2020-800025

上記当事者間の特許第６５２２０７２号発明「イズロン酸－２－スルファターゼのＣＮＳ送達のための方法および組成物」の特許無効審判事件について、次のとおり審決する。

結 論 特許第６５２２０７２号の特許請求の範囲を、訂正請求書に添付された特許請求の範囲のとおり、訂正後の請求項〔１～１２〕について訂正することを認める。 特許第６５２２０７２号の請求項１～１２についての審判請求は成り立たない。 審判費用は請求人の負担とする。

理 由 第１ 手続の経緯 本件の特許は、平成２３年６月２５日（パリ条約による優先権主張外国庁受理 ２０１１年２月１１日、２０１０年７月１日、２０１０年９月２９日、２０１１年１月２４日、２０１０年６月２５日、２０１１年６月９日、２０１１年４月１５日 いずれもアメリカ合衆国）を国際出願日とする特願２０１３－５１６８４５号の一部を、平成２７年１２月１７日に新たな出願としたものである特願２０１５－２４６２４４号の一部を、平成２９年１０月４日に新たな出願としたものである特願２０１７－１９４３４８号について、令和１年５月１０日に特許第６５２２０７２号として特許権の設定登録がされたものである（以下、「本件特許」という。）。令和２年３月６日に請求人グリーン クロス コーポレイションにより、本件特許の請求項１～１２に記載された発明についての特許を無効とすることを求める無効審判が請求された。手続の経緯及び提出された書面は、概略、以下のとおりである。 令和２年 ３月 ６日 審判請求書、甲第１～１１号証 令和２年 ５月 １日付け 手続補正書（審判請求書） 令和２年１０月 ６日付け 答弁書、訂正請求書、乙第１～１２号証 令和２年 １月１３日付け 審理事項通知書 令和３年 ３月 ２日付け 口頭審理陳述要領書（請求人）、甲第１２～２１号証、口頭審理陳述要領書（被請求人）、乙第１３～１４号証 令和３年 ３月２９日付け 上申書（請求人）、甲第２２号証 令和３年 ３月２９日 口頭審理 令和３年 ４月 ５日付け 上申書（請求人） 令和３年 ４月２７日付け 上申書（被請求人）、乙第１５～２５号証 令和３年 ５月２５日付け 上申書（請求人）、甲第２３～２４号証 第２ 訂正請求について １ 訂正請求の趣旨及び訂正の内容 被請求人は、令和２年１０月６日付け訂正請求書により、本件特許の特許請求の範囲を、訂正請求書に添付した訂正特許請求の範囲のとおり、訂正後の請求項１～１２について訂正することを求めた（以下、令和２年１０月６日付け訂正請求及び訂正特許請求の範囲を、それぞれ「本件訂正」、「本件訂正特許請求の範囲」ともいう。） 本件訂正の内容は以下のとおりである。 （１）訂正事項１ 特許請求の範囲の請求項１に「前記安定製剤は、少なくとも５ｍｇ／ｍｌの濃度のイズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）タンパク質を含み、」とあるのを、「前記安定製剤は、５ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇ／ｍｌの濃度のイズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）タンパク質を含み、」に訂正する。 （２）訂正事項２ 特許請求の範囲の請求項３の（ｉ）に「任意に：」とあるのを削除する。 （３）訂正事項３ 特許請求の範囲の請求項３の（ｉｉｉ）に「末梢標的組織への前記Ｉ２Ｓタンパク質の全身的送達をさらに生じさせ、任意に、前記末梢標的組織は、肝臓、腎臓および／または心臓から選択される、」とあるのを、「肝臓、腎臓および心臓から選択される末梢標的組織への前記Ｉ２Ｓタンパク質の全身的送達をさらに生じさせる、」に訂正する。 （４）訂正事項４ 特許請求の範囲の請求項３の（ｖ）に「脳標的組織、脊髄ニューロンおよび／または末梢標的組織内のＧＡＧ蓄積を減少させ、任意に、前記ＧＡＧ蓄積は、対照と比較して、少なくとも２０％、４０％、５０％、６０％、８０％、９０％、１倍、１．５倍、または２倍まで低減される、ならびに／または、」とあるのを、「脳標的組織、脊髄ニューロンおよび／または末梢標的組織内のＧＡＧ蓄積を減少させる、」に訂正する。 （５）訂正事項５ 特許請求の範囲の請求項３の（ｖｉ）に「ニューロンの空胞化を減少させ、任意に、前記ニューロンがプルキンエ細胞を含む、」とあるのを、「ニューロンの空胞化を減少させる、」に訂正する。 （６）訂正事項６ 特許請求の範囲の請求項４に「Ｉ２Ｓ酵素活性の増加を生じさせ、任意に： （ｉ）前記Ｉ２Ｓ酵素活性が、対照と比較して、少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍または１０倍まで増加される、および／または、 （ｉｉ）前記Ｉ２Ｓ酵素活性の増加が、少なくとも１０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、２０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、４０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、５０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、６０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、７０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、８０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、９０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、１００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、１５０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、２００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、２５０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、３００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、３５０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、４００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、４５０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、５００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、５５０ｎｍｏｌ／時・ｍｇまたは６００ｎｍｏｌ／時・ｍｇである、あるいは、 （ｉｉｉ）前記Ｉ２Ｓ酵素活性が、腰部で増加され、任意に、前記腰部において増加した前記Ｉ２Ｓ酵素活性は、少なくとも２０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、３０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、４０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、５０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、６０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、７０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、８０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、９０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、または１０，０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇである、」とあるのを、「Ｉ２Ｓ酵素活性の増加を生じさせる、」に訂正する。 （７）訂正事項７ 特許請求の範囲の請求項５の（ｉ）に「静脈内投与と併せて用いられ、任意に、前記静脈内投与は、１か月に１回以下の頻度であるか、または、２ヶ月に１回以下の頻度である、」とあるのを「静脈内投与と併せて用いられる、」に訂正する。 （８）訂正事項８ 特許請求の範囲の請求項６に「１０ｍｇ／ｍｌ以上の濃度のイズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）タンパク質と、」とあるのを、「１０ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇ／ｍｌの濃度のイズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）タンパク質と、」に訂正する。 （９）訂正事項９ 特許請求の範囲の請求項７に「３０ｍｇ／ｍｌ、５０ｍｇ／ｍｌ、１００ｍｇ／ｍｌ、２００ｍｇ／ｍｌ、２５０ｍｇ／ｍｌ、および３００ｍｇ／ｍｌから選択される濃度で、」とあるのを、「３０ｍｇ／ｍｌ、５０ｍｇ／ｍｌ、および１００ｍｇ／ｍｌから選択される濃度で、」に訂正する。 （１０）訂正事項１０ 特許請求の範囲の請求項９に「前記塩がＮａＣｌであり、任意に、前記ＮａＣｌは、０～３００ｍＭの範囲の濃度として、任意に、１３７～１５４ｍＭの範囲の濃度で、任意に１５４ｍＭの濃度で存在する、」とあるのを、「前記塩がＮａＣｌである、」に訂正する。 （１１）訂正事項１１ 特許請求の範囲の請求項１０に「前記ポリソルベート界面活性剤が、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート８０およびこれらの組み合わせからなる群から選択され、任意に、前記ポリソルベート界面活性剤は、ポリソルベート２０であり、かつ、０～０．０２％の範囲の濃度で、任意に、０．００５％の濃度で存在する、」とあるのを、「ポリソルベート２０である、」に訂正する。 （１２）訂正事項１２ 特許請求の範囲の請求項１１に「（ｉ）前記製剤が液体製剤である、または （ｉｉ）前記製剤が凍結乾燥粉末として製剤化される、」とあるのを、「前記製剤が液体製剤である、」に訂正する。 （１３）訂正事項１３ 特許請求の範囲の請求項１２に「請求項１～１１のいずれか一項に記載の安定製剤の単回投与形態を含む容器であって、任意に： （ｉ）前記容器が、アンプル、バイアル、カートリッジ、レザバー、ｌｙｏ－ｊｅｃｔ、または前充填した注射器から選択され、任意に、前記容器は、前充填された注射器であり、かつ、ベイクドシリコーン被覆膜を有するホウケイ酸ガラス注射器、噴霧されたシリコーンを有するホウケイ酸ガラス注射器、またはシリコーンを含有しないプラスチック樹脂注射器から任意に選択される、あるいは （ｉｉ）前記安定製剤が、５．０ｍＬ未満の容量、任意に、３．０ｍＬ未満の容量で存在する、 容器。」とあるのを、「請求項１～１１のいずれか一項に記載の安定製剤の単回投与形態を含む容器。」に訂正する。 ２ 訂正の適否 （１）訂正事項１について ア 訂正の目的 訂正事項１は、特許請求の範囲の請求項７及び本件特許明細書の【００１３】の「いくつかの実施形態では、Ｉ２Ｓタンパク質は、およそ１～３００ｍｇ／ｍｌの範囲の濃度（例えば、・・・１～１００ｍｇ／ｍｌ、１～５０ｍｇ／ｍｌ）で存在する。いくつかの実施形態では、Ｉ２Ｓタンパク質は、・・・５ｍｇ／ｍｌ、・・・１００ｍｇ／ｍｌ、・・・または３００ｍｇ／ｍｌから選択される濃度でまたはその濃度までで存在する。」との記載に基づき、訂正前の請求項１に記載のイズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）タンパク質の濃度を「少なくとも５ｍｇ／ｍｌ」から「５ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇ／ｍｌ」に限定するものであるから、特許法第１３４条の２第１項ただし書き第１号に規定する特許請求の範囲の減縮を目的とするものである。 イ 新規事項について 前記アのとおり、訂正事項１は、本件特許明細書中の発明の詳細な説明及び特許請求の範囲に基づいて導き出される構成であるから、願書に添付した明細書、特許請求の範囲又は図面に記載した事項の範囲内の訂正であり、特許法第１３４条の２第９項で準用する同法第１２６条第５項に適合するものである。 ウ 実質上特許請求の範囲を拡張し、又は変更するものではないかどうかについての判断 前記アのとおり、訂正事項１は、訂正前の請求項１に記載のイズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）タンパク質の濃度を、「少なくとも５ｍｇ／ｍｌ」から「５ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇ／ｍｌ」に限定するものであり、発明のカテゴリーや対象、目的を変更するものではないから、実質上特許請求の範囲を拡張し、又は変更するものには該当せず、特許法第１３４条の２第９項で準用する同法第１２６条第６項に適合するものである。 （２）訂正事項２について ア 訂正の目的 訂正事項２は、訂正前の請求項３の（ｉ）における「任意に：」との記載を削除することにより、特許請求の範囲を減縮するものであるから、特許法第１３４条の２第１項ただし書き第１号に規定する特許請求の範囲の減縮を目的とするものである イ 新規事項について 前記アのとおり、訂正事項２は、訂正前の請求項３の（ｉ）の「任意に：」との記載を削除することにより、特許請求の範囲を減縮する訂正であるから、願書に添付した明細書、特許請求の範囲又は図面に記載した事項の範囲内の訂正であり、特許法第１３４条の２第９項で準用する同法第１２６条第５項に適合するものである。 ウ 実質上特許請求の範囲を拡張し、又は変更するものでないかどうかの判断について 前記アのとおり、訂正事項２は、訂正前の請求項３の（ｉ）の「任意に：」との記載を削除することにより、特許請求の範囲を減縮する訂正であり、発明のカテゴリーや対象、目的を変更するものではないから、実質上特許請求の範囲を拡張し、又は変更するものには該当せず、特許法第１３４条の２第９項で準用する同法第１２６条第６項に適合するものである。 （３）訂正事項３について ア 訂正の目的 訂正事項３は、訂正前の請求項３の（ｉｉｉ）における「任意に、」との記載を削除することにより、特許請求の範囲を減縮する一方で、かかる訂正後の請求項に存在することとなる、「末梢標的組織への前記Ｉ２Ｓタンパク質の全身的送達をさらに生じさせ、前記末梢標的組織は、肝臓、腎臓および／または心臓から選択される、」との記載を「肝臓、腎臓および心臓から選択される末梢標的組織への前記Ｉ２Ｓタンパク質の全身的送達をさらに生じさせる、」と明瞭にする訂正であるから、特許法第１３４条の２第１項ただし書き第１号又は第３号に規定する特許請求の範囲の減縮又は明瞭でない記載の釈明を目的とするものである。 イ 新規事項について 前記アのとおり、訂正事項３は、訂正前の請求項３の（ｉｉｉ）における「任意に、」との記載を削除することにより、特許請求の範囲を減縮する一方で、請求項の記載を明瞭にする訂正であり、その内容は、【００２４】に記載された事項に対応するものである。そうすると、願書に添付した明細書、特許請求の範囲又は図面に記載した事項の範囲内の訂正であるから、特許法第１３４条の２第９項で準用する同法第１２６条第５項に適合するものである。 ウ 実質上特許請求の範囲を拡張し、又は変更するものでないかどうかの判断について 前記アのとおり、訂正事項３は、特許請求の範囲を減縮する一方で、請求項の記載を明瞭にする訂正であり、発明のカテゴリーや対象、目的を変更するものではないから、実質上特許請求の範囲を拡張し、又は変更するものには該当せず、特許法第１３４条の２第９項で準用する同法第１２６条第６項に適合するものである。 （４）訂正事項４について ア 訂正の目的 訂正事項４は、訂正前の請求項３の（ｖ）の「任意に、前記ＧＡＧ蓄積は、対照と比較して、少なくとも２０％、４０％、５０％、６０％、８０％、９０％、１倍、１．５倍、または２倍まで低減される、」との任意付加的事項を削除する訂正であるから、特許法第１３４条の２第１項ただし書き第１号に規定する特許請求の範囲の減縮を目的とするものである。 イ 新規事項について 前記アのとおり、訂正事項４は、任意付加的事項を削除するもので、願書に添付した明細書、特許請求の範囲又は図面に記載した事項の範囲内の訂正であり、特許法第１３４条の２第９項で準用する同法第１２６条第５項に適合するものである。 ウ 実質上特許請求の範囲を拡張し、又は変更するものでないかどうかの判断について 上記アのとおり訂正事項４は、訂正前の請求項３の（ｖ）の任意付加的事項を削除する訂正であり、発明のカテゴリーや対象、目的を変更するものではないから、実質上特許請求の範囲を拡張し、又は変更するものには該当せず、特許法第１３４条の２第９項で準用する同法第１２６条第６項に適合するものである。 （５）訂正事項５について ア 訂正の目的 訂正事項５は、訂正前の請求項３の（ｖｉ）の「任意に、前記ニューロンがプルキンエ細胞を含む、」との任意付加的事項を削除する訂正であるから、特許法第１３４条の２第１項ただし書き第１号に規定する特許請求の範囲の減縮を目的とするものである。 イ 新規事項について 前記アのとおり、訂正事項５は、任意付加的事項を削除するもので、願書に添付した明細書、特許請求の範囲又は図面に記載した事項の範囲内の訂正であり、特許法第１３４条の２第９項で準用する同法第１２６条第５項に適合するものである。 ウ 実質上特許請求の範囲を拡張し、又は変更するものでないかどうかの判断について 前記アのとおり、訂正事項５は、訂正前の請求項３の（ｖｉ）の任意付加的事項を削除する訂正であり、発明のカテゴリーや対象、目的を変更するものではないから、実質上特許請求の範囲を拡張し、又は変更するものには該当せず、特許法第１３４条の２第９項で準用する同法第１２６条第６項に適合するものである。 （６）訂正事項６について ア 訂正の目的 訂正事項６は、訂正前の請求項４の「任意に： （ｉ）前記Ｉ２Ｓ酵素活性が、対照と比較して、少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍または１０倍まで増加される、および／または、 （ｉｉ）前記Ｉ２Ｓ酵素活性の増加が、少なくとも１０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、２０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、４０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、５０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、６０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、７０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、８０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、９０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、１００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、１５０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、２００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、２５０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、３００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、３５０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、４００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、４５０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、５００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、５５０ｎｍｏｌ／時・ｍｇまたは６００ｎｍｏｌ／時・ｍｇである、あるいは、 （ｉｉｉ）前記Ｉ２Ｓ酵素活性が、腰部で増加され、任意に、前記腰部において増加した前記Ｉ２Ｓ酵素活性は、少なくとも２０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、３０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、４０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、５０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、６０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、７０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、８０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、９０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、または１０，０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇである、」との任意付加的事項を削除する訂正であるから、特許法第１３４条の２第１項ただし書き第１号に規定する特許請求の範囲の減縮を目的とするものである。 イ 新規事項について 前記アのとおり、訂正事項６は、任意付加的事項を削除するもので、願書に添付した明細書、特許請求の範囲又は図面に記載した事項の範囲内の訂正であり、特許法第１３４条の２第９項で準用する第１２６条第５項に適合するものである。 ウ 実質上特許請求の範囲を拡張し、又は変更するものでないかどうかの判断について 前記アのとおり、訂正事項６は、訂正前の請求項４の任意付加的事項を削除する訂正であり、発明のカテゴリーや対象、目的を変更するものではないから、実質上特許請求の範囲を拡張し、又は変更するものには該当せず、特許法第１３４条の２第９項で準用する同法第１２６条第６項に適合するものである。 （７）訂正事項７について ア 訂正の目的 訂正事項７は、訂正前の請求項５の（ｉ）の「任意に、前記静脈内投与は、１か月に１回以下の頻度であるか、または、２ヶ月に１回以下の頻度である、」との任意付加的事項を削除する訂正であるから、特許法第１３４条の２第１項ただし書き第１号に規定する特許請求の範囲の減縮を目的とするものである。 イ 新規事項について 前記アのとおり、訂正事項７は、任意付加的事項を削除する訂正で、願書に添付した明細書、特許請求の範囲又は図面に記載した事項の範囲内の訂正であり、特許法第１３４条の２第９項で準用する同法第１２６条第５項に適合するものである。 ウ 実質上特許請求の範囲を拡張し、又は変更するものでないかどうかの判断について 前記アのとおり、訂正事項７は、訂正前の請求項５の（ｉ）の任意付加的事項を削除する訂正であり、発明のカテゴリーや対象、目的を変更するものではないから、実質上特許請求の範囲を拡張し、又は変更するものには該当せず、特許法第１３４条の２第９項で準用する同法第１２６条第６項に適合するものである。 （８）訂正事項８について ア 訂正の目的 訂正事項８は、特許請求の範囲の請求項７及び本件特許明細書の段落［００１３］の「いくつかの実施形態では、Ｉ２Ｓタンパク質は、およそ１～３００ｍｇ／ｍｌの範囲の濃度（例えば、・・・（略）・・・１～１００ｍｇ／ｍｌ、１～５０ｍｇ／ｍｌ）で存在する。いくつかの実施形態では、Ｉ２Ｓタンパク質は、・・・（略）・・・１０ｍｇ／ｍｌ、・・・（略）・・・１００ｍｇ／ｍｌ、・・・（略）・・・または３００ｍｇ／ｍｌから選択される濃度でまたはその濃度までで存在する。」との記載に基づき、訂正前の請求項６に記載のイズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）タンパク質の濃度を「１０ｍｇ／ｍｌ以上」から「１０ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇ／ｍｌ」に限定するものであるから、特許法第１３４条の２第１項ただし書き第１号に規定する特許請求の範囲の減縮を目的とするものである。 イ 新規事項について 前記アのとおり、訂正事項８は、本件特許明細書中の発明の詳細な説明及び特許請求の範囲に基づいて導き出される構成であるから、願書に添付した明細書、特許請求の範囲又は図面に記載した事項の範囲内の訂正であり、特許法第１３４条の２第９項で準用する同法第１２６条第５項に適合するものである。 ウ 実質上特許請求の範囲を拡張し、又は変更するものでないかどうかの判断について 前記アのとおり、訂正事項８は、訂正前の請求項６に記載のイズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）タンパク質の濃度を、「１０ｍｇ／ｍｌ以上」から「１０ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇ／ｍｌ」に限定するものであり、発明のカテゴリーや対象、目的を変更するものではないから、実質上特許請求の範囲を拡張し、又は変更するものには該当せず、特許法第１３４条の２第９項で準用する同法第１２６条第６項に適合するものである。 （９）訂正事項９について ア 訂正の目的 訂正事項９は、上記訂正事項１及び訂正事項８に伴い、イズロン酸－２－スルファターゼの濃度の上限値を整合させるため、特許請求の範囲の請求項７に記載の「３０ｍｇ／ｍｌ、５０ｍｇ／ｍｌ、１００ｍｇ／ｍｌ、２００ｍｇ／ｍｌ、２５０ｍｇ／ｍｌ、および３００ｍｇ／ｍｌから選択される濃度」との択一的記載の要素の中から、「２００ｍｇ／ｍｌ、２５０ｍｇ／ｍｌ、および３００ｍｇ／ｍｌ」との一部の要素を削除し、「３０ｍｇ／ｍｌ、５０ｍｇ／ｍｌ、および１００ｍｇ／ｍｌから選択される濃度」とするものであるから、特許法第１３４条の２第１項ただし書き第１号に規定する特許請求の範囲の減縮を目的とするものである。 イ 新規事項について 前記アのとおり、訂正事項９は、訂正前の請求項７に記載の択一的記載の一部の要素を削除する訂正で、願書に添付した明細書、特許請求の範囲又は図面に記載した事項の範囲内の訂正であり、特許法第１３４条の２第９項で準用する同法第１２６条第５項に適合するものである。 ウ 実質上特許請求の範囲を拡張し、又は変更するものでないかどうかの判断について 前記アのとおり、訂正事項９は、訂正前の請求項７に記載の択一的記載の一部の要素を削除する訂正であり、発明のカテゴリーや対象、目的を変更するものではないから、実質上特許請求の範囲を拡張し、又は変更するものには該当せず、特許法第１３４条の２第９項で準用する同法第１２６条第６項に適合するものである。 （１０）訂正事項１０について ア 訂正の目的 訂正事項１０は、訂正前の請求項９の「任意に、前記ＮａＣｌは、０～３００ｍＭの範囲の濃度として、任意に、１３７～１５４ｍＭの範囲の濃度で、任意に１５４ｍＭの濃度で存在する、」との任意付加的事項を削除する訂正であるから、特許法第１３４条の２第１項ただし書き第１号に規定する特許請求の範囲の減縮を目的とするものである。 イ 新規事項について 前記アのとおり、訂正事項１０は、訂正前の請求項９の任意付加的事項を削除する訂正で、願書に添付した明細書、特許請求の範囲又は図面に記載した事項の範囲内の訂正であり、特許法第１３４条の２第９項で準用する同法第１２６条第５項に適合するものである。 ウ 実質上特許請求の範囲を拡張し、又は変更するものでないかどうかの判断について 前記アのとおり、訂正事項１０は、訂正前の請求項９の任意付加的事項を削除する訂正であり、発明のカテゴリーや対象、目的を変更するものではないから、実質上特許請求の範囲を拡張し、又は変更するものには該当せず、特許法第１３４条の２第９項で準用する同法第１２６条第６項に適合するものである。 （１１）訂正事項１１について ア 訂正の目的 訂正事項１１は、訂正前の特許請求の範囲の請求項１０に記載の「ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート８０およびこれらの組み合わせからなる群」との択一的記載の要素の中から、ポリソルベート２０以外の要素を削除し、また、該請求項の「任意に、前記ポリソルベート界面活性剤は、ポリソルベート２０であり、かつ、０～０．０２％の範囲の濃度で、任意に、０．００５％の濃度で存在する、」との任意付加的事項を削除する訂正であるから、特許法第１３４条の２第１項ただし書き第１号に規定する特許請求の範囲の減縮を目的とするものである。 イ 新規事項について 前記アのとおり、訂正事項１１は、訂正前の請求項１０に記載の択一的記載の一部の要素及び任意付加的事項を削除する訂正で、願書に添付した明細書、特許請求の範囲又は図面に記載した事項の範囲内の訂正であり、特許法第１３４条の２第９項で準用する同法第１２６条第５項に適合するものである。 ウ 実質上特許請求の範囲を拡張し、又は変更するものでないかどうかの判断について 前記アのとおり、訂正事項１１は、訂正前の請求項１０に記載の択一的記載の一部の要素及び任意付加的事項を削除する訂正であり、発明のカテゴリーや対象、目的を変更するものではないから、実質上特許請求の範囲を拡張し、又は変更するものには該当せず、特許法第１３４条の２第９項で準用する同法第１２６条第６項に適合するものである。 （１２）訂正事項１２について ア 訂正の目的 訂正事項１２は、訂正前の特許請求の範囲の請求項１１に記載の「（ｉ）前記製剤が液体製剤である、または（ｉｉ）前記製剤が凍結乾燥粉末として製剤化される」との択一的記載の要素の中から、「（ｉｉ）前記製剤が凍結乾燥粉末として製剤化される」との要素を削除するものであるから、特許法第１３４条の２第１項ただし書き第１号に規定する特許請求の範囲の減縮を目的とするものである。 イ 新規事項について 前記アのとおり、訂正事項１２は、訂正前の請求項１１に記載の択一的記載の一部の要素を削除する訂正で、願書に添付した明細書、特許請求の範囲又は図面に記載した事項の範囲内の訂正であり、特許法第１３４条の２第９項で準用する同法第１２６条第５項に適合するものである。 ウ 実質上特許請求の範囲を拡張し、又は変更するものでないかどうかの判断について 前記アのとおり、訂正事項１２は、訂正前の請求項１１に記載の択一的記載の一部の要素を削除する訂正であり、発明のカテゴリーや対象、目的を変更するものではないから、実質上特許請求の範囲を拡張し、又は変更するものには該当せず、特許法第１３４条の２第９項で準用する同法第１２６条第６項に適合するものである。 （１３）訂正事項１３について ア 訂正の目的 訂正事項１３は、訂正前の請求項１２の「任意に： （ｉ）前記容器が、アンプル、バイアル、カートリッジ、レザバー、ｌｙｏ－ｊｅｃｔ、または前充填した注射器から選択され、任意に、前記容器は、前充填された注射器であり、かつ、ベイクドシリコーン被覆膜を有するホウケイ酸ガラス注射器、噴霧されたシリコーンを有するホウケイ酸ガラス注射器、またはシリコーンを含有しないプラスチック樹脂注射器から任意に選択される、あるいは （ｉｉ）前記安定製剤が、５．０ｍＬ未満の容量、任意に、３．０ｍＬ未満の容量で存在する、」との任意付加的事項を削除する訂正であるから、特許法第１３４条の２第１項ただし書き第１号に規定する特許請求の範囲の減縮を目的とするものである。 イ 新規事項について 前記アのとおり、訂正事項１３は、訂正前の請求項１２の任意付加的事項を削除する訂正で、願書に添付した明細書、特許請求の範囲又は図面に記載した事項の範囲内の訂正であり、特許法第１３４条の２第９項で準用する同法第１２６条第５項に適合するものである。 ウ 実質上特許請求の範囲を拡張し、又は変更するものでないかどうかの判断について 前記アのとおり、訂正事項１３は、訂正前の請求項１２の任意付加的事項を削除する訂正であり、発明のカテゴリーや対象、目的を変更するものではないから、実質上特許請求の範囲を拡張し、又は変更するものには該当せず、特許法第１３４条の２第９項で準用する同法第１２６条第６項に適合するものである。 （１４）一群の請求項について 請求項１～５、７、８、１１及び１２は、訂正事項１によって記載が訂正される請求項１に連動して訂正されるものである。また、請求項６～１２は、訂正事項８によって記載が訂正される請求項６に連動して訂正されるものである。 したがって、訂正前の請求項１～１２に対応する訂正後の請求項１～１２は、特許法第１３４条の２第３項に規定する一群の請求項である。 ３ 小括 以上のとおり、本件訂正は、適法なものであるから、本件特許の特許請求の範囲を、訂正請求書に添付した訂正特許請求の範囲のとおり、訂正後の請求項１～１２について訂正することを認める。 第３ 本件特許の発明 上記のとおり、本件訂正が認められるから、本件特許の発明は、以下に示す本件訂正特許請求の範囲のとおりのものと認められる（以下、請求項の番号によって、訂正前の請求項を「請求項１」、本件訂正後の請求項を「訂正請求項１」などといい、訂正後の請求項１に記載された発明を「訂正発明１」などという。また、訂正後の発明をまとめて「訂正発明」などということがある。）。 【請求項１】 ハンター症候群を治療するための安定製剤であって、前記製剤は対象に脳室内投与されることを特徴とし、前記安定製剤は、５ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇ／ｍｌの濃度のイズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）タンパク質を含み、かつ、５０ｍＭ以下の濃度のリン酸塩を含み、前記製剤が５．５～７．０のｐＨを有することをさらに特徴とする、安定製剤。 【請求項２】 （ｉ）塩、または、（ｉｉ）ポリソルベート界面活性剤をさらに含む、請求項１に記載の安定製剤。 【請求項３】 請求項１～２のいずれか一項に記載の安定製剤であって、 （ｉ）前記製剤の前記脳室内投与が、標的脳組織への前記Ｉ２Ｓタンパク質の送達を生じさせ、 （ａ）前記脳標的組織が、白質および／または灰白質内のニューロンを含む、かつ／または、 （ｂ）前記Ｉ２Ｓタンパク質が、ニューロン、グリア細胞、血管周囲細胞および／または髄膜細胞に送達される、 （ｉｉ）前記Ｉ２Ｓタンパク質が、脊髄内のニューロンにさらに送達される、 （ｉｉｉ）前記製剤の前記脳室内投与が、肝臓、腎臓および心臓から選択される末梢標的組織への前記Ｉ２Ｓタンパク質の全身的送達をさらに生じさせる、 （ｉｖ）前記製剤の前記脳室内投与が、脳標的組織、脊髄ニューロンおよび／または末梢標的組織内のリソソーム局在化を生じさせる、 （ｖ）前記製剤の前記脳室内投与が、脳標的組織、脊髄ニューロンおよび／または末梢標的組織内のＧＡＧ蓄積を減少させる、ならびに／または、 （ｖｉ）前記製剤の前記脳室内投与が、ニューロンの空胞化を減少させる、 安定製剤。 【請求項４】 請求項１～３のいずれか一項に記載の安定製剤であって、前記製剤の前記脳室内投与が、脳標的組織、脊髄ニューロンおよび／または末梢標的組織内のＩ２Ｓ酵素活性の増加を生じさせる、安定製剤。 【請求項５】 請求項１～４のいずれか一項に記載の安定製剤であって、 （ｉ）前記脳室内投与が、静脈内投与と併せて用いられる、あるいは、 （ｉｉ）前記脳室内投与が、静脈内投与の不在下で用いられる、ならびに／あるいは、 （ｉｉｉ）前記脳室内投与が、２週間に１回、１ヶ月に１回、または、２ヶ月に１回実施される、ならびに／あるいは、 （ｉｖ）前記脳室内投与が、併用の免疫抑制療法の不在下で用いられる、 安定製剤。 【請求項６】 １０ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇ／ｍｌの濃度のイズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）タンパク質と、塩と、ポリソルベート界面活性剤とを含む、脳室内投与のための安定製剤であって、前記製剤は、５．５～７．０のｐＨを有し、かつ、５０ｍＭ以下の濃度のリン酸塩を含む、安定製剤。 【請求項７】 前記Ｉ２Ｓタンパク質が、３０ｍｇ／ｍｌ、５０ｍｇ／ｍｌ、および１００ｍｇ／ｍｌから選択される濃度で、または、その濃度までで存在する、請求項１～６のいずれか一項に記載の安定製剤。 【請求項８】 前記Ｉ２Ｓタンパク質が、配列番号１のアミノ酸配列を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の安定製剤。 【請求項９】 請求項６～８のいずれか一項に記載の安定製剤であって、前記塩がＮａＣｌである、安定製剤。 【請求項１０】 請求項６～９のいずれか一項に記載の安定製剤であって、前記ポリソルベート界面活性剤が、ポリソルベート２０である、安定製剤。 【請求項１１】 請求項１～１０のいずれか一項に記載の安定製剤であって、前記製剤が液体製剤である、安定製剤。 【請求項１２】 請求項１～１１のいずれか一項に記載の安定製剤の単回投与形態を含む容器。 第４ 請求人の主張 請求人は、本件特許の特許請求の範囲の請求項１～１２に記載された発明についての特許を無効とする、請求費用は被請求人の負担とする、との審決を求めた。請求人は、無効理由として、以下の無効理由１～６を主張し、主張を裏付ける証拠として、甲第１～２４号証を提出した（本件特許の登録時の特許請求の範囲に記載された発明を請求項の番号によって、「本件特許発明１」などといい、本件特許の明細書を「本件特許明細書」あるいは、単に「明細書」ともいう。）。 無効理由１（明確性）：本件特許発明１～１２は、特許法第３６条第６項第２号に規定された要件を満たしておらず、本件特許発明１～１２についての特許は、同法第１２３条第１項第４号に該当し、無効とすべきである。 無効理由２（実施可能要件）：本件特許明細書の発明の詳細な説明は、当業者が本件特許発明１～１２を実施することができる程度に明確かつ十分に記載されたものではなく、特許法第３６条第４項１号に規定された要件を満たしていない。したがって、本件特許発明１～１２についての特許は同法第１２３条第１項第４号に該当し、無効とすべきである。 無効理由３（サポート要件）：本件特許明細書の記載および本件特許出願時の技術常識を参酌しても、本件特許発明１～１２の全範囲にわたって、発明の詳細な説明に開示された内容を拡張ないし一般化できるとは言えず、特許法第３６条第６項１号に規定された要件を満たしていない。したがって、本件特許発明１～１２についての特許は、同法第１２３条第１項第４号に該当し、無効とすべきである。 無効理由４（新規性）：本件特許発明１～３、５～７、９及び１１は、甲第２号証に記載された発明であり、特許法第２９条第１項第３号に該当する。したがって、本件特許発明１～３、５～７、９及び１１についての特許は、特許法第１２３条第１項第２号に該当し、無効とすべきである。 無効理由５（進歩性）：本件特許発明１～１２についての特許は、以下のａ．～ｂ．に示す理由で、特許法第２９条第２項の規定に違反してされたものである。したがって、本件特許発明１～１２についての特許は、同許法第１２３条第１項第２号に該当し、無効とすべきである。 ａ．本件特許発明１～１２は、甲第２号証、又は甲第２号証及び甲第３～１０号証に記載された発明に基いて、当業者が容易に発明をすることができたものである。 ｂ．本件特許発明１～１２は、甲第３号証及び甲第２、４～１０号証に記載された発明に基いて、当業者が容易に発明をすることができたものである。 無効理由６（３９条２項）：本件特許発明１は、本件特許出願と同日に出願された出願の特許（甲第１１号証）の請求項１３に係る発明と実質的に同一であり、特許法第３９条第２項に規定された要件を満たしていないから、その特許は同法第１２３条第１項第２号に該当し、無効とすべきである。 甲第１号証：特許第６５２２０７２号公報 甲第２号証：特表第２００９－５２５９６３号公報 甲第３号証：米国特許出願公開第２００５／００４８０４７号公報 甲第４号証：The FASEB Journal, Vol.21, No.10, 2007, pages 2520-2527 甲第５号証：Molecular Genetics and Metabolism, Vol. 99, No. 2, 2010, pages 132-141 甲第６号証：FORMULATIONS FOCUS, Issue No.19, 2010, pages 16-20 甲第７号証：Drug Delivery: Principles and Applications, John Wiley & Sons, Inc., March 11, 2005, pages 321-339 甲第８号証：エラプレース点滴静注液６ｍｇ 医薬品インタビューフォーム（２０１６年７月 改訂第７版、発売年月日：２００７年１０月１７日） 甲第９号証：特表２００９－５３２３９４号公報 甲第１０号証：日本薬局方 生理食塩液「マイラン」添付文書（２０１５年１２月改訂 第１２版 販売名変更、販売開始１９９４年７月） 甲第１１号証：特許第６４６６５３８号公報 甲第１２号証：OndrugDelivery，Issue No#19 May 1st, 2010のウェブサイト：https://www.ondrugdelivery.com/magazines/injectable-drug-delivery-2010-formulations-focus/ のソースコード（２０２１年２月２２日取得） 甲第１３号証：ソク・ヨンテ氏（LINE Plus Corporation社：KSパート所属）の陳述書 甲第１４号証：優先権証明書（US61/358,857：2010年6月25日出願） 甲第１５号証：優先権証明書（US61/360,786：2010年7月1日出願） 甲第１６号証：Journal of Pharmacy & Pharmaceutical Sciences, Vol.6(2), 2003, pages 252-273 甲第１７号証：Recent Patents on Drug Delivery & Formulation, Vol. 3, 2009, pages 71-89 甲第１８号証：本件特許明細書の配列番号1のアミノ酸配列と、甲8に記載されたアミノ酸配列の配列比較表 甲第１９号証：Biochimica et Biophysica Acta, Vol. 1588, 2002, pages 203-209 甲第２０号証：Elliotts B Solutionデータシート改訂１０版（２０１５年） 甲第２１号証：Googleエンジンでのinjectable drug delivery formulationの検索結果のスクリーンショット（出力日２０２１年３月１日） 甲第２２号証：Guidance for Industry: Estimating the Maximum Safe Starting Dose in Initial Clinical Trials for Therapeutics in Adult Healthy Volunteers （２００５年７月） 甲第２３号証：「ONdrugDelivery」のウェブサイト(www.ondrugdelivery.com）のInternet Archive Wayback Machine上の2011年3月17日付データベースのスクリーンショット（出力日２０２１年５月１８日） 甲第２４号証：ウェブサイトClinical Trail Govの臨床試験NCT00920647の情報（２００９年６月１５日掲載） 第５ 被請求人の主張 被請求人は、本件審判請求は成り立たない。審判費用は請求人の負担とする、との審決を求め、上記請求人の主張する無効理由は、いずれも理由がないと主張し、主張を裏付ける証拠として、乙第１～２５号証を提出した。 乙第１号証：Ann Barbierの132宣誓書（２０１３年７月１６日） 乙第２号証：Sigma Sodium Citrate Product Sheet（２００３年９月） 乙第３号証：Meikle PJ et al., Prevalence of Lysosomal Storage Disorders. JAMA. 1999;281(3):249-254 乙第４号証：Pardridge et al., Fluids and Barriers of the CNS 2011 8:7 乙第５号証：Kakkis et al., Molecular Genetics and Metabolism, 2004, 83:163-174 乙第６号証：Cook, A.M. et al., The Journal of Human Pharmacology and Drug Therapy, 2009, 29: 832-845 乙第７号証：Shire et al., JOURNAL OF PHARMACEUTICAL SCIENCES, 2004, VOL.93, NO.6, 1390-1402 乙第８号証：Wang, W. and C. J. Roberts, eds. Aggregation of Therapeutic Proteins. Hoboken, NJ: John Wiley & Sons, 2010 乙第９号証：Maggio, J Exc. Food Chem, 2010, 1(2): 40-49 乙第１０号証：Won et al., International Journal of Pharmaceutics,1998, 167, 25-36 乙第１１号証：Calias P. et al., PLoS One, 2012, Volume 7, Issue 1, e30341 乙第１２号証：Guy Furness Statement（２０１４年７月） 乙第１３号証：国際公開２００７／０８４７３７号公報 乙第１４号証：Kakkis et al., Molecular Genetics and Metabolism, 2004, 83:163-174 乙第１５号証：Tim Tregubov教授の宣誓書（２０２１年３月２４日） 乙第１６号証：Tim Tregubov教授の宣誓書（乙第１７号証）のAPPENDIX Bの抄訳文 乙第１７号証：Tim Tregubov教授の宣誓書（乙第１７号証）のAPPENDIX Cの全文訳 乙第１８号証：Tim Tregubov教授の宣誓書（乙第１７号証）のAPPENDIX Dの全文訳 乙第１９号証：Tim Tregubov教授の宣誓書（乙第１７号証）のAPPENDIX Gの抄訳文 乙第２０号証：ウェブサイトhttps://jquery.org/history/（出力日２０２１年４月２１日） 乙第２１号証：ウェブサイトhttps://codex.wordpress.org/WordPress_Versions（出力日２０２１年４月２１日） 乙第２２号証：甲第６号証のＰＤＦファイルのプロパティ（出力日２０２１年４月２１日） 乙第２３号証：優先権証明書：ＵＳ６１／３６０，７８６（２０１０年７月１日出願） 乙第２４号証：Kakkis et al., Molecular Genetics and Metabolism, 2004, 83:163-174 乙第２５号証：Shire et al.,JOURNAL OF PHARMACEUTICAL SCIENCES, 2004, VOL.93, NO. 6, 1390-1402 第６ 証拠の記載 両当事者の提出した証拠には以下の記載がある。（以下、証拠について、甲号証及び乙号証の番号によって、「甲１」「乙１」などと言う。） １ 甲号証の記載 （１）甲１の記載 （甲１ア） 【０００３】 酵素補充療法（ＥＲＴ）は、対象への天然または組換え的に得られるタンパク質および／または酵素の全身投与を伴う。認可療法は、典型的には、対象に静脈内投与され、一般的には、根元的酵素欠乏の身体症候を処置するのに有効である。中枢神経系（ＣＮＳ）の細胞および組織中への静脈内投与タンパク質および／または酵素の限定的分布の結果として、静脈内投与タンパク質および／または酵素は血液－脳関門（ＢＢＢ）を適切に横断しないため、ＣＮＳ病因を有する疾患の処置は特に挑戦的であった。 ・・・ 【０００９】 したがって、脳に治療薬を有効に送達する必要性が依然として大いに存在する。更に特定的には、リソソーム蓄積障害の処置のために中枢神経系に活性作用物質をより有効に送達することが大いに必要とされている。 【課題を解決するための手段】 【００１０】 本発明は、中枢神経系（ＣＮＳ）への治療薬の直接送達のための有効且つ低侵襲性のアプローチを提供する。本発明は、一部は、酵素が種々の表面を横断して有効に且つ広範に拡散して、深部脳領域を含めて脳を横断する種々の領域に浸透するよう、リソソーム蓄積症のための補充酵素（例えば、イズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ））が高濃度（例えば、約３ｍｇ／ｍｇ以上、４ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ以上）での治療を必要とする対象の脳脊髄液（ＣＳＦ）中に直接的に導入され得る、という予期せぬ発見に基づいている。更に意外なことに、単なる生理食塩水または緩衝液ベースの製剤を用いて、そして対象において実質的副作用、例えば重篤な免疫応答を誘導することなく、このような高タンパク質濃度送達が達成され得る、ということを本発明人等は実証した。したがって、本発明は、ＣＮＳ構成成分を有する種々の疾患および障害、特にリソソーム蓄積症の治療のための直接ＣＮＳ送達のための非常に効率的な、臨床的に望ましい、且つ患者に優しいアプローチを提供する。本発明は、ＣＮＳターゲッティングおよび酵素補充療法の分野における有意の進歩を示す。 【００１１】 以下に詳細に説明されるように、本発明者は、イズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）タンパク質の有効な髄腔内腔内（ＩＴ）投与のための安定製剤を成功裏に開発した。しかしながら、本明細書に記載される様々な安定製剤は、種々の他のリソソーム酵素を含める治療薬のＣＮＳ送達のために概ね好適であることが考えられる。事実、本発明による安定製剤は、限定されるものではないが、実質内投与、脳内投与、脳室内（ＩＣＶ）投与、髄腔内腔内（例えば、ＩＴ－腰椎、ＩＴ－大槽）投与およびＣＮＳおよび／またはＣＳＦへの直接的または間接的な注入のための任意の他の技術および経路が挙げられる種々の技術および経路を介してＣＮＳ送達のために用いられ得る。 （甲１イ） 【００７４】 典型的には、ヒトＩ２Ｓは、前駆体形として生成される。ヒトＩ２Ｓの前駆体形は、シグナルペプチド（完全長前駆体のアミノ酸残基１～２５）と、プロペプチド（完全長前駆体のアミノ酸残基２６～３３）と、４２ｋＤａ鎖（完全長前駆体の残基３４～４５５）および１４ｋＤａ鎖（完全長前駆体の残基４４６～５５０）へと更に処理され得る鎖（完全長前駆体の残基３４～５５０）とを含有する。典型的には、この前駆体形は、完全長前駆体または完全長Ｉ２Ｓタンパク質とも呼ばれ、これは５５０個のアミノ酸を含有する。ヒトＩ２Ｓタンパク質の典型的野生型または天然型の、除去されたシグナルペプチドおよび完全長前駆体（配列番号２）を有する成熟型のアミノ酸配列（配列番号１）が表１に示されている。 ・・・ ［図：0001399781000001.jpg］ 【００９１】 本発明の前に、伝統的非緩衝化等張生理食塩水およびエリオットのＢ溶液（人工ＣＳＦ）が、典型的には髄腔内腔内送達のために用いられた。エリオットのＢ溶液に対するＣＳＦの組成を表す比較は、以下の表３に含まれている。表３に示されているように、エリオットＢ溶液の濃度は、ＣＳＦの濃度と密接に類似している。しかしながら、エリオットのＢ溶液は、極度に低い緩衝剤濃度を含有し、したがって、特に長期間に亘って（例えば、貯蔵状態の間）、治療薬（例えばタンパク質）を安定化するために必要とされる適切な緩衝能力を提供し得ない。更に、エリオットのＢ溶液は、いくつかの治療薬、特にタンパク質または酵素を送達するよう意図された製剤と非相溶性であり得るある種の塩を含有する。例えば、エリオットのＢ溶液中に存在するカルシム塩は、タンパク質沈降を媒介し、それにより製剤の安定性を低減し得る。 ［図：0001399781000002.jpg］ 【００９２】 したがって、いくつかの実施形態では、本発明による髄腔内腔内送達に適した製剤は、合成または人工ＣＳＦではない。 ・・・ 【００９８】 多数の治療薬、特に本発明のタンパク質および酵素は、本発明の薬学的組成物中でそれらの溶解性および安定性を保持するために、制御されたｐＨおよび特定の賦形剤を要する。以下の表４は、本発明のタンパク質治療薬の溶解性および安定性を保持するために重要であるとみなされるタンパク質製剤の典型的例示的態様を特定する。 （甲１ウ） 【０１２３】 ＣＮＳ送達 【０１２４】 本明細書で記載された種々の安定な製剤は、治療薬剤のＣＮＳ送達に概ね好適であると考えられる。本発明による安定製剤は、限定されるものではないが、実質内投与、脳内投与、脳室内（ＩＣＶ）投与、髄腔内腔内（例えば、ＩＴ－腰椎、ＩＴ－大槽）投与が挙げられる種々の技術および経路を介して、ならびにＣＮＳおよび／またはＣＳＦに直接的または間接的に注入するための任意の他の技術および経路を介してＣＮＳ送達のために用いられ得る。 【０１２５】 いくつかの実施形態では、補充酵素は、本明細書に記載された製剤中でＣＮＳに送達される。いくつかの実施形態では、補充酵素は、治療を必要とする被験者の脳脊髄液（ＣＳＦ）中に投与することによって、ＣＮＳに送達される。いくつかの実施形態では、髄腔内腔内投与は、所望の補充酵素（例えば、Ｉ２Ｓタンパク質）をＣＳＦ中に送達するために用いられる。本明細書で使用するとき、髄腔内腔内投与（髄腔内腔内注射とも呼ばれる）とは、脊椎管（脊髄を囲む髄腔内腔内空隙）への注射を指す。限定されないが、穿頭孔若しくは大槽穿刺または腰椎穿刺などを経ての外側脳室注射が挙げられる種々の技術が用いられてもよい。・・・ 【０１２６】 本発明によると、酵素は、脊髄周辺の任意の領域で注入され得る。いくつかの実施形態では、酵素は、腰部または大槽に注入されるか、または脳室空間に脳室内注入される。本明細書で使用するとき、用語「腰部」または「腰部領域」とは、第３と第４腰椎（背下部）との間の領域を指し、より包括的には、脊椎のＬ２－Ｓ１領域を指す。典型的には、腰部または腰部領域を介しての髄腔内注入もまた、「腰椎ＩＴ送達」または「腰椎ＩＴ投与」と呼ばれる。用語「大槽」とは、頭蓋骨と脊椎の先端部分との間の開口部を介する小脳周囲および下部の空間を指す。典型的には、大槽を介しての髄腔内腔内注射はまた、「大槽送達」とも呼ばれる。用語「脳室」とは、脊髄中心管と連続的である脳内の空隙を指す。典型的には、脳室空隙を介しての注入は、脳室内（ＩＣＶ）送達と呼ばれる。 （甲１エ） 【０１６４】 いくつかの実施形態では、本発明の方法および組成物は、リソソーム蓄積障害の神経学的および体細胞性後遺症または症候群の両方を処置するために有用である。例えば、本発明のいくつかの実施形態は、ＣＮＳまたは神経学的後遺症ならびにリソソーム蓄積症の症状発現の処置のために、対象のＣＮＳに１つ以上の治療薬を送達する（例えば、髄腔内腔内、静脈内または槽内に）組成物および方法に関するが、一方、そのリソソーム蓄積症の全身性または体細胞性症状発現も処置するためでもある。例えば、本発明のいくつかの組成物は、対象に髄腔内腔内投与され、それにより、対象のＣＮＳに１つ以上の治療薬を送達して、神経学的後遺症を処置し、それと対になって、全身循環の細胞および組織（例えば、心臓、肺、肝臓、腎臓またははリンパ節の細胞および組織）の両方にこのような治療薬を送達するために１つ以上の治療薬を静脈内投与し、それにより体細胞性後遺症を処置する。例えば、リソソーム蓄積症（例えばハンター症候群）を有するか、そうでなければ影響を及ぼされる対象は、１つ以上の治療薬（例えば、イズロン酸－２－スルファターゼ）を含む薬学的組成物を、神経学的後遺症を処置するために、少なくとも週１回、２週間に１回、月１回、２ヶ月に１回またはそれ以上、髄腔内腔内投与され得るが、一方、異なる治療薬は、当該疾患の全身性または体細胞性症状発現を処置するために、より高頻度ベースで（例えば、１日１回、隔日に１回、週３回または週１回）、対象に静脈内投与され得る。 【０１６５】 ハンター症候群、またはムコ多糖症ＩＩ（ＭＰＳ ＩＩ）は、酵素イズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）の不全に起因するＸ連鎖遺伝性代謝異常である。Ｉ２Ｓは、リソソームに局在化し、グリコサミノグリカン（ＧＡＧｓ）へパリン－および硫酸ダルマタンの異化作用で重要な役割を果たす。酵素の不在下では、これら物質が細胞内に蓄積し、最終的には充血を引き起こし、細胞死および組織破壊に続く。酵素の広範囲な発現のために、ＭＰＳ ＩＩ患者では、複数の細胞型および器官系が冒される。 ・・・ 【０１６７】 本発明の組成物および方法は、ハンター症候群に冒されたまたは罹患し易い個体を効果的に治療するために用いられ得る。本明細書で使用されるような用語「治療する」または「治療」は、疾患に関連する１つ以上の症状の軽減、疾患の１つ以上の症状の発症の抑制または遅延、および／または疾患の１つ以上の症状の重症度または頻度の緩和を指す。 （甲１オ） 【０１９４】 実施例１：生体分布 本試験の主な目的は、髄腔内腔内－腰椎経路によって、組換え体ヒトＩ２Ｓが成体ＭＰＳ ＩＩマウスの脳に送達されることができるかどうかを判定することである。 ［図：0001399781000003.jpg］ 材料および方法 ・・・ イズルスルファーゼ 【０１９６】 ２２ｍＬのＩ２Ｓ（組換え体ヒトイズルスルファーゼ）を、２Ｌのリン酸塩緩衝生理食塩水の４つの変化に対して透析した。次いでＩ２Ｓを、Ｖｉｖａｓｐｉｎカラムによって濃縮し、最終容積１ｍＬのＰＢＳ中に再懸濁し、続いて０．２μｍのフィルターを用いて濾過滅菌した。最終濃度は、５１ｍｇ／ｍＬであった。 ・・・ 結果 【０２０６】 脳においては、免疫組織化学（ＩＨＣ）染色で判定されたように、Ｉ２Ｓはビヒクル対照動物で認められなかった。対照的に、Ｉ２Ｓ注入動物においては、髄膜細胞、大脳および小脳のニューロンは、Ｉ２Ｓについて陽性に染色された。染色シグナルは、３用量投与された動物でより強かった（図１）。 【０２０７】 ビヒクル処置ＩＫＯマウスの脳組織では、細胞空胞化、すなわちリソソーム蓄積疾患の組織病理学的特徴が、野生型動物と比較して脳全体で認められた。Ｉ２Ｓ処置ＩＫＯマウスでは、未処置マウスと比較して、表面大脳皮質、尾状核、視床、小脳から白質までの細胞空胞化の広範囲の減少が存在した（図２）。野生型動物と比較した場合、異常に高いリソソーム活性が、リソソーム活性および疾患状態の指標であるリソソーム結合膜タンパク質－１（ＬＡＭＰ－１）染色によって、ビヒクル処置ＩＫＯマウスの小グリア細胞、髄膜細胞および血管周囲細胞で認められた。Ｉ２Ｓ髄腔内腔内処置マウスは、ＬＡＭＰ－１免疫染色で著しい減少を有した。この減少は、ＬＡＭＰ－１陽性細胞の数およびより明るい染色での低下によって特徴付けられる。この減少は、Ｉ２Ｓの２用量および３用量処置動物の双方で、表面大脳皮質、尾状核、視床、小脳から白質に至る脳全体で認められた（図３）。種々の脳領域のＬＡＭＰ－１免疫染色の形態計測学的分析は、評価された脳の全ての領域でＬＡＭＰ－１免疫染色陽性染色における著しい減少があることを確認した（図４）。 【０２０８】 ビヒクル処置ＩＫＯマウスの電子顕微鏡観察は、アモルファスな顆粒蓄積物質を含有する腫大した空胞および板状でゼブラ小体様構造を有する封入体を明らかにした。超微細構造レベルでのリソソーム蓄積のこれら典型的な病理特徴は、Ｉ２Ｓの髄腔内腔内－腰椎注射マウスでは、減少された（図５）。 【０２０９】 肝臓では、ビヒクル処置動物においては、Ｉ２Ｓの陽性染色はなかった。Ｉ２Ｓ髄腔内腔内注射マウスにおいては、大量の注射されたＩ２Ｓのが、シヌソイド細胞で明確に見出され（図６）、これは髄腔内腔内空隙に注射されたＩ２Ｓが、ＣＳＦと共に循環し、次いでクモ膜顆粒を経て循環系に吸収されたことを示している。 【０２１０】 ビヒクル処置ＩＫＯマウスの肝臓組織では、Ｈ＆Ｅ染色によって立証された重症の細胞空胞化および異常に高いリソソーム活性ならびに強いＬＡＭＰ－１免疫染色が、ＷＴマウスと比較して確認された。肝臓における細胞内空胞化およびＬＡＭＰ－１免疫染色の著しい減少が、Ｉ２Ｓでの髄腔内処置後に確認された。Ｈ＆Ｅ染色は、細胞質内空胞化は、正常な肝臓細胞構造に近い状態で、ほぼ完全に消失した（図７）。 【０２１１】 ＩＫＯマウスでは、髄腔内腔内－腰椎経路によって組換え体ヒトＩ２Ｓが脳に送達され、注射されたＩ２Ｓは、脳の種々の領域において広範囲の組織病理学的改善を生じさせる。 ・注射されたＩ２Ｓは、髄膜細胞および脳のニューロンで検出された。 ・光学顕微鏡および電子顕微鏡レベルの双方での脳全体の細胞空胞化の減少。 ・脳全体のＬＡＭＰ－１リソソームマーカーの減少。 ・髄腔内腔内注射されたＩ２Ｓは、末梢循環に入り、肝臓の形態学的および組織学的マーカーを改善した。 実施例２：毒性 【０２１２】 本実施例は、カニクイザルにおける月単位のボーラス髄腔内腔内腰椎投与を介するイズルスルファーゼに関連する臨床的徴候を示す。これを達成するために、以下の表に示されるように、１４匹の雄カニクイザルを５種の処置群に無作為割付した。 ［図：0001399781000004.jpg］ 【０２１３】 全ての群の動物は、腰部脊椎のレベルで月単位のインターバルでＩＴにて３回投与された。・・・ ・・・ 【０２１６】 結論として、月単位の間隔での１５０ｍｇまでの用量でのイズルスルファーゼのＩＴ投与は、副作用を有さなかった。したがって、無影響量（ＮＯＡＥＬ）は１５０ｍｇであると解釈され、これは本試験でテストされた最高投与量である。イズルスルファーゼ投与は、ＣＮＳにおけるイズルスルファーゼ活性の用量依存型増加に関連し、全身のＩ２Ｓレベルならびに肝臓、腎臓、および心臓における活性をもたらした。 ・・・ 【０２２７】 脳イズルスルファーゼ染色は、１５０ｍｇの群で確認された最高の染色強度で、３ｍｇ群の１匹の動物を除けば、全ての処置動物で陽性であった（図１６、１７、１８および１９）。３ｍｇ群では、髄膜細胞および髄膜細胞の下の数個のグリア細胞のみが陽性であり、注射されたイズルスルファーゼは、ニューロンでは検出されなかった。より高い用量群（３０、１００および１５０ｍｇ）では、髄膜細胞、グリア細胞および血管周囲細胞に加えて、脳内ニューロンの大規模な集団がイズルスルファーゼ染色について陽性であった。イズルスルファーゼ免疫染色は、髄膜近くの表面での層Ｉ内のニューロンから白質に隣接したより深い層ＩＶ内のニューロンに至る脳内ニューロンにおいて、注射されたイズルスルファーゼの広範囲な分布を明らかにした（図２０、２１および２２）。ニューロンの顕著な染色はまた、１５０ｍｇ投与群についても観察された（図２３）。全ての動物（３０～１５０ｍｇの投与群）では、ニューロンのイズルスルファーゼ染色で顕著な違いは、脳の前頭部、中頭部、および後頭部の間では認められなかった。 【０２２８】 イズルスルファーゼ染色は、腰部で最高の染色強度を伴い、全ての動物の脊髄において陽性であった（図２４および２５）。イズルスルファーゼ免疫染色もまた、用量依存型であった。ニューロン、髄膜細胞、グリア細胞、血管周囲細胞および神経線維を取り囲むエピ／ペリ／神経内膜（結合細胞）は、１５０ｍｇ群ではイズルスルファーゼ染色について強く陽性であった。 【０２２９】 肝臓では、イズルスルファーゼについての陽性染色は、全ての動物のシヌソイド細胞（Ｋｕｐｆｆｅｒ細胞および内皮細胞）で認められた。しかしながら、イズルスルファーゼは３ｍｇ処置群については肝細胞内で検出されず（図２８）、一方肝細胞における陽性イズルスルファーゼ染色は、１５０ｍｇ処置群での最大の染色強度を伴い、より高い投与群で見出された（図２９、３０および３１）。 【０２３０】 ３ｍｇ処置群からの動物では、イズルスルファーゼについて陽性染色は存在しなかった。これとは対照的に、間細胞は、陽性細胞数および染色強度に関して、１５０ｍｇ群で著しい染色を伴い、３０、１００および１５０ｍｇ群においてイズルスルファーゼについて陽性に染色された（図３３、３４および３５）。 腎臓 【０２３１】 注射されたイズルスルファーゼは、３ｍｇ投与群からの動物では、ほとんどまたは全く検出されなかった（図３６）。しかしながら、陽性イズルスルファーゼ染色が、３０および１００ｍｇ群において糸球体細胞および間細胞で認められた。１５０ｍｇ群では、イズルスルファーゼ免疫染色は、糸球体細胞および肝細胞の顕著な染色に加えて、近位細管細胞のイズルスルファーゼ染色を更に明白にした（図３９）。 考察 【０２３２】 体重、餌消費、理学的検査所見および神経学的検査所見に及ぼす供試物質に関連する臨床的徴候または影響はなかった。・・・ 【０２３３】 イズルスルファーゼ投与は、種々の脳領域、ならびに脳幹および脊髄におけるイズルスルファーゼ活性での用量依存型増加に関連した。脊髄内の染色強度の最高レベルは、腰部であり、ここはイズルスルファーゼのＩＴ投与が生じた場所である。イズルスルファーゼＩＴ投与はまた、肝臓、腎臓、および心臓における用量依存型染色強度で全身的曝露をもたらした。・・・ 【０２３４】 毎月の間隔で送達される１５０ｍｇまでの用量でのイズルスルファーゼのＩＴ投与は、副作用を有さなかった。したがって、無影響量（ＮＯＡＥＬ）は、本実施例で最高投与量である１５０ｍｇであると解釈された。イズルスルファーゼ投与は、ＣＮＳにおけるイズルスルファーゼの用量依存型増加に関連し、肝臓、腎臓、および心臓において全身的レベルをもたらした。 （甲１カ） 【０２４５】 ・・・ 実施例４：製剤 【０２４６】 本実施例は、第Ｉ／ＩＩ相臨床試験のためのイズルスルファーゼ－ＩＴ薬剤物質の製剤および医薬品製剤を確立するために実施された製剤開発試験を概説する。 【０２４７】 ＣＮＳ送達用に好適な賦形剤の制限のために、イズルスルファーゼの髄腔内腔内送達についての製剤開発のための取り組みは、全身的送達のためのＩ２Ｓ製剤と等価な安定性も維持すると同時に、リン酸塩およびポリソルベート２０レベルを低減することに焦点が当てられた。 【０２４８】 リン酸塩およびポリソルベートレベルの影響を検討するために、３種の重要なスクリーニングストレス試験が行われた。これら試験とは、凍結融解、振盪ストレス、および熱ストレスが挙げられる。この結果は、生理食塩水製剤が、低タンパク質濃度（２ｍｇ／ｍＬ）で凍結融解ストレスに対してより安定であることを示した。高タンパク質濃度（１００ｍｇ／ｍＬ）では、凍結融解ストレスは、生理食塩水含有製剤およびリン酸塩含有製剤の双方で不安定性の問題は発生しなかった。振盪ストレス試験は、０．００５％ポリソルベート２０が振盪関連ストレスに対してタンパク質を保護することを確認した。熱安定性試験は、生理食塩水製剤がリン酸塩を含有する製剤に比べてより安定であることを立証した。更に、生理食塩水製剤のｐＨは、２～８℃で２４カ月間、６．０で維持されることができた。タンパク質に結合された残留リン酸塩の量、ならびにタンパク質濃度の増加が、最終製剤におけるｐＨ安定性に関与することが認められた。 ・・・ ｐＨ 【０２７１】 表２０は、全ての製剤のｐＨが、２～８℃で２４ヶ月間、ベースラインに匹敵するｐＨのままでいたことを示している。生理食塩水製剤については、緩衝液が存在しないが、ｐＨは、２４ヶ月間、６．０で一定に維持された。 ・・・ 酵素活性 【０２７２】 参照標準と比較すると、２～８℃で２４ヶ月後に、全ての製剤についての比活性は、アッセイ間の偏差内で同等であり、これは、イズルスルファーゼが、２４ヶ月間、生理食塩水製剤中で安定のままでとどまることを示唆している（表２１）。 ［図：0001399781000005.jpg］ 【０２７３】 生理食塩水製剤の調製における最終的ＵＦ／ＤＦ工程は、１３７ｍＭのＮａＣｌ、２０ｍＭリン酸ナトリウムからのタンパク質を１５０ｍＭのＮａＣｌへと透析濾過するために用いられた。透析濾過サイクル数が最終生成物中の残留リン酸塩濃度にどのように影響を及ぼすかを検討するために、研究室スケールでの試験が、製剤原料（２ｍｇ／ｍＬのイズルスルファーゼ、１３７ｍＭのＮａＣｌ、２０ｍＭのリン酸ナトリウム、ｐＨ６．０）を用いて行われた。製剤原料を先ず初めに、５０ｍｇ／ｍＬのイズルスルファーゼに濃縮し、次いで１５０ｍＭの生理食塩水中に透析濾過した。サンプルを、７Ｘ、１０Ｘ、および１５Ｘ透析濾過工程で採取し、リン酸塩含量についてＩＣＰによって試験した。試験結果は、表２２に概説されている。示されるように、生理食塩水透析濾過溶液は、いずれのリン酸塩も含有しない。７ＸＤＦ後に、タンパク質は約０．２２ｍＭのリン酸塩を含有し、これは、理論的に計算された値よりも高かった。１０ＸＤＦ後に、通過液が約０．０７ｍＭのリン酸塩であったが、タンパク質保持物質は約０．１６ｍＭのリン酸塩を含有し、このことは、リン酸塩がタンパク質に結合していることを示唆した。１５ＸＤＦ後には、リン酸塩レベルは約０．０７ｍＭに下降した。 【０２７４】 この試験からの結果は、約０．２ｍＭのリン酸塩残基が、製剤原料中に残留していることを示し、これは、生理食塩水製剤が６．０のｐＨを維持していることに寄与していると思われる。 【表２２】 ［図：0001399781000006.jpg］ 製剤ｐＨの維持に及ぼすタンパク質濃度の影響 【０２７５】 リン酸塩含量分析から、タンパク質へのリン酸塩の結合が明白となった。したがって、高濃度のタンパク質がより多くのリン酸塩に結合し得ることが予期され、このことがｐＨをより良好に維持する可能性がある。この仮説を検討するために、生理食塩水溶液中のタンパク質を異なるレベルに濃縮し、異なる処理条件後の溶液のｐＨをテストした。この結果が、表２３に概説されている。 【０２７６】 表示されるように、溶液の最初のｐＨが、タンパク質濃度に依存して約６．０に維持された。しかし、周囲温度に２４時間露出後または３回の凍結融解サイクル後に、０．１ｍｇ／ｍＬまたはそれ未満のタンパク質を含有する溶液のｐＨは、６．０周辺で一定のｐＨを維持しなかった。１ｍｇ／ｍＬまたはそれ以上のタンパク質濃度では、溶液のｐＨは、６．０周辺で維持された。このことは、タンパク質濃度が、生理食塩水溶液のｐＨを維持する上での制御因子であることを確証した。 ［図：0001399781000007.jpg］ 【０２７７】 この試験からの結果は、生理食塩水製剤（５０ｍｇ／ｍＬのイズルスルファーゼ、０．００５％のポリソルベート、１５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ６．０）中のイズルスルファーゼが、２～８℃で保存される場合、少なくとも２４ヶ月安定であることを立証した。この製剤は、リン酸塩含有製剤に比べてより安定であると思われる。０．００５％のポリソルベート２０の選択は、タンパク質を振盪ストレスに対して保護するために十分であった。更に、この試験は、生理食塩水製剤のｐＨが、２～８℃で２４ヶ月間、６．０で安定に維持され得ることも示し、これは最終製剤における残留リン酸塩および高タンパク質濃度に部分的に起因するものである。 （甲１キ） 実施例５：生体分布 【０２７８】 髄腔内腔内投与がＣＮＳの組織へのＩ２Ｓを送達する有効な方法であることが成功裏に立証されたので、ＩＴ投与されたＩ２Ｓが脳の深部組織への分布が可能であるかどうか、ならびにＩＴ投与されたＩ２Ｓの細胞局在化があるかどうかを決定するために、追加的試験が行われた。組換え体ヒトイズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）製剤を、６．０のｐＨで、１５４ｍＭのＮａＣｌ、０．００５％のポリソルベート２０のビヒクル中で調製かつ製剤化した。 【０２７９】 非ヒト霊長類に、Ｉ２Ｓの３ｍｇ、３０ｍｇ、または１００ｍｇのいずれかを月単位で、移植した髄腔内腔内ポートによって、６ヶ月間継続して投与した。・・・ 【０２８０】 ６ヶ月間の非ヒト霊長類へのＩ２Ｓの繰り返し毎月投与は、テストされた最高用量で良好に忍容され、いずれの重大な有害毒性学的事象に関連しなかった。Ｉ２Ｓの第６回目および最終用量の投与後２４時間に、対象の非ヒト霊長類を致死させて、このようなヒト以外の霊長類のＣＮＳ組織を検査した。 【０２８１】 免疫組織化学法（ＩＨＣ）によって判定されたように、ＣＮＳの細胞および組織全体にＩ２Ｓの広範な細胞堆積があった。Ｉ２Ｓタンパク質は、大脳皮質から脳室白質までの堆積勾配を伴い、ＩＨＣによって脳の全ての組織で検出された。灰白質では、Ｉ２Ｓは、全ての群において、用量依存型の様式で、大脳、小脳、脳幹、および脊髄のニューロンで検出された。高投与量群の表面灰白質では、大多数の脳ニューロンが、表面皮質でのＩ２Ｓ染色について陽性であった（図４０Ａ）。Ｉ２Ｓは、視床（図４０Ｂ）、海馬（図４０Ｃ）、尾状核（図４０Ｄ）および脊髄（図４０Ｅ）内のニューロンでも検出された。髄膜細胞および血管周囲細胞もまた、Ｉ２Ｓ染色について陽性であった（図４０Ｆ）。 【０２８２】 図４１および４２に示されるように、対象の非ヒト霊長類のＣＮＳの組織への、特に灰白質、視床および大脳皮質へのＩＴ投与されたＩ２Ｓの分布が認められる。更には、図４２および４３は、ＩＴ投与されたＩ２Ｓが、用量依存型様式で、被験者のヒト以外の霊長類の示されたＣＮＳ組織で蓄積することを図示している。共局在化染色はまた、Ｉ２ＳのＩＴ投与が、ニューロンおよび希突起グリア細胞の双方と結合することを明らかにした。ＩＴ投与されたＩ２Ｓはまた、図４４によって実証されたように、対象のヒト以外の霊長類の大脳全体に分布かつ局在化する。特に、図４５は、フィラメント染色によって示されたように、対象の非ヒト霊長類へのＩＴ投与後のＩ２Ｓのニューロンによる取り込みおよび軸索結合を図示している。また特に興味深いのは、本試験はＩ２Ｓがニューロン細胞に対して選択的であることを示していることであり、このようなニューロン細胞は、脳の深部組織への髄腔内腔内投与されたＩ２Ｓの分布を促進し、軸索構造と結合するように見え、これはＩ２Ｓの順行性軸索輸送を示唆している。 ・・・ 【０２８４】 以下の表２６に示されるように、１２４Ｉ標識化Ｉ２Ｓを試験動物に投与し、ＰＥＴスキャン結果が図６２、図６３に示されている。 ［図：0001399781000008.jpg］ 【０２８５】 本試験はまた、ＩＴ投与後の対象の非ヒト霊長類の脳室近くの白質脳組織におけるＩＴ投与されたＩ２Ｓの細胞特定も立証した。白質内のＩ２Ｓ染色密度は、灰白質よりも概ね低いが、Ｉ２Ｓは希突起グリア細胞内で検出された（図４６）。特に、図４６は、白質脳組織におけるＩ２Ｓの細胞特定を示していて、Ｉ２Ｓがミエリンと結合するようには見えないことを更に立証している。 【０２８６】 ＩＴ投与されたＩ２Ｓの脳組織の深部への分布を立証したことに加えて、本試験はまた、標的の細胞内小器官へのＩ２Ｓの局在化、重要なことは、ハンター症候群などのリソソーム蓄積疾患において影響を受ける細胞内小器官であるリソソームへのＩ２Ｓの局在化を確認したことである。特に、Ｉ２Ｓは、リソソーム内に局在化され、軸索内でも検出された。図４６は、対象の非ヒト霊長類の希突起グリア細胞のリソソーム内のＩＴ投与されたＩ２Ｓの局在化を示していて、したがって、ＩＴ投与されたＩ２Ｓは、脳の組織の深部に分布することが可能であり、ならびに細胞内局在化が可能であることを確認した。 【０２８７】 送達されたＩ２Ｓが生物学的活性を保持しているかどうかを明らかにするために、脳におけるＩ２Ｓのレベルを、比活性アッセイを用いて測定した。最後の投与後２４時間の３ｍｇのＩＴ群の脳における活性は、装置対照およびビヒクル対照動物での基底レベルと明らかな差はなかった。３０ｍｇおよび１００ｍｇのＩＴ投与動物の脳における酵素活性は、死体解剖時（投与後２４時間）ではベースライン以上であった。 ・・・ 【０２８８】 ・・・ 実施例６：ＩＴ送達対ＩＣＶ送達 【０２８９】 前述の実施例で観察されたＩ２Ｓ分布が、単回ＩＴまたはＩＣＶ用量が投与された健常なビーグル犬でも再現された。雄ビーグル犬を、コンピューター作成番号を用いて、２つの群（１群（ＩＣＶ）、Ｎ＝３；２群（ＩＴ）、Ｎ＝４）に無作為割付した。全てのビーグル犬は、腰椎でのクモ膜下腔内または左側脳室内（投与用）ならびに大槽内（サンプリング用）に移植されたカテーテルを有した。全てのカテーテルは、皮下チタンアクセスポートに終結した。追加の犬が、非投与の外科的対照として用いられた。 【０２９０】 Ｉ２Ｓの単回ボーラス１ｍＬ注射（２０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ６．０；１３７ｍＭ塩化ナトリウム；０．０２％ポリソルベート－２０中３０ｍｇ／ｍＬ）がＩＴまたはＩＣＶで投与され、続いて、リン酸塩緩衝生理食塩水（ＰＢＳ；ｐＨ７．２）で０．３ｍＬ流された。臨床的徴候を監視し、投与後２４時間で致死させた。ＥＬＩＳＡ、Ｉ２Ｓ酵素活性およびＩＨＣによって決定されるような定量的Ｉ２Ｓ分析用に脳および脊髄組織サンプルを採取し、試験群間で比較した。 【０２９１】 ＩＨＣによって決定されたように、Ｉ２Ｓは、ＩＴおよびＩＣＶ群の双方の灰白質全体に広く分布した。大脳皮質では、図４７（ＡおよびＢ）によって示されるように、ＩＴおよびＩＣＶ群の双方で、ニューロンは、表面の分子層から深部の内層までの６つのニューロンでＩ２Ｓについて陽性であった。ＩＴおよびＩＣＶ群の大脳皮質では、図４７（ＣおよびＤ）で示されるように、Ｉ２Ｓは、プルキンエ細胞を含むニューロンで検出された。ＩＴおよびＩＣＶ群の双方において、図４７（ＥおよびＦ）に示されるように、海馬内のニューロンの大集団が、Ｉ２Ｓに陽性であった。Ｉ２Ｓ陽性ニューロンはまた、図４７（ＧおよびＨ）で示されるように、両群において、視床および尾状核でも確認された。 【０２９２】 したがって、本試験は、脳の深部細胞および組織分布するためのＩＴ投与された酵素の能力を確認し、ならびにハンター症候群などのリソソーム蓄積疾患に関連するＣＮＳ症状発現の治療のためのＩＴ投与されたＩ２Ｓなどの酵素の利用を裏付ける。 （甲１ク） 実施例７：イズロン酸－２－スルファターゼ欠損動物モデル 【０２９３】 ＩＴ投与されたＩ２Ｓが、脳の組織の深部への分布が可能であることならびにＩ２Ｓの細胞内局在化が立証されたので、ＩＴ投与されたＩ２Ｓの治療的有効性を判定するために、更なる試験が行われた。ＩＴ投与されたＩ２Ｓの疾患の進行を変更するための能力を試験するために、ハンター症候群の遺伝子的に処理されたイズロン酸－２－スルファターゼノックアウト（ＩＫＯ）マウスモデルを開発した。このＩ２Ｓノックアウトマウスモデルは、組織および器官においてグルコサミノグリカン（ＧＡＧ）の蓄積を生じさせるＩ２Ｓ遺伝子座の標的破壊を用いて開発された。ＩＫＯマウスモデルは、特徴的顔貌および骨格異常が挙げられるヒトで見られるハンター症候群の多くの身体的特徴を呈する。更に、ＩＫＯマウスモデルは、尿および体全体の組織におけるグルコサミノグリカン（ＧＡＧ）の上昇したレベル、ならびに組織病理学的に観察された広範囲の細胞空胞化を示す。 【０２９４】 本試験において、市販のＩ２Ｓ（Ｅｌａｐｒａｓｅ（登録商標））を濃縮し、リン酸塩緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に再懸濁させた。８～１２週齢の雄ＩＫＯマウスの６つの群を、Ｉ２Ｓ（１０μｌ；２６ｍｇ／ｍｌ）で処置した。ＡおよびＢ群（Ｎ＝３）には、それぞれＩ２Ｓの２６０μｇ用量を３回（１、８、および１５日目に）および２６０μｇ用量を２回（１および８日目に）髄腔内腔内投与した。Ｄ群もまた、１、８、および１５日目で、２６０μｇの３回の髄腔内腔内投与で処置した。Ｃ群およびＥ群（Ｎ＝３）は未処置対照群であり、Ｆ群（Ｎ＝３）は、未処置の野生型対照であった。対照マウスには、Ｉ２Ｓを含まないビヒクルを投与した。最後の注射後１時間でマウスを致死させて、続いて免疫組織化学法（ＩＨＣ）および組織病理学的分析用に組織調製を行った。 【０２９５】 ３回目の注射後に、ビヒクル処置マウスに比べてＩ２Ｓ処置マウスで、表面大脳皮質、尾状核、視床および小脳における細胞内空胞化の広範囲の減少があった。細胞内空胞化における減少はまた、ＩＴ処置後に白質において確認された。ＩＫＯマウスの脳組織へのＩ２Ｓの分布は、ＩＴ投与後に明白であった。 【０２９６】 ＩＫＯマウスにおけるＩ２Ｓの３週間のＩＴ投与もまた、光学顕微鏡および電子顕微鏡レベルの双方で、ＣＮＳ細胞内空胞化での著しい減少を示した。Ｉ２ＳのＩＴ投与後の細胞内空胞化の減少は、未処置ＩＫＯマウスに対して明確であって、これは、ＩＴ投与されたＩ２Ｓが疾患の進行を変更することが可能であることを示唆している。図４８に示されるように、細胞空胞化の減少は、Ｉ２ＳのＩＴ投与後にＩＫＯマウスの脳梁および円蓋で顕著であった。図４９は、処置されたＩＫＯマウスの大脳皮質組織における、リソソーム疾患の病理学的生物マーカーであるリソソーム結合膜タンパク質１（ＬＡＭＰ１）の存在の著しい減少を示している。 【０２９７】 更には、電子顕微鏡は、灰質内のニューロンでの蓄積封入体および白質内の希突起グリア細胞での空胞化の存在の減少を立証した。特に、ＩＫＯマウスのＩＴ投与されたＩ２Ｓは、特定のリソソーム蓄積疾患の特徴である柵状ラメラ体（ゼブラ小体）の減少を立証した。特に、図５は、未処置ＩＫＯマウスに対するＩ２Ｓを投与されたＩＫＯマウスのニューロン内の特徴的ゼブラ小体の減少を示している電子顕微鏡走査を表している。同様に、図５は、脳梁内の希突起グリア細胞の電子顕微鏡走査を示す。 【０２９８】 加えて、ＩＫＯマウスへのＩ２ＳのＩＴ投与はまた、表面大脳皮質、尾状核、視床、小脳および白質において、リソソーム活性および病状の指標である、リソソーム疾患病理学的生物マーカーのリソソーム結合膜タンパク質１（ＬＡＭＰ１）免疫染色での顕著な減少も示した。図４９Ａに示されるように、ＬＡＭＰ１免疫染色での顕著な減少は、図４９Ｂに示される未処置のＩＫＯ対照マウスの表面大脳皮質組織に対して、処置されたＩＫＯマウスの表面大脳皮質組織で明白であって、これは病変での改善を反映している。 【０２９９】 図２０は、脳組織のμｍ２領域で測定されたＬＡＭＰ－１の濃度を図示しかつ比較する。種々の脳領域のＬＡＭＰ－１免疫染色の形態計測学的分析は、評価された脳の領域におけるＬＡＭＰ－１陽性染色での著しい減少があることを確認した。図４に示されるように、評価された脳組織のそれぞれの領域（皮質、尾状核および被殻（ＣＰ）、視床（ＴＨ）、小脳（ＣＢＬ）および白質（ＷＭ））で、ＬＡＭＰ－１陽性領域は、未処置ＩＫＯ対照マウスに対して処置ＩＫＯマウスで減少され、野生型マウスのＬＡＭＰ－１陽性領域に近づいた。特に注目すべきことは、分析された脳組織の各領域におけるＬＡＭＰ－陽性領域は、継続された処置時間で更に減少された。 【０３００】 異常に高いリソソーム活性の減少は、脳の全ての領域での劇的な形態的改善に相関した。これら結果は、ＩＴ投与されたＩ２Ｓが、遺伝子的に処理されたＩＫＯマウスモデルにおいて、リソソーム蓄積疾患の進行を変更させることが可－ であることを裏付け、ならびにハンター症候群などのリソソーム蓄積疾患に関連するＣＮＳ症状発現を治療するためのＩＴ投与されたＩ２Ｓなどの酵素の能力を更に裏付けた。 （甲１ケ） ［図：0001399781000009.jpg］ （甲１コ）図６２ ［図：0001399781000010.jpg］ （２）甲２の記載 （甲２ア） 【請求項３８】 酵素の欠乏により引き起こされるリソソーム蓄積症にかかっている患者を治療する方法であって、前記酵素を脳への脳室内輸送によって患者に投与することを含む方法。 ・・・ 【請求項４３】 リソソーム蓄積症がムコ多糖症ＩＩ型であり、前記酵素がイズロン酸－２－スルファターゼである、請求項３８～４０のいずれか一項記載の方法。 （甲２イ） 【０００１】 本発明は、リソソーム蓄積症の領域に関する。特に、酵素補充療法によるこれらの病気の治療および／または予防に関連する。 【０００２】 （発明の要約） リソソーム蓄積症（ＬＳＤ）として知られている代謝性疾患のグループは、４０種類以上の遺伝子疾患を含み、それらの多くは多様なリソソーム加水分解酵素における遺伝子欠損に関する。代表的なリソソーム蓄積症および関連する欠損酵素が表２に記載される。 （表１） リソソーム蓄積症 欠損酵素 ・・・ ハンター症候群 イズロン酸－２－スルファターゼ ・・・ 【０００５】 本発明によると、上記表１で特定される病気のごときリソソーム蓄積症、例えば、ニーマン－ピック病Ａ型またはＢ型は、前記病気の病因として欠乏する酵素の脳への脳室内輸送を用いて治療および／または予防される。投与は、ゆっくり行われることにより最大の効果を達成することができる。効果は血液脳関門の両側で見られ、これは、脳および／または内臓に影響を与えるリソソーム蓄積症に対する有用な送達手段とされる。それゆえに、第１の態様では、本発明は、酵素の欠乏により引き起こされるリソソーム蓄積症の患者を治療または予防する方法であって、前記方法は、酵素を脳への脳室内輸送を通して患者に投与することを含む方法を提供する。関連の態様では、本発明は、患者の酵素の欠乏により引き起こされるリソソーム蓄積症の患者の治療または予防のための医薬品の製造のための酵素の使用であって、前記治療または予防が酵素の脳への脳室内投与を含む、酵素の使用を提供する。酵素の欠乏は、例えば、酵素の発現における欠乏、あるいはインビボにおいて酵素の活性レベルの減少（例、不活性な酵素）またはクリアランス／分解の速度の上昇をもたらす酵素の変異により引き起こされてもよい。欠乏は酵素基質の蓄積を引き起こし、酵素の投与は脳の基質レベルの減少をもたらしうる。リソソーム蓄積症は、上記表１で同定される病気のいずれかであってもよい。酵素は、リソソーム加水分解酵素であってもよい。 ・・・ 【００３８】 ＡＳＭまたは他のリソソーム加水分解酵素は、十分なレベルのリソソーム加水分解活性により特徴付けられる条件に治療、例えば、阻害、軽減、予防、または改善するのに有用な医薬組成物に組み込まれうる。医薬組成物は、リソソーム加水分解欠乏を患っている対象または前記欠乏を発生するリスクのある人に投与される。この組成物は、医薬上許容されるキャリア中に、治療量または予防量のＡＳＭまたは他のリソソーム加水分解酵素を含むべきである。医薬キャリアは、ポリペプチドを患者に輸送するのに適する、適合性無毒化物質のいずれかでありうる。滅菌された水、アルコール、脂肪、ワックスがキャリアとして用いられてもよい。医薬上許容されるアジュバンド、緩衝剤、分散剤、およびそれらの類似物はまた、医薬上許容される組成物に組み込まれてもよい。これらのキャリアは、脳室内注射または注入あるいは他の方法による投与に適するいずれかの形態（その形態はまた、静脈内または髄腔内投与に適合させることも可能である）で、ＡＳＭまたは他のリソソーム加水分解酵素と結合されうる。適するキャリアは、例えば、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ（登録商標）（ニュージャージー州、パーシッパニーのＢＡＳＦ）またはリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、他の食塩水、デキストロース溶液、グリセロール溶液、水ならびに石油、動物、植物、または合成由来の油（ピーナッツ油、大豆油、鉱油、またはゴマ油）と一緒に作製されたもののごとく油乳剤を含む。人工的なＣＳＦはキャリアとして用いることができる。このキャリアは、好ましくは無菌であり、発熱物質を含まない。医薬組成物中のＡＳＭまたは他のリソソーム加水分解酵素の濃度は、広範囲、すなわち、総組成物の少なくとも約０．０１重量％から０．１重量％、約１重量％、２０重量％以上に変動することができる。 （甲２ウ） 【００５４】 ・・・ 【実施例１】 【００５５】 （動物モデル） ニーマン－ピック病（ＮＰＤ）はリソソーム蓄積症であり、酸スフィンゴミエリナーゼ（ＡＳＭ；スフィンゴミエリンコリンリン酸加水分解酵素、ＥＣ３．１．３．１２）の遺伝子欠乏により特徴付けられる遺伝性神経代謝疾患である。機能的なＡＳＭタンパク質の欠如は、脳全域にわたる神経とグリアのリソソーム内のスフィンゴミエリン基質の蓄積を生じる。このことが核周辺の膨張した多数のリソソームの形成を招き、それらがＮＰＤＡ型の特徴および主な細胞の表現型である。膨張したリソソームの存在は、正常な細胞の機能の喪失および進行性の神経変性と関連し、小児期の初期に罹患した個体の死を招く（The Metabolic and Molecular Bases of Inherited Diseases, eds. Scriver et al., McGraw-Hill, New York, 2001, pp. 3589-3610）。第２の細胞の表現型（例えば、さらなる代謝異常）はまた、この病気に付随し、リソソーム区画におけるコレステロールの著しく高いレベルの蓄積である。スフィンゴミエリンはコレステロールに対して強い結合性を示し、その結果、ＡＳＭＫＯマウスとヒト患者のリソソームにおいて大量のコレステロールの隔離が生じる（Leventhal et al. (2001) J. Biol. Chem., 276:44976-44983; Slotte (1997) Subcell. Biochem., 28:277-293; and Viana et al. (1990) J. Med. Genet., 27:499-504）。ＮＰＤの詳細な考察は、the Online Metabolic Molecular Bases of Inherited Diseases, Part 16, Chapter 144 (2007)で見出されうる。【実施例２】【００５６】 （ＡＳＭＫＯマウスにおけるｒｈＡＳＭの連続的な脳室内注入） 目的：組み換えヒトＡＳＭ（ｒｈＡＳＭ）の脳室内注入がＡＳＭＫＯマウス脳における蓄積病変（すなわち、スフィンゴミエリンおよびコレステロール蓄積）においてどのような効果を示すかを調べるため。【００５７】方法：生後１２～１３週齢のＡＳＭＫＯマウスに留置ガイドカニューレを定位固定して移植した。１４週齢のマウスにポンプに繋がれた（ガイドカニューレ内に適合した）注入深針を用いて２５０ｍｇのｈＡＳＭ（ｎ＝５）を４日連続（合計１ｍｇが投与された）２４時間（～０．０１ｍｇ／ｈ）にわたり注入した。凍結乾燥されたｈＡＳＭを注入前に人工脳脊髄液（ａＣＳＦ）中に溶解させた。マウスを注入３日後に解剖した。解剖するマウスにユサゾール（ｅｕｔｈａｓｏｌ）（＞１５０ｍｇ／ｋｇ）を過剰摂取させ、次いでＰＢＳまたは４％パラホルムアルデヒドで環流した。脳、肝臓、肺および脾臓を取り除き、スフィンゴミエリン（ＳＰＭ）レベルを解析した。脳組織をＳＰＭ解析前に５つの領域に分けた（Ｓ１＝脳の前部、Ｓ５＝脳の後部；図１を参照）。（表２） ［図：0001399781000011.jpg］ 【００５８】 結果の要約：連続４日間２４時間あたり２５０ｍｇ（合計１ｍｇ）のｈＡＳＭの脳室内注入は、ＡＳＭＫＯ脳を通してｈＡＳＭ染色およびフィリピン（すなわち、コレステロール蓄積）クリアランスを生じた。生化学的解析は、ｈＡＳＭの脳室内注入が脳を通じてＳＰＭレベルの全身的な減少を導くことを示した。ＳＰＭレベルは、野生型（ＷＴ）のレベルが減少した。ＳＰＭの有意な減少を肝臓と脾臓でも観察した（減少傾向は肺でも見られた）。 【実施例３】 【００５９】 （ＡＳＭＫＯマウスにおけるｈＡＳＭの脳室内輸送ＩＩ） 目的：６時間にわたる注入期間における最も低い有効な用量を調べるため。 【００６０】 生後１２～１３週齢のＡＳＭＫＯマウスに留置ガイドカニューレを定位固定して移植した。１４週齢のマウスに以下の用量のｈＡＳＭのうちの１つで６時間にわたり注入した。１０ｍｇ／ｋｇ（０．２５０ｍｇ；ｎ＝１２）、３ｍｇ／ｋｇ（０．０７５ｍｇ；ｎ＝７）、１ｍｇ／ｋｇ（０．０２５ｍｇ；ｎ＝７）、０．３ｍｇ／ｋｇ（０．００７５ｍｇ；ｎ＝７）、またはａＣＳＦ（人工脳脊髄液；ｎ＝７）。各用量レベルからの２匹のマウスを６時間注入後に迅速に４％パラホルムアルデヒドで還流して脳内における酵素の分布を測定した（これらから血液を採取して血清ｈＡＳＭレベルを調べた）。各群からの残りのマウスを注入１週間後に解剖した。これらのマウスに由来する脳、肝臓、肺の組織を研究０５－０２０８にあるようにＳＰＭレベルについて解析した。（表３） ［図：0001399781000012.jpg］ 【００６１】 結果の要約：６時間にわたる脳室内ｈＡＳＭは、用量にかかわらず脳を通してＳＰＭレベルの有意な減少を生じた。用量＞０．０２５ｍｇで処理されたマウス脳のＳＰＭレベルは、野生型レベルまで減少した。内蔵器官のＳＰＭレベルはまた、用量依存的な様式で有意に減少した（野生型レベルまでではない）。この知見を裏付けることとして、ｈＡＳＭタンパク質はまた、ｈＡＳＭタンパク質を注入されたＡＳＭＫＯマウスの血清中で検出された。組織学的な解析は、ｈＡＳＭタンパク質が、ｈＡＳＭの脳室内投与後に脳を通して（Ｓ１からＳ５まで）広く分布することを示した。 （３）甲３の記載 甲３は外国語で記載されているので、訳文で示す。 （甲３ア） 特許請求の範囲 １．哺乳動物においてリソソーム蓄積症を治療するための方法であって、前記リソソーム蓄積症において欠損している酵素を含む医薬組成物を、前記リソソーム蓄積症の症状を改善するために有効な量で前記哺乳動物の中枢神経系に髄腔内投与するステップを含む方法。 ・・・ ２１．前記髄腔内投与が、前記医薬組成物を脳室内へ導入するステップを含む、請求項１に記載の方法。 （甲３イ） ［００１１］ そこで、当分野において、酵素補充療法の有効な投与を通してリソソーム蓄積嘩害を効果的に治療する方法を開発する必要がある。より詳細には、リソソーム蓄積障害を治療するために脳および中枢神経系へより効率的に活性物質を送達できる化合物および組成物のより効果的な投与方法に対する必要が存在する。・・・ ［００１３］ したがって、本発明の1つの態様では、リソソーム蓄積症を治療する方法であって、リソソーム蓄積症において欠損もしくは欠乏しているタンパク質を含む医薬組成物を提供するステップと、被験者の脳脊髄液内に前記医薬組成物を送達するステップと、を含み、それにより哺乳動物被験者において治療作用を提供するレベルで前記タンパク質が送達される方法が提供される。より詳細には、前記方法は一般に、哺乳動物被験者において治療作用を提供するレベルで前記被験者の脳組織へ前記タンパク質を送達するステップを含む。より詳細には、脳脊髄液への送達は、髄控内注射によって達成される。・・・ ［００１５］ 一部の実施形態は補充される酵素としてイズロニダーゼを使用するが、本発明の方法は異なる酵素の投与を必要とする他の疾患の治療的介入のために使用できることを理解されたい。例えば、本発明はさらにまた、βーグルクロニダーゼ(ＭＰＳ ＶＩＩ)、イズロン酸スルファターゼ(ＭＰＳ ＩＩ)、α－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼ(ＭＰＳ ＩＩＩＢ)、アリールスルファターゼＡ(ＭＬＤ)、グルコセレブロシダーゼ、βーグルコシダーゼもしくはアセチルガラクトサミン４－スルファターゼのクモ膜下投与もまた意図している。・・・ ［００２１］ 所定の代表的実施形態では、前記医薬組成物は、哺乳動物では少なくとも約０．０１ｍｇ／１５ｃｃ（ＣＳＦ）から約５．０ｍｇ／１５ｃｃ（ＣＳＦ）の用量のヒトα－Ｌ－イズロニダーゼを含み、その欠損症に罹患している被験者へ週１回投与される。好ましくは、前記医薬組成物は、哺乳動物では約１ｍｇ／１５ｃｃ（ＣＳＦ）の用量のヒトα－Ｌ－イズロニダーゼを含み、その欠損症に罹患している被験者へ週１回投与される。典型的な医薬組成物は、１００ｍＭリン酸ナトリウム、１５０ｍＭ ＮａＣｌおよび０．００１％ポリソルベート８０を含む緩衝液中に０．５８ｍｇ／ｍＬのイズロニダーゼを含む緩衝液中で調製される。 ［００２２］ 本発明の方法において使用するための医薬組成物は、さらにまた例えばヒトアルブミンなどの他の成分を含有していてよい。特定の実施形態では、本組成物は少なくとも約１ｍｇ／ｍＬの濃度でヒトアルブミンを含有する。本組成物は、例えば約１０～５０ｍＭの濃度でリン酸ナトリウム緩衝液を含む緩衝液中などのように、緩衝液の形状であってよい。 （甲３ウ） [００８８] 組換えタンパク質および他の治療薬などの物質の投与中は、被験者は、これらの物質に対する免疫応答を開始する可能性があり、これにより、結合して治療活性を抑制するだけでなく急性もしくは慢性免疫学的応答を誘発する抗体が産生されることが見出されている。この問題は、タンパク質が複雑な抗原であり、そして多くの場合に、該被験者が免疫学的に該抗原投与を受けていないために、タンパク質である治療薬にとって最も重要である。そこで、本発明の所定の態様では、治療酵素を摂取している被験者を酵素補充療法に対して寛容化させることが有用かもしれない。この状況では、酵素補充療法は、寛容化レジメンとの併用療法として被験者に投与することができる。 （甲３エ） ［００９４］ 本明細書で使用する用語「髄腔内投与」は、穿頭孔または大槽穿刺もしくば腰椎穿刺などを通しての側脳室内注射を含む技術（・・・）によって被験者の脳脊髄液内へ医薬組成物を直接送達することを含むことを意図する。・・・上記で言及した部位のいずれかへの本発明による医薬組成物の投与は、組成物の直接注射によって、または注入ポンプの使用によって達成できる。注射のためには本発明の組成物は溶液中で、好ましくはハンクス液、リンガー液もしくはリン酸緩衝液などの生理的に適合する緩衝液中で調製することができる。・・・ （甲３オ） ［００９９］ 本発明の方法において使用される医薬調製物は、リソソーム蓄積疾患の酵素補充療法に使用するための治療有効量の酵素を含有する。・・・治療有効量は、治療的に有益な作用が組成物の毒性もしくは有害な作用を上回る量でもある。イズロニダーゼの治療有効濃度についての非限定的範囲は、0.001/.lg(酵素）/mLから約150μg(酵素）/mLである。用量値は軽減すべき状態の重症度に伴って変化させてもよいことを留意されたい。いずれか特定の被験者については、特定投与レジメンは個々の必要および酵素補充療法を投与するもしくは投与を監督する人の専門的判断によって経時的に調整すべきであること、そして本明細書に記載の用量範囲は代表例に過ぎず、本発明の範囲もしくは実践を限定することは意図されていないことを理解されたい。 （甲３カ） ［０１３２］ ・・・ 実施例２ 脳室内注射を介して投与された酵素は血液脳関門を透過し、脳組織中で検出される。 ［０１３３］ リソソーム蓄積障害を有する被験者の脳内におけるリソソーム蓄積誘発性損傷部位への酵素の直接的投与は、現時点では困難であることが証明されている。これらの疾患を治療するために必要とされる大きな酵素複合体は、典型的には血液脳関門を透過することができない。脳－ＣＳＦ界面を越えてこれらの酵素を引き入れるために有効な方法を決定するために、リソソーム蓄積障害であるＭＰＳ Ｉのラットおよびイヌモデルにおいて２種の酵素投与経路について試験した。 ［０１３４］ 酵素を脳室内投与するために、定位固定誘導を用いて、５～１０μＬの組換えヒトイズロニダーゼ（ｒｈＩＤＵ）もしくはコントロールタンパク質のどちらかをラットの側脳室へ注射した。注射２４時間後に動物を致死させ、脳切片を入手した。 ［０１３５］ 脳切片は、抗イズロニダーゼ抗体を用いて共焦点顕微鏡を使用してｒｈＩＤＵの存在について分析した。免疫組織化学的分析は、注射された酵素が脳ニューロンに取り込まれたこと、そしてさらにイズロニダーゼがニューロン細胞内のリソソームへ局在することを証明した。抗ＩＤＵ染色は、この酵素が数ミリメートルにわたり脳組織を透過することを示しているが、酵素勾配は減少しており、これは注射部位から遠くへ離れるほど、脳内で検出される酵素が少なくなることを意味している。染色は、さらにこの酵素の半減期がおよそ７日間であることも示した。 ［０１３６］ 脳切片は、ｒｈＩＤＵ活性についても分析された。 （４）甲４の記載 甲４は外国語で記載されているので、訳文で示す。 （甲４ア）２５２０頁左欄要約 要約 グロボイド細胞白質ジストロフィー（GLD）、別名クラッベ病、は深刻な神経変性障害である。これはガラクトセレブロシダーゼ（GALC）遺伝子の機能喪失型突然変異により生じる常染色体劣性形質として遺伝する。以前の研究で筆者らはGLDのtwitcherマウスモデルの末梢組織に組換え酵素GALCを一日おきに注入すると初期臨床表現型が実質的に改善されることを示した。末梢組織に投与後、脳内に活性酵素が検出はされたものの、投与された酵素の大半は末梢部に局在していた。クラッベ病に中枢神経系（CNS）が実質的に関与していることに鑑み、筆者らは組換え酵素をCNSに直接単回投与すると（これは臨床的に可能であると思われるが）何らかの実質的改善がみられるかどうかを確かめたいと考えた。GALCの脳室内（icv）投与後、GALC基質であるサイコシンが有意に（16.5%だけ）減少することが認められた。サイコシンの異常な蓄積はクラッベ病に観察されるCNS病理に決定的な役割を果たすとみられる。さらに、組換えGALCは脳室周囲領域だけでなく注射部位から離れた大脳皮質や小脳のような場所においてもみられた。もっとも重要なのは、生後20日目に組換え酵素GALCを単回icv投与された動物は最長51日間生存したことであり、これは対照twitcherマウスが通常、生後40日と42日間しか生存しないことに比べると有利な点である。以上の結果は、組換え酵素GALCを単回icv投与しただけでも有意な臨床効果が得られる可能性があることを示し、CNSの有意な関与を伴うその他のリソソーム蓄積障害に対しても同様なメリットがあることを示唆する。 （甲４イ）２５２１頁左欄２７～３７行 アフィニティ精製抗-GALCポリクローナル抗体CL1475と組換えマウスGALCタンパクを（19）記載の方法で調製した。GALC注入液30μgに対し、組換えGALC溶液（10mg/ml）のストックを保存用緩衝液（マンニトール、170mM；クエン酸ナトリウム、50mM;Tween80、100mg/L）中で調製し単回使用アリコートに分配し、-80°Cにて保存した。抗GALCモノクローナル抗体（CL134）を組換えヒトGALCタンパクに対して産生させ、メイヨー・クリニック抗体中央研究所（Mayo Clinic Antibody Core Facility）の協力を得ながら調製した。CL13.1からのタンパク-A精製免疫グロブリンを使って脳の切片の免疫蛍光染色を行った。 （甲４ウ）２５２１頁左欄４７行～右欄４行 GALCタンパクまたはビヒクル単体を麻酔下のtwitcherマウスに総量3μlでicv投与した。マウスはイソフルラン（アボット・ラボ、North Chicago, IL, USA）吸入により麻酔し、定位装置（Stoelting Co., Wood Dale, IL, USA）に置いて位置決めし、その後、切開部位を適切に調整した。まず、小さく切開し、次に頭蓋骨を露出させ、清浄にし、歯科用ドリル又はドレメルロータリーツールを使って小さな窄頭孔をあけた。シリンジポンプ（Harvard Apparatus, Holliston, MA, USA）で注入速度を0.5μl/分に制御しながらGALCタンパク、またはビヒクル、を２７ゲージの針付きのハミルトン注射器（Reno, NV, USA）を使って右側脳室に注入した。座標として尾側からブレグマ方向に1mm、外側から矢状縫合方向に1.3mm、深さ2mmを用いた。 （甲４エ）２５２５頁左欄１３行～１８行 これまでの研究により、細胞外に分泌されたGALCはマンノース-6-ホスフェート受容体依存性及び非依存性経路を通して取り込まれることがわかっている（26、27）。内在化されると、この酵素はリソソーム内でタンパク分解をうけ活性形になると考えられている（28）。 （５）甲５の記載 甲５は外国語で記載されているので、訳文で示す。 （甲５ア）１３２頁要約 これまでに組換えヒトＮ－アセチルガラクトサミン－４－スルファターゼ（ｒｈＡＳＢ）による静脈内酵素補充療法（ＩＶ ＥＲＴ）を生後３か月以降毎週受けてきたＭＰＳ－ＶＩ猫はすべて循環抗ｒｈＡＳＢ抗体を産生してきた。この事実に鑑み、短期の寛容化レジメンを使って免疫寛容を誘導する可能性を試験した。生後４か月から始めて、ＭＰＳ－ＶＩ猫（ｎ＝５）と未罹患猫（ｎ＝２）に対してシクロスポリンとアザチオプリンを２２日間にわたって投与し、さらに０．１ｍｇ／ｋｇ ｒｈＡＳＢによるＩＶ ＥＲＴを毎週行った。4週間の休止期間後、これらの猫に対して０．１ｍｇ／ｋｇ ｒｈＡＳＢによるＩＶ ＥＲＴを生後１１か月または１７ヵ月になるまで毎週行った。４匹の未罹患猫（ｎ＝４）にはＩＶ ＥＲＴだけを行った。健康状態、成長度、及びセロコンバージョンを定期的にモニタリングした。５匹のＭＰＳ－ＶＩ猫のうち４匹はｒｈＡＳＢに対して良好な耐容性を示し、その根拠は抗体力価が無視できるか程度か低い値であること、または過敏性反応が見られないことである。ＭＰＳ－ＶＩ猫のうち１匹は一部のIV処置において抗体力価が上昇し、過敏性反応が見られた。寛容化レジメンを受けた２匹の未罹患猫は血清反応陰性のままであったが、このレジメンを受けなかった未罹患猫のうちセロコンバージョンが見られたのは半数のみであった。シクロスポリンとアザチオプリンの短期投与が原因で発生した副作用はわずかであった。ｒｈＡＳＢの髄腔内注射を毎週行っても２匹のＭＰＳ－ＶＩ猫はやはり良好な耐容性を示し、その結果、脳脊髄液内のオリゴ糖断片は少なく硬膜内の空胞形成も少なかった。以上のデータはＭＰＳ－ＶＩ猫を短期の寛容化レジメンで処置することによりｒｈＡＳＢに対する比較的高いレベルの免疫寛容を誘導することができ、最終的には髄腔内療法を使うことにより硬膜内のリソソーム蓄積の除去が可能となることを示す。 （甲５イ）１３３頁右欄 Materials and methodsのEnzyme preparation 酵素調製 ＩＶ ＥＲＴとＩＴ ＩＮＪそれぞれに用いるｒｈＡＳＢはBioMarin Pharmaceuticals Inc.から提供された。本酵素の詳しい調製に関しては以前に記述されている[12]。ｒｈＡＳＢの調製とＩＴ ＩＮＪそれぞれに用いたビヒクル溶液は１０ｍＭリン酸ナトリウム、１５０ｍＭ塩化ナトリウム及び０．０２５％ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ ８０）を含んでいた。すべてのｒｈＡＳＢとビヒクルの調製物はｐＨ５．８であった。ｒｈＡＳＢの調製物の濃度はＩＶ ＥＲＴの場合は１ｍｇ／ｍｌ、ＩＴ ＩＮＪの場合は５ｍｇ／ｍｌであった。ＩＴ ＩＮＪの前に、1倍量のｒｈＡＳＢ（または等量のビヒクル）を２倍量のエリオットＢ溶液（QOL Medical LLC, Seattle, WA 98021, USA）で毎回希釈した。 （６）甲７の記載 甲７は外国語で記載されているので、訳文で示す。 （甲７ア）３２５頁１行～１０行 Buffersの項 アメリカ薬局方（ＵＳＰ）収載の生理的緩衝剤リストからそれぞれの至適ｐＨ範囲に基づいて選択する必要がある。これらの緩衝剤とそのｐＨ範囲の一部を示すと以下の通り： リン酸塩類 ６．２－８．２ コハク酸塩 ３．２－６．６ クエン酸塩 ２．０－６．２ トリス ７．１－９．１ 最も頻繁に使われる緩衝剤濃度は１０、１５又は２０ｍｍの範囲にする必要がある。緩衝剤濃度が増加するに従い注射時の痛みが増大する。 （７）甲８の記載 （甲８ア）１頁 I . 概要に関する項目 I . 概要に関する項目 1 . 開発の経緯 エラプレース［一般名：イデュルスルファーゼ（遺伝子組換え）］は、米国 Trans Karyotic Therapies, Inc.(現 Shire Human Genetic Therapies, Inc.)によりムコ多糖症II型に対する治療薬として開発された、ヒトイズロン酸スルファターゼ(Ｉ２Ｓ)をヒト細胞により遺伝子組換え技術を応用して生産したイデュルスルファーゼ製剤である。2003年9月に米国において大規模な臨床試験が実施され、その有効性と安全性が確認されたため、２００６年７月２４日に米国食品医薬品局（ＦＤＡ）で、また２００７年１月８日には欧州医薬品庁（ＥＭＥＡ）でそれぞれ承認された。本邦においては、２００６年１２月に希少疾病用医薬品に指定され、患者数が非常に少ないこと、またムコ多糖症ＩＩ型は生命を脅かす疾患であり可及的速やかな保険適応が望まれることから、米国で実施された4例の日本人患者を含めた臨床試験データを基に製造販売承認申請を行い、２００７年１０月に承認を取得した （甲８イ）１頁 ２．製品の治療学的・製剤学的特性 ２．製品の治療学的・製剤学的特性 １．本剤は、ヒトＩ２Ｓの遺伝子組換え製剤であり、日本で初めて承認されたムコ多糖症ＩＩ型に対する酵素補充療法製剤である。 ２．本剤は週１回１～３時間の点滴静注により、欠損しているＩ２Ｓを補充し、リソソーム内に蓄積したグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）を分解する。 （甲８ウ）１頁 ［図：0001399781000013.jpg］ ［図：0001399781000014.jpg］ （甲８エ）９頁 ２．用法及び用量 ２．用法及び用量 通常、イデュルスルファーゼ（遺伝子組換え）として、１回体重１ｋｇあたり０．５ｍｇを週１回点滴静脈内注射する。 ■用法・用量に関連する使用上の注意 （１）希釈方法：患者の体重あたりで計算した必要量を取り、日局生理食塩水１００ｍＬで希釈する。 （８）甲９の記載 （甲９ア） 【請求項１】 a) 興味のあるポリペプチドを含む組成物を遠心分離及び／又はろ過し、 b) 工程a)から得られたそれぞれ上清又は残留物を濃縮する ことを含む、興味のあるポリペプチドを含む組成物を濃縮する方法。 （甲９イ） 【０００７】 さらに別の態様において、本発明は、500～300mg/mlのPBGDの組成物を皮下注射することを含む、哺乳動物の急性間欠性ポルフィリン症を治療する方法に関する。 さらに別の態様において、本発明は、50～300mg/mlのアリールスルファターゼAの組成物を皮下注射することを含む、哺乳動物の異染性白質ジストロフィーを治療する方法に関する。 さらに別の態様において、本発明は、50～300mg/mlのリゾソーマルアルファ-マンノシダーゼの組成物を皮下注射することを含む、哺乳動物のリゾソーム貯蔵障害アルファ-マンノシドーシスを治療する方法に関する。 さらに別の態様において、本発明は、50～300mg/mlのガラクトシルセレブロシダーゼの組成物を皮下注射することを含む、哺乳動物のクラッベ病を治療する方法に関する。 （９）甲１０の記載 （甲１０ア） ［図：0001399781000015.jpg］ ［図：0001399781000016.jpg］ （１０）甲２０の記載 （甲２０ア）１頁 エリオットのＢ溶液とＣＳＦの電解質組成とｐＨの比較表 ［図：0001399781000017.jpg］ ２ 乙号証の記載 （１）乙５（乙２４）の記載 乙５は、外国語で記載されているので、訳文で示す。なお、乙５と乙２４は同じ文献である。 （乙５ア）１７２頁左欄８～３４行 ｒｈＩＤＵを投与したＭＰＳ Ｉイヌ２頭と正常なイヌ１頭の血清（最大２０２Ｕ／μＬ）とＣＳＦ（最大８２．０Ｕ／μＬ）の両方から、ｒｈＩＤＵに対する中程度の抗体が検出された（表５）。これらの３匹の動物はすべて、試験に参加する数ヶ月前にｒｈＩＤＵの静脈内投与を受けていた。のこりの治療を受けた動物では、ｒｈＩＤＵに対する低レベルの抗体が血清中に検出され（試験終了時に３．６１－４０．９Ｕ／μＬ）、ＣＳＦではより低レベルの抗体が検出された（１．３９－２．２８Ｕ／μＬ）。治療を受けたイヌでは、ＣＳＦの白血球がわずかに増加していた。ＩＴ ｒｈＩＤＵで治療したすべてのイヌ（正常及びＭＰＳ Ｉ）において、脊髄の髄膜、脊髄硬膜の領域および脳の周辺に、Ｂリンパ球、形質細胞、およびその他のリンパ球の様々な蓄積が見られた（図５ｆ）。これらの硬膜浸潤は、典型的には脊髄神経根の周辺で最も強く、より重症の症例では隣接する硬膜外脂肪や結合組織にまで及んでいた。このような症例では、中程度の局所硬膜外リンパ球性動脈炎も見られた。未治療の動物では、ビヒクルを投与された１匹の正常なイヌを除いて、髄膜炎や炎症は見られなかった。ｒｈＩＤＵを投与した２匹の正常なイヌは、軽度の髄膜炎を発症した。ＣＮＳの炎症反応の程度はイヌによって異なり、用量に関係するようであった。免疫反応による明らかな影響は見られず、イヌは元気で活動的であった。 （乙５イ）１７３頁左欄６～２４行 髄腔内投与経路は、麻酔薬や化学療法等、薬物については新規の概念ではないが、酵素や他のタンパク質については広く試験されていない。酵素の髄腔内投与は、いくつかの課題をもたらす。タンパク質産物はいずれも、慢性抗体形成又は炎症反応のいずれかの形態で免疫反応のリスクを抱える。予想通り、ＩＴ ｒｈＩＤＵで治療されたイヌにおいて免疫反応が起こった。α－Ｌ－イズロニダーゼに対する抗体は、この研究に入る前に静脈内酵素に暴露されていた３匹のイヌの、血清及びＣＳＦで発見された。リンパ形質細胞浸潤以外は、この免疫応答の明らかな臨床的副作用はなかった。ヒトにおいては、静脈内ｒｈＩＤＵに対する免疫応答は、イヌモデルで観察されたものよりも低く、安全性や有効性に対して有意な影響を及ぼしていない。抗体価はヒトにおいては低く、一般に注入を続けると時間の経過と共に低下した［３５］。 （２）乙７（乙２５）の記載 乙７は、外国語で記載されているので、訳文で示す。なお、乙７と乙２５は同じ文献である。 （乙７ア）１３９３頁右欄３～２９行 凝集は、一方で二分子衝突を必要とし、高濃度依存性は、高濃度タンパク質製剤の主要な分解経路であると予想される。濃度と凝集体形成の関係は、凝集体のサイズと会合のメカニズムに依存する。１２，１７タンパク質凝集は、共有結合性（例えば、ジスルフィド結合）または非共有結合性（可逆的または非可逆的）の会合をもたらす可能性がある。非共有結合性の会合による不可逆的な凝集は、一般に、タンパク質の天然のコンフォメーションを変化させる熱的、機械的、または化学的プロセスによって露出された疎水性領域を介して生じる。１９タンパク質案フォールディングのステップが律速である場合、タンパク質凝集のキネティクスは、予想される高次濃度依存性ではなく、疑似１次動作１９を示すことがよくある。濃度と凝集体形成の関係における凝集メカニズムの重要性のさらなる説明は、気液界面との相互作用から生じるタンパク質凝集の逆濃度依存性によって示される。 タンパク質の凝集は、免疫原性のために、タンパク質の活性、薬物動態、及び安全性に影響を与えるかも知れない。 （３）乙８の記載 乙８は、外国語で記載されているので、訳文で示す。 （乙８ア）１５５頁２２～３１行 4.4.5.2 高濃度で増強されたタンパク質凝集 ほとんどの場合、タンパク質間の会合の機会が高まるため、タンパク質凝集はタンパク質濃度の増加とともに増加する。34,36,106タンパク質は、凝集プロセスを開始するための最初の核を形成するために、臨界濃度を必要とする可能性もある。72平均場格子モデル（mean field lattice model）は、タンパク質が十分に高い濃度で凝集/沈殿することを予測する。10より最近の研究では、生体外における広範囲の非構造ポリペプチドの凝集率が、5桁を超えるタンパク質濃度と相関係数0.92で正の相関があることが分かった。 （４）乙９の記載 乙９は、外国語で記載されているので、訳文で示す。 （乙９ア）４１頁右欄１～２７行 タンパク質凝集は、生物学的製剤の工程収率及び効能に悪影響を与える可能性もあるため、製薬会社にとって大きな問題となっている。さらに、ＦＤＡ及びその他の規制当局による凝集イベントの規制監督は、近年大幅に増加している。したがって、バイオ製薬会社はそれらを理解する努力を増やしている。特に懸念されるのは望ましくない免疫原性の誘導であり、これは広く認められている凝集の続発症である（5）。「ネイティブ」な四次の非共有相互作用の変化によって、又は新しいミスマッチの相互作用の人工的な作成によって生じる凝集現象は、（凝集した）ペプチド治療に対する宿主免疫原性応答の動員を頻繁に誘導する。そのような免疫原性応答は、ペプチドの治療効果の低下をもたらす可能性がある。例として、インターフェロンベータに対する中和抗体（6）は、脳ＭＲＩスキャンで測定されるように、より高い再発率とより多くの疾患活動性をもたらす（7）。さらなる例として、生命を脅かす抗体反応である「赤芽球癆」が一部の患者で見られたエリスロポエチン（ＥＰＯ）が挙げられる（8）。 第７ 無効理由についての判断 １ 無効理由１（明確性）について （１）請求人の主張の要点 無効理由１について、請求人は以下の点を主張している。 ア 請求項１には、「イズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）タンパク質」の濃度の上限値の記載がない。「脳室内投与」する場合における酵素濃度には、本来、上限値が存在するはずである。よって、請求項１の記載は、発明が不明確である。請求項１に従属する請求項２～５及び７～１２も同様である。 イ 請求項１には、「５０ｍＭまでのリン酸塩を含み」と規定されている。しかしながら、請求項１には「リン酸塩」の濃度の下限値の記載がなく、文言的にはリン酸塩濃度が０ｍＭの場合も包含する。しかしながら、本件特許明細書の発明の詳細な説明を踏まえると、本件特許発明の薬学的組成物において、ｐＨやイオン強度を安定に維持し、脳室内投与するためのリン酸塩濃度には、適切な下限値が存在するはずである。 よって、請求項１に記載された発明は不明確である。請求項１に従属する請求項２～５及び７～１２に記載された発明も同様である。 ウ 請求項３は、「または」の文言によって、複数の発明が一つの請求項に記載されており、請求項３に記載された発明の範囲が不明確である。また、請求項３は、「任意の」という文言に伴って任意付加的事項を含む点でも、発明の範囲が不明確である。請求項３に記載された発明の範囲が不明確である。請求項３に従属する請求項４～５および７～１２も同様である。 エ 請求項４には、「（ｉ）前記Ｉ２Ｓ酵素活性が、対照と比較して、少なくとも１倍、２倍、・・・または１０倍まで増加される」「（ｉｉ）前記Ｉ２Ｓ酵素活性の増加が、少なくとも１０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、２０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、・・・または６００ｎｍｏｌ／時・ｍｇである」「（ｉｉｉ）前記Ｉ２Ｓ酵素活性が、腰部で増加され、任意に、前記腰部において増加した前記Ｉ２Ｓ酵素活性は、少なくとも２０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、３０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、・・・または１０、０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇである」と規定され、「または」の文言によって、複数の発明が一つの請求項に記載されており、それにより発明の範囲が不明確となっている。 また、請求項４の記載は、「任意に」という文言に伴って任意付加的事項を含む点でも、発明の範囲を不明確にするものである。 よって、請求項４の記載は不明確である。請求項４に従属する請求項５及び７～１２も同様である。 オ 請求項５には、「（ｉ）前記脳室内投与が、静脈内投与と併せて用いられ、任意に、前記静脈内投与は、１か月に１回以下の頻度であるか、または、２ヶ月に１回以下の頻度である」「（ｉｉｉ）前記脳室内投与が、２週間に１回、１ヶ月に１回、または、２ヶ月に１回実施される」と規定され、「または」の文言によって、複数の発明が一つの請求項に記載されており、それにより発明の範囲が不明確となっている。 また、請求湖５の記載は、「任意に」という文言に伴って任意付加的事項を含む点でも、発明の範囲を不明確にするものである。 よって、請求項５の記載は不明確である。請求項５に従属する本請求項７～１２も同様である。 カ 請求項７には、「前記Ｉ２Ｓタンパク質が、３０ｍｇ／ｍｌ、５０ｍｇ／ｍｌ、１００ｍｇ／ｍｌ、２００ｍｇ／ｍｌ、２５０ｍｇ／ｍｌ、および３００ｍｇ／ｍｌから選択される濃度で、または、その濃度までで存在する」と規定され、「～から選択される濃度」や「または」の文言によって、複数の発明が一つの請求項に記載されており、発明の範囲が不明確である。請求項７に従属する請求項８～１２も同様である。 キ 請求項９には、「請求項６～８のいずれか一項に記載の安定製剤であって、前記塩がＮａＣｌであり、任意に、前記ＮａＣｌは、０～３００ｍＭの範囲の濃度として、任意に、１３７～１５４ｍＭの範囲の濃度で、任意に１５４ｍＭの濃度で存在する、安定製剤。」と規定され、「任意に」という文言に伴って任意付加的事項を含む点で、発明の範囲が不明確である。請求項９に従属する請求項１０～１２も同様である。 ク 請求項１０には、「請求項６～９のいずれか一項に記載の安定製剤であって、前記ポリソルベート界面活性剤が、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート８０およびこれらの組み合わせからなる群から選択され、任意に、前記ポリソルベート界面活性剤は、ポリソルベート２０であり、かつ、０～０．０２％の範囲の濃度で、任意に、０．００５％の濃度で存在する、安定製剤。」と規定され、「任意に」という文言に伴って任意付加的事項を含む点で、発明の範囲が不明確である。請求項１０に従属する請求項１１～１２も同様である。 ケ 請求項１２には、「請求項１～１１のいずれか一項に記載の安定製剤の単回投与形態を含む容器であって、任意に：（ｉ）前記容器が、アンプル、バイアル、カートリッジ、レザバー、ｌｙｏ－ｊｅｃｔ、または前充填した注射器から選択され、任意に、前記容器は、前充填された注射器であり、かつ、ベイクドシリコーン被覆膜を有するホウケイ酸ガラス注射器、噴霧されたシリコーンを有するホウケイ酸ガラス注射器、またはシリコーンを含有しないプラスチック樹脂注射器から任意に選択される、あるいは（ｉｉ）前記安定製剤が、５．０ｍＬ未満の容量、任意に、３．０ｍＬ未満の容量で存在する、容器。」 と規定され、「または」の文言によって、複数の発明が一つの請求項に記載されており、それにより発明の範囲が不明確となっている。 また、請求項１２は、「任意に」という文言に伴って任意付加的事項を含む点でも、発明の範囲が不明確である。 コ 請求項３では、「（ｉ）・・・、（ｉｉ）・・・、（ｉｉｉ）・・・、（ｉｖ）・・・、（ｖ）・・・、ならびに／または、（ｖｉ）・・・」と規定され、「ならびに／または」の文言によって、複数の発明を一つの請求項に記載されており、発明の範囲が不明確となっている。また、請求項４、５、１１および１２も同様の記載形式で規定されている。 よって、請求項３～５および１１～１２の記載は不明確である。 （２）無効理由１についての判断 ア （１）アについて 請求人の上記（１）アの主張は、請求項１～５及び７～１２にイズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）タンパク質の濃度について上限の記載がないことを問題とするものであったところ、本件訂正により、訂正請求項１には、イズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）タンパク質の濃度について、「５ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇ／ｍｌのイズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）タンパク質」と記載されることとなった。そして、訂正請求項２～５及び７～１２は、訂正請求項１を直接または間接的に引用してさらに特定する形式で記載されているから、これら訂正請求項に記載された発明における補充酵素の濃度は、訂正請求項１の範囲内であって、１００ｍｇ／ｍｌが上限となることは明らかである。したがって、訂正請求項１～５及び７～１２には、上記（１）アの不備はない。 イ （１）イについて 請求人の上記（１）イの主張は、訂正請求項１～５及び７～１２にリン酸塩の濃度の下限値が記載されていないことを問題とするものである。 しかし、訂正請求項１の記載から、訂正発明１の医薬組成物にリン酸が含まれ、その濃度が５０ｍＭまでであることが明確であり、濃度の下限がないことによって発明が不明確になるものでもない。 請求人が、発明の詳細な説明の記載から適切なリン酸塩の濃度があるはずであると主張している点は、むしろサポート要件に関わる内容であり、明確性とは別の問題である。 したがって、訂正請求項１～５及び７～１２には、上記（１）イの不備はない。 ウ （１）ウについて 請求人の上記（１）ウの主張は、訂正請求項３に「または」の文言が記載されていることを問題とするものである。 しかし、訂正請求項３の「請求項１～２のいずれか一項に記載の安定製剤であって、 （ｉ）前記製剤の前記脳室内投与が、標的脳組織への前記Ｉ２Ｓタンパク質の送達を生じさせ、 （ａ）前記脳標的組織が、白質および／または灰白質内のニューロンを含む、かつ／または、 （ｂ）前記Ｉ２Ｓタンパク質が、ニューロン、グリア細胞、血管周囲細胞および／または髄膜細胞に送達される、 （ｉｉ）前記Ｉ２Ｓタンパク質が、脊髄内のニューロンにさらに送達される、 （ｉｉｉ）前記製剤の前記脳室内投与が、肝臓、腎臓および心臓から選択される末梢標的組織への前記Ｉ２Ｓタンパク質の全身的送達をさらに生じさせる、 （ｉｖ）前記製剤の前記脳室内投与が、脳標的組織、脊髄ニューロンおよび／または末梢標的組織内のリソソーム局在化を生じさせる、 （ｖ）前記製剤の前記脳室内投与が、脳標的組織、脊髄ニューロンおよび／または末梢標的組織内のＧＡＧ蓄積を減少させる、ならびに／または、 （ｖｉ）前記製剤の前記脳室内投与が、ニューロンの空胞化を減少させる、 安定製剤。」との記載から、訂正請求項１及びその従属請求項２に記載されたいずれかの発明の範囲内で、上記（ｉ）～（ｖｉ）に挙げられた作用のいずれかを生じるものに特定したことが明確であり、訂正発明３が、訂正請求項１及び訂正請求項２に記載されたいずれかの発明と同様に、ひとつのまとまりのある発明であることは明確である。 訂正請求項３に従属する訂正請求項４～５及び７～１２も同様である。 したがって、訂正請求項３～５及び７～１２に、上記（１）ウの不備はない。 エ （１）エについて 請求人の上記（１）エの主張は、請求項４に「または」、「任意に」という記載がある点を問題とするものであった。 訂正請求項４における「または」という記載は、訂正請求項１～３のいずれか一項に記載の安定製剤について、その前記脳室内投与が、脳標的組織、脊髄ニューロン、末梢標的組織内のいずれかにおけるＩ２Ｓ酵素活性の増加を生じさせるものであることを、選択肢によって特定したものであるから、訂正発明４が、訂正請求項１～３に記載されたいずれかの発明と同様に、一ののまとまりのある発明であることは明確である。 また、本件訂正により、訂正請求項４は、「任意に」との文言を含まないものとなった。 したがって、訂正請求項４並びに訂正請求項４を引用する訂正請求項２～５及び７～１２に、上記（１）エの不備はない。 オ （１）オについて 請求人の主張は、請求項５に「または」、「任意に」という文言が記載されていることを問題とするものである。 しかしながら、訂正請求項５の「請求項１～４のいずれか一項に記載の安定製剤であって、 （ｉ）前記脳室内投与が、静脈内投与と併せて用いられる、あるいは、 （ｉｉ）前記脳室内投与が、静脈内投与の不在下で用いられる、ならびに／あるいは、 （ｉｉｉ）前記脳室内投与が、２週間に１回、１ヶ月に１回、または、２ヶ月に１回実施される、ならびに／あるいは、 （ｉｖ）前記脳室内投与が、併用の免疫抑制療法の不在下で用いられる、 安定製剤。」との記載から、訂正請求項１～４に記載されたいずれかの発明の範囲内において、その投与の形態を（ｉ）～（ｉｖ）に挙げられた選択肢から選ばれるものに特定したことが明確であり、訂正発明５が、訂正発明１～４のいずれかと同様に、ひとつのまとまりのある発明であることは明確である。 したがって、訂正請求項５及び訂正請求項５を引用する訂正請求項７～１２に、上記（１）オの不備はない。 カ （１）カについて 請求人の主張は、請求項７に、「～から選択される濃度」、「または」という文言が記載されていることを問題とするものである。 訂正請求項７の「前記Ｉ２Ｓタンパク質が、３０ｍｇ／ｍｌ、５０ｍｇ／ｍｌ、および１００ｍｇ／ｍｌから選択される濃度で、または、その濃度までで存在する、請求項１～６のいずれか一項に記載の安定製剤。」との記載から、訂正請求項１～６に記載されたいずれかの発明の範囲内において、製剤中のＩ２Ｓタンパク質の濃度が、３０ｍｇ／ｍｌ、５０ｍｇ／ｍｌ、および１００ｍｇ／ｍｌから選択される濃度であるか、あるいは、３０ｍｇ／ｍｌ、５０ｍｇ／ｍｌ、および１００ｍｇ／ｍｌから選択される濃度のいずれかであるものに特定したことが明確であり、訂正発明７が、訂正発明１～６のいずれかと同様に、ひとつのまとまりのある発明であることは明確である。 したがって、訂正請求項７及び訂正請求項７を引用する訂正請求項８～１２に、上記（１）カの不備はない。 キ （１）キについて 請求人の主張は、請求項９に「任意に」という文言が記載されていることを問題とするものである。 本件訂正により、訂正請求項９は「任意に」という文言を含まなくなった。 したがって、訂正請求項９及び訂正請求項９を引用する訂正請求項１０～１２に、上記（１）キの不備はない。 ク （１）クについて 請求人の主張は、請求項１０に「任意に」という文言が記載されていることを問題とするものである。 本件訂正により、訂正請求項１０は「任意に」という文言を含まなくなった。 したがって、訂正請求項１０及び訂正請求項１０を引用する訂正請求項１１～１２に、上記（１）クの不備はない。 ケ （１）ケについて 請求人の主張は、請求項１２に「または」、「任意に」という文言が記載されていることを問題とするものである。 本件訂正により、訂正請求項１２は、「または」、「任意に」という文言を含まないものとなった。 したがって、訂正請求項１２には、上記（１）ケの不備はない。 コ （１）コについて 請求人の主張は、請求項３～５、１１～１２に「ならびに／または」という文言が記載されていることを問題とするものである。 本件訂正後の請求項３の（ｉ）～（ｖｉ）で記載した選択肢は、それぞれＩ２Ｓタンパク質の送達部位ならびに該部位に送達されたＩ２Ｓタンパク質により発揮される効果を特定したものであり、これらの選択肢を含む請求項３からは、一の発明が把握される。また、本件訂正後の請求項４～５および１２についても、上記エ、オ及びケのとおりである。そして、本件訂正後の請求項１１は、「ならびに／または」という文言を含まないものとなった。 したがって、訂正請求項３～５、１１～１２に、上記（１）コの不備はない。 （３）小括 以上より、訂正請求項１～１２についての特許は、無効理由１によって無効とされるべきものでない。 ２ 無効理由２（実施可能要件）について （１）実施可能要件について 訂正発明１～１２は、いずれも物の発明である。 物の発明についての実施は、その物の製造、使用を含むことから、発明の詳細な説明の記載が実施可能要件を満たすためには、発明の詳細な説明の記載から、当業者がその発明の物を製造することができるとともに、その物を使用することができる程度の記載が必要である。そこで、実施可能要件について、以下、その観点から検討する。 （２）訂正発明１について ア 訂正発明１ 訂正発明１は、「ハンター症候群を治療するための安定製剤であって、前記製剤は対象に脳室内投与されることを特徴とし、前記安定製剤は、５ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇ／ｍｌの濃度のイズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）タンパク質を含み、かつ、５０ｍＭ以下の濃度のリン酸塩を含み、前記製剤が５．５～７．０のｐＨを有することをさらに特徴とする、安定製剤。」である。 そこで、発明の詳細な説明の記載から、当業者が５ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇ／ｍｌの濃度のイズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）タンパク質を含み、かつ、５０ｍＭ以下の濃度のリン酸塩を含み、前記製剤が５．５～７．０のｐＨを有するハンター症候群を治療するために対象に脳室内投与される安定製剤を製造することができ、当該安定製剤を使用することができるといえるかを検討する。 イ 明細書の記載内容 （ア）製剤化に関する記載 本件明細書の【００９１】には、従来、ＣＳＦに近い組成を有するエリオットのＢ溶液（人工ＣＳＦ）が、典型的には髄腔内腔内送達のために用いられていたが、エリオットのＢ溶液は、緩衝剤濃度極度に低いために、長期間に亘ってタンパク質を安定化するために必要とされる適切な緩衝能力を提供し得ず、また、エリオットのＢ溶液中に存在するカルシム塩は、タンパク質沈降を媒介し、それにより製剤の安定性を低減し得るものであることが記載されている。 実施例４の【０２４６】～【０２４８】には、イズルスルファーゼの髄腔内腔内送達についての製剤開発のため、全身的送達のためのＩ２Ｓ製剤と等価な安定性も維持すると同時に、リン酸塩およびポリソルベート２０レベルを低減することに焦点を当て、凍結融解、振盪ストレス、および熱ストレスに対する試験を行った結果、生理食塩水製剤が、低タンパク質濃度（２ｍｇ／ｍｌ）で凍結融解ストレスに対してより安定であり、高タンパク質濃度（１００ｍｇ／ｍｌ）では、凍結融解ストレスは、生理食塩水含有製剤およびリン酸塩含有製剤の双方で不安定性の問題は発生しなかったこと、振盪ストレス試験は、０．００５％ポリソルベート２０が振盪関連ストレスに対してタンパク質を保護すること、生理食塩水製剤のｐＨは、２～８℃で２４カ月間、６．０で維持されることを確認したことが記載され、また、タンパク質に結合された残留リン酸塩の量、ならびにタンパク質濃度の増加が、最終製剤におけるｐＨ安定性に関与することが認められたとの記載がある。 また、【０２７３】には、製剤原料のイズルスルファーゼを５０ｍｇ／ｍｌに濃縮し、次いで１５０ｍＭの生理食塩水中に透析濾過したところ、１０ＸＤＦ後において、通過液が約０．０７ｍＭのリン酸塩であったが、タンパク質保持物質は約０．１６ｍＭのリン酸塩を含有し、リン酸塩がタンパク質に結合して約０．２ｍＭのリン酸塩残基が、製剤原料中に残留していることを示し、これが生理食塩水製剤が６．０のｐＨを維持していることに寄与していると思われることが記載されている。 （イ）脳室内（ＩＣＶ）投与の実施例 明細書には、補充酵素を含む製剤のＩＣＶ投与が行われた以下の実施例が記載されている。 （ｉ）明細書の実施例５には、１２４Ｉ標識化Ｉ２ＳをＩＣＶ経路、ＩＴ－Ｌ経路、ＩＶ経路によって試験動物に投与し、ＰＥＴスキャンを実施した結果が図６２に示されている（【０２８４】、図６２）。 （ｉｉ）明細書の実施例６には、ビーグル犬にＩ２Ｓの単回ボーラス１ｍＬ注射（２０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ６．０；１３７ｍＭ塩化ナトリウム；０．０２％ポリソルベート－２０中３０ｍｇ／ｍＬ）がＩＴまたはＩＣＶで投与し、投与後２４時間で致死させ、脳および脊髄組織について、ＥＬＩＳＡ、Ｉ２Ｓ酵素活性およびＩＨＣによって定量的Ｉ２Ｓ分布を試験群間で比較したことが記載されている（【０２８９】～【０２９０】）。 明細書には、実施例６の結果について、Ｉ２Ｓは、ＩＴおよびＩＣＶ群の双方の灰白質全体に広く分布し、ＩＨＣでは、大脳皮質では、図４７（ＡおよびＢ）に示されるように、ＩＴおよびＩＣＶ群の双方で、ニューロンは、表面の分子層から深部の内層までの６つのニューロンでＩ２Ｓについて陽性であり、ＩＴおよびＩＣＶ群の大脳皮質では、図４７（ＣおよびＤ）で示されるように、Ｉ２Ｓは、プルキンエ細胞を含むニューロンで検出され、ＩＴおよびＩＣＶ群の双方において、図４７（ＥおよびＦ）に示されるように、海馬内のニューロンの大集団が、Ｉ２Ｓに陽性であり、Ｉ２Ｓ陽性ニューロンはまた、図４７（ＧおよびＨ）で示されるように、両群において、視床および尾状核でも確認されたことが記載されている（【０２９１】～【０２９２】）。 （ウ）髄腔内（ＩＴ）投与の実施例の記載 明細書には、補充酵素を含む製剤のＩＴ投与が行われた以下の実施例が記載されている。 （ｉ）実施例１には、髄腔内腔内－腰椎経路によって、組換え体ヒトＩ２Ｓが成体ＭＰＳ ＩＩマウス（ＩＫＯマウス）の脳に送達されることができるかどうかを判定するための試験を行ったことが記載されている（【０１９６】）。実施例１において試験に使用した組換え体ヒトＩ２Ｓは、リン酸塩緩衝生理食塩水に対して透析し、濃縮・再懸濁後に濾過滅菌したもので、最終濃度は、５１ｍｇ／ｍｌであったことが記載されている（【０１９６】）。この試験により、ＩＫＯマウスでは、髄腔内腔内－腰椎経路によって組換え体ヒトＩ２Ｓが脳に送達され、注射されたＩ２Ｓは、髄膜細胞および脳のニューロンで検出、光学顕微鏡および電子顕微鏡レベルの双方での脳全体の細胞空胞化の減少、注射されたＩ２Ｓは、脳の種々の領域において広範囲の組織病理学的改善、脳全体のＬＡＭＰ－１リソソームマーカーの減少、髄腔内腔内注射されたＩ２Ｓは、末梢循環に入り、肝臓の形態学的および組織学的マーカーの改善を生じさせることを示す結果が得られたことが記載されている（【０２０６】～【０２１１】）。 （ｉｉ）実施例２には、１５４ｍＭ ＮａＣｌ、０．００５％ポリソルベート２０、ｐＨ５．３～６．１中に、Ｉ２Ｓタンパク質を３ｍｇ／ｍｌ、３０ｍｇ／ｍｌ、１００ｍｇ／ｍｌまたは１５０ｍｇ／ｍｌの濃度で含む製剤をカニクイザルにＩＴ投与した試験が記載され（【０２１２】～【０２２０】）、このＩ２Ｓ製剤の投与により、臨床的徴候の発生率は最小であったこと（【０２２２】）、髄膜近くの表面での層Ｉから白質に隣接したより深い層ＩＶ内のニューロンに至る脳内ニューロンにおいて、注射されたＩ２Ｓの広範囲な分布が明らかにされたことが記載され（【０２２７】）、毎月の間隔で送達される１５０ｍｇまでの用量でのイズルスルファーゼのＩＴ投与は、副作用を示さず、ＣＮＳのほか、肝臓、腎臓および心臓においても全身的レベルをもたらしたことが記載されている（【０２３４】）。 （ｉｉｉ）実施例５には、組換え体ヒトイズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）製剤を、６．０のｐＨで、１５４ｍＭのＮａＣｌ、０．００５％のポリソルベート２０のビヒクル中で調製かつ製剤化し、非ヒト霊長類に、Ｉ２Ｓの３ｍｇ、３０ｍｇ、または１００ｍｇのいずれかを月単位で、移植した髄腔内腔内ポートによって、６ヶ月間継続して投与したことが記載されている（【０２７８】～【０２７９】）。 実施例５において、ＩＴ投与されたＩ２Ｓは脳室近くの白質脳組織の希突起グリア細胞内で検出され、リソソームへ局在化が確認されたことから、脳の組織の深部に分布することが可能であり、ならびに細胞内局在化が可能であることを確認したとの記載がある（【０２８５】～【０２８６】、図４６）。 また、送達されたＩ２Ｓが生物学的活性を保持しているかどうかを明らかにするために、脳におけるＩ２Ｓのレベルを、比活性アッセイを用いて測定したところ、３０ｍｇおよび１００ｍｇのＩＴ投与動物の脳における酵素活性は、死体解剖時（投与後２４時間）ではベースライン以上であったことが記載されている（【０２８７】）。 （ｉｖ）実施例７には、ハンター症候群の動物モデルとして、イズロン酸－２－スルファターゼノックアウト（ＩＫＯ）マウスモデルを市販のＩ２Ｓ（Ｅｌａｐｒａｓｅ（登録商標））を濃縮し、リン酸塩緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に再懸濁させたＩ２Ｓ濃度２６ｍｇ／ｍｌの製剤でＩ２Ｓの２６０μｇ用量を髄腔内投与で処置したところ、３回目の注射後に、ビヒクル処置マウスに比べてＩ２Ｓ処置マウスで、表面大脳皮質、尾状核、視床および小脳における細胞内空胞化の広範囲の減少が白質で確認されたことが記載されている（【０２９３】～【０２９５】）。 ウ 訂正発明１の医薬組成物の効果について 上記を踏まえ、訂正発明１の医薬組成物の効果につき、検討する。 （ア）Ｉ２Ｓによる治療効果について Ｉ２Ｓを有効成分とする医薬品は、ムコ多糖症II型の治療薬として、本願特許の出願日前である２００６年７月２４日に米国食品医薬品局(ＦＤＡ)で、また２００７年１月８日には欧州医薬品庁（ＥＭＥＡ）で承認され、日本では、２００７年１０月に承認されており（甲８ア）、Ｉ２Ｓがムコ多糖症II型、すなわち、ハンター症候群を治療することのできる生理活性を有するものであることは、本件特許の出願日において、当業者に周知の事項であると認められる。 そして、上記イ（ウ）のとおり、本件特許明細書の実施例１には、ハンター症候群のモデル動物であるＭＰＳ ＩＩマウス（ＩＫＯマウス）に対して、リン酸塩緩衝生理食塩水に対して透析し、濃縮・再懸濁後に濾過滅菌した５１ｍｇ／ｍｌの濃度のＩ２Ｓを髄腔内腔内－腰椎経路で投与すると、脳全体の細胞空胞化の減少、脳の種々の領域において広範囲の組織病理学的改善、脳全体のＬＡＭＰ－１リソソームマーカーの減少、肝臓の形態学的および組織学的マーカーを改善が観察されたことが示され、実施例７にも、ＩＴ投与による脳脊髄液へのＩ２Ｓの注入によって、ＩＫＯマウスの表面大脳皮質、尾状核、視床および小脳における細胞内空胞化の減少が確認されたことが示されている。 そうすると、当業者は、本件特許明細書の記載から、Ｉ２Ｓを脳脊髄液へ注入することにより、脳組織や肝臓において、ハンター症候群に対して治療効果を発揮できることを理解するといえる。 （イ）ＩＳ２の分布と深部組織への浸透について 上記イ（イ）及び（ウ）のとおり、実施例２、実施例５及び実施例６では、Ｉ２Ｓ製剤のＩＣＶ投与及びＩＴ投与のいずれによっても、Ｉ２Ｓが深部脳組織に浸透し、ニューロンで検出されることが示されている。 また、上記イ（ウ）のとおり、実施例５において、ＩＴ投与により、脳におけるＩ２Ｓのレベルを、比活性アッセイを用いて測定したところ、投与後２４時間の３０ｍｇおよび１００ｍｇのＩＴ投与動物の脳における酵素活性は、ベースライン以上であったことが記載されている。 （ウ）製剤の安定性について 上記イ（ウ）のとおり、本件特許明細書の実施例４においては、高タンパク質濃度では、凍結融解ストレスは、生理食塩水含有製剤およびリン酸塩含有製剤の双方で不安定性の問題は発生しなかったことが示されている。タンパク質に結合された残留リン酸塩の量、ならびにタンパク質濃度の増加が、最終製剤におけるｐＨ安定性に関与することが示され、タンパク質に結合して製剤原料中に残留するリン酸塩が生理食塩水製剤が６．０のｐＨを維持していることに寄与していると思われることが記載されている。また、０．００５％ポリソルベート２０は、振盪関連ストレスに対してタンパク質を保護することが記載されている。浸透関連ストレスは、液体状態で製剤を保存運搬する場合にのみ問題となるものであるところ、訂正請求項１を引用して限定する訂正請求項１１に凍結乾燥製剤の態様が記載されるように、訂正発明１の製剤は、必ずしも液体製剤として提供されるものでないことからすると、脳室内等や髄腔内投与により脳脊髄液を介して補充酵素を送達させる製剤に、リン酸塩やポリソルベート２０を敢えて添加しない場合であっても、脳脊髄液への注入に適する安定な製剤が得られることが理解できる。 エ 臨床試験に関する宣誓書について ハンター症候群患者へのイデュルスルファーゼ（Ｉ２Ｓ）のＩＴ投与の臨床試験に関する宣誓書（乙１）には、Ｉ２Ｓ製剤のＩＴ投与により、重篤な有害事象は認められず、またＣＳＦでのＧＡＧレベルの減少がみられ、中等度の罹患患者では、認知障害に対する臨床的有効性の有望な結果が観察されたことが記載されている。明細書において、訂正発明１の組成物のＩＣＶ投与がＩＴ投与と同等の補充酵素の分布をもたらしたことを踏まえると、乙１の臨床試験の結果からも、ヒトの治療に実際にＩＣＶ投与を行った場合に治療効果を示すであろうと推認することができる。 オ 小括 以上のとおり、明細書の記載から、当業者は、Ｉ２Ｓがハンター症候群に対して治療効果を示す酵素であると理解するとともに、脳脊髄液への注入に適する安定な製剤を製造することができ、リソソーム酵素の脳室内投与が、リソソーム蓄積症に対する治療効果を示すこと、脳室内投与及び髄腔内投与がいずれも、製剤中へのリン酸塩やポリソルベート２０の添加の有無を問わず脳の深部組織に治療標的の濃度でリソソーム酵素を送達可能であることを理解するといえる。 そうすると、明細書の記載から、当業者は、訂正発明１の医薬組成物が、安定な製剤であり、ハンター症候群の対象に脳室内投与することで治療効果が得られるものであることを理解するといえる。 よって、発明の詳細な説明の記載は、訂正発明１について、当業者がその実施をすることができる程度に明確かつ十分に記載したものである。 （３）訂正発明２～１２について 以下のように、発明の詳細な説明の記載は、訂正発明２～１２について、当業者がその実施をすることができる程度に明確かつ十分な記載がある。 訂正発明２は、「（ｉ）塩、または、（ｉｉ）ポリソルベート界面活性剤をさらに含む、請求項１に記載の安定製剤。」であるところ、上記（２）イ（ア）のとおり、本件明細書の実施例１などには、塩化ナトリウムやポリソルベート８０を含む製剤が記載されている。 訂正発明３は、「請求項１～２のいずれか一項に記載の安定製剤であって、 （ｉ）前記製剤の前記脳室内投与が、標的脳組織への前記Ｉ２Ｓタンパク質の送達を生じさせ、 （ａ）前記脳標的組織が、白質および／または灰白質内のニューロンを含む、かつ／または、 （ｂ）前記Ｉ２Ｓタンパク質が、ニューロン、グリア細胞、血管周囲細胞および／または髄膜細胞に送達される、 （ｉｉ）前記Ｉ２Ｓタンパク質が、脊髄内のニューロンにさらに送達される、 （ｉｉｉ）前記製剤の前記脳室内投与が、肝臓、腎臓および心臓から選択される末梢標的組織への前記Ｉ２Ｓタンパク質の全身的送達をさらに生じさせる、 （ｉｖ）前記製剤の前記脳室内投与が、脳標的組織、脊髄ニューロンおよび／または末梢標的組織内のリソソーム局在化を生じさせる、 （ｖ）前記製剤の前記脳室内投与が、脳標的組織、脊髄ニューロンおよび／または末梢標的組織内のＧＡＧ蓄積を減少させる、ならびに／または、 （ｖｉ）前記製剤の前記脳室内投与が、ニューロンの空胞化を減少させる、 安定製剤。」 あるところ、上記（２）ウのとおり、実施例において、これらの効果が得られることが確認されて記載されている。 訂正発明４は、「請求項１～３のいずれか一項に記載の安定製剤であって、前記製剤の前記脳室内投与が、脳標的組織、脊髄ニューロンおよび／または末梢標的組織内のＩ２Ｓ酵素活性の増加を生じさせる、安定製剤。」であるところ、本件特許明細書において、訂正発明の製剤のＩＣＶ投与により、脳組織や末梢標的組織である肝臓へのＩ２Ｓの到達が示されていることは、上記（２）ウ（ア）のとおりであり、脳脊髄液を介して送達されたＩ２Ｓが送達部位で酵素活性を有することが示されていることは、上記（２）ウ（イ）のとおりである。 訂正発明５は、「請求項１～４のいずれか一項に記載の安定製剤であって、 （ｉ）前記脳室内投与が、静脈内投与と併せて用いられる、あるいは、 （ｉｉ）前記脳室内投与が、静脈内投与の不在下で用いられる、ならびに／あるいは、 （ｉｉｉ）前記脳室内投与が、２週間に１回、１ヶ月に１回、または、２ヶ月に１回実施される、ならびに／あるいは、 （ｉｖ）前記脳室内投与が、併用の免疫抑制療法の不在下で用いられる、安定製剤。」であるところ、Ｉ２Ｓは、本件特許出願の前に、週１回の静脈注射用の製剤として承認され実用化されていたものであり（甲８ア及び甲８イ）、当業者は静脈注射と脳室内投与を併用することが可能であると理解でき、本件特許明細書の【０１６４】にも、脳室内投与と静脈注射の併用、採用可能な投与間隔について説明する記載がある。 訂正発明６は、「１０ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇ／ｍｌの濃度のイズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）タンパク質と、塩と、ポリソルベート界面活性剤とを含む、脳室内投与のための安定製剤であって、前記製剤は、５．５～７．０のｐＨを有し、かつ、５０ｍＭ以下の濃度のリン酸塩を含む、安定製剤。」であるところ、本件特許明細書には、上記（２）イ（ア）のとおり、実施例１などに、塩化ナトリウムやポリソルベート２０を含む製剤が記載されており、上記（２）イ（イ）及び（ウ）のとおり、当該範囲内の組成を有する製剤を投与した実施例が記載されている。 訂正発明７は、Ｉ２Ｓタンパク質が、３０ｍｇ／ｍｌ、５０ｍｇ／ｍｌ、および１００ｍｇ／ｍｌから選択される濃度で、または、その濃度までで存在するとの特定を有するものであるところ、上記（２）イ（ア）のとおり、本件特許明細書には、Ｉ２Ｓを１００ｍｇ／ｍｌの濃度で含有する製剤の例が記載され、上記（２）イ（イ）及び（ウ）のとおりＩ２Ｓを訂正発明７の範囲内の濃度で含有する製剤を投与した実施例が記載されている。 訂正発明８は、Ｉ２Ｓタンパク質が、配列番号１のアミノ酸配列を含むとの特定が付されたものであるが、Ｉ２Ｓタンパク質が、配列番号１のアミノ酸配列を有するものであることは、本件特許明細書の【００７４】に記載されている。 訂正発明９は、「請求項６～８のいずれか一項に記載の安定製剤であって、前記塩がＮａＣｌである、安定製剤。」、訂正発明１０は、「請求項６～９のいずれか一項に記載の安定製剤であって、前記ポリソルベート界面活性剤が、ポリソルベート２０である、安定製剤。」、訂正発明１１は、「請求項１～１０のいずれか一項に記載の安定製剤であって、前記製剤が液体製剤である、安定製剤。」、訂正発明１２は、「請求項１～１１のいずれか一項に記載の安定製剤の単回投与形態を含む容器。」であるところ、本件特許明細書には、塩化ナトリウムとポリソルベート２０をともに含む液体の製剤を用いた試験が記載されており（【０２８９】～【０２９０】）、液体の医薬組成物を単回投与形態で容器に収容することも当業者にはよく知られた手段である。 （４）まとめ 以上より、訂正発明１～１２についての特許は、無効理由２によって無効とされるべきものでない。 ３ 無効理由３（サポート要件）について 訂正後の特許請求の範囲の記載及び明細書【０００２】～【０００８】の記載から見て、訂正発明の課題は、グリコサミノグリカンの蓄積によりＣＮＳ障害を生じるリソソーム蓄積障害に対して、血液能関門及び脳表面でのバリアの存在などの障害物を克服し、脳に治療薬を有効に送達させることであると認められる。 上記２で検討したとおり、発明の詳細な説明の記載から、当業者は、訂正発明１～１２が、いずれも、脳室内投与により、補充酵素を脳深部組織に有効に送達させ、脳リソソーム蓄積障害を治療することができるものであると理解できる。したがって、訂正発明１～１２は、発明の詳細な説明の記載から、上記の発明の課題を解決可能であると当業者が認識可能な範囲内のものであるから、発明の詳細な説明に記載したものである。 よって、訂正発明１～１２についての特許は、無効理由３によって無効とされるべきものでない。 ４ 無効理由４（新規性）について （１）訂正発明１について ア 甲２に記載された発明 甲２は、リソソーム蓄積症の酵素補充療法に関する特許文献であり（【０００１】）、請求項３８には、「酵素の欠乏により引き起こされるリソソーム蓄積症にかかっている患者を治療する方法であって、前記酵素を脳への脳室内輸送によって患者に投与することを含む方法」が記載されている。また、請求項４３は、請求項３８を引用する形式で記載され、「リソソーム蓄積症がムコ多糖症ＩＩ型であり、前記酵素がイズロン酸－２－スルファターゼである、請求項３８～４０のいずれか一項記載の方法。」と記載されている。 甲２の【００３８】には、脳室内投与する組成物について、適する医薬キャリアとして、例えば、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、他の食塩水、デキストロース溶液、グリセロール溶液、水、ならびに石油、動物、植物、または合成油と一緒に作製された油乳剤を含むこと、また、医薬組成物中のリソソーム加水分解酵素の濃度が、約０．００１重量％から２０重量％以上に変動し得ることが記載されている。 甲２のこれらの記載から、甲２には以下の発明（以下、「甲２発明」という。）が記載されているといえる。 （甲２発明） 「酵素の欠乏により引き起こされるリソソーム蓄積症にかかっている患者を治療するための方法に用いるための組成物であって、リソソーム蓄積症がムコ多糖症ＩＩ型であり、前記酵素がイズロン酸－２－スルファターゼであり、該方法が、前記酵素を脳への脳室内輸送によって患者に投与することを含むものであり、該組成物は、適する医薬キャリアとして、例えば、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、他の食塩水、デキストロース溶液、グリセロール溶液、水、ならびに石油、動物、植物、または合成油と一緒に作製された油乳剤を含み、リソソーム加水分解酵素の濃度が、約０．００１重量％から２０重量％以上に変動し得る組成物。」 イ 対比 ムコ多糖症ＩＩ型は、イズロン酸－２－スルファターゼが欠乏することによる疾患であるところ、これはハンター症候群とも呼ばれる疾患であるから（甲２【０００２】）、訂正発明１と甲２発明との一致点及び相違点は以下のとおりと認められる。 （一致点） ハンター症候群を治療するための製剤であって、前記製剤は対象に脳室内投与されることを特徴とし、前記製剤は、イズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）タンパク質を含む製剤。 （相違点） 訂正発明１は、イズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）タンパク質を５ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇ／ｍｌの濃度で含むとともに、５０ｍＭまでのリン酸塩を含み、かつ該組成物が、５．５～７．０のｐＨを有する安定製剤であることを特徴とするのに対し、甲２発明は、イズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）タンパク質を５ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇ／ｍｌの濃度で含むこと、５０ｍＭまでのリン酸塩を含み、該組成物が、５．５～７．０のｐＨを有する安定製剤であることのいずれも特定されていない点。 ウ 判断 上記イのとおり、訂正発明１と甲２発明の間には相違点がある。 エ 請求人の主張に対して 請求人は、甲２の【００３８】や実施例の記載から、補充酵素を５ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇ／ｍｌの濃度で含む組成物が認定できる旨を主張する。 しかしながら、以下のとおり、請求人の主張は妥当なものではない。 甲２の実施例２（【００５６】～【００５８】）には、ＡＳＭＫＯマウスへの組み換えヒトＡＳＭ（ｒｈＡＳＭ）の連続的注入実験が記載され、凍結乾燥されたｒｈＡＳＭを人工脳脊髄液（ａＣＳＦ）中に溶解させ、０．２５０ｍｇのｈＡＳＭを４日連続で脳室内にカニューレで注入し、合計１ｍｇのｈＡＳＭを注入した結果、ｈＡＳＭの脳室内注入が脳を通じてＳＰＭレベルの全身的な減少を示したことが記載されている。この実施例２には、脳室内投与されたｈＡＳＭの量は記載されていても、組成物中のｈＡＳＭの濃度も組成物の投与液量も記載されていない。なお、甲２の【００５６】には２５０ｍｇとの記載もあるが、実施例２についての表２の記載は「．２５０ｍｇ」であり、甲２に対応する国際公開公報である乙１５の対応する記載も「０．２５０ｍｇ」であることからすると、甲２の記載は【００５６】翻訳の際に誤記（誤訳）が生じたものと認められ、甲２の実施例２における補充酵素の投与量は、０．２５０ｍｇであることが理解できる。 また、甲２の実施例３には、６時間かけて人工脳脊髄液（ａＣＳＦ）中に溶解させたｈＡＳＭが脳室内投与され、その投与量が０．２５０ｍｇ、０．０７５ｍｇ、０．０２５ｍｇ、０．００７５ｍｇであったことが記載されているが、溶液中のｈＡＳＭの濃度も投与液量も記載されていない。 脳室内投与される医薬組成物中の補充酵素の濃度について、甲２には、他にも、具体的に特定した記載はなく、【００３８】において広範な濃度範囲が例示的に記載されるにとどまる。このような甲２の記載から、特定の濃度の補充酵素を含む医薬組成物の発明が記載されているということはできない。 オ 小括 以上より、訂正発明１は、甲２に記載された発明でない。 （２）訂正発明６について 訂正発明６と上記（１）アの甲２発明を対比する。 （一致点） イズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）タンパク質を含む、脳室内投与のための製剤。 （相違点） 訂正発明６は、イズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）タンパク質を５ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇ／ｍｌの濃度で含むとともに、５０ｍＭまでのリン酸塩を含み、かつ該組成物が、５．５～７．０のｐＨを有することを特徴とする安定製剤であるのに対し、甲２発明は、イズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）タンパク質を５ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇ／ｍｌの濃度で含むこと、５０ｍＭまでのリン酸塩を含み、該組成物が、５．５～７．０のｐＨを有する安定製剤であることのいずれも特定されていない点。 訂正発明６と甲２発明との相違点は、上記（１）イの訂正発明１と甲２発明の相違点と同じものであり、上記（１）ウ～オのとおり、当該相違点に係る構成を備える発明が甲２に記載されているとはいえない。 したがって、訂正発明６は、甲２に記載された発明でない。 （３）訂正発明２～３、５、７、９及び１１について 訂正発明２～３、５、７、９及び１１は、訂正発明１又は６をさらに限定して特定した発明であるから、甲２発明との間に上記（１）イ又は（２）イにおける相違点と同様の相違点があることは明らかである。 したがって、訂正発明２～３、５、７、９及び１１も、甲２に記載された発明でない。 （４）まとめ 以上より、訂正発明１～３、５～７、９及び１１についての特許は、無効理由４によって無効とされるべきものでない。 ５ 無効理由５（進歩性）について （１）はじめに ア 甲６の先行技術文献としての適格性についての両当事者主張 請求人が、無効理由５の副引用例として、甲６に基づく主張をしていることに対し、請求人は、甲６が公衆に利用可能となった日が、優先基礎出願の出願日より後であり、優先権主張の利益が認められるから、甲６は先行技術文献としての適格性がない旨を主張しており、両当事者で争いがある。 そこで、進歩性の判断に先立って、まず、この点について以下で検討する。 イ 甲６が公衆に利用可能となった日 甲６の最初の２頁は、INJECTABLE DRUG DELIVERY: FORMULATIONS FOCUS Issue No #19 May 1st, 2010のウェブサイト （ＵＲＬ：https://www.ondrugdelivery.com/magazines/injectable-drug-delivery-2010-formulations-focus/） のプリントアウトであり、３頁以降は、上記ウェブサイトに表示されているｐｄｆダウンロード用のリンク （ＵＲＬ：https://www.ondrugdelivery.com/wp-content/uploads/2018/11/May2010.pdf） からダウンロードされたｐｄｆファイルのプリントアウトであると認められる。（甲６最初の頁、請求人口頭審理陳述要領書１６頁１９行～２３行） 甲６のｐｄｆファイルに対応する部分は、INJECTABLE DRUG DELIVERY:FORMULATIONS FOCUSと題する総説集である。甲６のうち、発行日に関する情報が読み取れるのは、ダウンロード元のウェブサイトに記載された「Issue No #19 May 1st, 2010」（甲６の最初の頁）の部分のみであり、この表示からは、甲６は２０１０年５月１日に発行されたものと解される。 しかしながら、甲６の３２頁（当該号の３０頁と印字されている頁）には、参考文献５として、２０１０年５月２４日にアクセスされたウェブページが記載され、参考文献１１として、２０１０年５月２６日にアクセスされたウェブページが記載されている（なお、甲６の上記記載からみて、被請求人の提出した令和３年４月２７日付け上申書４頁１２行～１５行の「１０の文献は、２０１０年５月２６日にインターネットを通じて利用可能となった文献であることが明記されている。」との記載について、文献の番号「１０」は、「１１」の誤記であると認められる。）。このように、甲６のｐｄｆ部分には、２０１０年５月１日よりも後に入手された情報に関する記載があることからすると、甲６の最初の頁（ウェブサイトの画面）に２０１０年５月１日との表示があっても、甲６のｐｄｆファイルが、２０１０年５月１日に公衆に利用可能であったとただちにいうことはできない。 また、甲６が含まれるＯＮｄｒｕｇＤｅｌｉｖｅｒｙマガジンの発行及び編集担当者である オーナー フレデリック ファーネス出版のガイ ファーネスへの照会結果である乙１２には、ＯＮｄｒｕｇＤｅｌｉｖｅｒｙのウェブサイトでは、甲６である「注射可能なドラッグイデリバリー２０１０：製剤フォーカス」号は、雑誌の各号に番号をつけて日付を付ける正式なシステムを導入する前に発行されたため、公開時期をオンラインで明確に確認できないこと、２０１０年５月号として掲載されているが、この号の植字、編集、校正について議論する２０１０年６月３０日の電子メールがあること、出版可能な発行物の入手可能性に関する電子メールが２０１０年７月２日に送受信されていること、この号のｐｄｆのプロファイルには、２０１０年７月２日の午前９：１０に作成され、同日の午前１０：５１に変更されたことが確認でき、この号が２０１０年７月２日より前には入手可能でなかったことが説明されている（乙１２の本文３段落～５段落）。さらに、甲６のｐｄｆファイルのプロパティを表示した乙２２からも、作成日と更新日が２０１０年７月２日であることが認められる。 これらの甲６のｐｄｆファイルの内容が公衆に利用可能となった日に関する証拠の内容を総合すると、甲６は２０１０年７月２日になってから公衆に利用可能となったと認められる。 ウ 優先権主張の利益について 上記イのとおり、甲６が２０１０年７月２日になってから公衆に利用可能となったものであると認められるのに対し、これより前の優先基礎出願は、２０１０年６月２５日の米国特許出願第６１／３５８，８５７号（基礎出願１、甲１４）と２０１０年７月１日の米国特許出願第６１／３６０，７８６号（基礎出願２、甲１５）である。 基礎出願２の明細書である甲１５の９頁５～２２行には、「本発明は、ＣＮＳ投与用の治療剤を製剤化するための医薬組成物や溶液の緩衝液濃度やｐＨのわずかな変化が、投与される溶液やそこに含まれる治療剤の忍容性やｉｎ ｖｉｖｏの安全性に劇的な影響を与えるという発見に基づいている。本発明の医薬組成物及び製剤は、高濃度の治療剤（例えば、タンパク質又は酵素）を可溶化することができ、そのような治療剤をＣＮＳ成分及び／又は病因に送達するのに適している。本発明の組成物は、それを必要とする対象のＣＮＳに投与された場合（例えば、髄腔内に投与された場合）、安定性が改善され、忍容性が改善されることをさらに特徴とする。」と記載され、本発明が、ＣＮＳ投与のための製剤の緩衝剤濃度及びｐＨの小さな変化が、忍容性及びｉｎ ｖｉｖｏの安全性に劇的な影響を与えるという発見に基づくものであり、本発明の製剤は、治療用酵素を高濃度で製剤化することが可能であることの記載がある。また、甲１５の１２頁の１～１５行の「発明の医薬組成物は、治療薬を脳室内でＣＮＳに送達する（すなわち、脳室に直接投与する）ために使用することもできる。脳室内への投与は、Ｏｍｍａｙａリザーバー又は他の同様のアクセスポートを介して容易に行うことができ、これらのアクセスポートは、脳室内に直接配置されたリードカテーテルとともに、被験者の頭頂部の頭皮と骨膜との間のポケットに移植され得る。また、小脳髄液槽（ｃｉｓｔｅｒｎａ ｍａｇｎａ）も考えられており、これは、小型のネズミでの髄液内又は脳室内投与と比較して物流が容易であることから、例えば動物種で使用することができる。」との記載及び１８頁２６行～１９頁４行の「発明の医薬組成物、製剤、及び関連する方法は、様々な治療剤を対象者のＣＮＳに送達し（例えば、髄腔内、脳室内、又は脳槽内）、関連する疾患の治療に有用である。本発明の医薬組成物は、リソソーム記憶障害を患っている被験者にタンパク質及び酵素を送達する（例えば、酵素置換療法）ために特に有用である。」と記載されるように、甲１５には、当該医薬組成物は、髄腔内のほか、脳室内への直接投与により送達することができるものであることが記載されている。そして、投与されたリソソーム酵素は、甲１５の図２に示されるように、脳深部組織の一つである尾状核（caudate nucleus）の神経細胞に分布することが示されている。甲１５の図１に示されるように、ＩＣＶ注射は脳室空間に直接注射するのに対し、ＩＴ注射は脊髄に注射する。たとえば、甲２の【００３４】にも記載されるように、脳脊髄液（ＣＳＦ）が脳室を満たし、脳と脊髄を取り囲んでおり、ＩＣＶとＩＴでは、異なる注入部位を介して同じＣＳＦに注入されることは、基礎出願２の出願時において周知の事項であったことも考慮すると、甲１５の上記記載に接した当業者は、甲１５に記載されている処方がＩＴとＩＣＶの両方に適用されると理解する。 甲１５には、医薬組成物のタンパク質の濃度として、「少なくとも５０ｍｇ／ｍｌ、・・・、少なくとも３０ｍｇ／ｍｌ、・・・、少なくとも１０ｍｇ／ｍｌ少なくとも５ｍｇ／ｍｌ」という記載があり（甲１５の２３頁７～１４行）、医薬組成物のｐＨ及びリン酸塩濃度が「低ｐＨ及び低リン酸塩濃度」であることが記載され（甲１５の５頁１～３行)、「約１０ｍＭ未満、約２０ｍＭ未満又は約３０ｍＭ未満のリン酸塩」の実施態様の記載がある（甲１５の５頁５～８行）。また、甲１５には、ＣＮＳ送達に適した製剤を実現するために必要な組成とｐＨの関係についても記載され、実施例３では、動物実験に基づいて、「リン酸塩濃度が低く、ｐＨが５．５～７．０の製剤は、良好な忍容性を示した」と記載され、５ｍＭのリン酸ナトリウム、１４５ｍＭの塩化ナトリウム、０．００５％のポリソルベート２０を含むｐＨ７．０のビヒクルが特に溶解性及び安定性に優れ、このビヒクルによってタンパク質１４ｍｇを１．０ｍＬ中に含む製剤を調製して４回の髄腔内投与を行ったところ、臨床上有害な兆候は見られなかったことが記載され、図５に示すように、「ＣＮＳ－Ｔｏｌｅｒａｔｅｄ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ」の処方設計空間が定義されたと結論づけるとともに、ＣＮＳへのタンパク医薬の送達のためには、医薬組成物が適切な溶解性、忍容性、安定性のバランスがとれたものとする必要であると記載している（甲１５の２７頁６行～２８頁３行、図５、図６）。 ＩＣＶ注射とＩＴ注射は、両方とも脳脊髄液に治療用酵素を直接注入する投与方法であり、基礎出願１、２の第５頁及び請求項４１及び８４には、治療用酵素として、イズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）が記載され、請求項４９及び５４に疾患としてハンター症候群についても記載されていることから、基礎出願１、２の明細書には、ハンター症候群のための治療用酵素のであるイズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）のＩＣＶ注射とＩＴ注射の両方を対象とする記載があると認められる。 これらの基礎出願２の明細書の記載全体から、訂正発明が、当該明細書に記載されているといえるから、本件特許出願は、基礎出願２に基づく優先権主張の利益を享受することができる。したがって、甲６は、本件特許出願に対する特許法第２９条の先行技術文献とはならない。 そこで、以下の無効理由５ａ、５ｂの判断において、甲６は除外して検討する。 （２）無効理由５ａについて 無効理由５ａは、請求人が請求項１～１２について主張した、甲２を主引用例とする進歩性欠如の無効理由である。 ア 訂正発明１について （ア）甲２発明 上記４（１）アで認定した甲２発明を再掲する。 （甲２発明） 「酵素の欠乏により引き起こされるリソソーム蓄積症にかかっている患者を治療するための方法に用いるための組成物であって、該方法が、前記酵素を脳への脳室内輸送によって患者に投与することからなり、前記リソソーム蓄積症がムコ多糖症ＩＩ型であり、前記酵素がものである、組成物であって、適する医薬キャリアとして、例えば、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、他の食塩水、デキストロース溶液、グリセロール溶液、水、ならびに石油、動物、植物、または合成油と一緒に作製された油乳剤を含み、リソソーム加水分解酵素の濃度が、約０．００１重量％から２０重量％以上に変動し得る組成物。」 （イ）対比 上記４（１）イで認定した訂正発明１と甲２発明の一致点及び相違点を再掲する。 （一致点） ハンター症候群を治療するための製剤であって、前記製剤は対象に脳室内投与されることを特徴とし、前記製剤は、イズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）タンパク質を含む製剤。 （相違点） 訂正発明１は、イズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）タンパク質を５ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇ／ｍｌの濃度で含むとともに、５０ｍＭまでのリン酸塩を含み、かつ該組成物が、５．５～７．０のｐＨを有する安定製剤であることを特徴とするのに対し、甲２発明は、イズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）タンパク質を５ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇ／ｍｌの濃度で含むこと、５０ｍＭまでのリン酸塩を含み、該組成物が、５．５～７．０のｐＨを有する安定製剤であることのいずれも特定されていない点。 （ウ）判断 （ｉ）相違点に関する甲２の記載について 甲２発明の組成物は、適する医薬キャリアとして、リン酸塩を含む緩衝液であるリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）を使用可能なものであるが、そのｐＨについて、甲２には記載されていない。また、甲７には、医薬品製剤に用いる緩衝液は、米国薬局方に挙げられたものから選択されるべきであるとして、そのうちのいくつかの緩衝液が示されているが、甲７に記載されているリン酸緩衝液のｐＨは６．２～８．２であるから、技術常識を考慮しても、ただちに甲２発明の組成物をｐＨ５．５～７．０とすることに到達するとはいえない。 さらに、甲２の記載全体を検討しても、以下のとおり、甲２発明の脳室内投与のための組成物を、補充酵素を５ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇ／ｍｌの濃度で含むこと、５０ｍＭまでのリン酸塩を含み、該組成物が、５．５～７．０のｐＨを有するとすることは、当業者が容易に想到し得たということはできない。 上記４（１）エのとおり、甲２の請求項３８の実施の態様として、実施例２（【００５６】～【００５８】）には、ＡＳＭＫＯマウスへの組み換えヒトＡＳＭ（ｒｈＡＳＭ）の連続的注入実験が記載され、凍結乾燥されたｒｈＡＳＭを人工脳脊髄液（ａＣＳＦ）中に溶解させ、０．２５０ｍｇのｈＡＳＭを４日連続で脳室内にカニューレで注入し、合計１ｍｇのｈＡＳＭを注入した結果、ｈＡＳＭの脳室内注入が脳を通じてＳＰＭレベルの全身的な減少を示したことが記載されていると認められる。 甲２の実施例２で用いられた人工脳脊髄液（ａＣＳＦ）に関し、甲２０には、代表的な人工脳脊髄液であるエリオットのＢ溶液が、１０ｍＬ中にリン酸塩である二リン酸ナトリウム７水和物２ｍｇを含み、リン酸の濃度が１．５ｍＥｑ／Ｌであり、ｐＨ６．０～７．５であることが記載されている。リン酸は３価の酸であるから、エリオットのＢ溶液のリン酸塩の濃度は、０．５ｍＭであり、５０ｍＭまでの範囲内にあると認められる。これを考慮すると、甲２の実施例２の人工脳脊髄液（ａＣＳＦ)が、代表的なエリオットのＢ溶液とした場合に請求項３８の具体的な実施の態様として、０．５ｍＭのリン酸塩を含む組成物が想定されるということはできる。しかし、そのｐＨは、訂正発明１とのｐＨ値は一部重複するものの、その範囲としてｐＨ７をこえ７．５までの範囲も含むものであって、訂正発明１におけるｐＨ５．５～７．０とは相違する。 上記４（１）エのとおり、甲２の実施例２にも、別の実施例である実施例３にも、溶液中のｈＡＳＭの濃度や投与液量の記載がなく、甲２の記載は、脳室内投与される医薬組成物中の補充酵素の濃度について、【００３８】において広範な濃度範囲が例示的に記載されるにとどまるものである。 また、リソソーム酵素をはじめとするタンパク質を含む医薬組成物の投与により免疫原性の問題が生じ得ることは技術常識である（乙５（乙２４）１７２頁左欄８～３４行及び１７３頁左欄６～２４行）。タンパク質は高濃度では凝集する傾向があること、及び、凝集タンパク質は免疫原性が高まることは、本件特許出願の優先日における技術常識であると認められる（乙７（乙２５）の１３９３頁右欄３～２９行、乙８の１５５頁２２～３１行、乙９の４１頁右欄１～２６行）。そして、本件特許明細書に記載の実施例１によれば、Ｉ２Ｓについては、タンパク質に結合された残留リン酸塩の量、ならびにタンパク質濃度の増加が、最終製剤におけるｐＨ安定性に関与することが示され、タンパク質に結合して製剤原料中に残留するリン酸塩が生理食塩水製剤のｐＨの維持に寄与し、製剤を安定に保つという技術的意義を有するものであると認められるところ、甲２には、Ｉ２Ｓを含む脳室内投与のための医薬組成物について、免疫原性の問題を回避することのできる製剤に関する記載もない。 したがって、組成物中の酵素濃度を甲２に示される広範な濃度範囲のうち、５ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇとすること、及び、５０ｍＭまでのリン酸塩を含み、該組成物が、５．５～７．０のｐＨを有する安定製剤とすることを、当業者が容易に想到し得るとはいえない。 （ｉｉ）相違点に関する他の証拠の記載について また、以下のとおり、甲３～５、７～１０のいずれの記載によっても、甲２発明について、イズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）タンパク質を５ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇ／ｍｌの濃度で含むとともに、５０ｍＭまでのリン酸塩を含み、該組成物が、５．５～７．０のｐＨを有する安定製剤であるという相違点に係る構成を備えるものに変更することが、当業者が容易になし得たことであるとはいえない。 甲３には、「典型的な医薬組成物は１００ｍＭリン酸ナトリウム、１５０ｍＭＮａＣｌおよび０．００１％ポリソルベート８０を含む緩衝液中に０．５８／ｍＬのイズロニダーゼを含む緩衝液中で調製される」（[００２１］）、「本組成物は、例えば約１０～５０ｍＭの濃度でリン酸ナトリウムを含む緩衝液中などのように、緩衝液の形状であってもよい。」（［００２２］）との記載があるが、甲３には、具体的なｐＨの範囲については記載されておらず、医薬組成物中の補充酵素の濃度としては、訂正発明１における５ｍｇ／ｍＬ～１００ｍｇ／ｍＬよりもはるかに低濃度である０．５８／ｍＬが例示されるのみである。 甲４には、ガラクトシルセレブロシダーゼ（ＧＡＬＣ）１０ｍｇ／ｍｌ、マンニトール１７０ｍＭ、クエン酸ナトリウム５０ｍＭ、およびＴｗｅｅｎ８０ １００ｍｇ／ｍＬの組成を有する脳室内投与するための組成物が記載されているが（２５２１頁左欄２７～３７行）、当該組成物は、Ｉ２Ｓ、リン酸塩を含むものではなく、甲２発明の組成物を５ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇ／ｍｌの濃度の該補充酵素と、５０ｍＭまでのリン酸塩を含み、ｐＨ５．５～７．０とすることについて、何ら示唆を与えるものではない。 甲５には、ｒｈＡＳＢを５ｍｇ／ｍｌの濃度で含むｒｈＡＳＢ調製物をエリオット社のＢ溶液で１：２の比率で希釈して髄腔内注射に用いたことが記載され（１３３頁右欄 Materials and methodsのEnzyme preparation）、脳脊髄液中へ投与する製剤である髄腔内注射用の組成物中のｒｈＡＳＢ濃度を、５ｍｇ／ｍｌから、その１／３の濃度に低下させたことが理解できる。そうすると、甲５の記載は、補充酵素の濃度を５ｍｇ／ｍｌ以上とすることに対する示唆を与えるものであるとはいえない。また、甲２１によれば、エリオット社のＢ溶液は、ｐＨ６．０～７．５であるから、甲５の記載は、訂正発明１のｐＨ範囲であるｐＨ５．５～７．０に保つことに対する示唆を与えるものでもない。 甲７は、タンパク質の製剤化に関する総説であり、甲２発明の組成物のｐＨを訂正発明１における５．５～７．０とすることに対する示唆を与えるものでないことは、既に上記で検討したとおりである（甲７の３２４頁）。 甲８は、日本で販売されているエラプレース点滴静注液の医薬品インタビューフォームである。、当該医薬品は、１バイアル３ｍｌ中にイデュルスルファーゼを６．０ｍｇ含むものであるから、脳室内投与とは異なる静脈注射用の製剤であって、そのタンパク質濃度は、２．０ｍｇ／ｍｌであり、５ｍｇ／ｍｌに満たず、注射に際しては、患者の体重あたりで計算した必要量を取り、生理食塩水１００ｍＬで希釈するとされることからすると、注射される医薬組成物中の補充酵素の濃度は、５ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇ／ｍｌの濃度範囲をはるかに下回る。したがって、甲８の記載は、甲３発明を５ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇ／ｍｌの濃度の該補充酵素と、５０ｍＭまでのリン酸塩を含み、かつ該組成物が、５．５～７．０のｐＨを有するものとすることに対する示唆を与えるものではない。 甲９は、ポリペプチドの濃縮技術に関する特許文献であり（請求項１）、【０００７】には、リソソーム酵素であるアリールスルファターゼやガラクトシルセレブロシダーゼなどを５０～３００ｍｇ／ｍｌで含む医薬組成物に関する記載があるが、これは皮下注射のためのもので、甲９には、脳室内投与のための医薬組成物については何ら記載されていない。したがって、甲９は、甲２発明の脳室内投与のための医薬組成物に何らかの変更を加えることに対する示唆を与えるものではない。 甲１０は、静脈注射や皮下注射に使われる生理食塩水「マイラン」の添付文書であり、補充酵素を含まない製剤に関するものであるから（甲１０の１～２頁）、甲２発明の脳室内投与のための医薬組成物に何らかの変更を加えることに対する示唆を与えるものではない。 （ｉｉｉ）請求人の主張について 請求人は、また、令和３年５月２５日付け上申書において、以下の主張をしている。「甲２の実施例２には、マウス投与量として１０ｍｇ／ｋｇと記載されており、ＦＤＡガイドライン（甲第２３号証）によれば、マウス投与量を１２．３で除することでヒト投与量に換算できる。そうすると、マウス投与量１０ｍｇ／ｋｇはヒト投与量０．８ｍｇ／ｋｇと換算でき、６０ｋｇ成人の場合の投与量は４８ｍｇとなる。さらに、甲６には、ヒトへの脳室内投与における投与堆積（審決注：原文のまま）は３ｍＬ以下に制限されることが記載されている。よって、仮に甲２の実施例に記載のマウス投与量をヒト投与量に換算し、３ｍＬで投与しようとすると、組成物の酵素濃度は１６ｍｇ／ｍＬとなる。この点からも、甲２発明の組成物の酵素濃度を訂正発明の範囲に調整することは、当業者にとって適宜選択し得た事項にすぎない。」（令和３年５月２５日付け上申書１８頁６行～１５行） 請求人の上記主張は、甲６の記載を根拠にヒトへの脳室内投与における投与堆積は３ｍＬ以下に制限されることを前提とするが、上記５（１）のとおり、甲６は、本件特許出願に対する特許法第２９条の先行技術文献とはならないので、請求人の主張は前提を欠いている。また、仮に、ヒトへの脳室内投与における投与体積は３ｍＬ以下に制限されることが、本件特許出願の優先日における技術常識であり、甲４３に記載の換算式によって、甲２の実施例に記載のマウス投与量をヒト投与量に換算した補充酵素を３ｍＬで投与する場合の酵素濃度が１６ｍｇ／ｍＬとなるとしても、上記（ｉ）のとおり、訂正発明１は、５０ｍＭまでのリン酸塩濃度とｐＨ５．５～７．０の製剤は、中枢神経を囲む脳脊髄液への投与において、良好な忍容性を示すという技術的意義を有するものであると認められるところ、上記（ｉ）および（ｉｉ）のとおりであるから、甲３～１０の記載によっても、甲２発明の医薬組成物を、５ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇ／ｍｌの補充酵素を含み、５０ｍＭまでのリン酸塩を含む脳室内投与のための医薬組成物のｐＨをｐＨ５．５～７．０とすることは、当業者が容易になし得たとはいえない。 また、請求人は、甲２５に、１０、３０、又は１００ｍｇのイデュルスルファーゼを髄腔内投与する臨床試験についての記載があることを根拠に、高濃度の補充酵素を髄腔内投与する臨床試験プロトコルが本件特許出願の優先日前に当業者に知られていたから、これを踏まえ、甲５及び甲６に記載された事項を参照して、甲２～甲３のいずれかに記載の発明の組成物の酵素濃度やリン酸塩濃度、ｐＨを訂正発明の範囲に調整することは、当業者にとって適宜選択できる事項にすぎず、容易想到であった旨を主張する（令和３年５月２５日付け請求人上申書１６頁２～１５行）。 しかしながら、甲２５には、補充酵素の濃度は明らかにされていないし、また、仮に、請求人の主張するとおり、甲２５の臨床試験で使用された製剤が高濃度の補充酵素を含む髄腔内投与のための製剤であるとしても、当該製剤が含む添加剤や、製剤のｐＨは不明である。甲５には、ｒｈＡＳＢを５ｍｇ／ｍｌの濃度で含むｒｈＡＳＢ調製物をエリオット社のＢ溶液で１：２の比率で希釈して髄腔内注射に用いたことが記載されており、甲２０によれば、エリオット社のＢ溶液は、ｐＨ６．０～７．５であるから、甲５の記載は、訂正発明１のｐＨ範囲であるｐＨ５．５～７．０に保つことに対する示唆を与えるものでもない。また、甲６は、上記（１）のとおり、本件特許の先行技術文献とはならないものである。 そして、本件特許明細書に記載の実施例１によれば、Ｉ２Ｓについては、タンパク質に結合された残留リン酸塩の量、ならびにタンパク質濃度の増加が、最終製剤におけるｐＨ安定性に関与することが示され、タンパク質に結合して製剤原料中に残留するリン酸塩が生理食塩水製剤のｐＨの維持に寄与し、製剤を安定に保つという技術的意義を有するものであると認められるところ、甲２発明のＩ２Ｓを含む脳室内投与のための医薬組成物について、タンパク質を高濃度に含み安定化された製剤を免疫原性の問題を回避することのできる製剤に関する記載もない。 （エ）小括 以上のとおり、甲２、３～５、７～１０のいずれも、甲２発明の組成物として、訂正発明１に規定される、ｐＨ５．５～７．０であり、酵素濃度５ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇ／ｍｌ及び５０ｍＭまでのリン酸塩を含むという、特定の液性と組成を備えるようにすることの動機付けを与えるものであるとはいえない。 したがって、訂正発明１は、甲２、又は甲２及び甲３～５、７～１０に記載された発明に基いて、当業者が容易に発明をすることができたものでない。 イ 訂正発明６について 訂正発明６と上記４（１）アで認定した甲２発明を対比する。 （一致点） イズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）タンパク質を含む、脳室内投与のための製剤。 （相違点） 訂正発明６は、イズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）タンパク質を５ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇ／ｍｌの濃度で含むとともに、５０ｍＭまでのリン酸塩を含み、かつ該組成物が、５．５～７．０のｐＨを有することを特徴とする安定製剤であるのに対し、甲２発明は、イズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）タンパク質を５ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇ／ｍｌの濃度で含むこと、５０ｍＭまでのリン酸塩を含み、該組成物が、５．５～７．０のｐＨを有する安定製剤であることのいずれも特定されていない点。 訂正発明６と甲２発明との相違点は、上記ア（イ）の訂正発明１と甲２発明の相違点と同じものであり、上記ア（ウ）のとおり、当該相違点に関し、甲２、３～５、７～１０のいずれも、甲２発明の組成物として、訂正発明１に規定される、ｐＨ５．５～７．０であり、酵素濃度５ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇ／ｍｌ及び５０ｍＭまでのリン酸塩を含むという、特定の液性と組成を備えるようにすることの動機付けを与えるものであるとはいえない。 したがって、訂正発明６は、甲２、又は甲２及び甲３～５、７～１０に記載された発明に基いて、当業者が容易に発明をすることができたものでない。 ウ 訂正発明２～５及び７～１２について 訂正発明２～５及び７～１２は、訂正発明１又は６をさらに限定して特定した発明である。そうすると、上記アのとおり、訂正発明１が甲２、又は甲２及び甲３～５、７～１０に記載された発明に基いて、当業者が容易に発明をすることができたものでなく、上記イのとおり、訂正発明６が甲２、又は甲２及び甲３～５、７～１０に記載された発明に基いて、当業者が容易に発明をすることができたものでないのであるから、訂正発明２～５及び７～１２が甲２、又は甲２及び甲３～５、７～１０に記載された発明に基いて、当業者が容易に発明をすることができたものでないことは明らかである。 エ まとめ 以上より、訂正発明１～１２についての特許は、無効理由５ａによって無効とされるべきものでない。 （３）無効理由５ｂについて 無効理由５ｂは、請求人が請求項１～１３について主張した、甲３を主引用例とする進歩性欠如の無効理由である。 ア 訂正発明１について （ア）甲３発明 甲３は、酵素補充療法によるリソソーム蓄積障害に対する治療において、中枢神経系へより効率的に活性物質を到達できる投与方法の提供を課題とし(［００１１］）、リソソーム蓄積症を治療する方法であって、リソソーム蓄積症において欠損もしくは欠乏しているタンパク質を含む医薬組成物を、髄腔内投与によって脳脊髄液内に送達することを含む態様が記載されている（［００１３］）。甲３における髄腔内投与とは、側脳室内注射を含む技術によって脳性気随液へ医薬組成物を直接送達することを含むことを意図するものであることが記載されている（[００９４］）。 甲３のクレーム１には、哺乳動物においてリソソーム蓄積症を治療するための方法であって、前記リソソーム蓄積症において欠損している酵素を含む医薬組成物を、前記リソソーム蓄積症の症状を改善するために有効な量で前記哺乳動物の中枢神経系に髄腔内投与するステップを含む方法が記載され、クレーム２１には、前記髄腔内投与が、前記医薬組成物を脳室内へ導入するステップを含む、クレーム１に記載の方法が記載されている。 甲３には、補充される酵素として、イズロニダーゼ、β－グルクロニダーゼ、イズロン酸スルファターゼ、α－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼ、アリールスルファターゼ、グルコセレブロシダーゼ、βーグルコシダーゼもしくはＮ－アセチルガラクトサミン４－スルファターゼが記載されている（[００１５］）。 そして、実施例２には、リソソーム蓄積障害であるＭＰＳ Ｉのラットおよびイヌモデルに対して、ヒトイズロニダーゼを脳室内投与し、注射された酵素が脳ニューロンに取り込まれ、イズロニダーゼがニューロン細胞のリソソームへ局在することを証明した実験が記載され（［０１３３］～［０１３５］）、この記載は、クレーム２１に記載された発明を裏付けるものであるといえる。 甲３の実施例２の記載から、甲３には以下の発明（以下、「甲３発明」という。）が記載されているといえる。 （甲３発明） 「ＭＰＳ Ｉのラットモデルに酵素を脳室内投与するための組換えヒトイズロニダーゼ（ｒｈＩＤＵ）を含む組成物。」 （イ）対比 ＭＰＳ Ｉのラットモデルは、ハンター症候群のモデルであり、また、イズロニダーゼ（ｒｈＩＤＵ）は、イズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）と同じものである（甲８ア）。上記（ア）のとおり、引用発明は、甲３のクレーム２１を裏付ける実験において用いられた組成物であって、ハンター症候群に対するヒトイズロニダーゼ（ｒｈＩＤＵ）の治療効果を得るための組成物に相当する。そうすると、訂正発明１と甲３発明との一致点及び相違点は以下のとおりと認められる。 （一致点） ハンター症候群を治療するための製剤であって、前記製剤は対象に脳室内投与されることを特徴とし、前記製剤は、イズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）タンパク質を含む製剤。 （相違点） 訂正発明１は、５０ｍＭ以下の濃度のリン酸塩を含み、前記製剤が５．５～７．０のｐＨを有することをさらに特徴とする、安定製剤であるのに対し、甲３発明は、５０ｍＭ以下の濃度のリン酸塩を含み、前記製剤が５．５～７．０のｐＨを有することをさらに特徴とする、安定製剤であるとは特定されていない点。 （ウ）判断 （ｉ）相違点に関する甲３の記載について 甲３には、「典型的な医薬組成物は１００ｍＭリン酸ナトリウム、１５０ｍＭＮａＣｌおよび０．００１％ポリソルベート８０を含む緩衝液中に０．５８／ｍＬのイズロニダーゼを含む緩衝液中で調製される」（[００２１］）、「本組成物は、例えば約１０～５０ｍＭの濃度でリン酸ナトリウムを含む緩衝液中などのように、緩衝液の形状であってもよい。」（［００２２］）との記載がある。 このように、甲３には、補充酵素を含む医薬組成物がリン酸塩を含む緩衝液である実施態様に関する記載があるが、具体的なｐＨの範囲については記載されておらず、実施例で用いた組成物についても、緩衝液の成分やｐＨは記載されていない。また、甲３には、医薬組成物中の補充酵素の濃度としては、０．５８／ｍＬが例示されるのみである。 そして、甲３と同時期の２００４年に発行された論文である乙５には、酵素の髄腔内投与は、タンパク質が抗体形成や炎症反応といった免疫応答のリスクを有することが記載されている（乙５（乙２４）の１７２頁左欄８～３４行）。また、タンパク質は高濃度では凝集する傾向があり、凝集タンパク質は免疫原性が高まることは、本件特許出願の優先日における技術常識であると認められる（乙７（乙２５）の１３９３頁右欄３～２９行、乙８の１５５頁２２～３１行、乙９の４１頁右欄１～２６行）。 甲３においても、「組換えタンパク質および他の治療薬などの物質の投与中は、被験者は、これらの物質に対する免疫応答を開始する可能性があり、これにより、結合して治療活性を抑制するだけでなく急性もしくは慢性免疫学的応答を誘発する抗体が産生されることが見出されている。この問題は、タンパク質が複雑な抗原であり、そして多くの場合に、該被験者が免疫学的に該抗原投与を受けていないために、タンパク質である治療薬にとって最も重要である。そこで、本発明の所定の態様では、治療酵素を摂取している被験者を酵素補充療法に対して寛容化させることが有用かもしれない。この状況では、酵素補充療法は、寛容化レジメンとの併用療法として被験者に投与することができる。」（[００８８］）と記載され、補充酵素による免疫応答の問題を回避すべきことが記載されている。 このような技術常識と甲３の記載を踏まえると、脳室内投与に用いる医薬組成物の補充酵素の濃度を高濃度とすることを示唆する記載もない甲３において、［００２１］に例示された０．５８／ｍＬから、敢えて免疫応答の危険が増す高濃度に変更することを当業者が考えるとはいえない。 したがって、甲３発明を、５ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇ／ｍｌの濃度の該補充酵素と、５０ｍＭまでのリン酸塩を含み、かつ該組成物が、５．５～７．０のｐＨを有するものとすることは、当業者が容易になし得たことであるとはいえない。 （ｉｉ）相違点に関する他の証拠の記載について また、以下のとおり、甲２、４、５、７～１０のいずれの記載によっても、甲３発明について、イズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）タンパク質を５ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇ／ｍｌの濃度で含むとともに、５０ｍＭまでのリン酸塩を含み、該組成物が、５．５～７．０のｐＨを有する安定製剤であるという相違点に係る構成を備えるものとすることが、当業者が容易になし得たことであるとはいえない。 甲２の記載から、脳室内投与のための医薬組成物について、補充酵素を５ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇ／ｍｌの濃度で含むこと、５０ｍＭまでのリン酸塩を含み、該組成物が、５．５～７．０のｐＨを有するものとすることを当業者が容易に想到し得たということはできないことは、上記（３）ア（ウ）（ｉ）のとおりである。 甲４には、ガラクトシルセレブロシダーゼ（ＧＡＬＣ）１０ｍｇ／ｍｌ、マンニトール１７０ｍＭ、クエン酸ナトリウム５０ｍＭ、およびＴｗｅｅｎ８０ １００ｍｇ／ｍＬの組成を有する脳室内投与するための組成物が記載されているが、上記（２）ア（ウ）（ｉ）のとおり、当業者は、甲４発明の５０ｍＭクエン酸ナトリウムを、５０ｍＭまでのリン酸塩に置き換えられるとは考えないから、甲４の記載によって、甲３発明の組成物を５ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇ／ｍｌの濃度の該補充酵素と、５０ｍＭまでのリン酸塩を含み、かつ該組成物が、５．５～７．０のｐＨを有するものとすることが容易想到であるとはいえない。 甲５には、ｒｈＡＳＢを５ｍｇ／ｍｌの濃度で含むｒｈＡＳＢ調製物をエリオット社のＢ溶液で１：２の比率で希釈して髄腔内注射に用いたことが記載され、脳脊髄液中へ投与する製剤である髄腔内注射用の組成物中のｒｈＡＳＢ濃度を、５ｍｇ／ｍｌから、その１／３の濃度に低下させたことが理解できる。また、甲２１によれば、エリオット社のＢ溶液はｐＨ６．０～７．５であり、訂正発明１における医薬組成物のｐＨ５．５～７．０とはｐＨの範囲が異なる。そうすると、甲５の記載は、甲３発明の組成物を、５ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇ／ｍｌの濃度の該補充酵素と、５０ｍＭまでのリン酸塩を含み、かつ該組成物が、５．５～７．０のｐＨを有するものとすることに対する示唆を与えるものであるとはいえない。 甲７は、タンパク質の製剤化に関する総説であり、一般的な緩衝液が記載されているだけであり（甲７の３２５頁）、甲３発明の組成物を５ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇ／ｍｌの濃度の該補充酵素と、５０ｍＭまでのリン酸塩を含み、かつ該組成物が、５．５～７．０のｐＨを有するものとすることに対する示唆を与えるものでない。 甲８は、日本で販売されているエラプレース点滴静注液の医薬品インタビューフォームである。当該医薬品は、１バイアル３ｍｌ中にイデユルスルファーゼを６．０ｍｇ含むものであるから、当該製剤は、脳室内投与とは異なる静脈注射用の製剤であって、そのタンパク質濃度は、２．０ｍｇ／ｍｌであり、５ｍｇ／ｍｌに満たず、注射に際しては、患者の体重あたりで計算した必要量を取り、生理食塩水１００ｍＬで希釈するとされることからすると、注射される医薬組成物中の補充酵素の濃度は、５ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇ／ｍｌの濃度範囲をはるかに下回る。したがって、甲８の記載は、甲３発明を５ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇ／ｍｌの濃度の該補充酵素と、５０ｍＭまでのリン酸塩を含み、かつ該組成物が、５．５～７．０のｐＨを有するものとすることに対する示唆を与えるものではない。 甲９は、ポリペプチドの濃縮技術に関する特許文献であり（請求項１）、【０００７】には、リソソーム酵素であるアリールスルファターゼやガラクトシルセレブロシダーゼなどを５０～３００ｍｇ／ｍｌで含む医薬組成物に関する記載がある。しかし、甲９に記載されている医薬組成物は皮下注射のためのものである。甲９には、脳室内投与のための医薬組成物については何ら記載されておらず、皮下注射では、皮下組織に薬剤が直接注射されるのに対し、脳室内注射では、緩衝能が低い脳脊髄液中に薬物が注入されるという相違があり、甲９の医薬組成物の濃度を甲３発明の脳室内投与のための医薬組成物にただちに適用できるとはいえない。 甲１０は、静脈注射や皮下注射に使われる生理食塩水「マイラン」の添付文書であり、補充酵素を含まない製剤に関するものであるから（甲１０の１～２頁）、甲３発明の脳室内投与のための医薬組成物に何らかの変更を加えることに対する示唆を与えるものではない。 （ｉｉｉ）請求人の主張について 上記（２）ア（ウ）（ｉｉｉ）のとおり、請求人は、甲２５に、１０、３０、又は１００ｍｇのイデュルスルファーゼを髄腔内投与する臨床試験についての記載があることを根拠に、高濃度の補充酵素を髄腔内投与する臨床試験プロトコルが本件特許出願の優先日前に当業者に知られていたから、これを踏まえ、甲５及び甲６に記載された事項を参照して、甲２～甲３のいずれかに記載の発明の組成物の酵素濃度やリン酸塩濃度、ｐＨを訂正発明の範囲に調整することは、当業者にとって適宜選択できる事項にすぎず、容易想到であった旨を主張するが、甲２５の内容を参酌しても、請求人が主張するように、甲３に記載の発明の組成物の酵素濃度やリン酸塩濃度、ｐＨを訂正発明１の範囲に調整することが、当業者にとって容易想到であったということはできない。 （エ）小括 以上のとおり、甲３、２、４、５、７～１０のいずれも、甲３発明の組成物として、訂正発明１に規定される、ｐＨ５．５～７．０であり、酵素濃度５ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇ／ｍｌ及び５０ｍＭまでのリン酸塩を含むという、特定の液性と組成を備えるようにすることの動機付けを与えるものであるとはいえない。 したがって、訂正発明１は、甲３及び甲２、４、５、７～１０に記載された発明に基いて、当業者が容易に発明をすることができたものでない。 イ 訂正発明６について 訂正発明６と、上記ア（ア）の甲３発明を対比する。 （一致点） イズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）タンパク質を含む製剤。 （相違点） 訂正発明１は、５０ｍＭ以下の濃度のリン酸塩を含み、前記製剤が５．５～７．０のｐＨを有することをさらに特徴とする、安定製剤であるのに対し、甲３発明は、５０ｍＭ以下の濃度のリン酸塩を含み、前記製剤が５．５～７．０のｐＨを有することをさらに特徴とする、安定製剤であるとは特定されていない点。 訂正発明６と甲３発明との相違点は、上記ア（イ）の訂正発明１と甲３発明の相違点と同じものであり、上記ア（ウ）のとおり、当該相違点に関し、甲２、４、５、７～１０のいずれも、甲２発明の組成物として、訂正発明１に規定される、ｐＨ５．５～７．０であり、酵素濃度５ｍｇ／ｍｌ～１００ｍｇ／ｍｌ及び５０ｍＭまでのリン酸塩を含むという、特定の液性と組成を備えるようにすることの動機付けを与えるものであるとはいえない。 したがって、訂正発明６は、甲３及び甲２、４、５、７～１０に記載された発明に基いて、当業者が容易に発明をすることができたものでない。 ウ 訂正発明２～５及び７～１２について 訂正発明２～５及び７～１２は、訂正発明１又は６をさらに限定して特定した発明である。そうすると、上記アのとおり、訂正発明１が甲３及び甲２、４、５、７～１０に記載された発明に基いて、当業者が容易に発明をすることができたものでなく、上記イのとおり、訂正発明６が甲３及び甲２、４、５、７～１０に記載された発明に基いて、当業者が容易に発明をすることができたものでないのであるから、訂正発明２～５及び７～１２が甲３及び甲２、４、５、７～１０に記載された発明に基いて、当業者が容易に発明をすることができたものでないことは明らかである。 エ まとめ 以上より、訂正発明１～１２についての特許は、無効理由５ｂによって無効とされるべきものでない。 ６ 無効理由６について 無効理由６は、本件特許と同日の優先日を有する特許である特許第６４６６５３８号（甲１３）の請求項１３と同一の発明であることを理由とするものである。 特許第６４６６５３８号に対して無効２０２０－８０００２４が請求され、令和３年９月２７日に「特許第６４６６５３８号の特許請求の範囲を、訂正請求書に添付された特許請求の範囲のとおり、訂正後の請求項〔１～１３〕について訂正することを認める。 特許第６４６６５３８号の請求項１～８及び１２に記載された発明についての審判請求は成り立たない。 特許第６４６６５３８号の請求項９～１１及び１３についての審判請求を却下する。 審判費用は、請求人の負担とする。」との審決がされ、同審決は令和３年１０月７日に送達された。当該審決が認容した訂正は、請求項９～１０及び１３を削除する訂正を含むものであったところ、同審決中、同請求項の削除に係る訂正を認めた部分については、当該審判事件の請求人・被請求人とも取消訴訟を提起する原告適格を有しないというべきであるから、同審決の送達により，登録時の請求項９～１０及び１３を削除した部分は、形式的に確定した。（知的財産高等裁判所平成１９年（行ケ）第１０３８０号事件・平成２０年１１月２７日判決、平成１９年（行ケ）第１００９９号事件・平成１９年７月２３日決定、知的財産高等裁判所平成１８年（行ケ）第１０４５５号事件・平成２０年２月１２日判決参照） したがって、訂正請求項１についての特許は、無効理由６によって無効とすることはできない。 第８ むすび 以上のとおり、本件訂正は適法であり、本件訂正後の請求項１～１２に記載された発明の特許は、請求人が主張する無効理由１～６のいずれによっても無効とすることはできない。 審判に関する費用については、特許法第１６９条第２項において準用する民事訴訟法第６１条の規定により、請求人の負担とする。 よって、結論のとおり、審決する。