2025-700529

特許第７５８４１７６号発明「無細胞系血漿又は血清の製造方法」の特許異議申立事件について、次のとおり決定する。

結 論 特許第７５８４１７６号の請求項１～２４に係る特許を維持する。

理 由 第１ 手続の経緯 特許第７５８４１７６号（以下「本件特許」という。）の請求項１～２４に係る特許についての出願は、令和５年５月２６日の出願（特願２０２３－８６８３１号）の一部を、令和５年１０月１３日に新たな出願（特願２０２３－１７７３１０号）としたものであって、令和６年１１月７日に特許権の設定登録がされ、同年同月１５日にその特許掲載公報が発行されたものである。 その後、令和７年５月１５日に、その請求項１～２４に係る特許に対し、特許異議申立人 荻原 守（以下「申立人」という。）により、特許異議の申立てがされた。 第２ 本件特許発明 本件特許の請求項１～２４に係る発明は、その特許請求の範囲の請求項１～２４に記載された事項により特定される、次のとおりのものである（以下、請求項の項番に従い「本件特許発明１」～「本件特許発明２４」といい、これらをまとめて「本件特許発明」という。）。 「【請求項１】 血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）を５Ｗ～１００Ｗの出力で超音波破砕処理して、超音波破砕処理後の血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）を得る工程、及び得られた超音波破砕処理後の血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）から細胞を除去して、無細胞系血漿（多血小板血漿を除く）又は無細胞系血清を得る工程を含む、ＶＥＧＦ又はＩＧＦ１を濃縮した無細胞系血漿（多血小板血漿を除く）又は無細胞系血清の製造方法であって、無細胞系血漿（多血小板血漿を除く）又は無細胞血清を得る工程が、フィルタによって細胞を除去する工程を含む、製造方法。 【請求項２】 超音波破砕処理における出力が、７Ｗ～１００Ｗである、請求項１に記載の製造方法。 【請求項３】 超音波破砕処理の時間が、５秒～３０分である、請求項１に記載の製造方法。 【請求項４】 血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）を５Ｗ～５００Ｗの出力で超音波破砕処理して、超音波破砕処理後の血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）を得る工程、及び得られた超音波破砕処理後の血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）から細胞を除去して、無細胞系血漿（多血小板血漿を除く）又は無細胞系血清を得る工程を含む、ＶＥＧＦ又はＩＧＦ１を濃縮した無細胞系血漿（多血小板血漿を除く）又は無細胞系血清の製造方法であって、超音波破砕処理が、１回で行われる、又は２回～６回に分けて行われ、無細胞系血漿（多血小板血漿を除く）又は無細胞血清を得る工程が、フィルタによって細胞を除去する工程を含む、製造方法。 【請求項５】 血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）を５Ｗ～５００Ｗの出力で超音波破砕処理して、超音波破砕処理後の血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）を得る工程、及び得られた超音波破砕処理後の血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）から細胞を除去して、無細胞系血漿（多血小板血漿を除く）又は無細胞系血清を得る工程を含む、ＶＥＧＦ又はＩＧＦ１を濃縮した無細胞系血漿（多血小板血漿を除く）又は無細胞系血清の製造方法であって、超音波破砕処理が、チップ式又はカップホーン式により、無細胞系血漿（多血小板血漿を除く）又は無細胞血清を得る工程が、フィルタによって細胞を除去する工程を含む、製造方法。 【請求項６】 フィルタが、孔径０．１μｍ～１μｍのメンブレンフィルタである、請求項１に記載の製造方法。 【請求項７】 血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）を５Ｗ～５００Ｗの出力で超音波破砕処理して、超音波破砕処理後の血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）を得る工程、及び得られた超音波破砕処理後の血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）から細胞を除去して、無細胞系血漿（多血小板血漿を除く）又は無細胞系血清を得る工程を含む、ＶＥＧＦ又はＩＧＦ１を濃縮した無細胞系血漿（多血小板血漿を除く）又は無細胞系血清の製造方法であって、無細胞系血漿（多血小板血漿を除く）又は血清を得る工程が、フィルタを介する遠心分離処理によって細胞を除去する工程を含む、製造方法。 【請求項８】 遠心分離処理の回転数が、５００ｒｐｍ～４５００ｒｐｍである、請求項７に記載の製造方法。 【請求項９】 遠心分離処理をする時間が、１分～３０分である、請求項７に記載の製造方法。 【請求項１０】 血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）を５Ｗ～５００Ｗの出力で超音波破砕処理して、超音波破砕処理後の血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）を得る工程、及び得られた超音波破砕処理後の血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）から細胞を除去して、無細胞系血漿（多血小板血漿を除く）又は無細胞系血清を得る工程を含む、ＶＥＧＦ又はＩＧＦ１を濃縮した無細胞系血漿（多血小板血漿を除く）又は無細胞系血清の製造方法であって、５Ｗ～５００Ｗの出力で超音波破砕処理する血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）が、血液を遠心分離処理して回収された上清であり、遠心分離処理の回転数が、５００～４０００ｒｐｍであり、無細胞系血漿（多血小板血漿を除く）又は無細胞血清を得る工程が、フィルタによって細胞を除去する工程を含む、製造方法。 【請求項１１】 血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）を５Ｗ～５００Ｗの出力で超音波破砕処理して、超音波破砕処理後の血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）を得る工程、及び得られた超音波破砕処理後の血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）から細胞を除去して、無細胞系血漿（多血小板血漿を除く）又は無細胞系血清を得る工程を含む、ＶＥＧＦ又はＩＧＦ１を濃縮した無細胞系血漿（多血小板血漿を除く）又は無細胞系血清の製造方法であって、５Ｗ～５００Ｗの出力で超音波破砕処理する血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）が、血液を遠心分離処理して回収された上清であり、遠心分離処理の時間が、１分～３０分であり、無細胞系血漿（多血小板血漿を除く）又は無細胞血清を得る工程が、フィルタによって細胞を除去する工程を含む、製造方法。 【請求項１２】 血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）を５Ｗ～５００Ｗの出力で超音波破砕処理して、超音波破砕処理後の血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）を得る工程、及び得られた超音波破砕処理後の血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）から細胞を除去して、無細胞系血漿（多血小板血漿を除く）又は無細胞系血清を得る工程を含む、ＶＥＧＦ又はＩＧＦ１を濃縮した無細胞系血漿（多血小板血漿を除く）又は無細胞系血清の製造方法であって、５Ｗ～５００Ｗの出力で超音波破砕処理する血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）が、血液を遠心分離処理して回収された上清であり、遠心分離処理を行う際の温度が、４℃～４０℃であり、無細胞系血漿（多血小板血漿を除く）又は無細胞血清を得る工程が、フィルタによって細胞を除去する工程を含む、製造方法。 【請求項１３】 血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）を５Ｗ～５００Ｗの出力で超音波破砕処理して、超音波破砕処理後の血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）を得る工程、及び得られた超音波破砕処理後の血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）から細胞を除去して、無細胞系血漿（多血小板血漿を除く）又は無細胞系血清を得る工程を含む、ＶＥＧＦ又はＩＧＦ１を濃縮した無細胞系血漿（多血小板血漿を除く）又は無細胞系血清の製造方法であって、５Ｗ～５００Ｗの出力で超音波破砕処理する血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）が由来する血液が、生体からの採取から、血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）を取得する処理までに、０℃～１０℃において０分～１４４時間保存されたものであり、無細胞系血漿（多血小板血漿を除く）又は無細胞血清を得る工程が、フィルタによって細胞を除去する工程を含む、製造方法。 【請求項１４】 ５Ｗ～１００Ｗの出力で超音波破砕処理する血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）が、生体からの採取の後に血液凝固阻止剤を添加された血液から得られたものである、請求項１に記載の製造方法。 【請求項１５】 血液凝固阻止剤が、ヘパリン塩、クエン酸又はクエン酸誘導体である、請求項１４に記載の製造方法。 【請求項１６】 ５Ｗ～１００Ｗの出力で超音波破砕処理する血清（細胞を含まない血清を除く）が、生体からの採取の後に血液凝固剤を添加された血液から得られたものである、請求項１に記載の製造方法。 【請求項１７】 ＶＥＧＦ又はＩＧＦ１を濃縮した無細胞系血漿（多血小板血漿を除く）又は無細胞系血清が、凍結乾燥物である、請求項１に記載の製造方法。 【請求項１８】 フィルタによって細胞を除去する工程を含む製造方法によってＶＥＧＦ又はＩＧＦ１を濃縮した無細胞系血漿（多血小板血漿を除く）又は無細胞系血清を製造するための血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）の処理産物の製造方法であって、血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）を５Ｗ～１００Ｗの出力で超音波破砕処理して、血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）の処理産物を得る工程を含む、方法。 【請求項１９】 フィルタによって細胞を除去する工程を含む製造方法によってＶＥＧＦ又はＩＧＦ１を濃縮した無細胞系血漿（多血小板血漿を除く）又は無細胞血清を製造するための血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）の処理産物の製造方法であって、血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）を５Ｗ～５００Ｗの出力で超音波破砕処理して、血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）の処理産物を得る工程を含み、超音波破砕処理が、１回で行われる、又は２回～６回に分けて行われる、方法。 【請求項２０】 フィルタによって細胞を除去する工程を含む製造方法によってＶＥＧＦ又はＩＧＦ１を濃縮した無細胞系血漿（多血小板血漿を除く）又は無細胞血清を製造するための血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）の処理産物の製造方法であって、血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）を５Ｗ～５００Ｗの出力で超音波破砕処理して、血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）の処理産物を得る工程を含み、超音波破砕処理が、チップ式又はカップホーン式による、方法。 【請求項２１】 フィルタによって細胞を除去する工程を含む製造方法によってＶＥＧＦ又はＩＧＦ１を濃縮した無細胞系血漿（多血小板血漿を除く）又は無細胞血清を製造するための血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）の処理産物の製造方法であって、血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）を５Ｗ～５００Ｗの出力で超音波破砕処理して、血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）の処理産物を得る工程を含み、５Ｗ～５００Ｗの出力で超音波破砕処理する血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）が、血液を遠心分離処理して回収された上清であり、遠心分離処理の回転数が、５００～４０００ｒｐｍである、方法。 【請求項２２】 フィルタによって細胞を除去する工程を含む製造方法によってＶＥＧＦ又はＩＧＦ１を濃縮した無細胞系血漿（多血小板血漿を除く）又は無細胞血清を製造するための血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）の処理産物の製造方法であって、血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）を５Ｗ～５００Ｗの出力で超音波破砕処理して、血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）の処理産物を得る工程を含み、５Ｗ～５００Ｗの出力で超音波破砕処理する血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）が、血液を遠心分離処理して回収された上清であり、遠心分離処理の時間が、１分～３０分である、方法。 【請求項２３】 フィルタによって細胞を除去する工程を含む製造方法によってＶＥＧＦ又はＩＧＦ１を濃縮した無細胞系血漿（多血小板血漿を除く）又は無細胞血清を製造するための血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）の処理産物の製造方法であって、血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）を５Ｗ～５００Ｗの出力で超音波破砕処理して、血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）の処理産物を得る工程を含み、５Ｗ～５００Ｗの出力で超音波破砕処理する血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）が、血液を遠心分離処理して回収された上清であり、遠心分離処理を行う際の温度が、４℃～４０℃である、方法。 【請求項２４】 フィルタによって細胞を除去する工程を含む製造方法によってＶＥＧＦ又はＩＧＦ１を濃縮した無細胞系血漿（多血小板血漿を除く）又は無細胞血清を製造するための血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）の処理産物の製造方法であって、血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）を５Ｗ～５００Ｗの出力で超音波破砕処理して、血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）の処理産物を得る工程を含み、５Ｗ～５００Ｗの出力で超音波破砕処理する血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）が由来する血液が、生体からの採取から、血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）を取得する処理までに、０℃～１０℃において０分～１４４時間保存されたものである、方法。」 第３ 申立理由の概要及び証拠１ 申立理由の概要 申立人は、特許異議申立書（以下「申立書」という。）において、下記２に示す甲第１～１７号証（以下、それぞれの番号順に「甲１」等という。）を証拠方法として添付して提出し、本件特許の請求項１～２４に係る特許を取り消すべきとの申し立てをしており、その理由（以下「申立理由」という。）の概要は、次に示すとおりである。 （１）申立理由１（明確性要件違反） 本件特許の請求項１～２４に係る特許は、特許法第３６条第６項第２号に規定する要件を満たしていない特許出願に対してされたものであるから、同法第１１３条第４号に該当し取り消されるべきものである。 （２）申立理由２（サポート要件違反） 本件特許の請求項１～２４に係る特許は、特許法第３６条第６項第１号に規定する要件を満たしていない特許出願に対してされたものであるから、同法第１１３条第４号に該当し取り消されるべきものである。 （３）申立理由３（実施可能要件違反） 本件特許の請求項１～２４に係る特許は、特許法第３６条第４項第１号に規定する要件を満たしていない特許出願に対してされたものであるから、同法第１１３条第４号に該当し取り消されるべきものである。 （４）申立理由４（新規性欠如） ア 請求項１～２４に係る発明は、本件特許の出願前に日本国内又は外国において頒布された刊行物である又は電気通信回線を通じて公衆に利用可能となった甲１４に記載された発明であり、特許法第２９条第１項第３号に該当するから、当該各請求項に係る発明についての特許は、同法第１１３条第２号に該当し、取り消されるべきものである。 イ 請求項１～２４に係る発明は、本件特許の出願前に日本国内又は外国において頒布された刊行物である又は電気通信回線を通じて公衆に利用可能となった甲１５に記載された発明であり、特許法第２９条第１項第３号に該当するから、当該各請求項に係る発明についての特許は、同法第１１３条第２号に該当し、取り消されるべきものである。 （５）申立理由５（進歩性欠如） ア 請求項１～２４に係る発明は、本件特許の出願前に日本国内又は外国において頒布された刊行物である又は電気通信回線を通じて公衆に利用可能となった甲１４に記載された発明及び周知技術（甲９、甲１１～甲１３、甲１５、甲１６にそれぞれ記載された事項）に基いて、その出願前にその発明の属する技術の分野における通常の知識を有する者（以下「当業者」という。）が容易に発明をすることができたものであり、特許法第２９条第２項の規定により特許を受けることができないものであるから、当該各請求項に係る発明についての特許は、同法第１１３条第２号に該当し、取り消されるべきものである。 イ 請求項１～２４に係る発明は、本件特許の出願前に日本国内又は外国において頒布された刊行物である又は電気通信回線を通じて公衆に利用可能となった甲１５に記載された発明及び周知技術（甲９、甲１１～甲１４、甲１６にそれぞれ記載された事項）に基いて、当業者が容易に発明をすることができたものであり、特許法第２９条第２項の規定により特許を受けることができないものであるから、当該各請求項に係る発明についての特許は、同法第１１３条第２号に該当し、取り消されるべきものである。 ２ 証拠方法 甲１：生化学辞典（第４版）、ｐ．４４０、４４１、４４４、２００７年１２月１０日発行、 （株）東京化学同人 甲２：岩波生物学辞典（第４版）、ｐ．３９６～３９８、２０００年３月８日発行、（株）岩波書店 甲３：本件特許出願の審査過程において令和６年７月１９日に特許庁に提出された意見書 甲４：新井規仁ら、「特集／運動器の新しい治療法とリハビリテーション診療 ＰＲＰ治療を併用した運動器リハビリテーション」、MB Med Reha、2022、No.280、p.14-21 甲５：新井規仁ら、「特集／多血小板血漿（PRP）の上手な使い方 整形外科疾患とPRP－PRPについての意識調査－」、PEPARS、2023、No.204、p．75-84 甲６：Dhurat,R. et al.,“Principles and Methods of Preparation of Platelet-Rich Plasma:A Review and Author’s Perspective”, Journal of Cutaneous and Aesthetic Surgery, 2014, Volume 7, Issue 4, p.189-197（及びその抄訳文） 甲７：荒木淳、「論文題目 血小板製剤を用いた創傷治療に関する研究」、博士論文、東京大学医学系研究科外科学専攻、公開日：2016年8月10日 甲８：Araki, J. et al.,“Optimized Preparation Method of Platelet-Concentrated Plasma and Noncoagulating Platelet-Derived Factor Concentrates: Maximization of Platelet Concentration and Removal of Fibrinogen”,TISSUE ENGINEERING: PartC, 2012, Volume 18, Number 3, p.176-185（及びその抄訳文） 甲９：特開２０２１－１０９８７５号公報 甲１０：本件特許出願の審査過程において令和６年４月１０日に特許庁に提出された意見書 甲１１：特開２０１７－１７１５９７号公報 甲１２：特開２０１９－１７８１１６号公報 甲１３：特開２０１３－２０９４０９号公報 甲１４：中国特許出願公開第１０７４４６０３６号明細書（及びその抄訳文） 甲１５：中国特許出願公開第１１００２８５７１号明細書（及びその抄訳文） 甲１６：米国特許出願公開第２００７／０２８０９５９号明細書（及びその抄訳文） 甲１７：本件特許公報 第４ 当審の判断 当審は、本件請求項１～２４に係る特許は、上記第３に示した申立理由及び証拠によっては、取り消すことはできないと判断する。その理由は以下のとおりである。 １ 申立理由１（明確性要件違反）について （１）判断の前提 特許を受けようとする発明が明確であるかは、特許請求の範囲の記載のみならず、本件特許明細書の記載及び図面を考慮し、また、当業者の出願時における技術常識を基礎として、特許請求の範囲の記載が、第三者に不測の不利益を及ぼすほどに不明確であるかという観点から判断されるべきである。 （２）判断 ア 申立人の主張 申立人は、以下の点を主張する。 （ア）「血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）」との記載について 「血漿」との用語は、「血液から赤血球、白血球、血小板等の血球を取除いた液体成分」を意味し、「多血小板血漿」との用語は、「遠心分離によって調製され、血小板を多く含む血漿」を意味するものと解されるところ、「血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）」との記載は、血小板を実質的に含まないことを前提とする「血漿」から、血小板を含むことを前提とする「多血小板血漿」を除外しようとするものであって、技術的に矛盾しており、その意味内容を明確に理解できない。 （イ）「血清（細胞を含まない血清を除く）」との記載について 「血清」との用語は、「血漿からフィブリノゲン等の血液凝固因子を取除いたもの」を意味するところ、「血清」が、実質的に細胞を含まないことは当然であって、「細胞を含まない血清」という表現自体当業者にとって意味をなさないのであるから、「細胞を含まない血清を除く」という限定によって、「血清」からどのような血清を除外しようとするものなのか、技術的に理解できない。 イ 本件特許の出願時の技術常識について （ア）血漿及び血清について ａ 血漿について 血漿に関し、生化学に関する技術用語を集約した辞典である甲１には、「血液中から血球を取除いた成分．通常は血液凝固阻止剤を加えて遠心することより血球が沈殿するので、上に透明な淡黄色の液体として得られる．遠沈条件を軽くすると血小板を多く含んだ血漿（platelet-rich plasma）が得られる．」と記載され、また、同じく生化学に関する技術用語を集約した辞典である甲２にも、「血液の液性成分．［１］脊椎動物では、新鮮な全血から赤血球その他の有形成分を除いた部分に相当する．採血後、直ちに蓚酸塩などの血液凝固防止剤を加えるか、あるいは低温に保って血液凝固の進行を阻止したのち、放置または遠心操作によって有形成分を分離すれば、上清として淡黄色の血漿をうる．」と記載されている。 そうすると、血漿とは、血液から赤血球その他の有形成分を取除いた液性成分であり、採血後の血液から、血液凝固の進行を防止したのち、遠心操作等により分離することにより得られる上清であって、その分離の条件によって、血小板を多く含んだ態様も、細胞を全く含まない態様も包含し得ることは、本件特許の出願時の技術常識であったものと認められる。 ｂ 血清について 血清に関し、甲１には、「血液から血球といくつかの血液凝固因子［フィブリノーゲン（Ｉ因子）、プロトロンビン（ＩＩ因子）、Ｖ因子、ＶＩＩＩ因子など］を取除いたもの」と記載され、また、甲２にも、「血液から凝固成分をとり除いた部分」であり「その成分はほぼ血漿からフィブリノゲンを除いたものにあたる」と記載されている。 そうすると、血清とは、血液から赤血球その他の有形成分を取除いた液性成分から更に血液凝固因子を取除いたものであることは、本件特許の出願時の技術常識であったものと認められる。 （イ）多血小板血漿について ａ 甲４～甲９、甲１２、甲１３に記載された事項 甲４～甲９、甲１２、甲１３には次の記載がある。なお、「・・・」は記載の省略を表す。 （ａ） 甲４ ・甲４ａ（１４頁左欄３段落） 「ＰＲＰは末梢血を遠心分離して得られる「血小板を多量に含有する血漿分画」と定義され２）、成長因子などが生体内のバランスを保った状態で複合的に作用することにより、運動器組織の修復を促進すると考えられている．」 ・甲４ｂ（１４頁右欄１～２段落） 「２．ＰＲＰに含まれる生理活性物質 成長因子は損傷組織において細胞の遊走・増殖・分化を調整する役割を担っている．血小板内のα顆粒内にはplatelet-derived growth factor (ＰＤＧＦ)、transforming growth factor-β（ＴＧＦ－β）、 vascular endothelial growth factor（ＶＥＧＦ）、epidermal growth factor（ＥＧＦ）、fibroblast growth factor（ＦＧＦ）などの成長因子が含まれる．また、血漿中にはhepatocyte growth factor（ＨＧＦ）、insulin-like growth factor-1（ＩＧＦ－１）などが含まれる（表１）３）． ３．ＰＲＰの分類 一般にＰＲＰといってもその成分は調整方法によって大きく異なり、その分類も様々である．白血球（leukocyte）を含むか否か、フィブリン（fibrin）として使用するか否かで４つのＰＲＰに分類できる（表２）４）．」 （ｂ） 甲５ ・甲５ａ（７５頁左欄１段落） 「その成長因子を多く含む自己由来産物として、多血小板血漿（platelet-rich plasma：ＰＲＰ）が挙げられる．ＰＲＰは全血を遠心分離して得られる「血小板を多量に含有する血漿分画」と定義１）され、血小板にあるα顆粒内の様々な成長因子と血漿内の成長因子や接着因子・糖蛋白が生体内のバランスを保った状態で複合的に作用することにより、腱・靱帯・軟骨などの運動器組織の再生を促進すると考えられている．」 ・甲５ｂ（７５頁右欄１段落） 「一概にＰＲＰと言ってもその成分は調整方法によって大きく異なり、その分類も様々である．Dohan Ehrenfestら２）」は、白血球を含むか否か、フィブリンとして使用するか否かで４つのＰＲＰに分類し、DeLongら３）は調整されたＰＲＰの成分と活性化方法によって分けるＰＡＷ分類を提唱した．臨床的にはbuffy-coatと呼ばれる白血球層を含むか否かで、その対象疾患を使い分けていることが多い．」 （ｃ） 甲６（抄訳文による。） ・甲６ａ（要約） 「ＰＲＰは長年にわたり使用されていますが、血小板濃縮物のさまざまなバリエーションを定義・分類・説明するための適切な用語に関しては依然として混乱がある。また、ＰＲＰの標準化および調製に関して報告されているプロトコルには大きなばらつきがあり、多くの文献では試験された製品の正確な特性評価がなされていないという問題もある。」 ・甲６ｂ（１９０頁左欄２段落） 「分類 ＰＲＰ（多血小板血漿）に関する文献は非常に多く存在するが、発表されている結果はしばしば矛盾している。これは、数多くの調製技術、用語、製剤形態、さらには無限に存在する応用可能性のために、既存のデータを整理し解釈することが極めて困難であることに起因する。」 ・甲６ｃ（１９０頁右欄５段落～１９１頁左欄１段落） 「ＰＲＰの調製方法には多くの手法が存在する。ＰＲＰ法またはバフィーコート法によって調製することができる。 ＰＲＰ法では、まず最初に遠心分離を行って赤血球（ＲＢＣ）を分離し、その後、２回目の遠心分離によって血小板を濃縮する。濃縮された血小板は、最小限の血漿量に懸濁される。」 （ｄ） 甲７ ・甲７ａ（４頁１段落～５頁１段落） 「血小板製剤、特に多血小板血漿（Platelet-rich plasma;PRP）は、血液を分離することによって得られる、血小板を多く含む血漿のことである。・・・使用の際には静脈より採取した全血から１回目の遠心にてＰＲＰを分離し、２回目の遠心で濃縮する。１回目は血小板が血球層に落ち込まないように弱く、２回目は血小板を底に落とすために強く遠心を行う。本研究では２回遠心後上清を除去し体積を減らすことによって濃縮されたＰＲＰをPlatelet-Concentrated Plasma（ＰＣＰ）とし、１回目の遠心後の通常のＰＲＰと区別した。」 （ｅ） 甲８（抄訳文による。） ・甲８ａ（１７６頁右欄２段落～１７７頁１段落） 「治療目的においては、全血（ＷＢ）から単回の遠心分離で得られたＰＲＰを、さらにもう一度遠心分離して濃縮することがよく行われている。最初の遠心分離は、血小板が沈降しないように低速で行われ、一方で２回目の遠心分離は血小板を沈降させるために高速で実施される。本研究においては、２回目の遠心操作によって濃縮されたＰＲＰを、通常のＰＲＰと区別するために「血小板濃縮血漿（ＰＣＰ：platelet-concentrated plasma）」と呼ぶこととする。」 （ｆ） 甲９ ・甲９ａ（【０００２】） 「【０００２】 多血小板血漿（platelet-rich plasma,PRP）は、ヒトまたは動物の全血を遠心することによって得られる高濃度の血小板を有する血漿であり、血小板溶解物は、多血小板血漿をさらに処理した派生物質で、再生に関わる多種の成長因子を含む。したがって、多血小板血漿および血小板溶解物は、再生医学に応用できることがわかっている。」 ・甲９ｂ（【００４０】） 「【００４０】 その後、ステップｃ）を実行し、第１上層部１２（または第２上層部１３）と中間部１４を混合して、多血小板血漿（platelet-rich plasma,PRP）部１５を得る。本実施形態において、第１上層部１２（または第２上層部１３）と中間部１４を混合する方法は、例えば、遠心管３０を均一に揺動させて、第１上層部１２（または第２上層部１３）と中間部１４を混合する方法である。しかし、本発明はこれに限定されず、第１上層部１２（または第２上層部１３）と中間部１４を均一に混合できる方法であれば、いずれもこのステップにおいて応用することができる。」 （ｇ） 甲１２ ・甲１２ａ（【０００２】） 「【０００２】 自己の血液を遠心分離することで調製される血小板を濃縮した血漿、多血小板血漿（planet rich plasma：以下、「ＰＲＰ」とも呼ぶ）を用いる治療法がある。」 ・甲１２ｂ（【００２３】～【００２９】） 「【００２３】 本発明の方法は、血液から多血小板血漿を分離する工程を含む。 【００２４】 この工程の間において、血液および多血小板血漿の温度は、約４～約２５℃に制御することが好ましい。 【００２５】 血液（全血）から多血小板血漿を分離する手段に制限はなく、公知の任意の手段が使用可能である。通常は、血液について比較的低速度の第１の遠心分離処理を施して、赤血球を含む画分と、多血小板血漿（ＰＲＰ）と、少血小板血漿（platelet poor plasma）とに分離して得られる。 【００２６】 比較的低速度の第１の遠心分離処理は、約１００～約１０００Ｇ（通常の遠心分離器においては約２００～約２０００ｒｐｍ程度に相当）の遠心分離である。約１５０～約７５０Ｇ、約２００～約５００Ｇとしてもよい。処理時間は約３～約３０分、約５～約２０分、約１０～約１５分である。 【００２７】 比較的低速度の第１の遠心分離処理単独によって多血小板血漿を取得してもよい。また上清である血漿画分全て（多血小板血漿および少血小板血漿）を回収した後、第２の遠心分離処理を施して多血小板血漿を得てもよい。 【００２８】 第１の遠心分離処理後に回収した血漿画分について比較的高速度の第２の遠心分離処理によって血小板をペレット化させ、その後再懸濁させることで純化・濃縮化することができる。 【００２９】 比較的高速度の第２の遠心分離処理は、約１０００～約２５００Ｇ（通常の遠心分離器においては約２０００～約５０００ｒｐｍ程度に相当）の遠心分離である。約１１００～約２０００Ｇ、約１２００～約１５００Ｇとしてもよい。処理時間は約１～約３０分、約５～約２０分、約１０～約１５分である。」 ・甲１２ｃ（【００６８】、【００６９】） 「【００６８】 以下に実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。 【００６９】 （検体１～４の作製） ４人（男性１人、女性３人）の協力者からそれぞれ約４０ｍＬの全血を採取した。これらを恒温槽において４℃で一晩（約１６時間）冷蔵保存した。保存後、第１の遠心分離処理（１２００ｒｐｍ（２８０Ｇ相当）、１０分間、２４℃）を行い、上清である血漿（約２０ｍＬ）を回収した。この血漿について第２の遠心分離処理（２６８０ｒｐｍ（１４００Ｇ相当）、１０分間、２４℃）を行い、上清（血漿）を除去した（約１ｍＬの上清は残した）。残った上清によってペレットを再懸濁させ、再懸濁液（多血小板血漿）を得た。この１ｍＬの多血小板血漿に対して、５ｍＬの後述する所定バッファー液および１．５ｍＬの２％塩化カルシウム水溶液（ニプロ株式会社製、商品名：塩化カルシウム注２％「ＮＰ」）を添加し、よく撹拌して、７．５ｍＬの多血小板血漿を得た。これを２５℃において２０分静置した。この間、カルシウムイオンによって血小板が活性化され、ＰＤＧＦが血小板から放出された。」 （ｈ） 甲１３ ・甲１３ａ（【００２０】） 「【００２０】 ここで、本発明における「血液」とは、少なくとも血小板を含み、血球（赤血球、白血球）と液体成分である血漿（血清）からなる全血、及びこれらの少なくとも１種を含んだ液体（例えば成分献血で採取された血液）をいう。 また、「血清」とは、採取した血液を放置すると流動性が低下し、その後に赤い凝固塊（血餅）から分離される淡黄色の液体、又は細胞増殖因子を多く含む淡黄色の血液の液性成分をいう。 また、「多血小板血漿」とは、通常の全血中の血小板濃度よりも、より多くの血小板を含む血液の液性成分をいう。」 ｂ 「多血小板血漿」についての技術常識について 上記甲４～甲９、甲１２、甲１３の記載からみて、「多血小板血漿」とは、血液を遠心分離して得られる「血小板を多量に含有する血漿分画」であって、甲１２に「比較的低速度の第１の遠心分離処理単独によって多血小板血漿を取得してもよい。また上清である血漿画分全て（多血小板血漿および少血小板血漿）を回収した後、第２の遠心分離処理を施して多血小板血漿を得てもよい。」（甲１２ｂ）とあるとおり、血液を比較的低速度で遠心分離処理し、その上清として回収される「血漿画分全て」が、多血小板血漿と少血小板血漿を含むものであるのに対し、「多血小板血漿」は、少血小板血漿を含まないものである点において、別異のものであることは、本件特許の出願時の技術常識であったものと認められる。 ウ 検討 （ア）「血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）」との記載について 「血漿」とは、一般に、「血液から赤血球その他の有形成分を取除いた液性成分」と定義され、「採血後の血液から、血液凝固の進行を防止したのち、遠心操作等により分離すること」により得られるものであり、その分離の条件によって、「多血小板血漿」及び「少血小板血漿」を含む「血漿画分全て」である態様も、「多血小板血漿」である態様も、「細胞を含まない血漿」である態様も包含するものである（上記イ（ア）ａ）。 他方、「多血小板血漿」とは、一般に、血液を遠心分離して得られる「血小板を多量に含有する血漿分画」と定義され、「多血小板血漿及び少血小板血漿」を含む「血漿画分全て」から、更に分離回収されるものである（上記イ（イ）ｂ）。 そうすると、「血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）」との記載は、「血液から赤血球その他の有形成分を取除いた液性成分」であって、「多血小板血漿」及び「少血小板血漿」を含む「血漿画分全て」である態様も、「多血小板血漿」である態様も、「細胞を含まない血漿」である態様も包含する「血漿」から、「多血小板血漿」である態様と、「細胞を含まない血漿」である態様を除くものであり、請求項の記載がそれ自体で明確であるといえる。 この点、本件特許明細書中にこれと異なる用語の定義又は説明があるかどうかを検討すると、本件特許明細書には、 「【０００９】 血漿成分は遠心分離することで簡単に回収できるため成長因子の増量を目的とした加工知見が乏しく、また、試薬などの添加物は安全性の観点からできるだけ避けることが好ましい。」、 「【００２２】 本発明の製造方法において、５Ｗ～５００Ｗの出力で超音波破砕処理する血漿又は血清は、好ましくは、血液を遠心分離処理して回収された上清である。ここで、遠心分離処理の回転数は、好ましくは、５００～４０００ｒｐｍであり、より好ましくは、１０００～４０００ｒｐｍであり、更に好ましくは、１０００～２０００ｒｐｍであり、更に好ましくは、１０００～１５００ｒｐｍである。」、 「【００２９】 実施例１： 成人男性（１名）の協力者から約４０ｍＬの全血を採取し、採取した全血を血液抗凝固剤入りスピッツであるヘパリン管（株式会社ビー・エム・エル）に入れ、転倒混和をした後、保管した。なお、当該ヘパリン管には、血液凝固阻止剤であるヘパリンナトリウムやＡＣＤ液（成分：クエン酸ナトリウム水和物、クエン酸水和物、ブドウ糖）が含まれる。これらを恒温槽において４℃で一晩（約１６時間）冷蔵保存した。冷蔵保存後、遠心分離処理（１３００ｒｐｍ、１０分間、２４℃）を行い、上清である血漿（約２０ｍＬ）を回収した。非滅菌タイプの超音波発生機（超音波ホモジナイザー）（トミー精工、ＨａｎｄｙＳｏｎｉｃ、ＵＲ－２０Ｐ）を用いて、この血漿について超音波破砕処理を出力０Ｗ、２Ｗ、又は１０Ｗで、それぞれ１０秒間を３回ずつ処理することで３種類の検体を得た。超音波破砕処理後、これをシリンジに移し替え、孔径０．２２μｍのメンブレンフィルタによってフィルタリングして、細胞成分を除去した。このフィルタリングによってフィルタ上に残留する血球系細胞と、フィルタを通過した液体（無細胞系血漿）とに分離された。約１８ｍＬの無細胞系血漿を２ｍＬずつ９本のバイアルに分注して－８０℃で冷凍保管して検体を得た。」（下線は、当審合議体が付した。） との記載があり、上記用語の解釈と異なる用語ないし説明がされているわけではない。 したがって、本件特許発明の「血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）との記載は、それ自体明確であり、特許請求の範囲の記載のみならず、本件特許明細書の記載及び図面を考慮し、また、当業者の出願時における技術常識を基礎とすれば なおのこと、第三者に不測の不利益を及ぼすほどに不明確であるとはいえない。 （イ）「血清（細胞を含まない血清を除く）」との記載について 前記イ（ア）ｂのとおり、「血清」とは、「血漿」から血液凝固因子を取除いたものであり、当該「血漿」は、分離の条件によって、「多血小板血漿」及び「少血小板血漿」をともに含む「血漿画分全て」である態様も、「多血小板血漿」である態様も、「細胞を含まない血漿」である態様も包含するものであるから、「血漿」から血液凝固因子を取り除いた「血清」が、血小板を含む態様も、血小板その他の細胞を含まない態様も包含することは明らかである。そうすると、本件特許発明における「血清（細胞を含まない血清を除く）」との記載は、血小板を含む態様や、血小板その他の細胞を含まない態様をも包含する血清から、「細胞を含まない血清」を除外することを特定するものであるから、何ら技術的に矛盾するものではなく、その意味内容は技術的に明確である。 そうしてみると、本件特許発明の「血清（細胞を含まない血清を除く）」との記載は、それ自体明確であり、特許請求の範囲の記載のみならず、本件特許明細書の記載及び図面を考慮し、また、当業者の出願時における技術常識を基礎とすればなおのこと、第三者に不測の不利益を及ぼすほどに不明確であるとはいえない。 （３）まとめ したがって、本件特許発明１～２４は明確であり、特許法第３６条第６項第２号に規定する要件に適合するから、申立理由１によっては本件特許発明１～２４に係る特許を取り消すことはできない。 ２ 申立理由２（サポート要件違反）について （１）判断の前提 特許請求の範囲の記載が、サポート要件に適合するか否かは、特許請求の範囲の記載と発明の詳細な説明の記載とを対比し、特許請求の範囲に記載された発明が、発明の詳細な説明に記載された発明で、発明の詳細な説明の記載により当業者が当該発明の課題を解決できると認識できる範囲のものであるか否か、また、その記載や示唆がなくとも当業者が出願時の技術常識に照らし当該発明の課題を解決できると認識できる範囲のものであるか否かを検討して判断すべきものである。 （２）本件特許発明が解決しようとする課題 本件特許発明は、本件特許明細書の発明の詳細な説明の【０００１】～【０００９】にあるとおり、「ＶＥＧＦ、ＩＧＦ１などの成長因子を濃縮した無細胞系血漿又は血清の製造が求められる」ところ、「成長因子を濃縮する方法として超音波処理を用いることは、現実の実験結果の裏付けはなく、抽象的に提案され」るにとどまり、「血漿成分は遠心分離することで簡単に回収できるため成長因子の増量を目的とした加工知見が乏しく、また、試薬などの添加物は安全性の観点からできるだけ避けることが好まし」く、「さらに、遠心分離後の血漿分画には様々なタンパク質成分などが含まれるため、フィルタ濾過などを行う無細胞処理工程で目詰まりすることがしばしば見られる」といった、「血漿加工サービスの課題となっている」との技術的背景のもとなされたものであって、その解決しようとする課題は、【００１０】に記載されるとおり、「フィルタ濾過の際に目詰まりを起こさず、短い時間で濾過を行うことができ、フィルタ交換が不要であるなど、優れた操作性をもって、ＶＥＧＦ又はＩＧＦ１を濃縮した無細胞系血漿又は血清を製造することができる方法を提供すること」にあると認められる。 （３）本件特許明細書の発明の詳細な説明の記載 本件特許明細書の発明の詳細な説明には、本件特許発明について以下の記載がある。なお、下線は当審合議体が付したものであり、「・・・」は記載の省略を示す。 ア 【０００９】 「【０００９】 血漿成分は遠心分離することで簡単に回収できるため成長因子の増量を目的とした加工知見が乏しく、また、試薬などの添加物は安全性の観点からできるだけ避けることが好ましい。さらに、遠心分離後の血漿分画には様々なタンパク質成分などが含まれるため、フィルタ濾過などを行う無細胞処理工程で目詰まりすることがしばしば見られる。このような点が、血漿加工サービスの課題となっている。」 イ 【００１１】 「【００１１】 本発明者は、鋭意検討したところ、意外なことに、５Ｗ～５００Ｗの出力で超音波破砕処理をして、超音波破砕処理後の血漿又は血清を得る工程、及び得られた超音波破砕処理後の血漿又は血清から細胞を除去して、無細胞系血漿又は血清を得る工程を含む方法により、優れた操作性をもって、ＶＥＧＦ又はＩＧＦ１を濃縮した無細胞系血漿又は血清を製造することができることを見出した。成長因子のうち、ＶＥＧＦやＩＧＦ１については、超音波処理をしても、これらを濃縮した無細胞系血漿又は血清を製造することができず、むしろ、超音波処理をすると無細胞系血漿又は血清におけるこれらの含有量が低下することが認められていたことに鑑みれば、本発明者が見出したこの知見は、きわめて意外なことである。」 ウ 【００１３】 「【００１３】 より具体的な態様の本発明の製造方法によれば、フィルタ濾過の際に目詰まりを起こさず、短い時間で濾過を行うことができ、フィルタ交換が不要であるなど、優れた操作性をもって、ＶＥＧＦ又はＩＧＦ１を濃縮した無細胞系血漿又は血清を製造することができる。これは、遠心分離後の血漿又は血清分画にタンパク質の複合体などが混在することで、フィルタの目詰まりなどが生じてその後の処理を煩雑にして、ＶＥＧＦ又はＩＧＦ１の濃度を低下させていることを、５Ｗ～５００Ｗの出力での超音波破砕処理が解消するためであると推察される。」 エ 【００１５】～【００２６】 「【００１５】 本発明は、血漿又は血清を５Ｗ～５００Ｗの出力で超音波破砕処理して、超音波破砕処理後の血漿又は血清を得る工程、及び得られた超音波破砕処理後の血漿又は血清から細胞を除去して、無細胞系血漿又は血清を得る工程を含む、ＶＥＧＦ又はＩＧＦ１を濃縮した無細胞系血漿又は血清の製造方法を提供する。 【００１６】 超音波破砕処理における出力は、好ましくは、５Ｗ～５００Ｗであり、好ましくは、７Ｗ～５００Ｗであり、好ましくは、１０Ｗ～５００Ｗであり、より好ましくは、５Ｗ～４００Ｗであり、より好ましくは、７Ｗ～４００Ｗであり、より好ましくは、１０Ｗ～４００Ｗであり、更に好ましくは、５Ｗ～３００Ｗであり、更に好ましくは、７Ｗ～３００Ｗであり、更に好ましくは、１０Ｗ～３００Ｗであり、更に好ましくは、５Ｗ～２００Ｗであり、更に好ましくは、７Ｗ～２００Ｗであり、更に好ましくは、１０Ｗ～２００Ｗであり、更に好ましくは、５Ｗ～１００Ｗであり、更に好ましくは、７Ｗ～１００Ｗであり、更に好ましくは、１０Ｗ～１００Ｗである。 【００１７】 超音波破砕処理の時間は、好ましくは、１秒～４５分であり、より好ましくは、１秒～３０分であり、より好ましくは、５秒～３０分であり、更に好ましくは、１０秒～３０分であり、更に好ましくは、１秒～１０分であり、更に好ましくは、５秒～１０分であり、更に好ましくは、１０秒～１０分であり、更に好ましくは、１秒～５分であり、更に好ましくは、５秒～５分であり、更に好ましくは、１０秒～５分である。超音波破砕処理の時間は、例えば、１秒～１分や、５秒～１分や、１０秒～１分や、１秒～４０秒や、５秒～４０秒や、１０秒～４０秒などでもよい。なお、超音波破砕処理の時間は、超音波破砕処理が複数回に分けて行われる場合には、当該複数回行われる超音波破砕処理の時間の合計を言う。 【００１８】 超音波破砕処理は、１回で行われてもよく、分けて行われてもよく、好ましくは、２回～１０回に分けて行われ、より好ましくは、２回～８回に分けて行われ、更に好ましくは、２回～６回に分けて行われ、更に好ましくは、２回～４回に分けて行われる。 【００１９】 超音波破砕処理は、制限はなく、公知の超音波破砕処理を含め、任意の超音波破砕処理が使用可能であるが、好ましくは、チップ式（例えば、トミー精工、ＵＤ－１００）又はカップホーン式（例えば、トミー精工、ＵＤ－２１１）による。チップ式としては、例えば、超音波発生器（細長い棒）を検体に直接入れて処理するものが挙げられる。そのため、１Ｗ～５０Ｗなどの低いＷ数で効率的に処理することができる。チップ式による超音波破砕処理における出力は、好ましくは、５Ｗ～１００Ｗであり、好ましくは、７Ｗ～１００Ｗであり、より好ましくは、５Ｗ～９０Ｗであり、より好ましくは、７Ｗ～９０Ｗであり、更に好ましくは、５Ｗ～７０Ｗであり、更に好ましくは、７Ｗ～７０Ｗであり、更に好ましくは、５Ｗ～５０Ｗであり、更に好ましくは、７Ｗ～５０Ｗであり、更に好ましくは、５Ｗ～３０Ｗであり、更に好ましくは、７Ｗ～３０Ｗである。カップホーン式としては、例えば、水浴槽全体を超音波振動させ、そこに浸かった検体入りチューブを、チューブ壁面を超えて処理するものが挙げられる。したがって、１００Ｗ～５００Ｗなどの高い出力が求められる。カップホーン式による超音波破砕処理における出力は、好ましくは、１０Ｗ～５００Ｗであり、より好ましくは、２０Ｗ～４００Ｗであり、更に好ましくは、３０Ｗ～３００Ｗであり、更に好ましくは、４０Ｗ～２５０Ｗであり、更に好ましくは、５０Ｗ～２００Ｗである。なお、超音波破砕処理は、例えば、滅菌下又は非滅菌下で行われる。 【００２０】 超音波破砕処理後の血漿又は血清から細胞を除去して、無細胞系血漿又は血清を得る工程としては、例えば、加熱処理を行う工程、酸処理を行う工程のほか、フィルタによって細胞を除去する工程などが挙げられる。これらのうち、成長因子の変性を招くリスクが小さいことからフィルタによって細胞を除去する工程が好ましい。ここで、フィルタは、血球系細胞を除去できるものであれば制限はないが、血球系細胞の最小サイズは血小板の約２μｍであるため、フィルタとしては、好ましくは、孔径が１μｍ以下である、より好ましくは、孔径が０．７μｍ以下である、更に好ましくは、孔径が０．５μｍ以下である、メンブレンフィルタを使用することができる。なお、メンブレンフィルタの孔径の下限値に制限はないが、過度に小さいものは目詰まりを起こすリスクが大きくなる。そのため、孔径は、０．１μｍ以上が好ましく、０．２μｍ以上がより好ましい。通常市販されているメンブレンフィルタのうち、この範囲を満たすものとしては、孔径が約０．２μｍのメンブレンフィルタと、孔径が約０．４５μｍのメンブレンフィルタがあり、本発明においては、いずれも使用することができる。フィルタとしては、例えば、ミリポア社によるマイレクスＧＶ（ＳＬＧＶＲ３３ＲＳ）などのシリンジに取り付けて手押しで濾過するものが挙げられる。 【００２１】 また、超音波破砕処理後の血漿又は血清から細胞を除去して、無細胞系血漿又は血清を得る工程は、好ましくは、フィルタを介する遠心分離処理によって細胞を除去する工程を含む。フィルタとしては、前述と同様のフィルタが挙げられる。遠心分離処理の回転数は、好ましくは、５００ｒｐｍ～４５００ｒｐｍであり、より好ましくは、７５０ｒｐｍ～４０００ｒｐｍであり、更に好ましくは、１０００ｒｐｍ～３０００ｒｐｍであり、更に好ましくは、１５００ｒｐｍ～２０００ｒｐｍである。遠心分離処理をする時間は、好ましくは、１～３０分であり、より好ましくは、３～２０分であり、更に好ましくは、４～１５分であり、更に好ましくは、５～１０分である。 【００２２】 本発明の製造方法において、５Ｗ～５００Ｗの出力で超音波破砕処理する血漿又は血清は、好ましくは、血液を遠心分離処理して回収された上清である。ここで、遠心分離処理の回転数は、好ましくは、５００～４０００ｒｐｍであり、より好ましくは、１０００～４０００ｒｐｍであり、更に好ましくは、１０００～２０００ｒｐｍであり、更に好ましくは、１０００～１５００ｒｐｍである。遠心分離処理の時間は、好ましくは、１～３０分であり、より好ましくは、５～３０分であり、更に好ましくは、５～１５分である。遠心分離処理を行う際の温度は、好ましくは、４℃～４０℃であり、より好ましくは、４℃～３０℃であり、更に好ましくは、４℃～２５℃である。遠心分離処理を行う際の温度は、１０℃～４０℃や、１５℃～３０℃や、２０℃～２５℃であってもよい。 【００２３】 上記の遠心分離処理される血液など、５Ｗ～５００Ｗの出力で超音波破砕処理する血漿又は血清が由来する血液は、生体からの採取から、遠心分離処理などの血漿又は血清を取得する処理までに、保存される時間が０分であることが好ましいが、１分～１４４時間保存されたものであってもよく、より好ましくは、２分～１２０時間保存されたものであってもよく、更に好ましくは、３分～９６時間保存されたものであってもよく、更に好ましくは、４分～７２時間保存されたものであってもよい。保存する際の温度は、例えば、０℃～１０℃であり、より好ましくは、２℃～８℃であり、更に好ましくは、４℃～６℃であり、更に好ましくは、４℃～５℃である。本発明の製造方法は、これらの保存によっても大きな変化が生じず、検体である血液の輸送の必要に応えることができる。ここで、５Ｗ～５００Ｗの出力で超音波破砕処理する血漿又は血清が由来する血液は、好ましくは、血液凝固阻止剤又は血液凝固剤を添加された血液である。この場合には、保存する時間の始期は、血液凝固阻止剤又は血液凝固剤を添加した時としてもよい。 【００２４】 本発明の製造方法において、５Ｗ～５００Ｗの出力で超音波破砕処理する血漿は、好ましくは、生体からの採取の後に血液凝固阻止剤を添加された血液から得られたものである。ここで、血液凝固阻止剤としては、例えば、ヘパリンナトリウムなどのヘパリン塩；クエン酸水和物などのクエン酸；クエン酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム水和物などのクエン酸塩、クエン酸デキストロースなどのクエン酸誘導体；ＥＤＴＡ－２Ｎａ、ＥＤＴＡ－２ＫなどのＥＤＴＡ塩などが挙げられる。 【００２５】 本発明の製造方法において、５Ｗ～５００Ｗの出力で超音波破砕処理する血清は、例えば、血液凝固剤を使わない血餅形成により得られたものであってもよいが、生体からの採取の後に血液凝固剤を添加された血液から得られたものであってもよい。ここで、血液凝固剤としては、例えば、トロンビン、フィブリノーゲンなどが挙げられる。 【００２６】 血液凝固阻止剤又は血液凝固剤を添加する血液は、生体からの採取の後であって、血液凝固阻止剤又は血液凝固剤を添加する前に、保存されたものであってもよい。ここで、保存する時間は、好ましくは、０分～７２時間であり、より好ましくは、０分～４８時間であり、更に好ましくは、０分～２４時間であり、更に好ましくは、０分～１時間である。保存する際の温度は、好ましくは、０℃～１０℃であり、より好ましくは、１℃～８℃であり、更に好ましくは、２℃～６℃であり、更に好ましくは、３℃～５℃である。本発明の製造方法は、これらの保存によっても大きな変化が生じず、検体である血液の輸送の必要に応えることができる。 オ 【００２９】～【００３２】 「【００２９】 実施例１： 成人男性（１名）の協力者から約４０ｍＬの全血を採取し、採取した全血を血液抗凝固剤入りスピッツであるヘパリン管（株式会社ビー・エム・エル）に入れ、転倒混和をした後、保管した。なお、当該ヘパリン管には、血液凝固阻止剤であるヘパリンナトリウムやＡＣＤ液（成分：クエン酸ナトリウム水和物、クエン酸水和物、ブドウ糖）が含まれる。これらを恒温槽において４℃で一晩（約１６時間）冷蔵保存した。冷蔵保存後、遠心分離処理（１３００ｒｐｍ、１０分間、２４℃）を行い、上清である血漿（約２０ｍＬ）を回収した。非滅菌タイプの超音波発生機（超音波ホモジナイザー）（トミー精工、ＨａｎｄｙＳｏｎｉｃ、ＵＲ－２０Ｐ）を用いて、この血漿について超音波破砕処理を出力０Ｗ、２Ｗ、又は１０Ｗで、それぞれ１０秒間を３回ずつ処理することで３種類の検体を得た。超音波破砕処理後、これをシリンジに移し替え、孔径０．２２μｍのメンブレンフィルタによってフィルタリングして、細胞成分を除去した。このフィルタリングによってフィルタ上に残留する血球系細胞と、フィルタを通過した液体（無細胞系血漿）とに分離された。約１８ｍＬの無細胞系血漿を２ｍＬずつ９本のバイアルに分注して－８０℃で冷凍保管して検体を得た。 【００３０】 得られた検体についてＥＬＩＳＡ法によって成長因子であるＶＥＧＦとＩＧＦ１の濃度を解析した。ＶＥＧＦについての結果を図１に示し、ＩＧＦ１についての結果を図２に示す。図１及び図２において、条件１は、０Ｗ（未処理）の超音波破砕を処理した検体についての結果である。条件４は、１０Ｗで１０秒間の超音波破砕を３回処理した検体についての結果である。条件５は、２Ｗで１０秒間の超音波破砕を３回処理した検体についての結果である。 【００３１】 図１及び図２に示すように、２Ｗで１０秒間の超音波破砕処理を３回行うなど、２Ｗなどの出力で超音波破砕処理を行う場合には、サイトカインであるＶＥＧＦの濃度は高くなるどころか、むしろ、低くなるものであったにもかかわらず、全く意外なことに、１０Ｗで１０秒間の超音波破砕処理を３回行うなど、１０Ｗなどの出力で超音波破砕処理を行うことにより、サイトカインであるＶＥＧＦの濃度が高くなることが分かり、サイトカインであるＩＧＦ１の濃度についても同様の傾向が認められた。 【００３２】 また、０．２２μｍフィルタなどの濾過においては、超音波破砕処理することによってスムーズな濾過が可能であった。すなわち、０Ｗでは濾過をするにあたり、１５秒の濾過時間を要し、時にはフィルタ目詰まりによる交換が必要だったが、２Ｗの場合には同条件において５秒で濾過を行うことができ、５Ｗ（合議体註解：「１０Ｗ」の誤記）の場合には１秒で濾過を行うことができ、また、フィルタ交換の必要性はなく、本工程に要する時間が大幅に減縮した。」 カ 【図１】 「 ［図：0001430025000001.jpg］ 」 キ 【図２】 「 ［図：0001430025000002.jpg］ 」 （４）本件特許発明１について ア 判断 本件特許明細書の発明の詳細な説明の記載には、前記（３）ア～エにあるとおり、「血漿成分は遠心分離をすることで簡単に回収できる」ところ、「好ましくは、生体からの採取の後に血液凝固防止剤を添加された」「血液を遠心分離処理して回収された上清」である「血漿」又は「例えば、血液凝固剤を使わない血餅形成により得られ」る、あるいは「生体からの採取の後に血液凝固剤を添加された血液から得られ」る「血清」を、「５Ｗ～５００Ｗの出力で」、「公知の超音波破砕処理を含め、任意の超音波破砕処理」、「好ましくは、チップ式」「又はカップホーン式」による「超音波破砕処理して、超音波破水処理後の血漿又は血清を得る工程、及び得られた超音波破砕処理の血漿又は血清から」「フィルタによって細胞を除去して、無細胞系血漿又は血清を得る工程を含む、ＶＥＧＦ又はＩＧＦ１を濃縮した無細胞系血漿又は血清の製造方法」により、「フィルタ濾過の際に目詰まりを起こさず、短い時間で濾過を行うことができ、フィルタ交換が不要であるなど、優れた操作性をもって、ＶＥＧＦ又はＩＧＦ１を濃縮した無細胞系血漿又は血清を製造することができる」ことが記載されている。そして、上記製造方法により、ＶＥＧＦ又はＩＧＦ１を濃縮することができるメカニズムとして、「遠心分離後の血漿又は血清分画にタンパク質の複合体などが混在することで、フィルタの目詰まりなどが生じてその後の処理を煩雑にして、ＶＥＧＦ又はＩＧＦ１の濃度を低下させていることを、５Ｗ～５００Ｗの出力での超音波破砕処理が解消するためである」と説明されている。 そして、これを具現化した実施例として、「実施例１」には、「成人男性（１名）の協力者から約４０ｍＬの全血を採取し、採取した全血を血液抗凝固剤入りスピッツであるヘパリン管（株式会社ビー・エム・エル）に入れ、転倒混和をした後、保管し」「恒温槽において４℃で一晩（約１６時間）冷蔵保存した」「後、遠心分離処理（１３００ｒｐｍ、１０分間、２４℃）を行い、上清である血漿（約２０ｍＬ）を回収し」、「非滅菌タイプの超音波発生機（超音波ホモジナイザー）（トミー精工、ＨａｎｄｙＳｏｎｉｃ、ＵＲ－２０Ｐ）を用いて、この血漿について超音波破砕処理を出力」「１０Ｗで、」「１０秒間を３回ずつ処理」し、「検体を得」、「超音波破砕処理後、これをシリンジに移し替え、孔径０．２２μｍのメンブレンフィルタによってフィルタリングして、細胞成分を除去し」、「このフィルタリングによってフィルタ上に残留する血球系細胞と、フィルタを通過した液体（無細胞系血漿）とに分離され」、「約１８ｍＬの無細胞系血漿を２ｍＬ」「のバイアルに分注して－８０℃で冷凍保管して検体を得」、この「得られた検体についてＥＬＩＳＡ法によって成長因子であるＶＥＧＦとＩＧＦ１の濃度を解析した」ところ、「ＶＥＧＦについての結果」である「図１」、「ＩＧＦ１についての結果を」である「図２」に「示すように、」「１０Ｗで１０秒間の超音波破砕を３回処理した検体についての結果である」「条件４」では、「０Ｗ（未処理）の超音波破砕を処理した検体についての結果である」「条件１」、「２Ｗで１０秒間の超音波破砕を３回処理した検体についての結果である」「条件５」に比して、「サイトカインであるＶＥＧＦの濃度が高くな」り、「サイトカインであるＩＧＦ１の濃度についても同様の傾向が認められ」たこと、また、「０．２２μｍフィルタなどの濾過においては、超音波破砕処理することによってスムーズな濾過が可能であ」り、「すなわち、０Ｗでは濾過をするにあたり、１５秒の濾過時間を要し、時にはフィルタ目詰まりによる交換が必要だったが、２Ｗの場合には同条件において５秒で濾過を行うことができ、５Ｗ（合議体註解：「１０Ｗ」の誤記）の場合には１秒で濾過を行うことができ、また、フィルタ交換の必要性はなく、本工程に要する時間が大幅に減縮した」が具体的なデータによる裏付けとともに記載されている（前記（３）オ～キ）。 そうすると、本件特許明細書の発明の詳細な説明には、生体から採取された血液を、１３００ｒｐｍ程度の遠心分離により回収された上清である血漿に対し、超音波破砕処理を施すことによって、遠心分離後の血漿又は血清分画に混在するタンパク質の複合体などによるフィルタの目詰まりを防止したうえで、フィルタ濾過により細胞を除去することで、フィルタ濾過の際に目詰まりを起こすことなく短時間で濾過を行うことができ、フィルタ交換を必要とせずにＶＥＧＦ又はＩＧＦ１を濃縮した無細胞系血漿を調製できることを、当業者が認識できるように記載されているといえる。 そして、上記１（２）イのとおりの本件特許の出願時の技術常識に照らせば、上記実施例１において具体的に開示された１３００ｒｐｍ程度の遠心分離によって回収した「上清である血漿」は、いわゆる「多血小板血漿」ではなく、多血小板血漿と少血小板血漿を含む「血漿画分全て」であると解され、甲１のとおり、血小板とは「血液中に存在する直径２～３μｍの無核の扁平な細胞」であるから、多血小板血漿と少血小板血漿を含む「上清である血漿」は「細胞」を含むものである。したがって、本件特許明細書の実施例１において、出発原料として具体的に開示された「上清である血漿」が、本件特許発明１において特定される「血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）」であることは明らかである。 また、出発原料が、本件特許発明１において特定される「血清（細胞を含まない血清を除く）」である態様については実施例の開示はないものの、血清が血漿から血液凝固因子を取り除いたものであることを考慮すれば、本件特許発明１において、血漿を出発原料とした場合と同様に、血清に混在するタンパク質の複合体を超音波破砕処理し、続いてフィルタ濾過することにより、フィルタの目詰まりを起こすことなく、効率的にＶＥＧＦ又はＩＧＦ１を濃縮した無細胞系血清を製造できることを、当業者であれば認識できる。 そうしてみると、本件特許発明１は、発明の詳細な説明に記載された発明であり、発明の詳細な説明の記載により、「フィルタ濾過の際に目詰まりを起こさず、短い時間で濾過を行うことができ、フィルタ交換が不要であるなど優れた操作性をもって、ＶＥＧＦ又はＩＧＦ１を濃縮した無細胞系血漿又は血清を製造することができる方法を提供するという課題」を当業者が解決できると認識できる範囲のものであり、また、その記載や示唆がなくとも当業者が出願時の技術常識に照らし当該発明の課題を解決できると認識できる範囲のものであるといえる。 イ 申立人の主張について （ア）申立人の主張の概要 申立人は、特許異議申立書において、主に以下の点を主張している。 ａ 本件特許発明では、超音波破砕処理の出力範囲の上限として、「１００Ｗ」又は「５００Ｗ」が特定されている一方で、本件特許明細書の実施例において、ＶＥＧＦ、ＩＧＦ１を濃縮できたことが確認できるのは「１０Ｗ」に限られており、高出力条件では成長因子が失活・変性したり、多量の細胞デブリの発生によりフィルタの目詰まりが生じるおそれがある（９１頁４段落～９３頁１段落）。 ｂ 本件特許発明では、超音波破砕処理に使用する超音波ホモジナイザーの種類が特定されておらず、本件特許明細書の実施例ではチップ式に限られており、他方、装置の違いにより、超音波の伝播方式や処理対象へのエネルギーの伝達効率も大きく異なり、結果として、タンパク質複合体を破砕する能力や、処理過程における発熱の温度が変化し、フィルタの目詰まりや成長因子の安定性に影響を及ぼすことから、チップ式以外の超音波装置を用いた場合でも本件特許発明が目詰まりの抑制とＶＥＧＦ、ＩＧＦ１の効率的回収という課題を解決できるかは不明である（９３頁２段落～９４頁１段落）。 （イ）検討 ａ 前記（ア）ａについて 前記（３）エのとおり、本件特許明細書の発明の詳細な説明には、【００１６】において、超音波破砕処理における出力は、「５Ｗ～５００Ｗ」の範囲内で選択し得ることが記載されているのであるから、所望の成長因子であるＶＥＧＦやＩＧＦ１が破壊されることなく、また、フィルタの目詰まりの原因となる多量の細胞デブリが発生しないよう、超音波破砕処理における出力について上記の出力範囲内で適宜選択すれば足りることであり、また、実施例にある１０Ｗを超えた出力を選択できないことを予想させるような特段の事情も見当たらない。よって、申立人の主張を採用できない。 ｂ 前記（ア）ｂについて 前記（３）エのとおり、本件特許明細書の発明の詳細な説明には、【００１９】において、超音波破砕処理は、制限はなく、公知の超音波破砕処理を含め、任意の超音波破水処理が使用可能であってよいとされており、好ましい態様として、チップ式、カップホーン式が挙げられており、態様に応じて好ましい出力範囲についても記載されているのであるから、所望の成長因子であるＶＥＧＦやＩＧＦ１が破壊されることなく、また、フィルタの目詰まりの原因となる多量の細胞デブリが発生しないよう、出力範囲に応じた装置を適宜選択すれば足りることであり、また、チップ式以外の超音波破砕処理を選択できないことを予想させるような特段の事情も見当たらない。よって、申立人の主張を採用できない。 ウ 小括 以上のとおりであるから、本件特許発明１は本件特許明細書の発明の詳細な説明に記載された発明であり、本件特許は、特許法第３６条第６項第１号に規定する要件に適合するものであるから、申立理由２によっては本件特許発明１に係る特許を取り消すことはできない。 （５）本件特許発明２について 本件特許発明２は、本件特許発明１の製造方法において、超音波破砕処理における出力が、「７Ｗ～１００Ｗである」ことが特定されたものである。 ここで、本件特許明細書の発明の詳細な説明には、【００１６】において、超音波破砕処理における出力は、「５Ｗ～５００Ｗ」の範囲内で選択することができ（前記（３）エ）、「更に好ましくは、７Ｗ～１００Ｗであ」ることが記載されており、【００２９】～【００３２】において、実施例として、その範囲内である「１０Ｗ」の出力とすることで、フィルタの目詰まりを起こすことなく、効率的にＶＥＧＦ又はＩＧＦ１を濃縮した無細胞系血漿を製造できることも具体的に記載されている（前記（３）オ）。したがって、超音波破砕処理における出力について、フィルタの目詰まりの原因となる多量の細胞デブリが発生しないように、かかる出力範囲内で適宜選択すれば足りることであり、また、実施例にある１０Ｗを超えた出力を選択できないことを予想させるような特段の事情も見当たらない。 そうしてみると、前記（４）において本件特許発明１について説示したものと同様に、本件特許発明２は、特許請求の範囲に記載された発明が発明の詳細な説明に記載された発明であり、上記詳細な説明の記載又は本件特許の出願時の技術常識に照らして、当業者が前記のような本件特許発明の課題を解決するものと認識できる範囲のものであるといえる。 （６）本件特許発明３について 本件特許発明３は、本件特許発明１の製造方法において、超音波破砕処理の時間が、「５秒～３０分である」ことが特定されたものである。 ここで、本件特許明細書の発明の詳細な説明には、【００１７】において、超音波破砕処理の時間は、「１秒～４５分」の範囲内で選択することができ、「より好ましくは、５秒～３０分であ」ることが記載されており（前記（３）エ）、【００２９】～【００３２】において、実施例として、その範囲内である「１０秒」の時間とすることで、フィルタの目詰まりを起こすことなく、効率的にＶＥＧＦ又はＩＧＦ１を濃縮した無細胞系血漿を製造できることも具体的に記載されている（前記（３）オ）。したがって、超音波破砕処理における時間について、フィルタの目詰まりの原因となる多量の細胞デブリが発生しないように、かかる範囲内で適宜選択すれば足りることである。 そうしてみると、前記（４）において本件特許発明１について説示したものと同様に、本件特許発明３は、特許請求の範囲に記載された発明が発明の詳細な説明に記載された発明であり、上記詳細な説明の記載又は本件特許の出願時の技術常識に照らして、当業者が前記のような本件特許発明の課題を解決するものと認識できる範囲のものであるといえる。 （７）本件特許発明４について 本件特許発明４は、本件特許発明１の製造方法において、超音波破砕処理の出力を「５Ｗ～５００Ｗ」に変更し、かつ超音波破砕処理が「１回で行われる、又は２回～６回に分けて行われ」ることが特定されたものである。 ここで、本件特許明細書の発明の詳細な説明には、【００１６】において、超音波破砕処理における出力は、「５Ｗ～５００Ｗ」の範囲内で選択することができ、好ましい範囲内が段階的に記載されており、「更に好ましくは、５Ｗ～１００Ｗであ」るとされている（前記（３）エ）。また、【００１８】において、超音波破砕処理は、「１回で行われてよく、分けて行われてもよく」、「更に好ましくは、２回～６回に分けて行われ」ることも記載されている（前記（３）オ）。その上で、【００２９】～【００３２】において、実施例として、その範囲内である「１０Ｗ」の出力の超音波破砕処理を「３回」行うことで、フィルタの目詰まりを起こすことなく、効率的にＶＥＧＦ又はＩＧＦ１を濃縮した無細胞系血漿を製造できることも具体的に記載されている。したがって、超音波破砕処理における出力について、フィルタの目詰まりの原因となる多量の細胞デブリが発生しないように、かかる出力範囲内や回数の範囲内で適宜選択すれば足りることであり、また、実施例にある１０Ｗを超えた出力を選択できないことを予想させるような特段の事情も見当たらない。 そうしてみると、前記（４）において本件特許発明１について説示したものと同様に、本件特許発明４は、特許請求の範囲に記載された発明が発明の詳細な説明に記載された発明であり、上記詳細な説明の記載又は本件特許の出願時の技術常識に照らして、当業者が前記のような本件特許発明の課題を解決するものと認識できる範囲のものであるといえる。本件特許発明４は、特許請求の範囲に記載された発明が発明の詳細な説明に記載された発明であり、上記詳細な説明の記載又は本件特許の出願時の技術常識に照らして、当業者が前記のような本件特許発明の課題を解決するものと認識できる範囲のものであるといえる。 （８）本件特許発明５について 本件特許発明４は、本件特許発明１の製造方法において、超音波破砕処理の出力を「５Ｗ～５００Ｗ」に変更し、かつ超音波破砕処理が「チップ式又はカップホーン式」により行われることが特定されたものである。 ここで、超音波破砕処理の出力を「５Ｗ～５００Ｗ」に変更する点に関しては、前記（７）で説示したとおりである。そして、本件特許明細書の発明の詳細な説明には、【００１９】において、超音波破砕処理は、「制限はなく、公知の超音波破砕処理を含め、任意の超音波破砕処理が使用可能であるが、好ましくは、チップ式（例えば、トミー精工、ＵＤ－１００）又はカップ本式（例えば、トミー精工、ＵＤ－２１１）による。」が記載されており（前記（３）エ）、【００２９】～【００３２】において、実施例として、「非滅菌タイプの超音波発生機（超音波ホモジナイザー）（トミー精工、ＨａｎｄｙＳｏｎｉｃ、ＵＰ－２０Ｐ）」を用いることで、フィルタの目詰まりを起こすことなく、効率的にＶＥＧＦ又はＩＧＦ１を濃縮した無細胞系血漿を製造できることも具体的に記載されている（前記（３）オ）。また、フィルタの目詰まりの原因となる多量の細胞デブリが発生しないよう、汎用の超音波破砕処理の中から適宜選択すれば足りることであり、また、チップ式以外の超音波破砕処理を選択できないことを予想させるような特段の事情も見当たらない。 そうしてみると、前記（４）において本件特許発明１について説示したものと同様に、本件特許発明５は、特許請求の範囲に記載された発明が発明の詳細な説明に記載された発明であり、上記詳細な説明の記載又は本件特許の出願時の技術常識に照らして、当業者が前記のような本件特許発明の課題を解決するものと認識できる範囲のものであるといえる。 （９）本件特許発明６について 本件特許発明６は、本件特許発明１の製造方法において、フィルタが、「孔径０．１μｍ～１μｍのメンブレンフィルタ」であることが特定されたものである。 ここで、本件特許明細書の発明の詳細な説明には、【００２０】において、フィルタは、「血球系細胞を除去できるものであれば制限はないが、血球系細胞の最小サイズは約２μｍであるため、フィルタとしては、好ましくは、孔径が１μｍ以下であ」る「メンブレンフィルタを用いることができ」、「メンブレンフィルタの孔径の下限値に制限はないが、過度に小さいものは目詰まりを起こすリスクが大きくなる」「ため、孔径は、０．１μｍ以上が好ましく」、「通常市販されているメンブレンフィルタのうち、この範囲を満たすものとしては、孔径が約０．２μｍのメンブレンフィルタと、孔径が約０．４５μｍのメンブレンフィルタがあり、本発明においては、いずれも使用することができ」ることが記載されており（前記（３）エ）、【００２９】～【００３２】において、実施例として、「孔径０．２２μｍのメンブレンフィルタ」を用いることで、フィルタの目詰まりを起こすことなく、効率的にＶＥＧＦ又はＩＧＦ１を濃縮した無細胞系血漿を製造できることも具体的に記載されている（前記（３）オ）。したがって、メンブレンフィルタの孔径について、フィルタの目詰まりの原因となる多量の細胞デブリが発生しないように、かかる範囲内で適宜選択すれば足りることである。 そうしてみると、前記（４）において本件特許発明１について説示したものと同様に、本件特許発明６は、特許請求の範囲に記載された発明が発明の詳細な説明に記載された発明であり、上記詳細な説明の記載又は本件特許の出願時の技術常識に照らして、当業者が前記のような本件特許発明の課題を解決するものと認識できる範囲のものであるといえる。 （１０）本件特許発明７について 本件特許発明７は、本件特許発明１の製造方法において、超音波破砕処理の出力を「５Ｗ～５００Ｗ」に変更し、かつ細胞を除去する工程におけるフィルタが「フィルタを介する遠心分離処理」に特定されたものである。 ここで、超音波破砕処理の出力を「５Ｗ～５００Ｗ」に変更する点に関しては、前記（７）で説示したとおりである。そして、本件特許明細書の発明の詳細な説明には、【００２１】において、「超音波破砕処理後の血漿又は血清から細胞を除去して、無細胞系血清又は血清を得る工程は、好ましくは、フィルタを介する遠心分離処理によって細胞を除去する工程を含む。フィルタとしては、前述と同様のフィルタ（合議体註解：前記（９）において本件特許発明６について説示した【００２０】に記載されたフィルタ）が挙げられる。」と記載されており（前記（３）エ）、【００２９】～【００３２】において、実施例として、「孔径０．２２μｍのメンブレンフィルタ」を用いることで、フィルタの目詰まりを起こすことなく、効率的にＶＥＧＦ又はＩＧＦ１を濃縮した無細胞系血漿を製造できることも具体的に記載されているところ（前記（３）オ）、フィルタを介する遠心分離処理によっても同様に細胞を除去できることを当業者は理解することができる。 そうしてみると、前記（４）において本件特許発明１について説示したものと同様に、本件特許発明７は、特許請求の範囲に記載された発明が発明の詳細な説明に記載された発明であり、上記詳細な説明の記載又は本件特許の出願時の技術常識に照らして、当業者が前記のような本件特許発明の課題を解決するものと認識できる範囲のものであるといえる。 （１１）本件特許発明８について 本件特許発明８は、本件特許発明７の製造方法において、フィルタを介する遠心分離処理の回転数が、「５００ｒｐｍ～４５００ｒｐｍ」であることが特定されたものである。 ここで、本件特許明細書の発明の詳細な説明には、【００２１】において、フィルタを介する遠心分離処理の回転数は、「好ましくは、５００ｒｐｍ～４５００ｒｐｍであ」ると記載されているところ（前記（３）エ）、本件特許発明７におけるフィルムを介する遠心分離処理の際の回転数を「５００ｒｐｍ～４５００ｒｐｍ」とする場合であっても同様に細胞を除去できることを当業者は理解することができる。 そうしてみると、前記（１０）において本件特許発明７について説示したものと同様に、本件特許発明８は、特許請求の範囲に記載された発明が発明の詳細な説明に記載された発明であり、上記詳細な説明の記載又は本件特許の出願時の技術常識に照らして、当業者が前記のような本件特許発明の課題を解決するものと認識できる範囲のものであるといえる。 （１２）本件特許発明９について 本件特許発明９は、本件特許発明７の製造方法において、フィルタを介する遠心分離処理をする時間が「１分～３０分」であることが特定されたものである。 ここで、本件特許明細書の発明の詳細な説明には、【００２１】において、フィルタを介する遠心分離処理の時間は、「好ましくは、１～３０分であ」ると記載されているところ（前記（３）エ）、本件特許発明７におけるフィルムを介する遠心分離処理の際の時間を「１分～３０分」とする場合であっても同様に細胞を除去できることを当業者は理解することができる。 そうしてみると、前記（１０）において本件特許発明７について説示したものと同様に、本件特許発明９は、特許請求の範囲に記載された発明が発明の詳細な説明に記載された発明であり、上記詳細な説明の記載又は本件特許の出願時の技術常識に照らして、当業者が前記のような本件特許発明の課題を解決するものと認識できる範囲のものであるといえる。 （１３）本件特許発明１０について 本件特許発明１０は、本件特許発明１の製造方法において、超音波破砕処理の出力を「５Ｗ～５００Ｗ」に変更し、５Ｗ～５００Ｗの出力で超音波破砕処理する血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）が「血液を遠心分離処理して回収された上清」であり、その遠心分離処理の回転数が「５００～４０００ｒｐｍ」であることが特定されたものである。 ここで、超音波破砕処理の出力を「５Ｗ～５００Ｗ」に変更する点に関しては、前記（７）で説示したとおりである。そして、本件特許明細書の発明の詳細な説明には、【００２２】において、５Ｗ～５００Ｗの出力で超音波破砕処理する血漿又は血清は、「好ましくは、血液を遠心分離処理して回収された上清である」とされており（前記（３）エ）、このことは前記上記１（２）イで認定した血漿、血清に関する本件特許の出願時の技術常識とも符合するものである。さらに、【００２２】には、その遠心分離処理の回転数は「好ましくは、５００～４０００ｒｐｍであ」りとした上でより好ましい回転数が段階的に記載され、「更に好ましくは、１０００～１５００ｒｐｍである」でされており、その上で、【００２９】～【００３２】において、実施例として、血液を「１３００ｒｐｍ」の回転数で遠心分離して上清である血漿を回収し、当該血漿を出発原料とし、超音波破砕処理、続くフィルタ濾過により、フィルタの目詰まりを起こすことなく、効率的にＶＥＧＦ又はＩＧＦ１を濃縮した無細胞系血漿を製造できることも具体的に記載されている（前記（３）オ）。 そうしてみると、前記（４）において本件特許発明１について説示したものと同様に、本件特許発明１０は、特許請求の範囲に記載された発明が発明の詳細な説明に記載された発明であり、上記詳細な説明の記載又は本件特許の出願時の技術常識に照らして、当業者が前記のような本件特許発明の課題を解決するものと認識できる範囲のものであるといえる。 （１４）本件特許発明１１について 本件特許発明１１は、本件特許発明１の製造方法において、超音波破砕処理の出力を「５Ｗ～５００Ｗ」に変更し、５Ｗ～５００Ｗの出力で超音波破砕処理する血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）が「血液を遠心分離処理して回収された上清」であり、その遠心分離処理の時間が「１分～３０分」であることが特定されたものである。 ここで、超音波破砕処理の出力を「５Ｗ～５００Ｗ」に変更する点に関しては、前記（７）で、５Ｗ～５００Ｗの出力で超音波破砕処理する血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）が「血液を遠心分離処理して回収された上清」であると特定する点に関しては、前記（１３）で説示したとおりである。そして、本件特許明細書の発明の詳細な説明には、【００２２】には、遠心分離処理の時間は「好ましくは、１～３０分であり」とした上でより好ましい時間が段階的に記載され、「更に好ましくは、５～１５である」とされており（前記（３）エ）、その上で、【００２９】～【００３２】において、実施例として、血液を「１０分間」遠心分離して上清である血漿を回収し、当該血漿を出発原料とし、超音波破砕処理、続くフィルタ濾過により、フィルタの目詰まりを起こすことなく、効率的にＶＥＧＦ又はＩＧＦ１を濃縮した無細胞系血漿を製造できることも具体的に記載されている（前記（３）オ）。 そうしてみると、前記（４）において本件特許発明１について説示したものと同様に、本件特許発明１１は、特許請求の範囲に記載された発明が発明の詳細な説明に記載された発明であり、上記詳細な説明の記載又は本件特許の出願時の技術常識に照らして、当業者が前記のような本件特許発明の課題を解決するものと認識できる範囲のものであるといえる。 （１５）本件特許発明１２について 本件特許発明１２は、本件特許発明１の製造方法において、超音波破砕処理の出力を「５Ｗ～５００Ｗ」に変更し、５Ｗ～５００Ｗの出力で超音波破砕処理する血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）が「血液を遠心分離処理して回収された上清」であり、その遠心分離処理を行う際の温度が「４℃～４０℃」であることが特定されたものである。 ここで、超音波破砕処理の出力を「５Ｗ～５００Ｗ」に変更する点に関しては、前記（７）で、５Ｗ～５００Ｗの出力で超音波破砕処理する血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）が「血液を遠心分離処理して回収された上清」であると特定する点に関しては、前記（１３）で説示したとおりである。そして、本件特許明細書の発明の詳細な説明には、【００２２】には、遠心分離処理を行う際の温度は「好ましくは、４℃～４０℃であり」とした上でより好ましい温度が段階的に記載され、「更に好ましくは、４℃～２５℃であ」り、「２０℃～２５℃であってもよい」とされており（前記（３）エ）、その上で、【００２９】～【００３２】において、実施例として、血液を「２４℃」で遠心分離して上清である血漿を回収し、当該血漿を出発原料とし、超音波破砕処理、続くフィルタ濾過により、フィルタの目詰まりを起こすことなく、効率的にＶＥＧＦ又はＩＧＦ１を濃縮した無細胞系血漿を製造できることも具体的に記載されている（前記（３）オ）。 そうしてみると、前記（４）において本件特許発明１について説示したものと同様に、本件特許発明１２は、特許請求の範囲に記載された発明が発明の詳細な説明に記載された発明であり、上記詳細な説明の記載又は本件特許の出願時の技術常識に照らして、当業者が前記のような本件特許発明の課題を解決するものと認識できる範囲のものであるといえる。 （１６）本件特許発明１３について 本件特許発明１３は、本件特許発明１の製造方法において、超音波破砕処理の出力を「５Ｗ～５００Ｗ」に変更し、５Ｗ～５００Ｗの出力で超音波破砕処理する血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）が由来する血液が、「生体からの採取から、血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）を取得する処理までに、０℃～１０℃において０分～１４４時間保存されたものであ」ることが特定されたものである。 ここで、超音波破砕処理の出力を「５Ｗ～５００Ｗ」に変更する点に関しては、前記（７）で説示したとおりである。そして、本件特許明細書の発明の詳細な説明には、【００２３】には、「５Ｗ～５００Ｗの出力で超音波破砕処理する血漿又は血清は、生体からの採取から、遠心分離処理などの血漿又は血清を取得するまでに、保存される時間が０分であることが好ましいが、１分～１４４時間保存されたものであってよく」、「保存する際の温度は、例えば、０℃～１０℃であ」ことが記載されており（前記（３）エ）、【００２９】～【００３２】において、実施例として、「４℃で一晩（約１６時間）冷蔵保存した」「採取した全血」を遠心分離して上清である血漿を得、超音波破砕処理、続くフィルタ濾過により、フィルタの目詰まりを起こすことなく、効率的にＶＥＧＦ又はＩＧＦ１を濃縮した無細胞系血漿を製造できることも具体的に記載されている（前記（３）オ）。 そうしてみると、前記（４）において本件特許発明１について説示したものと同様に、本件特許発明１３は、特許請求の範囲に記載された発明が発明の詳細な説明に記載された発明であり、上記詳細な説明の記載又は本件特許の出願時の技術常識に照らして、当業者が前記のような本件特許発明の課題を解決するものと認識できる範囲のものであるといえる。 （１７）本件特許発明１４、本件特許発明１５について 本件特許発明１４は、本件特許発明１の製造方法において、５Ｗ～１００Ｗの出力で超音波破砕処理する血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）が、「生体からの採取の後に血液凝固防止剤を添加された血液から得られたものである」ことを特定し、本件特許発明１５は、本件特許発明１４の製造方法について、血液凝固防止剤が、「ヘパリン塩、クエン酸又はクエン酸誘導体である」ことが特定されたものである。 ここで、本件特許明細書の発明の詳細な説明には、【００２４】において、「超音波破砕処理する血漿は、好ましくは、生体からの採取の後に血液凝固防止剤を添加された血液から得られたものである」こと、「血液凝固阻止剤としては、例えば、ヘパリンナトリウムなどのヘパリン塩；クエン酸水和物などのクエン酸；クエン酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム水和物などのクエン酸塩、クエン酸デキストロースなどのクエン酸誘導体；ＥＤＴＡ－２Ｎａ、ＥＤＴＡ－２ＫなどのＥＤＴＡ塩などが挙げられる」ことが記載されており（前記（３）エ）、このことは前記（２）（ア）ａで説示した血漿に関する本件特許の出願時の技術常識とも符合するものである。そして、【００２９】～【００３２】において、実施例として、超音波破砕処理する血漿は、「採取した全血を血液抗凝固入りスピッツである」「血液凝固阻止剤であるヘパリンナトリウムやＡＣＤ液（成分：クエン酸ナトリウム水和物、クエン酸水和物、ブドウ糖）が含まれる」「ヘパリン管（株式会社ビー・エム・エル）に入れ」られ、遠心分離により回収された上清である血漿であり、当該血漿を出発原料とし、超音波破砕処理、続くフィルタ濾過により、フィルタの目詰まりを起こすことなく、効率的にＶＥＧＦ又はＩＧＦ１を濃縮した無細胞系血漿を製造できることも具体的に記載されている（前記（３）オ）。 そうしてみると、前記（４）において本件特許発明１について説示したものと同様に、本件特許発明１４及び１５は、特許請求の範囲に記載された発明が発明の詳細な説明に記載された発明であり、上記詳細な説明の記載又は本件特許の出願時の技術常識に照らして、当業者が前記のような本件特許発明の課題を解決するものと認識できる範囲のものであるといえる。 （１８）本件特許発明１６について 本件特許発明１６は、本件特許発明１の製造方法において、５Ｗ～１００Ｗの出力で超音波破砕処理する血清（細胞を含まない血清を除く）が、「生体からの採取の後に血液凝固防止剤を添加された血液から得られたものである」ことが特定されたものである。 ここで、前記（３）エに記載されるように、本件特許発明の血漿は生体からの採取の後に血液凝固防止剤を添加された血液から得られたものであってよく、このことは前記１（２）イで認定した血漿に関する本件特許の出願時の技術常識とも符合するものであり、また、前記１（２）イのとおり、血清が、血漿から血液凝固因子を取り除いたものであることも技術常識である。そして、前記（３）オにあるように、本件明細書の発明の詳細な説明には、実施例として、生体から採取した後に血液凝固防止剤が添加された血液から遠心分離により回収された上清である血漿を出発原料とし、超音波破砕処理、続くフィルタ濾過により、フィルタの目詰まりを起こすことなく、効率的にＶＥＧＦ又はＩＧＦ１を濃縮した無細胞系血漿を製造できることが具体的に記載されているところ、そのような上清の血漿から血液凝固因子を取り除くことで調製される血漿を出発原料として同様の処理を行うことでＶＥＧＦ又はＩＧＦ１を濃縮した無細胞系血漿を製造できることを当業者は認識することができる。 そうしてみると、前記（４）において本件特許発明１について説示したものと同様に、本件特許発明１６は、特許請求の範囲に記載された発明が発明の詳細な説明に記載された発明であり、上記詳細な説明の記載又は本件特許の出願時の技術常識に照らして、当業者が前記のような本件特許発明の課題を解決するものと認識できる範囲のものであるといえる。 （１９）本件特許発明１７について 本件特許発明１７は、本件特許発明１の製造方法において、ＶＥＧＦ又はＩＧＦ１を濃縮した無細胞系血漿（多血小板血漿を除く）又は無細胞系血清が、「凍結乾燥物」であることが特定されたものである。 ここで、本件明細書の発明の詳細な説明には、【００２７】において「本発明の製造方法により製造される無細胞系血漿又は血清は、凍結乾燥物であってよい」と記載されており（前記（３）エ）、また、通常、液性成分を安定化のために凍結乾燥物とすることは文献を挙げるまでもなく本件特許の出願時の技術常識であったものと認められるところ、本件特許発明１の製造方法により得られたＶＥＧＦ又はＩＧＦ１を濃縮した無細胞系血漿（多血小板血漿を除く）又は無細胞系血清を凍結乾燥物とすることは当業者が理解することができる。 そうしてみると、前記（４）において本件特許発明１について説示したものと同様に、本件特許発明１７は、特許請求の範囲に記載された発明が発明の詳細な説明に記載された発明であり、上記詳細な説明の記載又は本件特許の出願時の技術常識に照らして、当業者が前記のような本件特許発明の課題を解決するものと認識できる範囲のものであるといえる。 （２０）本件特許発明１８について 本件特許発明１８は、表現上の差異はあるものの、本件特許発明１と実質的に同一の発明である。 そうしてみると、前記（４）において本件特許発明１について説示したものと同様に、本件特許発明１８は、特許請求の範囲に記載された発明が発明の詳細な説明に記載された発明であり、上記詳細な説明の記載又は本件特許の出願時の技術常識に照らして、当業者が前記のような本件特許発明の課題を解決するものと認識できる範囲のものであるといえる。 （２１）本件特許発明１９について 本件特許発明１９は、表現上の差異はあるものの、本件特許発明４と実質的に同一の発明である。 そうしてみると、前記（７）において本件特許発明４について説示したものと同様に、本件特許発明１９は、特許請求の範囲に記載された発明が発明の詳細な説明に記載された発明であり、上記詳細な説明の記載又は本件特許の出願時の技術常識に照らして、当業者が前記のような本件特許発明の課題を解決するものと認識できる範囲のものであるといえる。 （２２）本件特許発明２０について 本件特許発明２０は、表現上の差異はあるものの、本件特許発明５と実質的に同一の発明である。 そうしてみると、前記（８）において本件特許発明５について説示したものと同様に、本件特許発明２０は、特許請求の範囲に記載された発明が発明の詳細な説明に記載された発明であり、上記詳細な説明の記載又は本件特許の出願時の技術常識に照らして、当業者が前記のような本件特許発明の課題を解決するものと認識できる範囲のものであるといえる。 （２３）本件特許発明２１について 本件特許発明２１は、表現上の差異はあるものの、本件特許発明１０と実質的に同一の発明である。 そうしてみると、前記（１３）において本件特許発明１０について説示したものと同様に、本件特許発明２１は、特許請求の範囲に記載された発明が発明の詳細な説明に記載された発明であり、上記詳細な説明の記載又は本件特許の出願時の技術常識に照らして、当業者が前記のような本件特許発明の課題を解決するものと認識できる範囲のものであるといえる。 （２４）本件特許発明２２について 本件特許発明２２は、表現上の差異はあるものの、本件特許発明１１と実質的に同一の発明である。 そうしてみると、前記（１４）において本件特許発明１１について説示したものと同様に、本件特許発明２２は、特許請求の範囲に記載された発明が発明の詳細な説明に記載された発明であり、上記詳細な説明の記載又は本件特許の出願時の技術常識に照らして、当業者が前記のような本件特許発明の課題を解決するものと認識できる範囲のものであるといえる。 （２５）本件特許発明２３について 本件特許発明２３は、表現上の差異はあるものの、本件特許発明１２と実質的に同一の発明である。 そうしてみると、前記（１５）において本件特許発明１２について説示したものと同様に、本件特許発明２３は、特許請求の範囲に記載された発明が発明の詳細な説明に記載された発明であり、上記詳細な説明の記載又は本件特許の出願時の技術常識に照らして、当業者が前記のような本件特許発明の課題を解決するものと認識できる範囲のものであるといえる。 （２６）本件特許発明２４について 本件特許発明２４は、表現上の差異はあるものの、本件特許発明１３と実質的に同一の発明である。 そうしてみると、前記（１６）において本件特許発明１３について説示したものと同様に、本件特許発明２４は、特許請求の範囲に記載された発明が発明の詳細な説明に記載された発明であり、上記詳細な説明の記載又は本件特許の出願時の技術常識に照らして、当業者が前記のような本件特許発明の課題を解決するものと認識できる範囲のものであるといえる。 （２７）まとめ 以上のとおりであるから、本件特許発明１～２４は、本件特許明細書の発明の詳細な説明に記載された発明であり、本件特許は、特許法第３６条第６項第１号の要件を満たすものであって、申立理由２によっては本件特許発明１～２４に係る特許を取り消すことはできない。 ３ 申立理由３（実施可能要件違反）について （１）判断の前提 本件特許発明は、物を生産する方法とする発明であるところ、これらの発明について、発明の詳細な説明の記載が、実施可能要件を充足するためには、発明の詳細な説明に、「方法の発明」については、当業者がその方法を使用できるように記載されていなければならず、「物を生産する方法」については、当業者がその物を製造できるように記載されていることが要される。 （２）判断 本件特許明細書の発明の詳細な説明には、「血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）を５Ｗ～１００Ｗ又は５Ｗ～５００Ｗの出力で超音波破砕処理して、超音波破砕処理後の血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）を得る工程、及び得られた超音波破砕処理後の血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）から細胞を除去して、無細胞系血漿（多血小板血漿を除く）又は無細胞系血清を得る工程を含む、ＶＥＧＦ又はＩＧＦ１を濃縮した無細胞系血漿（多血小板血漿を除く）又は無細胞系血清の製造方法であって、無細胞系血漿（多血小板血漿を除く）又は無細胞血清を得る工程が、フィルタによって細胞を除去する工程を含む、製造方法」である本件特許発明について、「血液を遠心分離処理して回収された上清」である「血漿」を出発材料として、これを「５Ｗ～５００Ｗの出力で」、「公知の超音波破砕処理を含め、任意の超音波破砕処理」ことによって、遠心分離後の血漿又は血清分画に混在するタンパク質の複合体などによるフィルタの目詰まりを防止し、その後、フィルタ濾過により細胞を除去することで、フィルタ濾過の際に目詰まりを起こすことなく短時間で濾過を行うことができ、フィルタ交換を必要とせずにＶＥＧＦ又はＩＧＦ１を濃縮した無細胞系血漿を調製できることが説明されるとともに、実施例には、これらの工程を含む方法により、「無細胞系血漿（多血小板血漿を除く）又は無細胞系血清を得る工程を含む、ＶＥＧＦ又はＩＧＦ１を濃縮した無細胞系血漿（多血小板血漿を除く）又は無細胞系血清」を製造することができたことが具体的に示されている。 したがって、本件特許明細書の発明の詳細な説明には、「物を生産する方法」である本件特許発明について、当業者がその物を製造できるように記載されているといえる。 （３）申立人の主張について 申立人は、特許異議申立書において、前記２（４）イ（ア）ａ、ｂと同趣旨の主張をしている。 しかしながら、前記２（４）イ（イ）ａ、ｂで説示したとおりであるから、申立人の主張を採用することはできない。 （４）まとめ 以上のとおりであるから、本件特許明細書の発明の詳細な説明は、本件特許発明１～２４について、当業者が実施できる程度に明確かつ十分に記載されているといえ、特許法第３６条第４項第１号に規定する要件を満たすものであって、申立理由３によっては本件特許発明１～２４に係る特許を取り消すことはできない。 ４ 申立理由４及び５（新規性欠如及び進歩性欠如） （１）申立理由４（１）及び５（１）（甲１４を主引例とする新規性欠如及び進歩性欠如） ア 甲１４に記載された事項及び甲１４に記載された発明 （ア）甲１４に記載された事項 甲１４には以下の事項が記載されている（原文は中国語であるので、甲１４の抄訳文に基づき摘記する。）。なお、下線は当審合議体が付したものであり、「・・・」は記載の省略を示す。 ・甲１４ａ（請求項１～９） 「【請求項１】 血小板細胞因子濃縮物の濃縮方法であって、以下の工程を含む方法。 すなわち、全血を採取し、血小板を回収して生理食塩水に懸濁して細胞懸濁液とし、超音波出力１００～２００Ｗの条件下で複数回超音波破砕を行い（各回の破砕時間は１～６０秒）、その破砕混合液をろ過し、得られたろ液から血小板細胞因子濃縮物を得る方法。 【請求項２】 請求項１に記載の血小板細胞因子濃縮物の濃縮方法であって、 前記超音波破砕は、直径２～６ｍｍのプローブを備えた超音波細胞破砕装置により行うことを特徴とする方法。 【請求項３】 請求項１に記載の方法であって、 前記超音波破砕の回数が１回～６回であることを特徴とする方法。 【請求項４】 請求項１に記載の方法であって、 前記超音波破砕条件が、出力２００Ｗ、破砕１回、破砕時間６０秒であることを特徴とする方法。 【請求項５】 請求項１に記載の方法であって、 前記細胞懸濁液の細胞濃度が１０４～１０８個／ｍＬであることを特徴とする方法。 【請求項６】 請求項１に記載の方法であって、 前記ろ過が、孔径０．２２～０．４５μｍのフィルターを用いて行われることを特徴とする方法。 【請求項７】 請求項１に記載の方法であって、前記血小板の調製方法が以下の工程を含むことを特徴とする方法： （１）ヒトまたは動物由来の全血を抗凝固剤と十分に混合し、遠心管ａに入れて１０００ｒｐｍで１０分間遠心し、上層・中間層・下層の３層に分離し（下層：赤血球、上層：貧血小板層、中間層：富血小板層）、上層および中間層を遠心管ｂに回収する。抗凝固剤はクエン酸ナトリウム、ヘパリン、またはヒルジンである； （２）ステップ（１）で中間および上層を取り除いた後の遠心管ａに生理食塩水を加え、再度１０００ｒｐｍで１０分間遠心し、再び３層に分離させ、上層および中間層をステップ（１）の遠心管ｂに加えて混合する； （３）ステップ（２）の遠心管ｂに赤血球溶解液を加え、混合して３０分間静置した後、１５００ｒｐｍで２０分間遠心し、上清層・中間の白色フロック層・沈殿層に分離し、上清および白色層をそれぞれ遠心管ｃおよびｄに移す；遠心管ｃを１５００ｒｐｍで２０分間遠心し、得られた沈殿を遠心管ｄに加えて混合し、生理食塩水を加えて再度１５００ｒｐｍで２０分後遠心し、中間の白色層を回収して血小板とする方法。 【請求項８】 請求項７に記載の方法であって、ステップ（１）における抗凝固剤と全血の体積比が１：９であることを特徴とする方法。 【請求項９】 請求項７に記載の方法であって、ステップ（１）における赤血球溶解液が、質量濃度１％の塩化アンモニウム水溶液であることを特徴とする方法。」 ・甲１４ｂ（（１）技術分野、（２）背景技術） 「（１）技術分野 [0002]本発明は、軟骨および骨組織の損傷修復に利用可能な血小板細胞因子濃縮物の濃縮方法に関する。 （２）背景技術 血小板（platelet）は哺乳類の血液中に存在する無核細胞であり、細胞内のα顆粒の脱顆粒作用を通じて多くの細胞増殖因子を放出することができる。これらには、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、トランスフォーミング成長因子－β（ＴＧＦ－β）、インスリン様成長因子－１（ＩＧＦ－１）、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、上皮成長因子（ＥＧＦ）、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）などが含まれる・・・血小板が放出するこれらの細胞増殖因子は生物学的活性が非常に高く、骨細胞の分裂・増殖やコラーゲン合成を誘導し、骨組織の修復および再構築を促進することが知られている・・・。」 ・甲１４ｃ（［0021］、［0022］） 「［0021］既知の同種技術としては、ＰＲＰ（多血小板血漿）を凍結と再溶解により処理した血小板裂解液（ＰＬ）がある。これと比較して、本発明の有利な点は以下のとおりである： ［0022］１）ＰＬ（血小板裂解液）はＰＲＰ（多血小板血漿）を基に調製されたものであるが、ＰＲＰには赤血球、白血球、および血漿が残存することを避けられず、ＰＬ中に多数の異物細胞や血漿成分が混在する。そのため、含有されるサイトカインの効果を阻害し、潜在的な安全性の懸念を生じさせる可能性がある。これに対し、本発明は、先行特許技術（中国特許第ZL 2014 1 0508458.8号）に基づいて得られた精製血小板を用いて調製しており、異物細胞や血漿の影響を排除することができ、より高い安全性および生物学的効果を有する。」 ・甲１４ｄ（[0025]） 「[0025]本発明により得られる血小板超音波破砕液（サイトカイン濃縮物）は、ＴＧＦ－β、ＰＤＧＦ、ＩＧＦｓ、ＦＧＦｓ、ＥＧＦ、ＶＥＧＦなど、多種類の生物活性因子を含有する。これらは軟骨細胞の活性を向上させ、幹細胞の増殖および分化を促進し、軟骨および骨組織の再生・修復に貢献する、また、本組成物は注射剤、粉末剤などの形態で製剤化することができ、医療用骨組織工学分野において極めて応用の可能性を有している。」 ・甲１４ｅ（［0032］～［0043］） 「[0032]実施例１ ［0033］(1)ヒト全血９ｍｌを、質量濃度３．２％のクエン酸ナトリウム水溶液１ｍＬ（抗凝固剤）を含む容器に採取する。抗凝固剤の全血の体積比は１：９とし、完全に混和して凝固を防止する。 ［0034］(2)ステップ（１）で混合した血液を遠心チューブａに分注し、１０００ｒｐｍで１０分間遠心する。遠心後、血液は３層に分けられ、下層は赤血球層、上層は貧血小板層とし、中間層は血小板および白血球を含む富血小層となる。 ［0035］(3)ステップ（２）の遠心チューブａの上層および中間層をピペットで吸引し、新たな遠心チューブｂに移す。この際、赤血球を意図的に避ける必要はない。 ［0036］(4)ステップ（３）で上層および中間層を取り除いた後の遠心チューブａに生理食塩水を加え、１０００ｒｐｍで１０分間遠心する。再び３層に分かれるので、上層（貧血小板層）および中間層（富血小板層）をピペットで吸引し、ステップ（３）の遠心チューブｂに加えて混合する。 ［0037］(5)ステップ（４）遠心チューブｂに、１ｍｌの１％とする塩化アンモニウム水溶液を加え、混合後３０分間静置する。その後１５００ｒｐｍで２０分間遠心し、上清、中間の白色絮状層、下部の沈殿層に分かれる。上清及び中間層をそれぞれ遠心チューブｃおよびｄに移す。遠心チューブｃを１５００ｒｐｍでさらに１０分間遠心し、得られた白色沈殿をチューブｄに加えて混合し、生理食塩水を加えた後、１５００ｒｐｍで１０分間遠心する。中間の白色層を回収することで、精製された血小板が得られる。この精製血小板１００μＬを用いて、ＢＤ社製のフローサイトメーターで血小板濃度を測定し、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社製のＣＤ４１ａ－ＰＥ抗体を用いて陽性率を測定する（図４ａ参照）。血小板濃度は３．１×１０１１／Ｌ、陽性率９７．８７％であり、本製法の品質管理に使用する。 ［0038］(6)ステップ（５）で得られた精製血小板を用い、生理食塩水で１０４／ｍＬの細胞懸濁液５ｍＬを作製する。これを２ｍｍプローブ付きの超音波破砕機（ＶＣＸ５００，５００Ｗ／２０ＫＨｚ、ＳＯＮＩＣＳ＆ＭＡＴＥＲＩＡＬＳ社製）により、超音波出力２００Ｗ、６０秒、１回の条件で破砕処理を行う。０．２２μｍのフィルターを通して混合液をろ過し、血小板細胞因子濃縮物を得る。ＢＤ社製のフローサイトメトリーを用いて、ろ過前の細胞懸濁液および破砕後の超音波混合液の濃度を測定し、ＣＤ４１ａ－ＰＥ抗体で陽性率を測定する（図４ｃ参照）。血小板濃度は＜１×１０９／Ｌ、陽性割合７．６７％であり、破砕および濾過の程度を明確に示す。得られた濃縮物について、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ法）により、ＴＧＦ－β、ＰＤＧＦ－ＢＢ、ＩＧＦ－１、ＶＥＧＦの含有量を測定した（表１および図５参照）。 ［0039］比較として、ＰＬ法で調製した血小板凍結融解裂解液についても濃度および陽性率を測定（図４ｂ参照）し、ＥＬＩＳＡ測定結果を図５に示した。 ［0040］(7)ステップ（６）で得られた血小板細胞因子濃集物を、高濃度（原液）、中濃度（原液の１／１０、生理食塩水で希釈）、低濃度（原液の１／５０）に希釈し、それぞれ５０μＬを９６ウェルプレート中の間葉系幹細胞を摂取済みのＤＭＥＭ培地１５０μＬに添加し、３７℃で２４時間、４８時間、７２時間培養した。各時間点でＭＴＴ法により細胞活性を評価し、ＰＬ法との比較を行った（図１参照）。その結果、本発明の濃縮物は２４時間以降、幹細胞の増殖活性を有意に向上させ、時間依存性および濃度依存性を示し、ＰＬ法よりも優れていた。 ［0041］ＰＬ法はステップ（５）の精製血小板を－２０℃で凍結し、その後３７℃で急速解凍する操作を３回繰り返して調製される。ＰＬについても同様に濃度設定し、ＭＴＴおよびＥＬＩＳＡによる比較を実施した（表１および図１）。 ［0042］対照として、生理食塩水のみを同量添加して評価した。 ［0043］(8)ＲａｙＢｉｏｔｅｃｈ社製抗体アレイ（ＡＡＨ－ＢＬＧ－５０７）を用い、ステップ（６）で得られた血小板細胞因子濃縮物とＰＬ法による裂解液の成分分析を行った。各サンプル４００μＬを２本の透析管に分け、ｐＨ８．０のＰＢＳ（５００ｍＬ）に入れ、４℃で一晩透析した（途中２回ＰＢＳを交換・撹拌）。透析後のサンプル（透過液）を１．５ｍＬ遠心チューブに移し、４℃・１００００ｒｐｍ、５分間遠心し、上清を新しいチューブに移す。透析済みサンプル（１８０μＬ）に３６μＬＢｉｏｔｉｎ／ｍｇＰｒｏｔｅｉｎの比で標識試薬を加え、室温で３０分間撹拌した後、ＳｔｏｐＳｏｌｕｔｉｏｎ（ＩｔｅｍＤ）３μＬを添加して混合。再度ＰＢＳに入れ一晩透析（途中ＰＢＳ交換２回）。透析後に同様に延伸し、上清を回収してチップ検出に用いた。表２に示すように、ＰＬに比べ、本発明の方法で得られた濃縮物には、ＢＭＰ－３ｂ、ＧＤＦ－１０、ＢＭＰ－４、ＢＭＰ－８、ＣＣＲ４、ＣＣＲ６、ＦＧＦＲ４など、より多くの種類の細胞因子が含まれていたことが確認された。これは、本方法によりより多様な細胞因子が効果的に抽出できることを示している。」 ・甲１４ｆ（［0048］～［0051］） 「［0048］実施例２ ［0049］操作手順は実施例１と同様でアルが、異なるのはラットのサンプルを用いた点であり、ステップ（６）では、細胞懸濁液の濃度が１０６／ｍＬ、超音波破砕装置に装着するプローブの使用が４ｍｍ、超音波出力が１５０Ｗ、各回の破砕時間が３０秒、間隔１０秒で、計３回破砕を行った。 [0050]調製された細胞因子濃縮物中のＴＧＦ－β、ＰＤＧＦ、ＩＧＦ－１およびＶＥＧＦの含有量は、それぞれ１００ｐｇ／ｍｌ、５０ｐｇ／ｍｌ、３００ｐｇ／ｍｌ、７０ｐｇ／ｍｌを上回っており、詳細は表３に示す。 [0051]実施例１のステップ（７）と同様に、実施例２で得られた血小板細胞因子濃集物を高濃度（原液）、中濃度（原液の１／１０）、低濃度（原液の１／５０）に設定し、それぞれ間充織幹細胞を培養したプレートに添加し、３７℃で２４時間、４８時間、７２時間の各時間で細胞活性（ＭＴＴ法）およびＥＬＩＳＡによる検出を行い、ＰＬ法と比較した。結果は図２と表３に示す。結果は、ラット血小板細胞因子濃縮物が２４時間から顕著に幹細胞の増殖活性を高めることを示しており、時間依存性および濃度依存性を有し、ＰＬ法よりも優れた効果を示した（図２）。」 ・甲１４ｇ（[0054]～[0057]） 「［0054］実施例３ [0055]操作手順は実施例１と同様であるが、異なる点はマウスのサンプルを使用したことであり、ステップ（６）においては、細胞懸濁液の濃度が１０８／ｍｌ、超音波破砕装置に装着されたプローブの仕様が６ｍｍ、超音波出力は１００Ｗとし、毎回の破砕時間が１０秒、間隔１０秒、合計６回破砕を行った。 [0056]この条件で得られた細胞因子濃縮物中のＴＧＦ－β、ＰＤＧＦ、ＩＧＦ－１およびＶＥＧＦの含有量を調製してそれぞれ１００ｐｇ／ｍｌ、５０ｐｇ／ｍｌ、３００ｐｇ／ｍｌ、７０ｐｇ／ｍｌを上回っていた。 [0057]実施例１のステップ（７）と同様に、実施例３で得られた血小板細胞因子濃集物を、高濃度（原液）、中濃度（原液の１／１０）、低濃度（原液の１／５０）に設定し、それぞれ間葉系幹細胞を培養したプレートに添加し、３７℃で２４時間、４８時間、７２時間の各時間で細胞活性（ＭＴＴ法）およびＥＬＩＳＡによる検出を行い、ＰＬ法と比較した。結果は図３よび表４に示す。結果は、マウスの血小板細胞因子濃集物が４８時間以降に幹細胞の増殖活性を有意に向上させ、時間依存性および濃度依存性を有し、ＰＬ法よりも優れた効果を示した（図３）。」 （イ）甲１４に記載された発明 甲１４には、「哺乳類の血液中に存在する無核細胞であ」る「血小板」は、「細胞内のα顆粒の脱顆粒作用を通じて」「インスリン様成長因子－１（ＩＧＦ－１）」、「血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）」といった「多くの細胞増殖因子を放出することがで」き、「これらの細胞増殖因子は生物学的活性が非常に高く、骨細胞の分裂・増殖やコラーゲン合成を誘導し、骨組織の修復および再構築を促進することが知られている」との背景技術のもと、「医療用骨組織工学分野において極めて応用の可能性を有している」「ＩＧＦｓ」、「ＶＥＧＦなど、多種類の生物活性因子を含有する」「血小板細胞因子濃縮物」を調製することを目的とし、「全血を採取し、血小板を回収して生理食塩水に懸濁して細胞懸濁液とし、超音波出力１００～２００Ｗの条件下で複数回超音波破砕を行い（各回の破砕時間は１～６０秒）、その破砕混合液をろ過し、得られたろ液から血小板細胞因子濃縮物を得る」「工程」「を含む」「血小板細胞因子濃縮物の濃縮方法」が記載されている（甲１４ａ、１４ｂ、１４ｄ）。 そして、甲１４の実施例には、全血を採取し、血小板を回収して生理食塩水に懸濁して細胞懸濁液とし、「超音波出力２００Ｗ」、「１５０Ｗ」又は「１００Ｗ」の条件下で超音波破砕を行い、その破砕粉砕液をフィルターを用いてろ過処理することにより、「ＩＧＦ－１」、「ＶＥＧＦ」などの多種類の生物活性因子を含有する「血小板細胞因子濃縮物」を調製することができたことが裏付けをもって記載されている（甲１４ｅ～１４ｇ）。 そうしてみると、甲１４には次の発明が記載されていると認められる。 「血小板細胞因子濃縮物の濃縮方法であって、以下の工程を含む方法、すなわち、全血を採取し、血小板を回収して生理食塩水に懸濁して細胞懸濁液とし、超音波出力１００～２００Ｗの条件下で各回１～６０秒の破砕時間である超音波破砕を複数回行い、その破砕混合液をろ過し、得られたろ液から血小板細胞因子濃縮物を得る方法。」（以下「甲１４発明」という。） イ 甲９、甲１１～甲１３、甲１５、甲１６に記載された事項 甲９、甲１１～甲１３、甲１５、甲１６には、それぞれ以下の事項が記載されている（甲１５は、中国語による記載であるため、甲１５の抄訳文に基づき摘記する。また、甲１６は、英語による記載であるため、甲１６の抄訳文に基づき摘記する。）なお、下線は当審合議体が付したものであり、「・・・」は記載の省略を示す。 （ア） 甲９ ・甲９ｃ（【０００２】） 「【０００２】 多血小板血漿（platelet-rich plasma，ＰＲＰ）は、ヒトまたは動物の全血を遠心することによって得られる高濃度の血小板を有する血漿であり、血小板溶解物は、多血小板血漿をさらに処理した派生物質で、再生に関わる多種の成長因子を含む。したがって、多血小板血漿および血小板溶解物は、再生医学に応用できることがわかっている。」 （イ） 甲１１ ・甲１１ａ（【０００２】） 「【０００２】 多血小板血漿（Ｐｌａｔｅｌｅｔ Ｒｉｃｈ Ｐｌａｓｍａ：以下「ＰＲＰ」と略称する）は、血液中に含まれる３種類の血球（赤血球、白血球、血小板）のうちの血小板のみを高濃度に濃縮させたものであり、細胞の再生を促す種々の成分、例えば、ＥＧＦ（表皮増殖因子：Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、ＰＤＧＦ（血小板増殖因子：Ｐｌａｔｅｌｅｔ-Ｄｅｒｉｖｅｄ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、ＶＥＧＦ（血管内皮細胞増殖因子：Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、ＩＧＦ（インスリン様成長因子：Ｉｎｓｕｌｉｎ-ｌｉｋｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、ＦＧＦ（線維芽細胞増殖因子：Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、ＨＧＦ（肝細胞増殖因子：Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）、ＴＧＦ（トランスフォーミング増殖因子：Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）などの増殖因子などが含まれていることから、骨、血管、皮膚などの再生促進機能を有することが知られており、難治性皮膚潰瘍などの治療に用いられている。ＰＲＰの調製は、例えばＰＲＰを適用する患者から採血した血液を遠心分離することで行われているが（特許文献１）、こうした方法で調製されるＰＲＰには、血小板と分離しきれなかった白血球が含まれている場合がある。しかしながら、ＰＲＰに白血球が含まれていても、その数はわずかであるので、ＰＲＰに含まれている白血球の有核細胞としての機能を喪失させるための措置は行われていない。」 ・甲１１ｂ（【０００８】） 「【０００８】 本発明において、血小板濃縮製剤の原料となる血小板濃縮物としては、例えばＰＲＰが挙げられる。ＰＲＰは、例えば、ＰＲＰを適用する患者から採血した血液を、採血に用いたシリンジのままやシリンジからスピッツや真空採血管に移し替えて遠心分離することによって調製することができる。遠心分離の条件は公知の条件を採用することができる。また、血小板濃縮製剤の原料となる血小板濃縮物は、ｉＰＳ細胞やＥＳ細胞などの幹細胞由来の血小板を、その取得態様に応じて濃縮したものであってもよい。」 ・甲１１ｃ（【００１２】） 「【００１２】 実施例１： 抗凝固剤として６００μｌのクエン酸ナトリウム液（扶桑薬品工業株式会社）を２０ｍｌのシリンジ（テルモ株式会社）に分取し、３名の健常者から１２ｍｌの採血を行った。それぞれの血液１０ｍｌを真空採血管（日本ベクトン・ディッキンソン）に移し、２回遠心分離法を実施して（１回目：２００Ｇで１５分間、２回目：１２００Ｇで１５分間）、０．５ｍｌのＰＲＰを調製した。調製されたそれぞれのＰＲＰ０．４ｍｌに対し、超音波破砕機（東京超音波技研株式会社）を用いて２０分間の超音波破砕を行った。超音波破砕の条件は、１５０Ｗ出力、氷冷下、１５秒照射と２０秒停止のサイクルを７回とした。超音波破砕を行ったＰＲＰに白血球が含まれるかどうかを検査会社に依頼して調べたところ、３名のＰＲＰすべてにおいて、超音波破砕を行う前に認められた白血球の存在が超音波破砕を行った後は認められなかった。また、超音波破砕を行ったＰＲＰを-２０℃で冷凍し、７日後、自然解凍し、血小板に含まれている増殖因子の含有量をＲ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍ社のＥＬＩＳＡキットを用いて調べたところ、ＥＧＦ：１８００～４０００ｐｇ／ｍｌ、ＰＤＧＦ：１６３００～２４０００ｐｇ／ｍｌ、ＶＥＧＦ：６００～２６００ｐｇ／ｍｌ、ＩＧＦ：１０～５０ｐｇ／ｍｌ、ＦＧＦ：２００～４００ｐｇ／ｍｌ、ＨＧＦ：７００～９００ｐｇ／ｍｌ、ＴＧＦ：２４００～６０００ｐｇ／ｍｌであって、超音波破砕を行う前の含有量とほぼ同じであり、ＰＲＰに対して超音波破砕を行ったこととその後に冷凍したことによる増殖因子の含有量の低下は認められなかった。」 （ウ） 甲１２ ・甲１２ｄ（請求項１～４） 【請求項１】 血液から成長因子混合物を調製する方法であって、 血液から多血小板血漿を分離する工程と、 多血小板血漿から細胞を除去して無細胞系血漿を得る工程と、 無細胞系血漿を凍結乾燥して成長因子混合物を得る工程と、 を含む方法。 【請求項２】 血液から多血小板血漿を分離する工程の前に、０～１０℃、０～７２時間に亘って血液を予冷蔵する工程をさらに含むことを特徴とする請求項１に記載の方法。 【請求項３】 血液から多血小板血漿を分離する工程が、１００～１０００Ｇ、３～３０分による遠心分離処理を含むことを特徴とする請求項１または２に記載の方法。 【請求項４】 多血小板血漿から細胞を除去して無細胞系血漿を得る工程が、フィルタリング処理を含むことを特徴とする請求項１～３のいずれか１項に記載の方法。」 ・甲１２ｅ（【０００２】） 「【０００２】 自己の血液を遠心分離することで調製される血小板を濃縮した血漿、多血小板血漿（platelet rich plasma：以下、「ＰＲＰ」とも呼ぶ）を用いる治療法がある。この多血小板血漿は、血小板由来増殖因子（platelet-derived growth factor：以下、「ＰＤＧＦ」とも呼ぶ）などの多種の増殖因子を豊富に含む。これら成長因子が創傷治癒や組織再生に効果的な役割を果たすため、多血小板血漿は再生医療分野において有望な材料である（例えば、特許文献１）。」 ・甲１２ｆ（【００２１】～【００２９】） 「【００２１】 本発明の方法は、血液から多血小板血漿を分離する工程と、多血小板血漿から細胞を除去して無細胞系血漿を得る工程と、無細胞系血漿を凍結乾燥して成長因子混合物を得る工程と、を少なくとも含む方法。本発明の方法は、血液から多血小板血漿を分離する工程の前に血液を予冷蔵する工程をさらに含んでもよい。 【００２２】 血液を予冷蔵する工程における冷蔵温度は０～１０℃である。血液を予冷蔵する工程の工程時間は通常０～７２時間である。下限値は１時間以上、２時間以上、４時間以上、８時間以上としてもよい。上限値は６０時間以下、４８時間以下、３６時間以下、２４時間以下としてもよい。 【００２３】 本発明の方法は、血液から多血小板血漿を分離する工程を含む。 【００２４】 この工程の間において、血液および多血小板血漿の温度は、約４～約２５℃に制御することが好ましい。 【００２５】 血液（全血）から多血小板血漿を分離する手段に制限はなく、公知の任意の手段が使用可能である。通常は、血液について比較的低速度の第１の遠心分離処理を施して、赤血球を含む画分と、多血小板血漿（ＰＲＰ）と、少血小板血漿（platelet poor plasma）とに分離して得られる。 【００２６】 比較的低速度の第１の遠心分離処理は、約１００～約１０００Ｇ（通常の遠心分離器においては約２００～約２０００ｒｐｍ程度に相当）の遠心分離である。約１５０～約７５０Ｇ、約２００～約５００Ｇとしてもよい。処理時間は約３～約３０分、約５～約２０分、約１０～約１５分である。 【００２７】 比較的低速度の第１の遠心分離処理単独によって多血小板血漿を取得してもよい。また上清である血漿画分全て（多血小板血漿および少血小板血漿）を回収した後、第２の遠心分離処理を施して多血小板血漿を得てもよい。 【００２８】 第１の遠心分離処理後に回収した血漿画分について比較的高速度の第２の遠心分離処理によって血小板をペレット化させ、その後再懸濁させることで純化・濃縮化することができる。 【００２９】 比較的高速度の第２の遠心分離処理は、約１０００～約２５００Ｇ（通常の遠心分離器においては約２０００～約５０００ｒｐｍ程度に相当）の遠心分離である。約１１００～約２０００Ｇ、約１２００～約１５００Ｇとしてもよい。処理時間は約１～約３０分、約５～約２０分、約１０～約１５分である。」 ・甲１２ｇ（【００４１】～【００４４】） 「【００４１】 細胞を完全に除去する手段は、特に制限はなく、任意のものが使用可能である。例えば加熱処理、酸処理、フィルタリング処理等が挙げられる。これらのうち、成長因子の変性を招くリスクが小さいことからフィルタリング処理が好ましい。すなわち本工程は、フィルタリング処理によって多血小板血漿から細胞を除去して無細胞系血漿を得るフィルタリング工程であることが好ましい。 【００４２】 フィルタリング処理に使用するフィルタは、血小板を除去できるものであれば制限はない。血小板の大きさは約２μｍであるため、例えば、孔径が約１μｍ以下、約０．７μｍ以下、約０．５μｍ以下のメンブレンフィルタを使用することができる。なお、メンブレンフィルタの孔径の下限値に制限はないが過度に小さいものは目詰まりを起こすリスクが大きくなる。そのため、孔径は約０．２μｍ以上、約０．３μｍ以上、約０．４μｍ以上が好ましい。通常市販されているメンブレンフィルタのうち、この範囲を満たすものとしては孔径が約０．２μｍのメンブレンフィルタと孔径が約０．４５μｍのメンブレンフィルタがある。本発明においてはいずれも使用可能であり、孔径が約０．４５μｍのメンブレンフィルタが最適なメンブレンフィルタである。 【００４３】 フィルタリング処理は、前述のフィルタを介する遠心分離によって実行されてもよい。この際の遠心分離は、約８００～約１８００Ｇ（通常の遠心分離器においては約１５００～約４０００ｒｐｍ程度に相当）の遠心分離である。工程時間は約１～約３０分、約５～約１５分、約１０分である。 【００４４】 この処理の結果、フィルタを通過した細胞を含まない液体（すなわち無細胞系血漿）を得ることができる。」 （エ） 甲１３ ・甲１３ｂ（【００４６】） 「【００４６】 次いで、全血貯留部１１中の全血から血漿（以下、本実施形態では多血小板血漿とする）を分離する（以下、第１分離工程Ｓ３とする）。分離方法としては、遠心分離、ろ過、又はそれらの組み合わせ、等が挙げられる。本実施形態では、遠心分離を行う。遠心分離の条件は、貯留された血液の量及び分離する成分の種類によって設定されるものであるが、例えば１１０Ｔ０（Ｇ）×６（ｍｉｎ．）、２４（℃）に設定されることが好ましい。なお、遠心分離を行う際は、血清調製装置１を折りたたんで遠心分離機にかけることが好ましい。」 （オ） 甲１５ ・甲１５ａ（請求項５） 「【請求項5】 血液破砕生理活性因子の製造方法であって、以下の工程を含む方法： 血液を800～2300g／分で3回遠心して高濃度血小板血漿を得る工程； 好ましくは、第1回を5～10分間、第2回を5～10分間、第3回を10～20分間遠心する方法； 高濃度血小板血漿を、少なくとも2回の凍結／解凍処理、または10分以上の超音波処理によって裂解し、生理活性因子抽出液を得る工程； 好ましくは、凍結／解凍条件が-50℃～-60℃で20～30分間凍結し、35℃～40℃で5～15分間解凍する工程であり、より好ましくは2～5回繰り返す方法； または、好ましくは超音波条件が185W、40kHzで10～20分間である方法；および、任意に、生理活性因子抽出液をろ過後、凍結乾燥保存する工程。」 ・甲１５ｂ（[0039]～[0050]） 「[0039]【第1工程：PRP(多血小板血漿)の採取】 [0040]治療用途に供するための成長因子を含む血小板を保存する目的で、血液サンプルを採取する。通常、この血液サンプルは非ヒト動物(好ましくは魚類など)から静脈採血により得られる。推奨される血液量は30mL～60mLであり、輸送の便を考慮してクエン酸ナトリウム中に保存される。 [0041]採取した血液サンプルを遠心分離機にかけ、3,800～4,000rpmで遠心する。より好ましくは、以下の条件で3回遠心する：第1回5分間、第2回5分間、第3回20分間。これによりPRP層と血球層とを分離し、PRP中の成長因子濃度を高める。 [0042]【第2工程：PRPのpH安定化】 [0043]pH値の変動を抑制し、低温条件下でも成長因子の活性が変化しないよう、緩衝液を添加してPRPのpHを安定化する。具体的には、0.6～1.0％のHEPES(4-(2-ヒドロキシエチル）-1-ピペラジンエタンスルホン酸)をPRPの体積に応じて添加し、凍結乾燥保護剤として使用する。好ましくは、0.8％HEPESを使用する。 [0044]【第3工程：血小板からの成長因子の放出】 [0045]成長因子を得るために、PRPを-50°C～-60°Cで30分間凍結し、その後37°Cの水浴中で10分間解凍する。これにより、血小板内に氷晶が形成され、細胞膜が膨張・破裂し、成長因子が放出される。この凍結／解凍処理は、成長因子の収率を高めるため、少なくとも2回繰り返すことが望ましい。血小板は低温下でアポトーシスを起こしやすく、抑制因子を放出して成長因子を損なう可能性があるが、本法により放出された成長因子は長期保存が可能である。 [0046]なお、血小板の破砕は、凍結／解凍のほか、低温下での超音波処理や手動による粉砕等、機械的方法でも達成できる。例として、185W・40kHzの超音波を10分以上照射する方法が挙げられる。 [0047]【第4工程：濾過滅菌】 [0048]得られた成長因子抽出液は、0.2μmの酢酸セルロース膜などを用いて濾過処理を行う。濾過の目的は、病原体やその他の汚染物質を除去し、溶液の安定性と成長因子の寿命を維持することである。 [0049]【第5工程：凍結乾燥】 [0050]任意に、濾過された成長因子抽出液を凍結乾燥して保存することができる。」 ・甲１５ｃ（[0053]～[0062]） 「[0053]【実施例1】 [0054]本実施例は、破砕成長因子の製造方法を例示的に提供するものであり、使用する血液はヒトまたは非ヒト動物（例えばブタ、ニワトリ、魚類など）に由来することができる。 [0055]本実施例において提供される破砕成長因子の製造方法は、以下の工程を含む： [0056]a)高濃度血小板血漿の取得 30mL～60mLの血液サンプルを、3,000～5,000rpmで5分間遠心し、得られた上清を再度3,000～5,000rpmで5分間遠心し、さらに得られた上清を3,000～5,000rpmで20分間遠心する。この三段階の遠心操作によって、高濃度血小板血漿(PRP)を得る。 [0057]b)血小板の破砕および成長因子抽出 得られた高濃度血小板血漿を、-50°C～-60°Cで30分間冷凍した後、37°Cで10分間解凍する凍結／再溶解処理、または185W・40kHzの条件下で超音波処理を行い、血小板を破砕することによって、VEGF、EGF、PDGFなどを含む破砕成長因子抽出液を得る。 [0058]ｃ)濾過および凍結乾燥 得られた抽出液を0.2μmの酢酸セルロース膜で濾過し、濾液を一80°Cに保存した後、150mTorrの真空条件下で16時間凍結乾燥を行い、4°Cにて保存する。 [0059]本実施例では、血液サンプルの遠心条件を最適化した。図1は、第3回遠心の時間が高濃度血小板血漿から放出される成長因子量に与える影響を示す。図1から明らかなように、第3回遠心の時間を延長することで各種成長因子の放出量が顕著に増加するが、20分を超えると変化が見られない、あるいは減少する傾向も示される。したがって、第3回遠心の時間は10～20分が好ましく、20分が最適である。 [0060]また、血小板の破砕には凍結／再溶解または超音波処理のいずれも使用可能であり、本実施例ではそれぞれの条件についても最適化を行った。 [0061]図2は、凍結／再溶解回数が成長因子放出量に与える影響を示す。図2によれば、凍融回数が増加するにつれて放出量が有意に増加するが、5回を超えると放出量はほとんど変化せず、またはむしろ減少する。したがって、凍融回数は少なくとも2回、好ましくは2～5回、最適は5回である。 [0062]図3は、超音波処理時間が成長因子の放出量に与える影響を示す。図3から、超音波処理時間の延長に伴い、成長因子の放出量は顕著に増加することが明らかとなった。したがって、超音波処理時間は少なくとも10分、好ましくは10～20分、最適は10分である。」 （カ） 甲１６ ・甲１６ａ（実施例１、２） 「実施例 １ 調製 [0014] クエン酸で抗凝固処理された血液を、室温で200gの遠心力で10分間遠心した。上澄みを新しい チューブに移し、再度室温で200gで20分間遠心した。得られた上澄みの上位30～50%（血小板乏血漿：PPP)を除去し、ペレットを残りの上澄みに再懸濁することで、血小板濃厚血漿（PRP) を調製した。PRPには最終濃度10%となるようにCaCl2 を等量加えた。PRPの超音波処理は氷上 で行い、25kHzの周波数を15秒間加えた。これにより、血小板がメディエーターおよびサイトカ インを放出した。ゲルの固化には1時間を要した。すべての工程は無菌条件下で実施された。 実施例2 調製 [0015] 抗凝固処理された血液を、150～400g（好ましくは200g）の遠心力で10～60分間、室温で遠心（ブレーキ設定は弱）した。上層の血漿を新しいチューブに移し、再び室温で500～2000gで7～ 10分間遠心した。上澄みの50～70%PPPを含む）を除去し、残りの上澄みにペレットをボルテックスで再懸濁してPRPを作製した。この方法により、未処理血液80～130mLから7 ～15mLの非活 性化PRPが得られた。PRPは2～8℃で最大24時間、好ましくは8時間以内に保存された。PRPには最終体積の10%となるようにCaC12を添加し、クエン酸の抗凝固効果を中和して、フィブリノゲンをフィブリンゲルに重合させた。PRPの超音波処理は氷上で行い、20kHzの周波数を2回X5秒加えた。これにより血小板が脱顆粒を起こし、メディエーターおよびサイトカインを放出した。ゲルの固化には1～2時間を要した。すべての工程は無菌条件下で実施された。」 イ 本件特許発明１について （ア）対比 本件特許発明１と甲１４発明とを対比する。 ａ 血漿が、「血液から赤血球その他の有形成分を取除いた液性成分」であり、血小板を含有し得ることは当業者の技術常識であるから、甲１４発明の「全血を採取し、血小板を回収して血小板を生理食塩水に懸濁」させた「細胞懸濁液」は、本件特許発明１の「血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）」と、採取された全血から得られた血小板を含む液である点で共通する。 ｂ 「ＶＥＧＦ」が血小板内のα顆粒内に含まれる成長因子であり、また「ＩＧＦ１」が、血漿中に含まれることは当業者の技術常識であるから（前記１（２）イ（イ）ａ（ａ）の甲４ｂ）、甲１４発明の「血小板細胞因子濃縮物を得る方法」は、本件特許発明１の「ＶＥＧＦ又はＩＧＦ１を濃縮した無細胞系血漿（多血小板血漿を除く）又は無細胞系血清の製造方法」と、血小板あるいは血漿由来の成長因子濃縮物の製造方法である点で共通する。 ｃ 甲１４発明の「破砕混合液をろ過」することは、本件特許発明１の「細胞を除去する工程」に相当する。 そうしてみると、本件特許発明１と甲１４発明は、 「採取された全血から得られた血小板を含む液を超音波破砕処理して、超音波破砕処理後の液を得る工程、及び得られた超音波破砕処理後の液から細胞を除去する工程を含む、血小板あるいは血漿由来の成長因子濃縮物の製造方法。」 である点で一致し、以下の点で相違する。 ＜相違点１＞ 超音波破砕処理に付される「採取された全血から得られた血小板を含む液」が、本件特許発明１では、「血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）」であるのに対し、甲１４発明では、「全血を採取し、血小板を回収して血小板を生理食塩水に懸濁し」た「細胞懸濁液」である点。 ＜相違点２＞ 濃縮される血小板あるいは血漿由来の成長因子が、本件特許発明１では、ＶＥＧＦ又はＩＧＦ１であるのに対し、甲１４発明では、その特定がない点。 ＜相違点３＞ 超音波破砕処理の条件が、本件特許発明１では、「５Ｗ～１００Ｗの出力で超音波破砕処理」すると特定されているのに対し、甲１４発明では、「超音波出力１００～２００Ｗの条件下で各回１～６０秒の破砕時間である超音波破砕を複数回行」うと特定されている点。 ＜相違点４＞ 細胞を除去する工程が、本件特許発明１では、フィルタによることが特定されているのに対し、甲１４発明では、その特定がない点。 （イ）新規性についての判断 相違点１について検討する。 前記１（２）ウ（ア）、前記１（２）ウ（イ）において説示したとおり、本件特許発明１の超音波破砕処理の対象の成分である「血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清）」は、その記載のとおり、血漿から、多血小板血漿である態様が除外されたものである。他方、甲１４発明における「全血を採取し、血小板を回収して血小板を生理食塩水に懸濁し」た「細胞懸濁液」とは、甲１４ｅにあるように、採取した全血について多段階の遠心分離を行うことで得られる多くの血小板が含まれる富血小板層から、さらに血小板を精製し、生理食塩水に懸濁したものであるから、血漿に由来する、血小板以外の成分が生理食塩水に置換されたものである点で、本件特許発明１の「血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清）」と相違することは明らかである。 したがって、その他の相違点について検討するまでもなく、本件特許発明１は、甲１４に記載された発明であるとは認められない。 （ウ）進歩性についての判断 相違点１について検討する。 甲１４発明は、甲１４ｂ、甲１４ｄにあるとおり、「血小板（platelet）は哺乳類の血液中に存在する無核細胞であり、細胞内のα顆粒の脱顆粒作用を通じて多くの細胞増殖因子を放出することができ」、「これらには、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、トランスフォーミング成長因子－β（ＴＧＦ－β）、インスリン様成長因子－１（ＩＧＦ－１）、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、上皮成長因子（ＥＧＦ）、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）などが含まれ」るところ、「血小板が放出するこれらの細胞増殖因子は生物学的活性が非常に高く、骨細胞の分裂・増殖やコラーゲン合成を誘導し、骨組織の修復および再構築を促進することが知られ」、「軟骨細胞の活性を向上させ、幹細胞の増殖および分化を促進し、軟骨および骨組織の再生・修復に貢献」し、「注射剤、粉末剤などの形態で製剤化すること」により「医療用骨組織工学分野において極めて応用の可能性を有している」との背景技術のもと、なされた発明であって、出発材料として、精製された血小板の細胞懸濁液を用いるものである。すなわち、甲１４には、超音波破砕処理に付される「採取された全血から得られた血小板を含む液」に関し、採取された全血から、遠心により富血小板層を得、更にこれを精製することにより得られた精製血小板を、生理食塩水に懸濁して用いることが記載されている。そして、甲１４の記載全体をみても、当該精製された血小板を含有する細胞懸濁液に代えて、血小板が富化されていない血漿画分あるいは血清を用いることについては開示も示唆もされていない。 かえって、甲１４には、「既知の同種技術として、ＰＲＰ（多血小板血漿）を凍結と再溶解により処理した血小板裂解液（ＰＬ）」に関し、「ＰＬ（血小板裂解液）はＰＲＰ（多血小板血漿）を基に調製されたものであるが、ＰＲＰには赤血球、白血球、および血漿が残留することが避けられず、ＰＬに多数の異物細胞や血漿成分が混在する。そのため、含有されるサイトカインの効果を阻害し、潜在的な安全性の懸念を生じさせる可能性がある。」（甲１４ｃ。下線は当審合議体が付した。）とあるように、血漿画分全てに比し血小板を多量に含む、多血小板血漿ついてですら、血小板が精製されていないことにより、異物細胞や血漿成分が混在するため、医療用骨組織工学分野における応用に際し望ましくないことが記載されている。 そうすると、医療用骨組織工学分野における応用を念頭におき、血小板が放出する細胞増殖因子である、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）やインスリン様成長因子－１（ＩＧＦ－１）を濃縮して得ようとする甲１４の課題に照らせば、血小板を多く含む液を出発原料として選択することが自然であって、これに代えて、血小板の含有量もさまざまであり、異物細胞や血漿成分が混在する「血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清）」を用いることは当業者にとり動機付けられたものとはいえない。 また、甲９、甲１１～甲１３、甲１５、甲１６をみても、甲１４発明における出発原料として血小板を多く含む液に代えて「血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清）」を用いることを動機付ける記載は見当たらない。 そうすると、本件件特許発明１の相違点１に係る構成は、甲１４に記載された発明及び甲９、甲１１～甲１３、甲１５、甲１６・に示された周知技術から当業者が容易に想到し得たものではない。 そして、効果について検討すると、本件特許発明１は、本件特許明細書の実施例に裏付けられるように、「血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清）」を出発原料とした場合において、フィルタ濾過の際に目詰まりを起こさず、短い時間で濾過を行うことができ、フィルタ交換が不要であるなど、優れた操作性をもって、ＶＥＧＦ又はＩＧＦを濃縮した無細胞系血漿又は血清を製造することができるという効果を奏するものであり、当該効果は、甲１４の記載事項及び周知技術から当業者が予測することができたものとは認められない。 したがって、その他の相違点について検討するまでもなく、本件特許発明１は、甲１４及び甲９、甲１１～甲１３、甲１５、甲１６に示された周知技術から当業者が容易に想到し得たものではない 。 （エ）申立人の主張について 申立人は、甲１４には、「遠心分離して純化した血小板層（１０００～１０００ｒｐｍで１０～２０分間）が記載されて」おり（実施例１）、「甲１４では、１００Ｗ，１５０Ｗ、２００Ｗで６０秒間の超音波処理が行われている（実施例１）」ことから、甲１４には、本件特許発明１の「血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）を５Ｗ～１００Ｗの出力で超音波破砕処理して、超音波破砕処理後の血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）を得る工程、及び」との事項が記載されていると主張する（異議申立書９５～９６頁）。 しかしながら、甲１４の実施例１には、出発原料として、あくまで、「精製された血小板」を生理食塩水に懸濁した「細胞懸濁液」を用いることが記載されているのであり、「血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）」を出発原料とすることについては記載されていないのであるから、申立人の主張を採用することはできない。 （オ）小括 以上のとおりであるから、本件特許発明１は、甲１４に記載された発明であるとはいえず、また、甲１４に記載された発明に基いて、あるいは甲１４に記載された発明及び周知技術（甲９、甲１１～甲１３、甲１５、甲１６）に基いて、当業者が容易に発明することができたものではない。 ウ 本件特許発明２～２４について 本件特許発明２～２４は、本件特許発明１において、超音波破砕処理の条件、濾過条件、原料の血漿や血清を得るための遠心分離処理などが変更・特定されたものであるが、上記イ（ア）で説示したと同様に、相違点を有するのであるから、いずれも甲１４に記載された発明であるとはいえない。また、上記イ（ウ）で説示したと同様に、甲１４に記載された発明に基いて、あるいは甲１４に記載された発明及び周知技術（甲９、甲１１～甲１３、甲１５、甲１６）に基いて、当業者が容易に発明することができたものではない。 （２）申立理由４（２）及び５（２）（甲１５を主引例とする新規性欠如及び進歩性欠如） ア 甲１５に記載された事項及び甲１５に記載された発明 （ア）甲１５に記載された事項 甲１５には以下の事項が記載されている（原文は中国語であるので、甲１５の抄訳文に基づく。）。なお、下線は当審合議体が付したものであり、「・・・」は記載の省略を示す。 ・甲１５ｄ（請求項１、５～７、９） 「【請求項１】 以下の工程を含む、血液破砕生理活性因子の製造方法： 血液を分離して高濃度の血小板血漿を得る工程、 高濃度の血小板血漿を裂解して生理活性因子抽出液を得る工程、 生理活性因子抽出液をろ過して不純物を除去する工程、 および、任意に、ろ過された生理活性因子抽出液を凍結乾燥する工程。 ・・・ 【請求項5】 血液破砕生理活性因子の製造方法であって、以下の工程を含む方法： 血液を800～2300g／分で3回遠心して高濃度血小板血漿を得る工程； 好ましくは、第1回を5～10分間、第2回を5～10分間、第3回を10～20分間遠心する方法； 高濃度血小板血漿を、少なくとも2回の凍結／解凍処理、または10分以上の超音波処理によって裂解し、生理活性因子抽出液を得る工程； 好ましくは、凍結／解凍条件が-50℃～-60℃で20～30分間凍結し、35℃～40℃で5～15分間解凍する工程であり、より好ましくは2～5回繰り返す方法； または、好ましくは超音波条件が185W、40kHzで10～20分間である方法；および、任意に、生理活性因子抽出液をろ過後、凍結乾燥保存する工程。 【請求項6】 請求項1～5のいずれかに記載の方法であって、前記破砕生理活性因子が主にVEGF、EGFおよびPDGFを含む方法。 【請求項7】 請求項1～6のいずれかに記載の方法であって、前記血液が哺乳類、鳥類、爬虫類、両生類又は魚類に由来する方法； 好ましくは、該血液が魚類に由来する方法。 ・・・ 【請求項9】 請求項1～7のいずれかに記載の方法によって製造された破砕生理活性因子であって、皮膚創傷の治癒、皮膚再生、皮膚の美白、または皮膚の抗酸化／抗老化に用いられるもの。」 ・甲１５ｅ（[0001]） 「[0001]本出願はバイオテクノロジ一分野に属し、血液破砕成長因子の製造方法およびその用途に関する。」 ・甲１５ｆ（[0030]、[0037]） 「[0030]本出願において、「血液破砕成長因子」または「破砕成長因子」とは、血液中の血小板に内在する各種の成長因子を意味し、超音波処理または冷凍／再溶解(凍結融解サイクル)によって血小板膜を破壊することで得られるものである。これらには、血小板由来成長因子(PDGF)、血管内皮成長因子(VEGF)、表皮成長因子(EGF)などが主に含まれる。 ・・・ [0037]一方、本発明は、血液由来破砕成長因子の製造方法も提供する。この方法は低コストであり、操作が簡便で、得られる成長因子抽出液には主にVEGF、EGFおよびPDGFなどの成長因子が含まれる。」 ・甲１５ｇ（[0039]～[0051]） 「[0039]【第1工程：PRP(多血小板血漿)の採取】 [0040]治療用途に供するための成長因子を含む血小板を保存する目的で、血液サンプルを採取する。通常、この血液サンプルは非ヒト動物(好ましくは魚類など)から静脈採血により得られる。推奨される血液量は30mL～60mLであり、輸送の便を考慮してクエン酸ナトリウム中に保存される。 [0041]採取した血液サンプルを遠心分離機にかけ、3,800～4,000rpmで遠心する。より好ましく は、以下の条件で3回遠心する：第1回5分間、第2回5分間、第3回20分間。これによりPRP層と血球層とを分離し、PRP中の成長因子濃度を高める。 [0042]【第2工程：PRPのpH安定化】 [0043]pH値の変動を抑制し、低温条件下でも成長因子の活性が変化しないよう、緩衝液を添加してPRPのpHを安定化する。具体的には、0.6～1.0％のHEPES(4-(2-ヒドロキシエチル）-1-ピペラジンエタンスルホン酸)をPRPの体積に応じて添加し、凍結乾燥保護剤として使用する。好ましくは、0.8％HEPESを使用する。 [0044]【第3工程：血小板からの成長因子の放出】 [0045]成長因子を得るために、PRPを-50°C～-60°Cで30分間凍結し、その後37°Cの水浴中で10分間解凍する。これにより、血小板内に氷晶が形成され、細胞膜が膨張・破裂し、成長因子が放出される。この凍結／解凍処理は、成長因子の収率を高めるため、少なくとも2回繰り返すことが望ましい。血小板は低温下でアポトーシスを起こしやすく、抑制因子を放出して成長因子を損なう可能性があるが、本法により放出された成長因子は長期保存が可能である。 [0046]なお、血小板の破砕は、凍結／解凍のほか、低温下での超音波処理や手動による粉砕等、機械的方法でも達成できる。例として、185W・40kHzの超音波を10分以上照射する方法が挙げられる。 [0047]【第4工程：濾過滅菌】 [0048]得られた成長因子抽出液は、0.2,μmの酢酸セルロース膜などを用いて濾過処理を行う。濾過の目的は、病原体やその他の汚染物質を除去し、溶液の安定性と成長因子の寿命を維持することである。 [0049]【第5工程：凍結乾燥】 [0050]任意に、濾過された成長因子抽出液を凍結乾燥して保存することができる。 [0051]本出願により提供される血液破砕成長因子の製造方法によって得られる非ヒト由来の破砕成長因子は、収率が高く、商業化が容易であり、美白効果において特に顕著で、抗酸化効果にも優れる。非ヒト動物の血液を使用することで、製造コストが大幅に削減され、医薬品、健康補助食品、食品、美容製品などの幅広い分野での応用が可能となる。言い換えれば、非ヒト血液から成長因子を抽出することにより、成長因子の生産量および商業価値を高めることができ、とりわけ皮膚再生、美白、抗老化製品などの製造において極めて有望である。」 ・甲１５ｈ（[0053]～[0062]） 「[0053]【実施例1】 [0054]本実施例は、破砕成長因子の製造方法を例示的に提供するものであり、使用する血液はヒトまたは非ヒト動物（例えばブタ、ニワトリ、魚類など）に由来することができる。 [0055]本実施例において提供される破砕成長因子の製造方法は、以下の工程を含む： [0056]a)高濃度血小板血漿の取得 30mL～60mLの血液サンプルを、3,000～5,000rpmで5分間遠心し、得られた上清を再度3,000～5,000rpmで5分間遠心し、さらに得られた上清を3,000～5,000rpmで20分間遠心する。この三段階の遠心操作によって、高濃度血小板血漿(PRP)を得る。 [0057]b)血小板の破砕および成長因子抽出 得られた高濃度血小板血漿を、-50°C～-60°Cで30分間冷凍した後、37°Cで10分間解凍する凍結／再溶解処理、または185W・40kHzの条件下で超音波処理を行い、血小板を破砕することによって、VEGF、EGF、PDGFなどを含む破砕成長因子抽出液を得る。 [0058]ｃ)濾過および凍結乾燥 得られた抽出液を0.2μmの酢酸セルロース膜で濾過し、濾液を-80°Cに保存した後、150mTorrの真空条件下で16時間凍結乾燥を行い、4°Cにて保存する。 [0059]本実施例では、血液サンプルの遠心条件を最適化した。図1は、第3回遠心の時間が高濃度血小板血漿から放出される成長因子量に与える影響を示す。図1から明らかなように、第3回遠心の時間を延長することで各種成長因子の放出量が顕著に増加するが、20分を超えると変化が見られない、あるいは減少する傾向も示される。したがって、第3回遠心の時間は10～20分が好ましく、20分が最適である。 [0060]また、血小板の破砕には凍結／再溶解または超音波処理のいずれも使用可能であり、本実施例ではそれぞれの条件についても最適化を行った。 [0061]図2は、凍結／再溶解回数が成長因子放出量に与える影響を示す。図2によれば、凍融回数が増加するにつれて放出量が有意に増加するが、5回を超えると放出量はほとんど変化せず、またはむしろ減少する。したがって、凍融回数は少なくとも2回、好ましくは2～5回、最適は5回である。 [0062]図3は、超音波処理時間が成長因子の放出量に与える影響を示す。図3から、超音波処理時間の延長に伴い、成長因子の放出量は顕著に増加することが明らかとなった。したがって、超音波処理時間は少なくとも10分、好ましくは10～20分、最適は10分である。」 （イ）甲１５に記載された発明 甲１５には、「血管内皮成長因子(VEGF)など」を含む「血液破砕生理活性因子」は、「血液中の血小板に内在する各種の成長因子を意味し、超音波処理または冷凍／再溶解(凍結融解サイクル)によって血小板膜を破壊することで得られるもの」であって、「皮膚再生、美白、抗老化製品などの製造」に有望あるところ、「血液を分離して高濃度の血小板血漿を得る工程、高濃度の血小板血漿を裂解して生理活性因子抽出液を得る工程、生理活性因子抽出液をろ過して不純物を除去する工程、および、任意に、ろ過された生理活性因子抽出液を凍結乾燥する工程」「を含む」「製造方法」により「血液破砕生理活性因子」を「製造」することが記載されている。（甲１５ｄ～１５ｇ）。 そして、甲１５には、これを具現化した実施例として、「以下の工程を含む方法：血液を800～2300g／分で3回遠心して高濃度血小板血漿を得る工程；好ましくは、第1回を5～10分間、第2回を5～10分間、第3回を10～20分間遠心する方法；高濃度血小板血漿を、」「10分以上の超音波処理によって裂解し、生理活性因子抽出液を得る工程；」「好ましくは超音波条件が185W、40kHzで10～20分間である方法；および、任意に、生理活性因子抽出液をろ過後、凍結乾燥保存する工程」により「血液破砕生理活性因子」を「製造」するとされており（甲１５ｄ、甲１５ｇ）、「30mL～60mLの血液サンプルを、3,000～5,000rpmで5分間遠心し、得られた上清を再度3,000～5,000rpmで5分間遠心し、さらに得られた上清を3,000～5,000rpmで20分間遠心する」という「三段階の遠心操作によって、高濃度血小板血漿(PRP)を得」、続いて「185W・40kHzの条件下で超音波処理を行い、血小板を破砕することによって、VEGFなどを含む破砕成長因子抽出液を得」、「得られた抽出液を0.2μmの酢酸セルロース膜で濾過し、濾液を－80°Cに保存した後、150mTorrの真空条件下で16時間凍結乾燥を行」ったことが裏付けをもって記載されている（甲１５ｈ）。 そうしてみると、甲１５には次の発明が記載されていると認められる。 「以下の工程を含む、血液破砕生理活性因子の製造方法： 血液を分離して高濃度の血小板血漿を得る工程、 高濃度の血小板血漿を裂解して生理活性因子抽出液を得る工程、 生理活性因子抽出液をろ過して不純物を除去する工程、 および、任意に、ろ過された生理活性因子抽出液を凍結乾燥する工程。」（以下「甲１５発明」という。） イ 本件特許発明１について （ア）対比 本件特許発明１と甲１５発明とを対比する。 ａ 血漿が、「血液から赤血球その他の有形成分を取除いた液性成分」であり、血小板を含有し得ることは当業者の技術常識であるから、甲１５発明の「血液を分離して」「得」られる「高濃度の血小板血漿」は、本件特許発明１の「血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）」と、採取された全血から得られた血小板を含む液である点で共通する。 ｂ 「ＶＥＧＦ」が血小板内のα顆粒内に含まれる成長因子であり、また「ＩＧＦ１」が、血漿中に含まれることは当業者の技術常識であって（前記１（２）イ（イ）ａ（ａ）の甲４ｂ）、甲１５には、「「血液破砕成長因子」または「破砕成長因子」とは、血液中の血小板に内在する各種の成長因子を意味し、超音波処理または冷凍／再溶解(凍結融解サイクル)によって血小板膜を破壊することで得られるものであ」り、「これらには、血小板由来成長因子(PDGF)、血管内皮成長因子(VEGF)、表皮成長因子(EGF)などが主に含まれる。」（甲１５ｆ）とあることから、甲１５発明の「血液破砕生理活性因子の製造方法」は、本件特許発明１の「ＶＥＧＦ又はＩＧＦ１を濃縮した無細胞系血漿（多血小板血漿を除く）又は無細胞系血清の製造方法」と、血小板あるいは血漿由来の成長因子濃縮物の製造方法である点で共通する。 ｃ 甲１５発明の「高濃度の血小板血漿を裂解して生理活性因子抽出液を得る工程」とは、「高濃度血小板血漿を「１０分以上の超音波処理によって裂解し、生理活性因子抽出液を得る工程」であるから（甲１５ｄ）、上記ａの点を踏まえれば、甲１５発明の「高濃度の血小板血漿を裂解して生理活性因子抽出液を得る工程」は、本件特許発明１の「血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）を５Ｗ～１００Ｗの出力で超音波破砕処理して、超音波破砕処理後の血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）を得る工程」と、採血された全血から得られた血小板を含む液を超音波破砕処理する工程である点で共通する。 ｄ 甲１５発明の「生理活性因子抽出液をろ過して不純物を除去する工程」は、本件特許発明１の「細胞を除去する工程」に相当する。 そうしてみると、本件特許発明１と甲１５発明は、 「採取された全血から得られた血小板を含む液を超音波破砕処理して、超音波破砕処理後の液を得る工程、及び得られた超音波破砕処理後の液成分から細胞を除去する工程を含む、血小板あるいは血漿由来の成長因子濃縮物の製造方法。」 である点で一致し、以下の点で相違する。 ＜相違点５＞ 超音波破砕処理に付される「採取された全血から得られた血小板を含む液」が、本件特許発明１では、「血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）」であるのに対し、甲１５発明では、「血液を分離して」「得」られる「高濃度の血小板血漿」である点。 ＜相違点６＞ 濃縮される血小板あるいは血漿由来の成長因子が、本件特許発明１では、ＶＥＧＦ又はＩＧＦ１であるのに対し、甲１５発明では、その特定がない点。 ＜相違点７＞ 超音波破砕処理の条件が、本件特許発明１では、「５Ｗ～１００Ｗの出力で超音波破砕処理」すると特定されているのに対し、甲１５発明では、その特定がない点。 ＜相違点８＞ 細胞を除去する工程が、本件特許発明１では、フィルタによることが特定されているのに対し、甲１５発明では、その特定がない点。 （イ）新規性についての判断 相違点５について検討する。 本件特許発明１の超音波破砕処理の対象の成分である「血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清）」は、その記載のとおり、少なくとも多血小板血漿である態様が除外されたものである。他方、甲１５発明における「血液を分離して」「得」られる「高濃度の血小板血漿」とは、甲１５ｄ、甲１５ｇ、甲１５ｈにあるように、採取した全血について多段階の遠心分離を行うことで得られるＰＲＰ（多血小板血漿）である高濃度の血小板を含む血漿である点において、本件特許発明１の「血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清）」と相違することは明らかである。 したがって、その他の相違点について検討するまでもなく、本件特許発明１は、甲１５に記載された発明であるとは認められない。 （ウ）進歩性についての判断 相違点５について検討する。 甲１５発明は、甲１５ｄ、甲１５ｆにあるとおり、「血液破砕生理活性因子」、すなわち、「血液破砕成長因子」又は「破砕成長因子」とも呼ばれる、「血液中の血小板に内在する各種の成長因子」の製造方法に関し、「低コストであり、操作が簡便で、得られる成長因子抽出液には主にVEGF、EGFおよびPDGFなどの成長因子が含まれる」「血液由来破砕成長因子」の製造方法を提供することを解決すべき課題とするものであって、甲１５には、甲１５ｇにあるように、[0039]に、「PRP（多血小板血漿）の採取」として、「[0041]採取した血液サンプルを遠心分離機にかけ、3,800～4,000rpmで遠心」すること、より好ましくは、「第1回5分間、第2回5分間、第3回20分間」の条件で、「3回遠心する」ことにより、「PRP層と血球層とを分離し、PRP中の成長因子濃度を高める」こと、［0044]に、「血小板からの成長因子の放出」として、「凍結／解凍処理は、成長因子の収率を高めるため、少なくとも2回繰り返すことが望ましい」こと、「血小板の破砕は、凍結／解凍のほか、低温下での超音波処理や手動による粉砕等、機械的方法でも達成できる」こと、そして、［0051］に、このような工程を備える「血液破砕成長因子の製造方法によって得られる非ヒト由来の破砕成長因子は、収率が高く、商業化が容易であり、美白効果において特に顕著で、抗酸化効果にも優れる」ことが記載されている。すなわち、甲１５発明は、得られる血液破砕生理活性因子の収率を向上させるべく、超音波破砕処理に付される「採取された」「血小板を含む血液サンプル」が、「PRP(多血小板血漿)」であることが前提とされた発明であるといえる。そして、甲１５の記載全体をみても、当該「PRP(多血小板血漿)」に代えて、血小板が富化されていない血漿画分やそのような血漿画分から調製される血清を用いることについては開示も示唆もされていない。 そうすると、「低コストであり、操作が簡便で、得られる成長因子抽出液には主にVEGF、EGFおよびPDGFなどの成長因子が含まれる」「血液破砕生理活性因子」の製造方法を提供するという甲１５発明の解決すべき課題に照らせば、血小板を多く含む液を出発原料として選択することが自然であって、これに代えて、血小板の含有量もさまざまな、「血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清）」を用いることは当業者にとり動機付けられたものとはいえない。 また、甲９、甲１１～甲１４、甲１６をみても、甲１５発明における出発原料として血小板を多く含む液に代えて「血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清）」を用いることを動機付ける記載は見当たらない。 そうすると、本件件特許発明１の相違点５に係る構成は、甲１５に記載された発明及び甲９、甲１１～甲１５、甲１６に示された周知技術から当業者が容易に想到し得たものではない。 そして、効果について検討すると、本件特許発明１は、本件特許明細書の実施例に示されるように、「血漿（多血小板血漿を除き、かつ、細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清）」を出発原料とした場合において、フィルタ濾過の際に目詰まりを起こさず、短い時間で濾過を行うことができ、フィルタ交換が不要であるなど、優れた操作性をもって、ＶＥＧＦ又はＩＧＦを濃縮した無細胞系血漿又は血清を製造することができるという効果を奏するものであり、当該効果が、甲１５の記載事項及び周知技術から当業者が予測することができるものとも認められない。 したがって、その他の相違点について検討するまでもなく、本件特許発明１は、甲１５及び甲９、甲１１～甲１４、甲１６に示された周知技術から当業者が容易に想到し得たものではない。 （エ）申立人の主張について 申立人は、「甲１５には、遠心分離して高濃度血小板血漿（３０００～５０００ｒｐｍで５～２０分）が記載されて」おり「（実施例１）」、「甲１５では、１８５Ｗで１０～２０分間に超音波処理が行われて」おり「（請求項４，実施例１）」、「５Ｗ～１００Ｗの出力」は明示されていないが、血小板の超音波破砕処理の出力として、「５Ｗ～１００Ｗ」程度の出力を選択するのは、技術常識（例えば甲４）であるし、当業者が適宜行う設計事項である」と主張する（異議申立書１０１頁）。 しかしながら、甲１５の実施例１には、出発原料として、あくまで「高濃度血小板血漿」を用いることが記載されているのであり、「血漿（多血小板血漿を除き、かつ細胞を含まない血漿を除く）又は血清（細胞を含まない血清を除く）」を出発原料とすることについては記載されていないのであるから、申立人の主張を採用することはできない。 （オ）小括 以上のとおりであるから、その他の相違点について検討するまでもなく、本件特許発明１は、甲１５に記載された発明であるとはいえず、また、甲１５に記載された発明に基いて、あるいは甲１５に記載された発明及び周知技術（甲９、甲１１～甲１４、甲１６）に基いて、当業者が容易に発明することができたものではない。 ウ 本件特許発明２～２４について 本件特許発明２～２４は、本件特許発明１において、超音波破砕処理の条件、濾過条件、原料の血漿や血清を得るための遠心分離処理などが変更・特定されたものであるが、上記イ（ア）で説示したと同様に、相違点を少なくとも有するものであるから、いずれも甲１５に記載された発明であるとはいえない。また、上記イ（ウ）で説示したと同様に、甲１５に記載された発明に基いて、あるいは甲１５に記載された発明及び周知技術（甲９、甲１１～甲１４、甲１６）に基いて、当業者が容易に発明することができたものではない。 （３）申立理由４及び５のまとめ したがって、本件特許発明１～２４は、甲１４に記載された発明ではなく、また、甲１４に記載された発明及び周知技術（甲９、甲１１～甲１３、甲１５、甲１６に記載された事項）に基いて、当業者が容易に発明をすることができたものとはいえず、申立理由４及び５によっては、本件特許発明１～２４を取り消すことはできない。 また、本件特許発明１～２４は、甲１５に記載された発明ではなく、また、甲１５に記載された発明及び周知技術（甲９、甲１１～甲１４、甲１６に記載された事項）に基いて、当業者が容易に発明をすることができたものとはいえず、申立理由４及び５によっては、本件特許発明１～２４を取り消すことはできない。 第５ まとめ 以上のとおりであるから、特許異議申立書に記載した特許異議申立理由によっては、本件特許発明１～２４に係る特許を取り消すことはできない。 また、他に本件特許発明１～２４に係る特許を取り消すべき理由を発見しない。 よって、結論のとおり決定する。