2016-004356

特願２０１２－５３５８６４「アルブミン変異体」拒絶査定不服審判事件〔平成２３年　５月　５日国際公開、ＷＯ２０１１／０５１４８９、平成２５年　３月１４日国内公表、特表２０１３－５０９１７０〕について、次のとおり審決する。

【結　論】 本件審判の請求は、成り立たない。

【理　由】 第１　手続の経緯、本願発明 本願は、平成２２年１１月１日（パリ条約による優先権主張外国庁受理　２００９年１０月３０日　欧州、２０１０年４月２３日、２０１０年５月２５日　いずれも米国、２０１０年８月２６日　欧州）を国際出願日とする出願であって、平成２７年１１月１１日付けで拒絶査定がなされ、これに対し平成２８年３月２３日に拒絶査定不服審判の請求がなされるとともに同日付け手続補正がなされ、さらに同日付けで早期審理に関する事情説明書が提出され、同年６月３０日付けで当審より拒絶理由が通知され、同年１０月４日付けで意見書及び手続補正書が提出されたものである。 本願の請求項１～１７に係る発明は、平成２８年１０月４日付け手続補正書により補正された特許請求の範囲の請求項１～１７に記載された事項により特定されるとおりのものであり、そのうち請求項２に係る発明（以下、「本願発明」という。）は、請求項２に記載される以下のとおりのものである。 「【請求項２】　　アルブミンの変異体、少なくとも４００アミノ酸を有するその断片、又は、前記アルブミンの変異体又はその断片を含む融合ポリペプチドであって、親アルブミン、少なくとも４００アミノ酸を有するその断片、又は、前記親アルブミン又はその断片を含む融合ポリペプチドと比べて、延長された血漿中半減期、及び、増強された酸性ｐＨ下でのＦｃＲｎへの親和性を有し、且つ、配列番号２に対して少なくとも９８％の配列同一性を有すると共に、配列番号２の位置に対応する置換：K573A,C,D,F,G,H,I,L,M,N,P,R,S,V,W,Yに対応する置換を有する、アルブミンの変異体、その断片、又は、前記アルブミンの変異体又はその断片を含む融合ポリペプチド。」 第２　平成２８年６月３０日付け拒絶理由 平成２８年６月３０日付け拒絶理由は、本願の請求項１～２１に係る発明は、その優先日前に頒布された刊行物である引用例１及び引用例２の記載に基づいて、当業者が容易に発明をすることができたものであるから、特許法第２９条第２項の規定により特許を受けることができない（Ｄ．理由３）、という理由を含むものである。 第３　当審の判断 １．引用例 （１）引用例１ 本願優先日前に頒布された刊行物であるBiochimica et Biophysica Acta, 2007, Vol.1774, p.1582-1590（以下、「引用例１」という）には、以下の事項が記載されている。 なお、翻訳は当審によるものであり、下線は当審が付与したものである。以下、同様である。 （１－ア）「１７種のヒト血清アルブミンの一残基変異体と通常アルブミンの薬物動態特性は、ハツカネズミで研究が行われた。すべてのケースで、血漿中半減期は、影響を受けたが、チャージが＋２変化した遺伝的バリアントだけは、血漿中半減期が長くなった。その一方で、疎水性が変化したものは、血漿中半減期が減少した。ドメインＩおよびＩＩＩとドメインＩＩにおけるα－ヘリックス構造変化と、血漿中半減期の変化の間に相関関係が見いだされた。変異のタイプやΔＨｖに象徴される熱安定性の変化に相関関係はなかった。」(１５８２頁、要約１行目～５行目まで) （１－イ）「この研究で使用された１７種のＨＳＡの遺伝多型(バリアント)は、最初にキャリアーが見つけ出された場所にちなんで命名された。バリアントは、一残基置換をもち、その変異の位置は、図１中に示される。一つを除いた、すべてのバリアントは、生理的なｐＨで正常なＨＳＡと異なる電荷がある。・・・Alb Kashmir(501 Glu→Lys),Alb Verona(570 Glu→Lys)は、すべて＋２の電荷、・・・(中略)・・・Alb Milano Fast(573 Lys→Glu)は、－２の電荷がある。・・・(中略)・・・ほとんどの置換は、すなわち９種がドメインＩＩ(２００－３９１残基)にある。ドメインＩ(１－１９９残基)とドメインＩＩＩ(３９２－５８５残基)は、それぞれ３種および５種の実例が示されている。」(１５８４頁左欄３行～１８行) （１－ウ）「図１　ＨＳＡの結晶構造は、この研究で使用した１７種のバリアントの一残基変異体の位置を示す。ＮとＣは、それぞれ、Ｎ末端及びＣ末端を示す。 」（１５８３頁） 「図２　マウスにおける静脈注射実施後の111Ｉｎ標識したバリアントとアルブミンＡ(通常)の血漿中の総量比較。111Ｉｎアルブミンは、尾静脈にボーラス投与で注射された。総量比較は、注射後の時間に対してプロットされる。各ポイントは、３－６尾のマウスの平均値（±Ｓ．Ｄ．）を表す。白丸と黒丸は、それぞれバリアント及び正常アルブミンを表す。 」（１５８４頁）、 「表１　マウスにおける111Ｉｎ標識したバリアントとアルブミンＡ(通常)の半減期および臓器取込クリアランス 」(１５８５頁)、 「表２　マウスにおけるＨＳＡバリアントの半減期と臓器取込クリアランスの変化 」(１５８６頁)。 （１－エ）「最近、ＨＳＡサイトーシスの別のタイプは、実質的にすべての核のある細胞のタンパク質の再利用に起因することが確認された。ピノサイトーシスの後に、アルブミンは、細胞内のＦｃＲｎ受容体にｐＨ依存的な方法で結合する。それによって、タンパク質は、リソソームの分解経路から外れ、血漿中半減期が増大したそのままの形態で、循環するためエンドサイトーシスに戻る。Chaudhuryらは、細胞内のＨＳＡとＦｃＲｎの結合が、受容体におけるヒスチジン残基とアルブミンのドメインＩＩＩにおけるヒスチジン残基の間で相互作用により引き起こされると提案している。Andersenらは、ＦｃＲｎが、負の電荷と、ＨＳＡのドメインＩＩＩ上の残基が接する表面で相互作用すると提案している。 このように、特にドメインＩＩＩの置換を伴ったバリアント(遺伝多型)は、修飾したＨＳＡ－ＦｃＲｎ再生利用プロセスのため血漿中半減期に変化を起こす可能性がある。 結論において、ＨＳＡの血漿中半減期は、一残基変異体の表面上の一残基によって変化させることができる。変異体のタイプに関する明確な関係は存在しない。しかし、＋２のバリアントは半減期が増大するが、一方、疎水性が増加したものは、半減期が減少する。 もしドメインＩあるいはＩＩＩの位置でタンパク質のα－ヘリックス構造の変化が起きた場合は、半減期にポジティブ効果を与える。一方、ドメインＩＩ場合、ネガティブ効果を与える。」(１５８９頁左欄５５行～右欄１９行目) （２）引用例２ 本願優先日前に頒布された刊行物であるBiochemistry, 2006, Vol.45, p.4983-4990（以下、「引用例２」という）には、以下の事項が記載されている。 （２－ア）「３つの組換えアルブミンドメインに対するＦｃＲｎへの結合を測定する実験では、アルブミンＤ－ＩＩＩだけがＦｃＲｎに結合するために必要かつ十分であると証明する。固定されたｓｈＦｃＲｎに結合するのが３つのドメインのうちのＤ－ＩＩＩのみであるばかりでなく、Ｄ－ＩＩＩの結合は、ＨＳＡの結合と等モルである。ｓｈＦｃＲｎ(データ提示なし)を結合することが示された異なる種(ネズミ、牛、マウス、人間)からのアルブミンのＤ－ＩＩＩのアミノ酸配列アライメントは、Ｄ－ＩＩＩ(H440、H464、H510、H535)の中の４つのヒスチジンのうち、３が保持される(H464、H510、H535)ことを明らかにする。Ｈ４６４は、アルブミンのＮ－Ｂ推移の間じゅう、ｐＨ５．０とｐＨ７．０の間でｐＨ依存によるプロトン化を経ることが示され、ＦｃＲｎとのヒスチジンを媒介としたｐＨ依存的な相互作用の可能性を示唆している。」(４９８９頁右欄３７行～５０行) ２．引用発明 引用例１の（１－ア）、（１－イ）には、Alb Milano Fast(573 Lys→Glu)がヒト血清アルブミンの一残基変異体であること、同（１－ウ）の表１及び表２には、Alb Milano Fast(573 Lys→Glu)の血漿中半減期が増加することがそれぞれ記載されていることから、引用例１には、「増加した血漿中半減期を有する、ヒト血清アルブミンのＫ５７３においてＥへの一残基変異を有する、ヒト血清アルブミンの変異体」に関する発明（以下、「引用発明」という。）が記載されている。 （なお、アミノ酸の表記について、Ｌｙｓは、リジンの三文字略号であり、対応する一文字略号は「Ｋ」である。同様にグルタミン酸(Ｇｌｕ)の一文字略号は「Ｅ」である。） ３．対比 本願発明のうち、「アルブミンの変異体であって、親アルブミンと比べて、延長された血漿中半減期、及び、増強された酸性ｐＨ下でのＦｃＲｎへの親和性を有し、且つ、配列番号２に対して少なくとも９８％の配列同一性を有すると共に、配列番号２の位置に対応する置換：K573A,C,D,F,G,H,I,L,M,N,P,R,S,V,W,Yに対応する置換を有する、アルブミンの変異体。」と引用発明を対比する。 引用発明のヒト血清アルブミンは配列番号２を有すると認められるから、引用発明の「ヒト血清アルブミンのＫ５７３において・・・一残基変異を有する、ヒト血清アルブミンの変異体」は、本願発明の「アルブミンの変異体であって、配列番号２に対して少なくとも９８％の配列同一性を有すると共に、配列番号２の位置に対応する置換：K573・・・に対応する置換を有する、アルブミンの変異体」に相当する。 また、引用発明の「増加した血漿中半減期を有する」は、本願発明の「延長された血漿中半減期・・・を有し」に相当する。 したがって、両者は、「アルブミンの変異体であって、親アルブミンと比べて、延長された血漿中半減期を有し、且つ、配列番号２に対して少なくとも９８％の配列同一性を有すると共に、配列番号２の位置に対応する置換：K573に対応する置換を有する、アルブミンの変異体」である点で一致し、以下の点で相違する。 相違点１：Ｋ５７３に対応する置換について、本願発明は、「Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｎ，Ｐ，Ｒ，Ｓ，Ｖ，Ｗ，Ｙ」であるのに対して、引用発明は、「Ｅ」である点。 相違点２：本願発明は、親アルブミンと比べて、増強された酸性ｐＨ下でのＦｃＲｎへの親和性を有するのに対して、引用発明には明記されていない点。 ４．当審の判断 以下、相違点１～２について、検討する。 相違点１について 引用例１には、Ｋ５７３Ｅのアルブミンの一残基変異体の血漿中半減期が増大することが示されているから、当業者はＫ５７３のアミノ酸の置換は血漿中半減期に影響を与えるアミノ酸位置であることを理解するといえる。 そうすると、同じＫ５７３においてＥ以外のアミノ酸に置換し、その血漿中半減期が延長されたものを選択することは、当業者が通常行うことに過ぎない。 そして、本願明細書の表１４の「ＨＳＡ　Ｋ５７３一点変異体の動態」を参酌すると、引用発明のＫ５７３Ｅは、ＫＤ値が３２２ｎＭであるのに対して、Ｋ５７３Ｄは５１８ｎＭ、Ｋ５７３Ｌは４５１ｎＭ、Ｋ５７３Ｒは３５３ｎＭを示しており、いずれも、Ｋ５７３Ｅより大きいＫＤ値、すなわち、Ｋ５７３Ｅよりも低い血漿中半減期であることが明らかである。 そうすると、Ｋ５７３に対応する置換アミノ酸を特定したことにより、そのすべてにおいて、当業者の予測を超えた格段に優れた血漿中半減期の増加を示しているわけではない。 相違点２について 本願明細書の段落【００５１】によればアルブミンのＦｃＲｎに対する親和性向上と血漿中半減期の延長とは相関するものであることが記載され、Ｋ５７３のアルブミン変異体におけるＦｃＲｎに対する親和性向上については、本願明細書の表１４(結合定数ＫＤ)及び図１２及び１３（ｐＨ５．５とｐＨ７．４におけるアルブミン変異体の親和性）に示されている。 そして、上記相違点１について検討したとおり、血漿中半減期の延長されたＫ７５３に置換を有するアルブミン変異体を選択することは、当業者が容易に行い得ることである。 そうすると、選択されたものは、ＦｃＲｎへの親和性も高いと推認される。 したがって、相違点２も、同様に当業者であれば容易に行い得ることである。 また、引用例２には、アルブミンに３つあるドメインのうち、ドメインＩＩＩとＦｃＲｎが結合し、その結合は、ｐＨ５．０とｐＨ７．０の間でｐＨ依存的であることが記載されており、アルブミンとＦｃＲｎがｐＨ依存的に結合する（親和性を有する）ことは、本願発明の優先日前に当業者に公知である。 そうであれば、引用発明において、引用例２の記載に基づいて、酸性ｐＨ下でのＦｃＲｎへの親和性を確認することは、当業者が容易に行い得ることである。 以上のとおり、上記本願発明は、引用例１および引用例２の記載に基づき当業者が容易に発明できたものである。 ５．審判請求人の主張について 審判請求人は、平成２８年１０月４日付け意見書において引用例１及び引用例２に基づいて位置５７３における変異に着目することは困難である旨主張している。 しかし、上記のとおり、引用例１には、Ｋ５７３Ｅの一残置変異体の血漿中半減期が増加することが記載されている以上、その記載に基づき位置５７３におけるアミノ酸置換に着目することは、当業者が容易に行い得ることであり、そのことによる効果についても、上記のとおり、特定されたアミノ酸すべてが予想外の格別顕著な効果を奏していると認められないから、審判請求人の主張は採用できない。 第４　むすび 以上のとおり、本願発明は、引用例１及び引用例２に記載された発明に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものであるから、特許法第２ ９条第２項の規定により特許を受けることができないので、他の請求項に係る発明について論及するまでもなく、本願は拒絶すべきものである。 よって、結論のとおり審決する。