2025-001409

特願２０２２－１９５４９９「分析物検出のためのユニバーサルバイオセンサーシステム」拒絶査定不服審判事件〔令和 ５年 ４月２６日出願公開、特開２０２３－ ５９２６９〕について、次のとおり審決する。

結 論 本件審判の請求は、成り立たない。

理 由 第１ 手続の経緯 本願は、２０１７年（平成２９）年１２月２１日（パリ条約による優先権主張外国庁受理、２０１６年１２月２２日 （ＵＳ）米国、２０１７年７月６日 （ＵＳ）米国）を国際出願日とする特願２０１９－５３４８７８号の一部を令和４年１２月７日に新たな特許出願としたものであって、その主な手続きの経緯は、次のとおりである。 令和４年１２月２９日 ：手続補正書、上申書の提出 令和５年 ３月３１日 ：手続補正書、上申書の提出 令和６年 １月１８日付け ：拒絶理由通知 同年 ７月１９日 ：意見書、手続補正書の提出 同年 ９月２４日付け ：拒絶査定 令和７年 １月３１日 ：審判請求書の提出 同年 ３月１０日 ：手続補正書（審判請求書を補正するもの）の提出 第２ 本願発明 本願の請求項１～１１に係る発明は、令和６年７月１９日提出の手続補正書によって補正された特許請求の範囲の請求項１～１１に記載された事項により特定されるものであるところ、その請求項１に係る発明（以下、「本願発明」という。）は、次のとおりのものである。 「 【請求項１】 標的分析物を検出するためのバイオセンサーシステムであって、 （ａ）所定の種類の生体細胞と、 （ｂ）前記生体細胞に関連するシグナル生成レポーターと、 （ｃ）前記シグナル生成レポーターに関連する活性化メカニズムであって、前記活性化メカニズムが、 （ｉ）前記生体細胞のｐＨまたは温度の変化； （ｉｉ）前記生体細胞の電気的または磁気的性質の変化； （ｉｉｉ）前記生体細胞内のＧタンパク質共役受容体シグナル経路の活性化； （ｉｖ）前記生体細胞内のホスファチジルイノシトール経路の活性化； （ｖ）ジアシルグリセロール、セラミド、または他の親油性メッセンジャー分子を放出する前記生体細胞内のシグナル伝達経路の活性化； （ｖｉ）一酸化窒素、ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ、または他の環状ヌクレオチドを放出または生成する前記生体細胞内のシグナル伝達経路の活性化； （ｖｉｉ）スーパーオキシド、過酸化水素、一酸化炭素、硫化水素、または他の二次酸化還元シグナル分子を放出または生成する前記生体細胞内のシグナル伝達経路の活性化；または （ｖｉｉｉ）前記生体細胞によって発現される受容体の構造変化； からなる群から選択される事象によって活性化される、前記活性化メカニズムと、 （ｄ）前記活性化メカニズムに関連する非抗体ユニバーサル検出成分であって、前記非抗体ユニバーサル検出成分が、 （ｉ）Ｔ細胞可変結合（ＶＪ）領域、可変多様性結合（ＶＤＪ）領域、または他のＴ細胞受容体決定基； （ｉｉ）合成ペプチド； （ｉｉｉ）レクチン決定因子、炭水化物結合モジュール、または他の炭水化物結合決定因子； （ｉｖ）脂質結合決定因子； （ｖ）金属または他の金属結合決定因子を結合するメタロチオン決定因子； （ｖｉ）免疫受容体チロシン系阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）； （ｖｉｉ）前記生体細胞内のシグナル伝達経路のＦｃ結合部分に非共有結合するＦｃ決定因子；または （ｖｉｉｉ）前記生体細胞内のシグナル伝達経路のビオチンまたはストレプトアビジン結合部分に非共有結合するビオチンまたはストレプトアビジン決定因子； からなる、前記非抗体ユニバーサル検出成分と、および （ｅ）前記ユニバーサル検出成分に関連する分析物結合成分であって、前記分析物結合成分は、前記ユニバーサル検出成分および標的分析物の両方に特異的である、前記分析物結合成分と、 を含む、バイオセンサーシステム。」 第３ 原査定の拒絶の理由の概要 原査定における拒絶の理由のうち、本願発明に対する理由２（実施可能要件）の概要は、発明の詳細な説明の記載は、請求項１に係る発明について、当業者が実施することができる程度に明確かつ十分に記載されたものではないから、特許法第３６条第４項第１号に規定する要件を満たしておらず、特許を受けることができない、というものである。 第４ 当審の判断 １ 実施可能要件違反の判断基準 本願発明は物の発明であるところ、物の発明について実施可能要件を充足するためには、発明の詳細な説明に、当業者が、発明の詳細な説明の記載及び出願時の技術常識に基づいて、過度の試行錯誤を要することなく、その物を生産し、使用することができる程度の記載があることを要する。 本願発明においては、物の発明を構成する各要素のうち「活性化メカニズム」、「非抗体ユニバーサル検出成分」について、それぞれ（ｉ）～（ｖｉｉｉ）の選択肢がある。各選択肢はいずれも「活性化メカニズム」、「非抗体ユニバーサル検出成分」として具体的に採用可能な選択肢であるから、各選択肢それぞれについて、上記基準を満たしている必要がある。（仮に、本件出願時に実施可能でない具体的な選択肢が含まれている場合、本願出願後に無関係の第三者が当該選択肢を実施可能とする条件を実験等により初めて見出したといった事情があっても、本件出願人が当該選択肢に対して特許を取得できることとなってしまう。このような状況は、先願主義にもとるものであって、容認することはできない。） そこで、以下この考え方に基づいて検討する。 ２ 発明の詳細な説明の記載 本願の発明の詳細な説明には、以下の記載がある。 「【００１８】 シグナル生成レポーター 本発明の例示的実施形態は、生きた、改変バイオセンサー細胞によって産生または発現されるレポータータンパク質または酵素などのレポーター成分を含む。レポータータンパク質は、生きた、改変バイオセンサー細胞のサイトゾルにおける特定の所定の変化に応答して検出可能なシグナルを発する。本発明の特定の実施形態では、レポータータンパク質は、水生動物Ａｅｑｕｏｒｅａ Ｖｉｃｔｏｒｉａに由来するエクオリンなどの生物発光性発光タンパク質である。エクオリンは、生体シグナルセンサー細胞を操作して、さまざまなシグナル伝達経路の活性化に応答して光シグナルを生成するために使用され、そのように、生体細胞におけるエクオリンの産生を操作するための様々な方法は当業者によく知られている。特に、当業者は、適切な遺伝物質をバイオセンサー細胞に導入するために、例えば、細菌プラスミドベクターまたはウイルスベクターなどの任意の適切な遺伝子送達手段を選択し使用し得る。バイオセンサー細胞内のレポータータンパク質の産生は、導入された遺伝物質の発現によって制御されるだろう。当業者であれば、また、他の発光タンパク質または他の種類のレポータータンパク質、酵素、および分子を本発明の様々な代替の実施形態に組み込んで利用できることも理解するだろう。 【００１９】 本発明の様々な実施形態において、レポーターは、少なくとも１つの生化学的経路の活性化および結果として生じる生体細胞の変化に応答して検出可能な変化を受ける蛍光特性を有するタンパク質であり得る。レポーターまたはレポータータンパク質は、オベリン、タラシコリン、ミトロコミン（ハリスタリン）、クリチン（フィアリジン）、ニモプシン、ベロビン、インド－１、フラ－２、キン－２、フルオ－３、Ｒｈｏｄ－２、カルシウムグリーン、ＢＡＰＴＡ、カメレオン（Ａ．Ｍｉｙａｗａｋｉ ｅｔ ａｌ．，（１９９９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９６，２１３５４０）、または同様の分子などの他のカルシウム感受性発光または蛍光分子であり得る。レポータータンパク質は、Ｃａ２＋結合ドメインおよび関連する蛍光タンパク質を含むキメラタンパク質であり得る。関連する蛍光タンパク質は、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）であり得る。タンパク質は、ホスファチジルイノシトール経路（すなわち、本明細書に記載の実施形態で使用される経路）の他の成分と結合し、その蛍光を変え得る。一例は、ジアシルグリセロールと結合するように操作された蛍光タンパク質である。レポーターは、発光シグナルまたは蛍光シグナルを生じるように適合されている酵素であり得る。レポータータンパク質は、それぞれ発光シグナルまたは蛍光シグナルを生じるルシフェラーゼまたはアルカリホスファターゼなどの酵素であり得る。それはまた、蛍光タンパク質であり得るか、または蛍光、荷電、もしくは磁性ナノ粒子、ナノドット、もしくは量子ドットを含み得る。レポーターは、蛍光、紫外線、または可視特性を有する染料とすることができ、蛍光、紫外線、または可視特性は、少なくとも１つの生化学的経路の活性化および結果として生じる生体細胞の変化に応じて検出可能な変化を受ける。」 「【００２０】 活性化剤メカニズム 本発明の例示的実施形態は、生きた、改変バイオセンサー細胞によって発現されるシグナル伝達経路の形態の活性化剤機構を含む。シグナル伝達経路は、生きた、改変細胞のサイトゾル内の少なくとも１つの生物学的プロセスを制御し、少なくとも１つの生物学的プロセスが起こると、レポータータンパク質に検出可能なシグナルを放出させる。本発明の特定の実施形態では、シグナル伝達経路は、受容体タンパク質などの細胞表面シグナル伝達分子の活性化に応答して細胞内Ｃａ２＋濃度の増加が誘導される任意の生化学的経路である。本発明で使用されるバイオセンサー細胞は、細胞表面シグナル伝達分子の活性化に応答して細胞質Ｃａ２＋の増加を生じさせ得る一組の生細胞から選択することができる。例えば、Ｂ細胞、Ｔ細胞、および肥満細胞は、Ｂ細胞受容体、Ｔ細胞受容体、およびＦｃイプシロン受容体（肥満細胞）などの細胞表面シグナル伝達分子の活性化に応答して、Ｃａ２＋濃度の増加を誘導する能力を有する。 【００２１】 培養中で増殖する哺乳動物細胞は、典型的には特定の個々の細胞がＣａ２＋濃度の増加を誘導する異なる能力を有する可能性がある細胞集団を生成するので、Ｃａ２＋シグナルを生成するために、頑強な能力を有する細胞の亜集団またはクローン細胞株を選択又はスクリーニングすることが有用である。これは、例えばエクオリン誘発閃光の誘発を分析することによって達成することができる。特に、細胞への導入遺伝子の導入によって作り出されたトランスフェクタントは、多数の独立した遺伝子挿入事象に由来する細胞の混合集団である。したがって、バイオセンサー細胞を構築するとき、導入された導入遺伝子の有用な発現レベルと共に効率的なシグナル伝達能力を有する細胞またはクローン細胞株の特定のサブセットをスクリーニングまたは選択することが有用である。高発現細胞の亜集団を選択するため、またはこの目的のためにクローン細胞株を作製するために蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）技術を使用することは特に有用である。 【００２２】 前述のように、エクオリンは、特にそのようなシグナル伝達経路が生細胞内の細胞質Ｃａ２＋イオンの増加をもたらす場合、多種多様なシグナル伝達経路の活性化に応答して光シグナルを生成するように生きたバイオセンサー細胞を改変するために以前から使用されてきた。本発明の特定の実施形態において、レポータータンパク質としてエクオリンを産生するバイオセンサー細胞は、検出アッセイにおけるそれらの使用の前に、セレンテラジン（ＣＴＺ）を負荷される。この荷電工程はエクオリンを疎水性補欠分子族（例えば、ＣＴＺ）に共有結合させ、カルシウム（Ｃａ２＋）が結合すると、ＣＴＺは、立体構造変化を含む不可逆反応を受け、（４６９ｎｍで）青色光を放射する。 【００２３】 上記のように、シグナル伝達経路は、小胞体から細胞質ゾルへのカルシウムイオンの放出によって第一のシグナルを伝達し得、第二のシグナルは、カルシウムイオンに応答してレポーターによって放出され得る。このシグナル伝達経路は、Ｂ細胞、Ｔ細胞、肥満細胞、マクロファージ、およびその他の免疫細胞に見られるセカンドメッセンジャーカスケードで、細胞表面受容体の架橋がチロシンキナーゼを活性化し、それが次にホスホリパーゼＣをリン酸化し、それがホスファチジルイノシトール４，５－ビスリン酸（ＰＩＰ２）からイノシトール１，４，５－トリスリン酸（ＩＰ３）、およびジアシルグリセロールへと突き進み、その後、ＩＰ３はカルシウムチャネルを開き、小胞体などの細胞内貯蔵からカルシウムを放出するか、または細胞外カルシウムを取り込むことによって、細胞のサイトゾル中のカルシウム濃度を上昇させる。受容体の種類、細胞の種類、および所望のシグナル伝達方法に応じて、Ｇ－タンパク質－アデニリル環状－ｃＡＭＰ－タンパク質キナーゼＡカスケードなどの代替のセカンドメッセンジャーカスケードを使用し得る。シグナル伝達経路はまた、ジアシルグリセロール、セラミド、または他の親油性セカンドメッセンジャー分子の放出によってシグナルを伝達することができ、レポーターはジアシルグリセロール、セラミド、または他の親油性セカンドメッセンジャー分子の放出に応答して第２のシグナルを放出する。シグナル伝達経路はまた、一酸化窒素（「ＮＯ」）、ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ、または他の環状ヌクレオチドの放出または産生によってシグナルを伝達することができ、レポーターはこの放出または産生に応答して第２のシグナルを放出する。シグナル伝達経路はまた、スーパーオキシド、過酸化水素、一酸化炭素、硫化水素、または他の二次レドックスメッセンジャーの放出または生成によってシグナルを伝達することができ、レポーターはスーパーオキシドの放出または生成に応答して第２のシグナルを放出する。過酸化水素、一酸化炭素、硫化水素、または他の二次酸化還元メッセンジャー分子。特定の実施形態において、活性化剤メカニズムは、細胞のｐＨもしくは温度の変化、または細胞の電気的もしくは磁気的性質の変化を含む。」 「【００２４】 ユニバーサル検出成分 本発明の例示的実施形態は、標的分析物を認識するためのユニバーサル検出成分として機能する様々な非抗体シグナル伝達成分を含む。各シグナル伝達成分は、典型的には、それ自体受け取るように適合される分析物結合成分（本明細書では「検出分子」とも呼ぶ）を結合する、すなわち対象の特定の分析物を結合するように、受け取るように適合される。一実施形態では、シグナル伝達成分は、バイオセンサー細胞の表面に改変されて発現され、最終的に検出可能なシグナルを放出するレポータータンパク質をもたらすシグナル伝達経路を活性化するように適合された膜貫通キメラ融合タンパク質である。別の実施形態では、シグナル伝達成分は、シグナル伝達経路を活性化するように適合され、最終的に検出可能なシグナルを発するレポータータンパク質を生じさせるように細胞表面シグナルトランスデューサーに結合するように適合される、天然の受容体またはレポータータンパク質のような、細胞表面シグナルトランスデューサーに結合するように適合される、可溶性キメラ融合タンパク質である。さらに別の実施形態では、シグナル伝達成分はバイオセンサー細胞内に改変されて発現される可溶性キメラ融合タンパク質である。可溶性キメラ融合タンパク質は、細胞外シグナルトランスデューサー、例えばシグナル伝達経路を活性化するように適合されて最終的には検出可能なシグナルを放出するレポータータンパク質を生じさせる細胞表面シグナルトランスデューサーに結合される、天然の受容体またはレポータータンパク質のような、細胞表面シグナル伝達に結合される細胞外空間に分泌／排出される。 【００２５】 本発明のキメラ融合タンパク質は、（ｉ）少なくとも１つの種類の検出分子（例えば、可溶性抗体）に結合するように適合されるタンパク質の成分、（ｉｉ）生きた、改変バイオセンサー細胞によって通常発現されるレセプター複合体の成分を含みうる。いくつかの実施形態では、少なくとも１種類の検出分子に結合するように適合されるタンパク質の成分は、例えば、ストレプトＧタンパク質のＩｇＧ結合ドメイン（本明細書ではＩｇＧｂｐまたはＩｇｂｐと図中で呼ばれる）のような細菌結合タンパク質（すなわち、細菌に由来する抗体結合タンパク質）に由来し得る。可溶性抗体に対する結合タンパク質の親和性を高めるために、このＩｇＧ結合ドメインの縦列反復を含めることができる。代替の実施形態において、少なくとも１種類の検出分子に結合するように適合されているキメラ融合タンパク質の成分は、例えばマウスＦｃガンマＲＩ（ＦｃγＲＩ）レセプターのような受容体タンパク質に由来する抗体結合ドメインである。様々な例示的実施形態では、生きた、改変バイオセンサー細胞によって通常発現される受容体複合体の成分は、ＩｇＭ（Ｂ細胞バイオセンサー用）、Ｉｇα／β（Ｂ細胞バイオセンサー用）、ＩｇＥ（肥満細胞バイオセンサー用）、ＣＤ１９（Ｂ細胞バイオセンサー用）、ＣＤ３ゼータ（Ｔ細胞バイオセンサー用）、またはＦｃεＲＩ（肥満細胞バイオセンサー用）である。 【００２６】 本発明の非抗体シグナル伝達成分は、より大きなタンパク質分子に由来する選択されたタンパク質ドメインのような完全タンパク質配列または改変タンパク質断片のいずれかを含み得る。当業者であれば、より大きい分子の断片が合成遺伝子技術のような標準的な遺伝子工学技術を用いて作製され得ることを理解するだろう。キメラ融合タンパク質の態様として抗体結合モチーフを改変するために、より大きなタンパク質の断片を使用する場合、選択されたタンパク質断片の適切な立体配座の折り畳みを確実にするように改変されたタンパク質を設計することが重要である。したがって、タンパク質の二次構造を容易に形成しない短いスペーサーまたはリンカー成分を（融合タンパク質中に）含むことは有用である。例えば、グリシン、セリンおよびアラニンなどのアミノ酸の短い組み合わせをこれらのスペーサーまたはリンカー成分に使用することができる。例示的な実施形態において、アミノ酸配列グリシン（Ｇ）、セリン（Ｓ）、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、グリシン（Ｇ）、セリン（Ｓ）、グリシン（Ｇ）は、改変タンパク質分子（配列番号１９参照）中の受容体複合体の成分から結合ドメインを分離するために使用される。検出成分をシグナル伝達成分に接続するため、またはシグナル伝達成分の異なるセグメントを相互接続するために使用されるペプチドリンカーまたはスペーサーに関して、リンカーは典型的にはある成分のカルボキシル末端を別の成分のアミノ末端に結合する。ペプチドリンカーは、０～２５アミノ酸長または任意の中間整数値で変化し得、典型的には、常にではないが、グリシン（Ｇ）およびセリン（Ｓ）のような親水性アミノ酸を含む。 【００２７】 前述のように、各シグナル伝達成分は、対象の特定の分析物に結合する検出分子に結合する。分析物に結合した検出分子は、（ｉ）膜貫通シグナル伝達成分に結合する、または（ｉｉ）それ自体が細胞表面シグナルトランスデューサー（例えば天然受容体）に結合することになるシグナル伝達成分のいずれかを行う。第１の状況では、それ自身が膜貫通非抗体シグナル伝達成分に結合する十分な数の分析物が十分な数の検出分子に結合すると、シグナル伝達成分の凝集がバイオセンサー細胞表面上で起こる。経路が活性化され、生物学的プロセスが起こり、検出可能なシグナルがレポータータンパク質によって放出される。第２の場合には、十分な数の分析物と十分な数の検出分子とそれ自身が適切な天然の受容体に結合する十分な数の非抗体シグナル伝達成分とが結合すると、細胞表面、シグナル伝達経路が活性化され、細胞内カルシウムの増加が起こり、検出可能な光がレポータータンパク質によって放出される。 【００２８】 各シグナル本発明の例示的実施形態による第１の非抗体シグナル伝達成分は、ＧＳＡＳＧＳＧリンカーを用いてＩｇＭ重鎖定常ドメイン（Ｂ細胞）に融合した細菌結合タンパク質（ＩｇＧｂｐ）を含む。配列番号１は、シグナル伝達成分ＩｇＧｂｐ－ＩｇＭのＤＮＡ配列を提供し、配列番号２は、シグナル伝達成分ＩｇＧｂｐ－ＩｇＭのタンパク質配列を提供する。 【００２９】 本発明の例示的実施形態による第２の非抗体シグナル伝達成分は、ＧＳＡＳＧＳＧリンカーを用いてＢ細胞受容体のＩｇα／β成分に融合された細菌結合タンパク質（ＩｇＧｂｐ）を含む。配列番号３は、シグナル伝達成分ＩｇＧｂｐ－Ｉｇα／βのＤＮＡ配列を提供し、配列番号４は、シグナル伝達成分ＩｇＧｂｐ－Ｉｇα／βのタンパク質配列を提供する。 【００３０】 本発明の例示的実施形態による第３の非抗体シグナル伝達成分は、ＧＳＡＳＧＳＧリンカーを用いてＴ細胞受容体のＣＤ３ゼータ鎖に融合した細菌結合タンパク質（ＩｇＧｂｐ）を含む。配列番号５は、シグナル伝達成分ＩｇＧｂｐ－ＣＤ３ζのＤＮＡ配列を提供し、配列番号６は、シグナル伝達成分ＩｇＧｂｐ－ＣＤ３ζのタンパク質配列を提供する。 【００３１】 本発明の例示的実施形態による第４の非抗体シグナル伝達成分は、ＧＳＡＳＧＳＧリンカーを用いてＩｇＭ重鎖定常ドメイン（Ｂ細胞）に融合したＦｃγＲＩ抗体結合ドメインを含む。配列番号７は、シグナル伝達成分ＦｃγＲＩ－ＩｇＭのＤＮＡ配列を提供し、配列番号８は、シグナル伝達成分ＦｃγＲＩ－ＩｇＭのタンパク質配列を提供する。 【００３２】 本発明の例示的実施形態による第５の非抗体シグナル伝達成分は、ＧＳＡＳＧＳＧリンカーを用いてＢ細胞受容体のＩｇα／β成分に融合したＦｃγＲＩ抗体結合ドメインを含む。配列番号９は、シグナル伝達成分ＦｃγＲＩ－Ｉｇα／βのＤＮＡ配列を提供し、配列番号１０は、シグナル伝達成分ＦｃγＲＩ－Ｉｇα／βのタンパク質配列を提供する。 【００３３】 本発明の例示的実施形態による第６の非抗体シグナル伝達成分は、ＧＳＡＳＧＳＧリンカーを用いてＴ細胞受容体のＣＤ３ゼータ鎖に融合したＦｃγＲＩ抗体結合ドメインを含む。配列番号１１は、シグナル伝達成分ＦｃγＲＩ－ＣＤ３ζのＤＮＡ配列を提供し、配列番号１２は、シグナル伝達成分ＦｃγＲＩ－ＣＤ３ζのタンパク質配列を提供する。 【００３４】 本発明に従う第７の例示的非抗体シグナル伝達成分は、ＧＳＡＳＧＳＧリンカーを用いてＩｇＥ定常ドメイン（Ｂ細胞）に融合された細菌結合タンパク質（ＩｇＧｂｐ）を含む。配列番号１３は、シグナル伝達成分ＩｇＧｂｐ－ＩｇＥのＤＮＡ配列を提供し、配列番号１４は、シグナル伝達成分ＩｇＧｂｐ－ＩｇＥのタンパク質配列を提供する。 【００３５】 本発明による第８の例示的な非抗体シグナル伝達成分は、ＧＳＡＳＧＳＧリンカーを用いてＩｇＥ定常ドメイン（Ｂ細胞）に融合したＦｃγＲＩ抗体結合ドメインを含む。配列番号１５は、シグナル伝達成分ＦｃγＲＩ－ＩｇＥのＤＮＡ配列を提供し、配列番号１６は、シグナル伝達成分ＦｃγＲＩ－ＩｇＥのタンパク質配列を提供する。 【００３６】 本発明による第９の例示的非抗体シグナル伝達成分は、ＧＳＡＳＧＳＧリンカーを用いてＴ細胞受容体のＣＤ３ゼータ鎖に融合した単量体ストレプトアビジンを含む。配列番号１７は、シグナル伝達成分ｍＳＡ－ＣＤ３ζのＤＮＡ配列を提供し、および配列番号１８は、シグナル伝達成分ｍＳＡ－ＣＤ３ζのタンパク質配列を提供する。単量体ストレプトアビジンは、ストレプトアビジン四量体を単量体に分解し、及び得られた単離されたサブユニットの溶解性を増強する突然変異を含むストレプトアビジンの組換え型である。 【００３７】 様々な実施形態において、ユニバーサル検出成分は、抗体ＶＤＪ領域、Ｆａｂフラグメントまたは他の抗体決定基を含む。ユニバーサル検出成分は、Ｔ細胞ＶＪ領域、ＶＤＪ領域、または他のＴ細胞受容体決定基を含み得る。ユニバーサル検出成分は、合成ペプチド、ペプチドではない小さな有機決定基、タンパク質またはペプチド決定基、レクチン決定基、炭水化物結合モジュール、または他の炭水化物結合決定基、脂質結合決定基、または金属または他の金属結合決定基を結合するメタロチオン決定基を含み得る。 【００３８】 ユニバーサル検出成分は、生きた、生体細胞によって発現されるシグナル伝達経路に共有結合することが可能である。一例は、アンカー部分がシグナル伝達経路の一部である、すなわち、細胞の外側から細胞内にシグナルを伝達する膜アンカー抗体である。いくつかの実施形態では、ユニバーサル検出成分はモジュール式ではないが、シグナル伝達経路の不可欠な部分、例えばその経路を形成するキメラタンパク質の一部である。ユニバーサル検出成分は、シグナル伝達経路に非共有結合することができる。一例は、Ｆｃ受容体を担持する分子が膜を通してシグナルを伝達する、シグナル伝達分子上のＦｃ受容体に外部的に結合した抗体である。他の実施形態では、ユニバーサル検出成分はモジュール式であり、シグナル伝達経路を含む細胞には、選択のユニバーサル検出成分を装填することができる。ユニバーサル検出成分は、シグナル伝達経路の一部に非共有結合する決定基を含むことができ、またはユニバーサル検出成分は、それをシグナル変換経路のＦｃ結合部分に非共有結合するＦｃ決定基を含み得る。ユニバーサル検出器成分は、それをシグナル伝達経路のビオチンまたは（ストレプト）アビジン結合部分に非共有結合させるビオチンまたは（ストレプト）アビジン決定基を含み得る。」 「【００３９】 検体結合成分／検出分子 本発明の例示的な実施形態は、本明細書で「検出分子」とも呼ばれる少なくとも１種類の検体結合成分を含み、各検体結合成分は特定の標的検体に結合するようになっている。分析物結合成分は、バイオセンサー細胞によって決して発現されない可溶性抗体であり得る。本発明と共に使用される特定の分析物結合成分は、対象の標的分析物を明確に同定するその能力に基づいて選択される。例示的な実施形態では、分析物結合成分は、感染性物質などの特定の分析物に特異的な市販のＩｇＧなどの可溶性抗体である。別の例示的な実施形態では、分析物結合成分は、例えば抗自己抗原抗体に特異的なビオチン化自己抗原分子などの所定の分析物に特異的なビオチン化分子（またはストレプトアビジン系分子）である。本発明による検出器または標的分子は、自己抗原または自己免疫疾患に関連する自己抗体を含み得る。代表的な自己免疫疾患または障害としては、慢性関節リウマチ（ＲＡ）、若年性ＲＡ（ＪＲＡ）、１型糖尿病、全身性エリテマトーデス、橋本病、グレーブス病、強皮症、セリアック病、クローン病、潰瘍性大腸炎、シェーグレン症候群、多発性硬化症、グッドパスチャー症候群、アジソン病、ウェゲナー肉芽腫症、原発性胆汁性肝硬変、硬化性胆管炎、自己免疫性肝炎、多発性筋痛リウマチ、側頭動脈炎／巨細胞動脈炎、およびギランバレー症候群が挙げられる。検出分子または標的分子はまた、腫瘍特異的もしくは腫瘍関連抗原、またはＥＧＦのような生物学的に活性な分子、インスリンおよび成長ホルモンを含むペプチドホルモン、サイトカイン、インターロイキン、インターフェロン、ＴＮＦなど、またはそのような生物学的に活性な分子に対する抗体ような抗原に対する抗体を含み得る。 【００４０】 本発明のシステムは、ＩｇＧ断片を含む検体結合成分をさらに含むことができ、ＩｇＧ断片は一本鎖抗体または一本鎖ダイアボディであり得る。検出器はまた、アフィボディ（すなわち、改変された結合タンパク質）、アプタマー（例えば、リガンドに結合するように改変されたＤＮＡまたはＲＮＡ分子）、または感染性ウイルスに対する可溶性受容体などの可溶性受容体であり得る。」 「【００６８】 バイオセンサーの実施例Ｉ 図１ａ～１ｂを参照すると、本発明の例示的な実施形態による第１のバイオセンサー１００は、エクオリン１０４を生成するように設計され、かつＣＴＺ１０６で充填されてエクオリン／ＣＴＺ複合体を形成するジャーカットＴ細胞１０２を含む。この特定のバイオセンサーはまた、ＩｇＧｂｐ－ＣＤ３ζ（配列ＩＤ番号５～６）である膜貫通非抗体シグナル伝達成分１０８を発現するように設計されているが、膜貫通非抗体シグナル伝達成分ＦｃγＲＩ－ＣＤ３ζ（配列ＩＤ番号１１～１２）もまたバイオセンサー１００と共に使用することができる。バイオセンサー細胞１０２はまた、少なくとも１つのシグナル伝達経路１１０を含み、その活性化は細胞内Ｃａ２＋１１２の増加をもたらす。図１ｂに示すとおり、標的分析物１１６（例えば大腸菌０１５７）が結合している十分な量の検出分子１１４（例えば可溶性抗体）が膜貫通非抗体シグナル伝達成分１０８に結合すると、シグナル伝達経路１１０が活性化され、Ｃａ２＋１１２が増加し、エクオリン／ＣＴＺ複合体が立体構造の変化を起こして光電子増倍管１２０によって検出される光１１８のシグナル（光子）を放出し、スパイク１２２が試験装置にグラフィック表示され（下記参照）、試験中のサンプル内の標的分析物１１６の存在を指し示す。このディスプレイは、標的分析物１１６に関して定性的および定量的の両方であり得る。 【００６９】 バイオセンサーの実施例ＩＩ 図２ａ～図２ｂを参照すると、上述のように、本発明の例示的な実施形態による第２のバイオセンサー２００は、エクオリン２０４を生成するように設計され、かつＣＴＺ２０６で充填されてエクオリン／ＣＴＺ複合体を形成するＭＣ／９（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－８３０６（商標））肥満細胞２０２を含む。この特定のバイオセンサーは、ＩｇＧｂｐ－ＩｇＥ（配列ＩＤ番号１３～１４）である可溶性非抗体シグナル伝達成分２０８に結合する天然のＦｃイプシロン受容体（すなわち、ＦｃεＲＩ）２０７を発現するが、非抗体シグナル伝達成分ＦｃγＲＩ－ＩｇＥ．（配列ＩＤ番号１５～１６）もまたバイオセンサー２００と共に使用することができる。図２ｂに示すとおり、標的分析物２１６（例えば、大腸菌０１５７）が結合している十分な数の検出分子２１４（例えば、可溶性抗体）が、すでに天然のＦｃイプシロン受容体２０７に結合している非抗体シグナル伝達成分２０８に結合すると、シグナル伝達経路２１０が活性化され、細胞内Ｃａ２＋２１２が増加し、エクオリン／ＣＴＺ複合体が立体配座の変化を起こして光電子増倍管２２０によって検出される光２１８のシグナル（光子）を放出し、スパイク２２２が試験装置にグラフィック表示され（下記参照）、試験中のサンプル内の標的分析物２１６の存在を指し示す。このディスプレイは、標的分析物２１６に関して定性的および定量的の両方であり得る。 【００７０】 バイオセンサーの実施例ＩＩＩ 図３ａ～図３ｂを参照すると、上述のように、本発明の例示的な実施形態による第３のバイオセンサー３００は、エクオリン３０４を生成するように設計され、かつＣＴＺ３０６で充填されてエクオリン／ＣＴＺ複合体を形成するＭＣ／９（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－８３０６（商標））肥満細胞３０２を含む。この特定のバイオセンサーは、ＩｇＧｂｐ－ＩｇＥ（配列ＩＤ番号１３～１４）である非抗体シグナル伝達成分３０８に結合する天然のＦｃイプシロン受容体（すなわち、ＦｃεＲＩ）３０７を発現するが、非抗体シグナル伝達成分ＦｃγＲＩ－ＩｇＥ．（配列ＩＤ番号１５～１６）もまたバイオセンサー３００と共に使用することができる。この特定の実施形態では、バイオセンサー細胞３０２は、ＩｇＧｂｐ－ＩｇＥを発現し、かつこの非抗体シグナル伝達成分を細胞外空間に排出するようにさらに設計されており、これは細胞表面に発現している天然のＦｃεＲＩに結合する。図３ｂに示すように、標的分析物３１６（例えば、大腸菌０１５７）が結合している十分な量の検出分子３１４（例えば、可溶性抗体）が、すでに天然のＦｃイプシロン受容体３０７に結合している非抗体シグナル伝達成分３０８に結合すると、シグナル伝達経路３１０が活性化され、細胞内Ｃａ２＋３１２が増加し、エクオリン／ＣＴＺ複合体が立体構造の変化を起こして光電子増倍管３２０によって検出される光３１８のシグナル（光子）を放出し、スパイク３２２が試験装置にグラフィック表示され（下記参照）、試験中のサンプル内の標的分析物３１６の存在を指し示す。このディスプレイは、標的分析物３１６に関して定性的および定量的の両方であり得る。 【００７１】 バイオセンサーＩＶの実施例 図４を参照すると、本発明の例示的な実施形態による第４のバイオセンサー４００は、エクオリンを生成し、かつｍＳＡ－ＣＤ３ζ（配列ＩＤ番号１７～１８）である膜貫通非抗体シグナル伝達成分４０８を発現するように設計されたバイオセンサー細胞４０２を含む。非抗体シグナル伝達成分ｍＳＡ－ＣＤ３ζ（単量体ストレプトアビジン－ＣＤ３ζ）はビオチン化検出分子４１４に結合し、これは例えば上皮成長因子（ＥＧＦ）のような標的分子４１６に特異的に結合する。例えば、抗ＥＧＦなどの抗標的分子抗体４１７は、上述のように、複数のシグナル伝達成分をクラスター化し、かつシグナル伝達を誘導する標的多量体を生成する。他の実施形態において、単量体ストレプトアビジン成分はビオチン化成分と置き換えられ、代わりの連結手段を用いてもよい。 【００７２】 バイオセンサーＶの実施例 図５を参照すると、本発明の例示的な実施形態による第５のバイオセンサー５００は、エクオリンを生成し、かつｍＳＡ－ＣＤ３ζ（配列ＩＤ番号１７～１８）である膜貫通非抗体シグナル伝達成分５０８を発現するように設計されたバイオセンサー細胞５０２を含む。非抗体シグナル伝達成分ｍＳＡ－ＣＤ３ζ（単量体ストレプトアビジン－ＣＤ３ζ）はビオチン化検出分子５１４に結合し、これはいくつかの実施形態では自己抗原分子である。ビオチン化検出分子５１４は標的分子５１６に特異的に結合し、これはいくつかの実施形態では抗自己抗原分子である。血清試料中の自己抗体は、上述したように、複数のシグナル伝達成分をクラスター化し、かつシグナル伝達を誘導する標的多量体を生成する。他の実施形態において、単量体ストレプトアビジン成分はビオチン化成分と置き換えられ、代わりの連結手段を用いてもよい。」 「【００７６】 Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）は免疫グロブリンのＦｃ部分に結合し、ＦｃγＲＩおよびＦｃεＲＩを含む多くの種類のＦｃ受容体が知られている。これらのＦｃＲの構造的および機能的な結合特性は、Ｆｒｉｄｍａｎ，ＦＡＳＥＢ Ｊ．１９９１ Ｓｅｐ；５（１２）：２６８４－９０を参照することにより組み込まれる。フリドマンによって開示された配列などの既知のＦｃＲアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、８７．５％、９０％、９２．５％、９５％、９７．５％、９８％、９９％の配列同一性または類似性を有するＦｃＲまたはそれらの免疫グロブリン結合セグメントの変異体は、免疫グロブリン結合アミノ酸配列をコードする核酸の直接合成を含む本分野において周知の分子生物学的技術によって製造することができる。」 「【００９９】 Ｆｃ受容体 本発明によって利用される受容体、例えばリガンドまたは検出器としては、代わりのＦｃ含有キメラ受容体を挙げることができる。本明細書に記載のキメラ受容体は、免疫グロブリンのＦｃ部分に対する結合親和性および特異性を有する細胞外ドメイン（「Ｆｃ結合剤」）、膜貫通ドメイン、少なくとも１つの共刺激シグナル伝達ドメイン、およびＩＴＡＭを含む細胞質シグナル伝達ドメインを含む。キメラ受容体は、宿主細胞上で発現されると、細胞外リガンド結合ドメインが標的分子（例えば抗体またはＦｃ融合タンパク質）および共刺激シグナル伝達ドメインに結合するために細胞外に位置するように構成され、ＩＴＡＭ含有細胞質シグナル伝達ドメインは、活性化および／またはエフェクターシグナル伝達を誘発するために細胞質内に位置している。いくつかの実施形態において、本明細書に記載のキメラ受容体構築物は、Ｎ末端からＣ末端にかけて、Ｆｃ結合剤、膜貫通ドメイン、少なくとも１つの共刺激シグナル伝達ドメイン、およびＩＴＡＭ含有細胞質シグナル伝達ドメインを含む。他の実施形態において、本明細書に記載のキメラ受容体構築物は、Ｎ末端からＣ末端にかけて、Ｆｃ結合剤、膜貫通ドメイン、ＩＴＡＭ含有細胞質シグナル伝達ドメイン、および少なくとも１つの共刺激シグナル伝達ドメインを含む。 【０１００】 本明細書に記載のキメラ受容体はいずれも、Ｆｃ結合剤のＣ末端および膜貫通ドメインのＮ末端に位置することができるヒンジドメインをさらに含むことができる。あるいは、またはさらに、本明細書に記載のキメラ受容体構築物は、互いに連結するか、またはＩＴＡＭ含有細胞質シグナル伝達ドメインによって分離され得る、２つ以上の共刺激性シグナル伝達ドメインを含み得る。キメラ受容体コンストラクト中の細胞外Ｆｃ結合剤、膜貫通ドメイン、共刺激シグナル伝達ドメイン、およびＩＴＡＭ含有細胞質シグナル伝達ドメインは、直接またはペプチドリンカーを介して互いに結合することができる。 【０１０１】 本明細書に記載のキメラ受容体コンストラクトは、Ｆｃ結合剤、すなわち適切な哺乳動物（例えば、ヒト、マウス、ラット、ヤギ、ヒツジ、サル）の免疫グロブリン（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、またはＩｇＥ）のＦｃ部分に結合することができる細胞外ドメインを含む。適切なＦｃ結合剤は、哺乳動物Ｆｃ受容体または特定の細菌タンパク質（例えば、タンパク質Ａ、タンパク質Ｇ）などの天然に存在するタンパク質に由来し得る。さらに、Ｆｃ結合剤は、本明細書に記載のＩｇ分子のいずれかのＦｃ部分に高い親和性および特異性で結合するように特異的に改変された合成ポリペプチドであり得る。例えば、そのようなＦｃ結合剤は、免疫グロブリンのＦｃ部分に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片であり得る。例としては、一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、ドメイン抗体、またはナノボディが挙げられるが、これらに限定されるものではない。あるいは、Ｆｃ結合剤は、Ｋｕｎｉｔｚドメイン、小型モジュラー免疫医薬品（ＳＭＩＰ）、アドネクチン、アビマー、アフィボディ、ＤＡＲＰｉｎ、またはアンチカリンなどのＦｃ部分に特異的に結合する合成ペプチドであってもよく、これらはＦｃに対する結合活性についてペプチド結合ライブラリーをスクリーニングすることによって同定される。 【０１０２】 いくつかの実施形態において、Ｆｃ結合剤は哺乳動物Ｆｃ受容体の細胞外リガンド結合ドメインである。本明細書で使用されるように、「Ｆｃ受容体」は、多くの免疫細胞（Ｂ細胞、樹状細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、好中球、肥満細胞、および好酸球を含む）の表面に発現する細胞表面結合受容体であり、抗体のＦｃドメインに対して結合特異性を示す。Ｆｃ受容体は、典型的には抗体のＦｃ（フラグメント結晶化可能）部分に対する結合特異性を有する少なくとも２つの免疫グロブリン（Ｉｇ）様ドメインからなる。いくつかの例において、抗体のＦｃ部分へのＦｃ受容体の結合は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）効果を誘発し得る。本明細書中に記載されるようなキメラ受容体を構築するために使用されるＦｃ受容体は、野生型の同等物と比較してＦｃに対する親和性が増大または減少し得る天然の多型変異体（例えばＣＤ１６ Ｖ１５８変異体）であり得る。あるいは、Ｆｃ受容体は、Ｉｇ分子のＦｃ部分への結合親和性を変化させる１つまたは複数の突然変異（例えば、最大１０個のアミノ酸残基の置換）を有する野生型の同等物の機能的変異体であってもよい。いくつかの例において、その突然変異はＦｃ受容体のグリコシル化パターン、つまりＦｃに対する結合親和性を変化させることができる。 【０１０３】 以下の表は、Ｆｃ受容体細胞外ドメインにおけるいくつかの例示的な多型を列挙する（例えば、Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ． Ｍｏｌ．Ｅｖｏｌ．５３：１－９，２００１を参照のこと）。 【表１】 ［図：0001437942000001.jpg］ 【０１０４】 Ｆｃ受容体は、それが結合することができる抗体のアイソタイプに基づいて分類される。例えば、Ｆｃガンマ受容体（ＦｃγＲ）は一般に、その１つ以上のサブタイプ（すなわち、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）などのＩｇＧ抗体に結合し、Ｆｃアルファ受容体（ＦｃαＲ）は一般に、ＩｇＡ抗体に結合すし、Ｆｃイプシロン受容体（ＦｃｃＲ）は一般に、ＩｇＥ抗体に結合する。いくつかの実施形態において、Ｆｃ受容体は、Ｆｃガンマ受容体、Ｆｃアルファ受容体、またはＦｃイプシロン受容体である。Ｆｃガンマ受容体の例には、ＣＤ６４Ａ、ＣＤ６４Ｂ、ＣＤ６４Ｃ、ＣＤ３２Ａ、ＣＤ３２Ｂ、ＣＤ１６Ａ、およびＣＤ１６Ｂが含まれるが、これらに限定されるものではない。Ｆｃアルファ受容体の例は、ＦｃαＲ１／ＣＤ８９である。Ｆｃイプシロン受容体の例としては、ＦｃεＲＩおよびＦｃイプシロンＲＩＩ／ＣＤ２３が挙げられるが、これらに限定されるものではない。以下の表は、本明細書に記載のキメラ受容体を構築する際に使用するための例示的なＦｃ受容体、およびそれらの対応するＦｃドメインに対する結合活性を列挙する。 【表２】 ［図：0001437942000002.jpg］ 」 （当審注：段落０１０４中の「ＩｇＡ抗体に結合すし、」は「ＩｇＡ抗体に結合し、」の誤記であり、「Ｆｃイプシロン受容体（ＦｃｃＲ）は一般に、」は「Ｆｃイプシロン受容体（ＦｃεＲ）は一般に、」の誤記であると認められる。） 「【０１０５】 本明細書に記載のキメラ受容体に使用するためのＦｃ受容体のリガンド結合ドメインの選択は、当業者には明らかであろう。例えば、それはＦｃ受容体の結合が望まれる抗体のアイソタイプおよび結合相互作用の望まれる親和性などの要因に依存し得る。いくつかの実施例において、（ａ）は、Ｆｃに対する親和性を調節することができる天然に存在する多型を組み込んでいるＣＤ１６の細胞外リガンド結合ドメインである。いくつかの実施例において、（ａ）は、１５８位（例えば、バリンまたはフェニルアラニン）に多型を組み込んでいるＣＤ１６の細胞外リガンド結合ドメインである。いくつかの実施形態において、（ａ）は、そのグリコシル化状態およびそのＦｃに対する親和性を変化させる条件下で生成される。いくつかの実施形態では、（ａ）は、それを組み込んだキメラ受容体をＩｇＧ抗体のサブセットに対して特異的にする修飾を組み込んだＣＤ１６の細胞外リガンド結合ドメインである。例えば、ＩｇＧサブタイプ（例えば、ＩｇＧ１）に対する親和性を増加または減少させる突然変異を組み込むことができる。 【０１０６】 他の実施形態において、Ｆｃ結合剤は、ＩｇＧ分子のＦｃ部分に結合することができる天然に存在する細菌タンパク質に由来する。本明細書に記載のキメラ受容体を構築するのに使用するためのＦｃ結合剤は、全長タンパク質またはその機能的断片であり得る。タンパク質Ａは、元来は細菌黄色ブドウ球菌の細胞壁に見出される４２ｋＤａの表面タンパク質である。これはそれぞれが三ヘリックス束に折り畳まれ、かつほとんどの抗体のＦｃ領域およびヒトＶＨ３ファミリー抗体のＦａｂ領域との相互作用を介してＩｇＧを結合することができる５つのドメインからなる。タンパク質Ｇは、哺乳動物ＩｇＧのＦａｂ領域およびＦｃ領域の両方に結合するＣ群およびＧ群のレンサ球菌において発現する約６０ｋＤａのタンパク質である。天然のタンパク質Ｇもアルブミンに結合するが、アルブミン結合を排除する組換え変異体が設計されている。 【０１０７】 キメラ受容体に使用するためのＦｃ結合剤はまた、コンビナトリアルバイオロジーまたは定方向進化法を使用して新たに作製することもできる。タンパク質骨格（例えば、ＩｇＧ由来のｓｃＦｖ、Ｋｕｎｉｔｚ型プロテアーゼ阻害剤由来のＫｕｎｉｔｚドメイン、アンキリンリピート、タンパク質Ａ由来のＺドメイン、リポカリン、フィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン、Ｆｙｎ由来ＳＨ３ドメインなど）から始めて、表面上の一連の残基についてのアミノ酸側鎖は、変異型骨格の大きなライブラリーを作製するために無作為に置換することができる。大きなライブラリーから、最初に結合について選択し、続いてファージ、リボソーム、または細胞ディスプレイによって増幅することによって、Ｆｃドメインのような標的に対する親和性を有する珍しい変異体を単離することが可能である。標的に対する最も高い親和性を有するタンパク質を単離するために、一連の選択および増幅を繰り返し使用することができる。 【０１０８】 本明細書に記載のいずれのＦｃ結合剤も、治療用抗体のＦｃ部分に対して適切な結合親和性を有し得る。本明細書中で使用される場合、「結合親和性」とは、見かけの会合定数またはＫＡをいう。ＫＡは解離定数ＫＤの逆数である。本明細書に記載のキメラ受容体のＦｃ受容体ドメインの細胞外リガンド結合ドメインは、少なくとも１０－５、１０－６、１０－７、１０－８、１０－９、１０－１０Ｍ、または抗体のＦｃ部分よりも低いＫＤの結合親和性を有し得る。いくつかの実施形態において、Ｆｃ結合剤は、別の抗体、抗体のアイソタイプ、またはそれらのサブタイプに対するＦｃ結合剤の結合親和性と比較して、抗体、抗体のアイソタイプ、またはそれらのサブタイプに対して高い結合親和性を有する。いくつかの実施形態において、Ｆｃ受容体の細胞外リガンド結合ドメインは、他の抗体、抗体のアイソタイプ、またはそのサブタイプに対するＦｃ受容体の細胞外リガンド結合ドメインの結合と比較して、抗体、抗体のアイソタイプ、またはそのサブタイプに対して特異性を有する。高親和性結合を有するＦｃガンマ受容体には、ＣＤ６４Ａ、ＣＤ６４Ｂ、およびＣＤ６４Ｃが含まれる。低親和性結合を有するＦｃガンマ受容体には、ＣＤ３２Ａ、ＣＤ３２Ｂ、ＣＤ１６Ａ、およびＣＤ１６Ｂが含まれる。高親和性結合を有するＦｃイプシロン受容体はＦｃイプシロンＲＩであり、低親和性結合を有するＦｃイプシロン受容体はＦｃイプシロンＲＩＩ／ＣＤ２３である。 【０１０９】 Ｆｃ結合剤を含むＦｃ受容体またはキメラ受容体（例えば、Ｆｃ受容体の細胞外リガンド結合ドメイン）に対する結合親和性または結合特異性は、平衡透析、平衡結合、ゲル濾過、ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴、または分光法を含む様々な方法によって決定することができる。 【０１１０】 いくつかの実施形態において、Ｆｃ受容体の細胞外リガンド結合ドメインは、天然のＦｃガンマ受容体、Ｆｃアルファ受容体、またはＦｃイプシロン受容体の細胞外リガンド結合ドメインのアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９％）同一であるアミノ酸配列を含む。２つのアミノ酸配列の「同一性パーセント」は、Ｋａｒｌｉｎ ａｎｄ Ａｌｔｓｃｈｕｌ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：５８７３－７７，１９９３において修正されたＫａｒｌｉｎ ａｎｄ Ａｌｔｓｃｈｕｌ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：２２６４－６８，１９９０のアルゴリズムを用いて決定することができる。そのようなアルゴリズムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－１０，１９９０のＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）に組み込まれている。ＢＬＡＳＴタンパク質の検索は、本開示のタンパク質分子と相同なアミノ酸配列を得るために、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワード長＝３を用いて実施することができる。２つの配列間にギャップが存在する場合、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５（１７）：３３８９－３４０２，１９９７に記載されるように使用することができる。ＢＬＡＳＴおよびＧａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合、それぞれのプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトのパラメータを使用することができる。」 「【０１１１】 本発明のさらに別の実施形態は、改変細胞を分析物と接触させるための空間または区画；リガンド、シグナル伝達経路、およびレポーターを含む改変細胞；および検出器を含むシステムを提供し、ユニバーサル検出成分が所定の検出成分に結合し、シグナル伝達経路は当該分析物のリガンドへの結合によって誘導される第一のシグナルを受け取り、当該第一のシグナルをレポーターに伝達し、前記レポーターはシグナル伝達経路からの第一シグナルを受け取ると第二の検出可能なシグナルを放出する。 【００１２】 本発明のさらに別の実施形態は、改変細胞を所定の分析物と接触させるための空間または区画；リガンドと、光または別の検出可能なシグナルを放出する検出器にシグナルを構成的に伝達するシグナル伝達成分との集合体を含む改変細胞；および検出器を含むシステムを提供し、リガンドおよびシグナル伝達成分の集合体への所定の分析物の結合はシグナル伝達を減衰させ、かつレポーターによる光または他の検出可能なシグナルの放出を減衰させる。リガンドおよびシグナル伝達成分の集合体は粘着性アダプターによって維持され、当該粘着性アダプターが所定の分析物によって結合されると、リガンドおよびシグナル伝達成分の集合体を維持するその能力は弱まる。 【０１１３】 本発明のさらに別の実施形態は、改変細胞を所定の分析物と接触させるための空間または区画；リガンドと、所定の分析物に結合したときに阻害シグナルを伝達するシグナル伝達成分と、光または別の検出可能なシグナルを構成的に放出するレポーターとを含む改変細胞；および検出器を含むシステムを提供し、所定の分析物とユニバーサル検出成分との結合は、レポーターによる光または他の検出可能なシグナルの放出を減衰させる阻害シグナルを誘導する。この実施形態では、ユニバーサル検出成分は、免疫受容体チロシン系阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を含むことができる。ＩＴＩＭは、Ｓｔａｕｂ Ｅ，Ｒｏｓｅｎｔｈａｌ Ａ，Ｈｉｎｚｍａｎｎ Ｂ（２００４）．"Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｒｅｃｅｐｔｏｒ ｔｙｒｏｓｉｎｅ－ｂａｓｅｄ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｍｏｔｉｆｓ ｉｎ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｐｒｏｔｅｏｍｅ"．Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌ １６（４）：４３５-４５６にさらに開示されており、この参照により組み込まれる。」 「図１ ［図：0001437942000003.jpg］ 」 「図２ ［図：0001437942000004.jpg］ 」 「図３ ［図：0001437942000005.jpg］ 」 「図４ ［図：0001437942000006.jpg］ 」 「図５ ［図：0001437942000007.jpg］ 」 ３ 当審の判断 前記２で摘記したとおり、発明の詳細な説明には、段落００１８～００１９に「シグナル生成レポーター」について、段落００２０～００２３に「活性化メカニズム」について、段落００２４～００３８に「ユニバーサル検出成分」について、段落００３９～００４０に「検体結合成分／検出分子」（本願発明における「分析物結合成分」に対応）について、それぞれ概要が説明され、段落００６８～００７２、図１～５に実施例が記載されている。以下、「活性化メカニズム」、「ユニバーサル検出成分」及び「実施例」について、判断する。 （１）活性化メカニズムについて 活性化メカニズムについては、段落００２３に「シグナル伝達経路は、小胞体から細胞質ゾルへのカルシウムイオンの放出によって第一のシグナルを伝達し得、第二のシグナルは、カルシウムイオンに応答してレポーターによって放出され得る。このシグナル伝達経路は、Ｂ細胞、Ｔ細胞、肥満細胞、マクロファージ、およびその他の免疫細胞に見られるセカンドメッセンジャーカスケードで、細胞表面受容体の架橋がチロシンキナーゼを活性化し、それが次にホスホリパーゼＣをリン酸化し、それがホスファチジルイノシトール４，５－ビスリン酸（ＰＩＰ２）からイノシトール１，４，５－トリスリン酸（ＩＰ３）、およびジアシルグリセロールへと突き進み、その後、ＩＰ３はカルシウムチャネルを開き、小胞体などの細胞内貯蔵からカルシウムを放出するか、または細胞外カルシウムを取り込むことによって、細胞のサイトゾル中のカルシウム濃度を上昇させる。」と免疫細胞におけるカルシウムイオン濃度を上昇させるシグナル伝達系について記載があり、同段落には、他の活性化メカニズムに関して「受容体の種類、細胞の種類、および所望のシグナル伝達方法に応じて、Ｇ－タンパク質－アデニリル環状－ｃＡＭＰ－タンパク質キナーゼＡカスケードなどの代替のセカンドメッセンジャーカスケードを使用し得る。シグナル伝達経路はまた、ジアシルグリセロール、セラミド、または他の親油性セカンドメッセンジャー分子の放出によってシグナルを伝達することができ、レポーターはジアシルグリセロール、セラミド、または他の親油性セカンドメッセンジャー分子の放出に応答して第２のシグナルを放出する。シグナル伝達経路はまた、一酸化窒素（「ＮＯ」）、ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ、または他の環状ヌクレオチドの放出または産生によってシグナルを伝達することができ、レポーターはこの放出または産生に応答して第２のシグナルを放出する。シグナル伝達経路はまた、スーパーオキシド、過酸化水素、一酸化炭素、硫化水素、または他の二次レドックスメッセンジャーの放出または生成によってシグナルを伝達することができ、レポーターはスーパーオキシドの放出または生成に応答して第２のシグナルを放出する。過酸化水素、一酸化炭素、硫化水素、または他の二次酸化還元メッセンジャー分子。特定の実施形態において、活性化剤メカニズムは、細胞のｐＨもしくは温度の変化、または細胞の電気的もしくは磁気的性質の変化を含む。」との記載があるが、例示されている各活性化メカニズムを「ユニバーサル検出成分」とどのように関連付けるのか具体的に記載されていない。 （２）「ユニバーサル検出成分」について 段落００２４～００３８の「ユニバーサル検出成分」の説明において、特に、段落００２４で「ユニバーサル検出成分として機能する様々な非抗体シグナル伝達成分を含む」と記載されており、「シグナル伝達成分は、バイオセンサー細胞の表面に改変されて発現され、最終的に検出可能なシグナルを放出するレポータータンパク質をもたらすシグナル伝達経路を活性化するように適合された膜貫通キメラ融合タンパク質」、「シグナル伝達成分は、シグナル伝達経路を活性化するように適合され、最終的に検出可能なシグナルを発するレポータータンパク質を生じさせるように細胞表面シグナルトランスデューサーに結合するように適合される、天然の受容体またはレポータータンパク質のような、細胞表面シグナルトランスデューサーに結合するように適合される、可溶性キメラ融合タンパク質」、「シグナル伝達成分はバイオセンサー細胞内に改変されて発現される可溶性キメラ融合タンパク質」と記載され、「キメラ融合タンパク質」について、段落００２５に「（ｉ）少なくとも１つの種類の検出分子（例えば、可溶性抗体）に結合するように適合されるタンパク質の成分、（ｉｉ）生きた、改変バイオセンサー細胞によって通常発現されるレセプター複合体の成分を含みうる。」と説明され、レセプター複合体の成分として、「ＩｇＭ（Ｂ細胞バイオセンサー用）、Ｉｇα／β（Ｂ細胞バイオセンサー用）、ＩｇＥ（肥満細胞バイオセンサー用）、ＣＤ１９（Ｂ細胞バイオセンサー用）、ＣＤ３ゼータ（Ｔ細胞バイオセンサー用）、またはＦｃεＲＩ（肥満細胞バイオセンサー用）」が挙げられている。 そして、本願発明において（ｉ）～（ｖｉｉｉ）で特定される各非抗体ユニバーサル検出成分については、段落００３７において、「様々な実施形態において、ユニバーサル検出成分は、抗体ＶＤＪ領域、Ｆａｂフラグメントまたは他の抗体決定基を含む。ユニバーサル検出成分は、Ｔ細胞ＶＪ領域、ＶＤＪ領域、または他のＴ細胞受容体決定基を含み得る。ユニバーサル検出成分は、合成ペプチド、ペプチドではない小さな有機決定基、タンパク質またはペプチド決定基、レクチン決定基、炭水化物結合モジュール、または他の炭水化物結合決定基、脂質結合決定基、または金属または他の金属結合決定基を結合するメタロチオン決定基を含み得る。」、段落００３８において「ユニバーサル検出成分は、それをシグナル変換経路のＦｃ結合部分に非共有結合するＦｃ決定基を含み得る。ユニバーサル検出器成分は、それをシグナル伝達経路のビオチンまたは（ストレプト）アビジン結合部分に非共有結合させるビオチンまたは（ストレプト）アビジン決定基を含み得る。」と記載されている。また、「（ｖｉ）免疫受容体チロシン系阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）」については、段落０１１３に説明されている。 しかし、シグナル伝達の起点となる成分については、段落００２５の各免疫細胞用のもの（ＩｇＭ、Ｉｇα／β、ＩｇＥ、ＣＤ１９、ＣＤ３ゼータ、ＦｃεＲＩ）しか具体的に記載されておらず、これらの成分から開始されるシグナル伝達（本願発明の「（ｃ）」の「（ｉｖ）前記生体細胞内のホスファチジルイノシトール経路の活性化」に対応する。後述する（３）の記載を参照。）以外の（本願発明において特定される）活性化メカニズムとの関連において、非抗体ユニバーサル検出成分として、どのような成分を用いればよいか具体的に把握することができない。 （３）実施例について 前記２で摘記したとおり、段落００６８～００７２、図１～５には、バイオセンサーの５つの実施例が記載されている。５つの実施例における本願発明の各構成要件の具体的な開示は次のとおりである。 ○実施例Ｉ（段落００６８及び図１）： ・非抗体ユニバーサル検出成分・・・「ＩｇＧｂｐ－ＣＤ３ζ」である「膜貫通非抗体シグナル伝達成分１０８」及び「ＦｃγＲＩ－ＣＤ３ζ」 ・分析物結合成分・・・「検出分子１１４（例えば可溶性抗体）」 ・活性化メカニズム・・・「Ｃａ２＋１１２の増加をもたらす」「シグナル伝達経路１１０」 ・シグナル生成レポーター・・・「Ｃａ２＋１１２が増加し、」「立体構造の変化を起こして」「光１１８のシグナル（光子）を放出」する「エクオリン／ＣＴＺ複合体」 ○実施例ＩＩ（段落００６９及び図２）： ・非抗体ユニバーサル検出成分・・・「Ｆｃイプシロン受容体２０７に結合している」「ＩｇＧｂｐ－ＩｇＥ（配列ＩＤ番号１３～１４）である可溶性非抗体シグナル伝達成分２０８」及び「非抗体シグナル伝達成分ＦｃγＲＩ－ＩｇＥ」 ・分析物結合成分・・・「検出分子２１４（例えば、可溶性抗体）」 ・活性化メカニズム・・・「細胞内Ｃａ２＋２１２が増加する」「シグナル伝達経路２１０」 ・シグナル生成レポーター・・・「細胞内Ｃａ２＋２１２が増加し、」「立体配座の変化を起こして」「光２１８のシグナル（光子）を放出」する「エクオリン／ＣＴＺ複合体」 ○実施例ＩＩＩ（段落００７０及び図３）： ・非抗体ユニバーサル検出成分・・・「天然のＦｃイプシロン受容体（すなわち、ＦｃεＲＩ）３０７」に結合する「ＩｇＧｂｐ－ＩｇＥ（配列ＩＤ番号１３～１４）である非抗体シグナル伝達成分３０８」及び「非抗体シグナル伝達成分ＦｃγＲＩ－ＩｇＥ」 ・分析物結合成分・・・「検出分子３１４（例えば、可溶性抗体）」 ・活性化メカニズム・・・「細胞内Ｃａ２＋３１２が増加する」「シグナル伝達経路３１０」 ・シグナル生成レポーター・・・「細胞内Ｃａ２＋３１２が増加し、」「立体構造の変化を起こして」「光３１８のシグナル（光子）を放出」する「エクオリン／ＣＴＺ複合体」 ○実施例ＩＶ（段落００７１及び図４） ・非抗体ユニバーサル検出成分・・・「ｍＳＡ－ＣＤ３ζ（配列ＩＤ番号１７～１８）」「（単量体ストレプトアビジン－ＣＤ３ζ）」「である膜貫通非抗体シグナル伝達成分４０８」 ・分析物結合成分・・・「ビオチン化検出分子４１４」 ・シグナル生成レポーター・・・「エクオリン」 ○実施例Ｖ（段落００７２及び図５） ・非抗体ユニバーサル検出成分・・・「ｍＳＡ－ＣＤ３ζ（配列ＩＤ番号１７～１８）」「（単量体ストレプトアビジン－ＣＤ３ζ）」「である膜貫通非抗体シグナル伝達成分５０８」 ・分析物結合成分・・・「ビオチン化検出分子５１４」 ・シグナル生成レポーター・・・「エクオリン」 これらの実施例は、全てシグナル生成レポーターとして、エクオリンが用いられており、エクオリンはカルシウムイオン感受性である。 そして、実施例Ｉ、ＩＶ、Ｖで用いられている「ＣＤ３ζ」は、Ｔ細胞におけるシグナル伝達の上流を担う物質であり、このシグナル伝達の下流では、ホスファチジルイノシトール４，５－ビスリン酸（ＰＩＰ２）からイノシトール１，４，５－トリスリン酸（ＩＰ３）、及びジアシルグリセロールへと進み、ＩＰ３によってカルシウムチャネルが開かれる。また、実施例Ｉの「ＩｇＧｂｐ」、「ＦｃγＲＩ」は、抗体のＦｃ領域に結合するドメインである。そうすると、実施例Ｉは、本願発明の「（ｉｖ）前記生体細胞内のホスファチジルイノシトール経路の活性化」である「（ｃ）」の「活性化メカニズム」と「（ｖｉｉ）前記生体細胞内のシグナル伝達経路のＦｃ結合部分に非共有結合するＦｃ決定因子」である「（ｄ）」の「非抗体ユニバーサル検出成分」を備えているといえ、実施例ＩＶ、Ｖは、本願発明の「（ｉｖ）前記生体細胞内のホスファチジルイノシトール経路の活性化」である「（ｃ）」の「活性化メカニズム」と「（ｖｉｉｉ）前記生体細胞内のシグナル伝達経路のビオチンまたはストレプトアビジン結合部分に非共有結合するビオチンまたはストレプトアビジン決定因子」である「（ｄ）」の「非抗体ユニバーサル検出成分」を備えているといえる。 また、実施例ＩＩ、ＩＩＩでは、「Ｆｃイプシロン受容体」に「ＩｇＧｂｐ－ＩｇＥ」又は「ＦｃγＲＩ－ＩｇＥ」のＩｇＥのＦｃ領域に結合することでシグナル伝達が生じ、下流において、ホスホリパーゼＣが活性化され、ホスファチジルイノシトール４，５－ビスリン酸（ＰＩＰ２）からイノシトール１，４，５－トリスリン酸（ＩＰ３）、及びジアシルグリセロールへと進み、ＩＰ３によってカルシウムチャネルが開かれるから、実施例ＩＩ、ＩＩＩは、本願発明の「（ｉｖ）前記生体細胞内のホスファチジルイノシトール経路の活性化」である「（ｃ）」の「活性化メカニズム」と「（ｖｉｉ）前記生体細胞内のシグナル伝達経路のＦｃ結合部分に非共有結合するＦｃ決定因子」である「（ｄ）」の「非抗体ユニバーサル検出成分」を備えているといえる。 発明の詳細な説明には、これらの実施例以外に段落００９９～０１１０に、本願発明の「（ｄ）」の「非抗体ユニバーサル検出成分」である「（ｖｉｉ）前記生体細胞内のシグナル伝達経路のＦｃ結合部分に非共有結合するＦｃ決定因子」に対応する「Ｆｃ受容体」についての説明が詳細に記載されている。しかし、これらの段落の記載において、「Ｆｃ受容体」を、本願発明における「（ｃ）」の「活性化メカニズム」である「（ｉ）前記生体細胞のｐＨまたは温度の変化」、「（ｉｉ）前記生体細胞の電気的または磁気的性質の変化」、「（ｉｉｉ）前記生体細胞内のＧタンパク質共役受容体シグナル経路の活性化」、「（ｖ）ジアシルグリセロール、セラミド、または他の親油性メッセンジャー分子を放出する前記生体細胞内のシグナル伝達経路の活性化」、「（ｖｉ）一酸化窒素、ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ、または他の環状ヌクレオチドを放出または生成する前記生体細胞内のシグナル伝達経路の活性化」、「（ｖｉｉ）スーパーオキシド、過酸化水素、一酸化炭素、硫化水素、または他の二次酸化還元シグナル分子を放出または生成する前記生体細胞内のシグナル伝達経路の活性化」に具体的にどのように関連付けるか記載されていない。 （４）総合的な検討 前記（１）～（３）を総合すると、本願の発明の詳細な説明においては、本願発明の「（ｄ）前記活性化メカニズムに関連する非抗体ユニバーサル検出成分」について、「（ｖｉｉ）前記生体細胞内のシグナル伝達経路のＦｃ結合部分に非共有結合するＦｃ決定因子」又は、「（ｖｉｉｉ）前記生体細胞内のシグナル伝達経路のビオチンまたはストレプトアビジン結合部分に非共有結合するビオチンまたはストレプトアビジン決定因子」を、「（ｉｖ）前記生体細胞内のホスファチジルイノシトール経路の活性化」である「（ｃ）」の「活性化メカニズム」と関連させたものが具体的に説明されている。 しかし、発明の詳細な説明の記載からは、本願発明の「（ｄ）」の（ｉ）～（ｖｉｉｉ）で特定される各「非抗体ユニバーサル検出成分」の中で具体的にどのような成分を、本願発明の「（ｃ）」の（ｉ）～（ｖｉｉｉ）で特定される各「活性化メカニズム」とどのように組み合わせて、どの細胞において実施すればよいかを前段落で言及した組み合わせ以外について把握することができない。 特に、「（ｃ）」の「（ｉ）前記生体細胞のｐＨまたは温度の変化」と「（ｉｉ）前記生体細胞の電気的または磁気的性質の変化」の「活性化メカニズム」に関しては、これらの変化を生じさせる経路及びその経路に対応する「シグナル生成レポーター」について、本願の出願時において、技術常識として知られていたとは認められない。そのため、例えば「（ｃ）」の「（ｉｉ）」のうち「前記生体細胞の」「磁気的性質の変化」を選択肢として採用して本願発明を実施しようとした場合、どのような物質を「非抗体ユニバーサル検出成分」として採用するかについて、当該技術常識がない中で、当業者は選択をせざるを得ない。どのような物質が「非抗体ユニバーサル検出成分」として機能するかの指標がない状態で候補物質も十分に絞ることができないのであるから、「（ｄ）」の（ｉ）～（ｖｉｉｉ）に該当する多くの既存物質をいわば闇雲に実験系に適用し、それぞれの物質について磁気的性質の変化を測定し、所望のシグナルを得られるかを確認する作業が必要となり、当該作業は明らかに当業者に期待しうる以上の過度の試行錯誤を要すると認められる。 「（ｉ）前記生体細胞のｐＨまたは温度の変化」と「（ｉｉ）前記生体細胞の電気的」「性質の変化」の「活性化メカニズム」についても同様である。 このため、本願発明を実施するにあたり、本願発明の詳細な説明には、過度の試行錯誤を要することなく、その物を生産し、使用することができる程度の記載がない。 （５）請求人の主張について ア 請求人の主張 請求人は、請求の理由において以下の主張をしている。 「本願の請求項に記載の活性化メカニズム、非抗体ユニバーサル検出成分、分析物結合成分、および標的分析物間の機能的相互作用は、本願の明細書の段落および図において、非常に明確に説明および図示されております（例えば、本願の明細書段落［００２０］～［００４０］および［００６８］～［００７２］および図１ａ～５等参照）。この詳細な開示に基づき、特許請求の範囲に記載の技術を実施するために過度な実験は必要とせず、当業者であれば、開示された様々な生物学的構成要素の性質および特徴を理解し、特許請求の範囲に記載のシステムに関してそれらの互換性を理解するであろうと思量いたします。」 イ 主張に対する当審の判断 請求人の前記主張について検討する。 請求人が根拠する発明の詳細な説明の記載については、前記（１）～（３）で触れたとおりであるが、前記（４）で説示したように、少なくとも、「活性化メカニズム」の「（ｉ）前記生体細胞のｐＨまたは温度の変化」と「（ｉｉ）前記生体細胞の電気的または磁気的性質の変化」については、本願の出願時において、技術常識であったとは認められず、発明の詳細な説明においても具体的に記載されていないため、このような変化と関連付けられる「ユニバーサル検出成分」としてどのような物を本願発明の（ｉ）～（ｖｉｉｉ）で特定されるもの内で具体的に選択することができるのかを、発明の詳細な記載及び出願時の技術常識から当業者が把握することができない。 よって、請求人の前記主張は採用することができない。 （６）まとめ 以上のとおり、本願の発明の詳細な説明の記載は、当業者が本願発明の実施をすることができる程度に明確かつ十分に記載したものでないから、特許法第３６条第４項第１号に規定する要件を満たしていない。 第５ むすび 以上のとおり、本願は、本願発明について、発明の詳細な説明の記載が特許法第３６条第４項第１号に規定する要件を満たしていないから、その余について検討するまでもなく、拒絶すべきものである。 よって、結論のとおり審決する。