訂正は適法であり、本件訂正後の請求項３～５、１３、１５～２２、２５～３１、３３～３８、４０、４５～５３、５５、５７～６９、７１、７２に係る特許は、請求人が主張する無効理由１～６のいずれによっても無効とすることはできない。 本件特許の請求項７３及び７４に記載された発明は、本件訂正により削除されたため、それらに対して請求人がした請求については却下する。 審判に関する費用については、特許法１６９条第２項で準用する民事訴訟法６１条の規定により請求人の負担とする。 よって、結論のとおり審決する。