2023-016143

特願２０２０－５１３６０７「組換え微生物を用いて炎症性皮膚疾患を処置するための方法および組成物」拒絶査定不服審判事件〔平成３１年 ３月１４日国際公開、ＷＯ２０１９／０５０８９８、令和 ２年１２月１７日国内公表、特表２０２０－５３６４９９〕について、次のとおり審決する。

結 論 本件審判の請求は、成り立たない。

理 由 第１ 手続の経緯 本願は、２０１８年９月５日（パリ条約による優先権主張 ２０１７年９月５日及び２０１８年６月１５日、いずれも（ＵＳ）アメリカ合衆国）を国際出願日とする出願であって、その主な手続の経緯は以下のとおりである。 令和４年 ８月３１日付け 拒絶理由通知書 令和５年 ３月 ６日 意見書、手続補正書の提出 同 年 ５月１０日付け 拒絶査定 同 年 ９月２５日 審判請求書、手続補正書の提出 第２ 令和５年９月２５日付け手続補正についての補正却下の決定 ［補正却下の決定の結論］ 令和５年９月２５日付けの手続補正（以下、「本件補正」という。）を却下する。 ［理由］ １ 補正の内容 本件補正により、特許請求の範囲の請求項１の記載は、 （補正前）「【請求項１】 フィラグリン（ＦＬＧ）ポリペプチドを分泌することができる組換え微生物であって、該フィラグリンポリペプチドを発現することができる遺伝子を含む第１のコード配列と、細胞透過性ペプチドを発現することができる遺伝子を含む第２のコード配列とを含む発現ベクターを含み、該フィラグリンポリペプチドがＦＬＧドメイン９－１０（ＦＬＧドメイン［９－１０］）を含む、組換え微生物。」 から （補正後）「【請求項１】 フィラグリン（ＦＬＧ）ポリペプチドを分泌することができる組換え微生物であって、該フィラグリンポリペプチドを発現することができる遺伝子を含む第１のコード配列と、細胞透過性ペプチドを発現することができる遺伝子を含む第２のコード配列とを含む発現ベクターを含み、該フィラグリンポリペプチドがＦＬＧドメイン９－１０（ＦＬＧドメイン［９－１０］）を含み、 前記ＦＬＧドメイン９－１０（ＦＬＧドメイン［９－１０］）は、配列番号４６と少なくとも９０％の配列同一性を有し、 前記組換え微生物は、ビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ブレヴィバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、プロピオニバクテリウム（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ラクトコッカス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）、ストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、エンテロコッカス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）、ペディオコッカス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ）、ロイコノストック（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）、もしくはオエノコッカス（Ｏｅｎｏｃｏｃｃｕｓ）、およびその組合せからなる群から選択される、 前記組換え微生物。」（以下、「本件補正発明」という。） に補正された。（下線部は補正箇所である。） ２ 補正の適否 本件補正は、 「ＦＬＧドメイン［９－１０］」について、本願の願書に添付した明細書（以下、「本願明細書」という。）の段落０００９、００５６～００５７、実施例、及び配列表、並びに、本願の願書に添付した図面（以下、「本願図面」という。）の図１３の記載に基づき、「配列番号４６と少なくとも９０％の配列同一性を有」する場合に限定し、 「組換え微生物」について、本願明細書の段落００１０、及び、拒絶査定時の請求項８（拒絶理由通知時の請求項９に相当）の記載に基づき、「ビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ブレヴィバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、プロピオニバクテリウム（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ラクトコッカス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）、ストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、エンテロコッカス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）、ペディオコッカス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ）、ロイコノストック（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）、もしくはオエノコッカス（Ｏｅｎｏｃｏｃｃｕｓ）、およびその組合せからなる群から選択される」場合に限定するものである。 そして、補正前の請求項１に記載された発明と補正後の請求項１に記載される発明は、産業上の利用分野及び解決しようとする課題が同一である。 よって、本件補正は、特許法第１７条の２第５項第２号に掲げる特許請求の範囲の限定的減縮を目的とするものを含むと認められる。 そこで、本件補正により補正された特許請求の範囲の請求項１に記載された事項により特定される発明が、特許出願の際独立して特許を受けることができるものであるか（特許法第１７条の２第６項において準用する同法第１２６条第７項の規定に適合するか）（以下、「独立特許要件」という。）について、以下、検討する。 ３ 独立特許要件の検討 （１） 特許法第２９条第１項第３号（いわゆる新規性の欠如）について ア 引用文献の記載 原査定の拒絶の理由で引用された、本願優先日前に頒布された刊行物である特表２０１７－５１８３７０号公報（以下、「引用文献」という。）には、以下の事項が記載されている。なお、下線は当審で付した。 （ア） 特許請求の範囲 「…… 【請求項１１】 異常な皮膚状態の治療又は予防を必要とするヒトの当該状態の治療又は予防方法であって、以下、当該ヒトに、ビフィドバクテリウム、ブレビバクテリウム、プロピオニバクテリウム、ラクトコッカス、ストレプトコッカス、スタフィロコッカス、ラクトバチルス、エンテロコッカス、ペディオコッカス、ロイコノストック、又はオエノコッカス、及びそれらの混合物から選択される細菌株を含有する細胞培養組成物を投与することを含み、ここで、当該細胞培養組成物が、異常な皮膚状態を治療し又は予防するための（ａ）フィラグリンのアミノ酸配列、（ｂ）分泌シグナル、及び（ｃ）細胞膜透過性ペプチド（ｃｅｌｌ ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ ｐｅｐｔｉｄｅ）を含む組換えポリペプチドの治療上有効量を産生する少なくとも１つの操作された細菌株を含有する、方法。 【請求項１２】 前記細胞培養組成物が表皮ブドウ球菌を含有する、請求項１１に記載の方法。 …… 【請求項１５】 前記フィラグリンのアミノ酸配列が配列番号１を含む、請求項１１に記載の方法。 …… 【請求項２９】 異常な皮膚状態の治療又は予防を必要とするヒトの当該状態の治療又は予防用の医薬組成物であって、以下、（Ｉ）ビフィドバクテリウム、ブレビバクテリウム、プロピオニバクテリウム、ラクトコッカス、ストレプトコッカス、スタフィロコッカス、ラクトバチルス、エンテロコッカス、ペディオコッカス、ロイコノストック、又はオエノコッカス、及びそれらの混合物から選択される細菌株を含有する細胞培養組成物であって、異常な皮膚状態を治療し又は予防するための、（ａ）フィラグリンのアミノ酸配列、（ｂ）分泌シグナル、及び（ｃ）細胞膜透過性ペプチドを含む組換えポリペプチドの治療上有効量を産生する少なくとも１つの操作された細菌株を含有する、細胞培養組成物、ならびに、（ＩＩ）薬学的に許容される担体、を含有する、医薬組成物。 【請求項３１】 前記細胞培養組成物が表皮ブドウ球菌を含有する、請求項２９に記載の医薬組成物。 …… 【請求項３４】 前記フィラグリンのアミノ酸配列が配列番号１を含む、請求項２９に記載の医薬組成物。 …… 【請求項４３】 異常な皮膚状態の治療又は予防を必要とするヒトの当該状態の治療又は予防用の医薬の製造のための細胞培養組成物の使用であって、当該細胞培養組成物が、ビフィドバクテリウム、ブレビバクテリウム、プロピオニバクテリウム、ラクトコッカス、ストレプトコッカス、スタフィロコッカス、ラクトバチルス、エンテロコッカス、ペディオコッカス、ロイコノストック、又はオエノコッカス、及びそれらの混合物から選択される細菌株を含有し、異常な皮膚状態を治療し又は予防するための（ａ）フィラグリンのアミノ酸配列、（ｂ）分泌シグナル、及び（ｃ）細胞膜透過性ペプチドを含む組換えポリペプチドの治療上有効量を産生する少なくとも１つの操作された細菌株を含有する、使用。」 （イ） 段落００７０（図面の簡単な説明） 「【００７０】 …… 【図５】図５は、プラスミドｐＪＢ３８のベクター設計（Ｃｈｅｕｎｇ，ＡＬ．ら（２００４））を示す。制限部位はベクターのマルチクローニングサイト（ＭＣＳ）に組み込まれる。ベクターのＭＣＳには、キシロース誘導性プロモーター、リボソーム結合部位、輸出シグナル（例えばＳｅｃＡ輸出シグナル）、フィラグリンモノマーに隣接する部分的ＦＬＧ（フィラグリン）リピート、及び細胞浸透シグナルを有するフィラグリン発現ベクターが挿入される。ｐＡＺＴ－０１のインサートはバイオ・ベーシック・インク（Ｂｉｏ Ｂａｓｉｃ，Ｉｎｃ．）（マーカム、ＯＮ、カナダ）によって構築され、ｐＪＢ３８にクローニングされた。 ……」 （ウ） 段落００７３～００８３ 「【００７３】 １．細菌株 細胞培養組成物 広い範囲の細菌が本発明での使用に適している。例としては、非病原性及び片利共生細菌が挙げられるが、これらに限定されない。本発明での使用に適している細菌には、ビフィドバクテリウム、ブレビバクテリウム、プロピオニバクテリウム、ラクトコッカス、ストレプトコッカス、スタフィロコッカス（例えば、表皮ブドウ球菌）、ラクトバチルス（例えば、Ｌ．アシドフィルス）、ペディオコッカス、ロイコノストック、又はオエノコッカスが挙げられるが、これらに限定されない。 【００７４】 特定の実施形態は細菌の表皮ブドウ球菌の使用を含む。使用されることになる表皮ブドウ球菌の株はバイオフィルムを生成することができない。この例は表皮ブドウ球菌株ＡＴＣＣ１２２２８である。 【００７５】 しかしながら、皮膚に見られる他の関連又は類似の種を使用することもできる。 【００７６】 ２．フィラグリン及びフィラグリン遺伝子 本発明の実施形態で選択された有用な遺伝子はフィラグリン（ＦＬＧ）をコードする哺乳動物遺伝子である。フィラグリンはケラチノサイトを分化させることによって産生されるタンパク質であり、そして、ケラチンフィラメントを他の成分と組み合わせて周辺帯を含む細胞骨格へと凝集させる役割を果たす。ＦＬＧは染色体１ｑ２１上に位置する大きな遺伝子であり、タンパク質分解されて機能性フィラグリンモノマーを放出する不要性ポリタンパク質であるプロフィラグリンを産生する（Ａｒｍｅｎｇｏｔ－Ｃａｒｂｏら、２０１４）。本発明のための遺伝子は任意の哺乳動物由来のものとすることができる。非限定的な例としては、マウス、ラット、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、ウマ、ウシ、イヌ、霊長類、またはヒト遺伝子配列が挙げられる。好ましい実施形態では、当該遺伝子配列はヒト遺伝子配列である。フィラグリンタンパク質の非限定的な例は表１に記載され、その配列はさらに対応する配列表に記載される。 【００７７】 【表１】 ［図：0001430426000001.jpg］ 【００７８】 ３．分泌シグナル 分泌シグナル又は輸出シグナルは、タンパク質が分泌経路に向かうことになっており、そのため細胞から分泌されることを示す、タンパク質上のペプチドである。細菌細胞の外にタンパク質、例えばフィラグリン分子の排出を促進する任意の分泌シグナルは、分泌シグナルとして考えられる。分泌シグナルの非限定的な例を表２に記載する。 【００７９】 【表２】 ［図：0001430426000002.jpg］ 【００８０】 ４．細胞膜透過性ペプチド 細胞膜透過性ペプチドは、受容体を使用することなく、そして著しい膜の損傷を引き起こすことなく、イン・ビボでのカーゴ（ｃａｒｇｏ）の輸送を媒介するために使用することができる。皮膚ケラチノサイトへの侵入を促進する細胞膜透過性ペプチドは本発明の細胞膜透過性ペプチドとして考えられる。非限定的な例を表３に記載する。 【００８１】 【表３】 ［図：0001430426000003.jpg］ 【００８２】 ５．遺伝子コンストラクト 本発明は標準的な分子生物学技術、例えば（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、２００１）に記載されるものを利用する。本発明に使用される遺伝子コンストラクトの例は、プラスミドベクターｐＢＴ－２（図２）、大腸菌とブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ）種との間の対立遺伝子交換シャトルベクターに基づく（Ｎａｋａｎｉｓｈｉ、Ｏｓｈｉｄａら、１９８６）。図３のプラスミドは、治療用タンパク質をコードする遺伝子のｃＤＮＡをｐＢＴ－２のＭＣＳの制限部位に挿入することによって構築される。インサートはプロモーターによって駆動されるコーディング配列を含む。このようなプロモーターは構成的又は誘導性のいずれかとすることができる。誘導性プロモーターの例としては、化学化合物、例えばアルコール、糖類、金属、又はテトラサイクリンによって、あるいは物理的要因、例えば光又は高温によって活性化されるものが挙げられる。 【００８３】 遺伝子コンストラクトはプラスミドベクターｐＪＢ３８、大腸菌とブドウ球菌種との間の対立遺伝子交換シャトルベクターに基づくことができる。（Ｃｈｅｕｎｇ ＡＬら、２００４）参照。ヒトＦＬＧのｍＲＮＡ配列はジーンバンクアクセッション番号ＮＭ＿００２０１６を有し、上記配列番号１として再現される。プラスミドｐＡＺＴ－０１（図５）は、ＦＬＧのｃＤＮＡの一部をｐＪＢ３８の制限部位に挿入することによって構築することができる。インサートは構成的キシロースプロモーターによって駆動されるコーディング配列を含む。当該コンストラクトは分泌シグナル及び細胞膜透過性ペプチドもコードし、したがってフィラグリン融合タンパク質をもたらす。」 （エ） 実施例１（段落０１１２～０１２５） 「【０１１２】 実施例１ ベクターｐＡＺＴ－０１を用いてエレメントのフィラグリンを発現する表皮ブドウ球菌 Ａ．細菌 黄色ブドウ球菌ＲＮ４２２０株の細菌をベクターの調製に使用した（Ｋｒｅｉｓｗｉｒｔｈ、ＢＮ．ら、１９８３）。当該株のストック溶液をブレインハートフュージョン培地（ｂｒａｉｎ ｈｅａｒｔ ｆｕｓｉｏｎ ｂｒｏｔｈ）（ＢＨＩ）中の５０％グリセロール中に、－２０℃で保存した。 【０１１３】 表皮ブドウ球菌株ＡＴＣＣ１２２２８の細菌を使用した（Ｚｈａｎｇ，ＹＱ．ら、２００３）。当該株のストック溶液をブレインハートフュージョン培地（ＢＨＩ）中の５０％グリセロール中に、－２０℃で保存した。細菌をブレインハートフュージョン培地（ＢＨＩ）で培養した。１６時間のインキュベーション後、細菌を遠心分離により回収し、ブレインハートフュージョン培地（ＢＨＩ）中で２×１０９細菌／１００μｌに１０倍濃縮した。細菌のストック調製物を、５ｍＬの培養液にスラントからの細胞を接種することによって調製した。細胞を３０℃で一晩増殖させた。次いで、３ｍＬの十分に増殖した培養物を１ｍｌの６０％グリセロールに添加し、－８０℃で保存した。 【０１１４】 Ｂ．ベクターへのゲノムの組込 プラスミドＡＺＴ－０１は、フィラグリン発現インサートを有するシャトルベクターｐＪＢ３８からなる（図５）（Ｃｈｅｕｎｇ、ＡＬ．ら、２００４）。ｐＪＢ３８へのインサートはフィラグリンＤＮＡ配列（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿００２０１６）についての完全なオペロン、キシロース－誘導性プロモーターを含み、目的の化合物の生産に使用された。ｐＪＢ３８－ＦＬＧベクター（図５）はバイオ・ベーシック・インク（マーカム、ＯＮ、カナダ）によって構築され、クローニングされた。 【０１１５】 Ｃ．形質転換 フィラグリン配列を含むベクター、又は異常なヒトの皮膚の治療処置の目的で構築された任意のベクターを以下のステップを含む以下のプロトコルに従って、表皮ブドウ球菌株に形質転換した：黄色ブドウ球菌細菌細胞の調製、黄色ブドウ球菌の形質転換、黄色ブドウ球菌からのプラスミドＤＮＡの単離、表皮ブドウ球菌細菌細胞の調製、表皮ブドウ球菌の形質転換、細菌の増殖、及び形質転換された細菌の保存。代替の中間株も形質転換、及び表皮ブドウ球菌への形質転換のための調製におけるプラスミドＤＮＡの単離に使用することができる。これらの株にはメチル化を欠損した株を含む黄色ブドウ球菌及び大腸菌株が挙げられるが、これらに限定されない。 【０１１６】 黄色ブドウ球菌の調製及び形質転換：細胞の調製：黄色ブドウ球菌ＲＮ４２２０細胞を、５０ｍｌの培養物を３７℃、ＢＨＩ培地中で一晩増殖させ、次いで１００ｍｌの新鮮なＢＨＩ培地に一晩培養物の１０ｍｌを接種することによって、エレクトロコンピテントにした。ＯＤ６００が０．２～０．３に達したら、細胞をペレット化し（ｐｅｌｌｅｔｅｄ）、１ｘ容量の４℃１０％スクロースで再懸濁した。本工程を３回繰り返し、次いで細胞を０．１ｘ容量の４℃１０％スクロースで再懸濁し、ペレット化し、そして１ｍｌの１０％スクロースで再懸濁した。 【０１１７】 ＲＮ４２２０の形質転換のために、２００～５００ｍｇのｐＡＺＴ－０１を先に調製したエレクトロコンピテントセルと混合し、そしてＭｉｃｒｏＰｕｌｓｅｒ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｏｒａｔｏｒ（バイオ－ラッド（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）、ハーキュリーズ、ＣＡ）を使用して２．５ｋＶで室温でのエレクトロポレーションを用いて形質転換した。形質転換された細胞を選択ＢＨＩ培地上に２８℃で一晩プレーティングし、選択ＢＨＩ培地で一晩増殖させ、次いでＤＮＡを単離するために使用した。 【０１１８】 表皮ブドウ球菌の調製及び形質転換：エレクトロコンピテント表皮ブドウ球菌ＡＴＣＣ１２２２８を以下の方法を使用して作製した。まず、－８０℃のストックからのＡＴＣＣ１２２２８の５０ｍｌの一晩培養物をＢ２培地（１．０％トリプトン、２．５％酵母エキス、０．５％グルコース、２．５％ＮａＣｌ、０．１％Ｋ２ＰＯ４、ｐＨ７．５）中で、３７℃で増殖させた。一晩培養物の１０ｍｌを新鮮な予熱した（ｐｒｅ－ｗａｒｍｅｄ）Ｂ２培地に希釈し、ＯＤ６００が０．５～０．６に達するまで振とうし、次いで１０分間４℃でペレット化した。次に、細胞を１、１／２、１／２０、及び１／５０容量の冷やした１０％グリセロールで洗浄し、洗浄の間に４℃でペレット化した。最終ペレットを７００μｌの冷やした１０％グリセロールに再懸濁した。 【０１１９】 エレクトロコンピテントＡＴＣＣ１２２２８を、２．５ｋＶ、２５ｕＦ、１００Ωでのエレクトロポレーション（Ｍｉｃｒｏｐｕｌｓｅｒ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｏｒａｔｏｒ（バイオ－ラッド、ハーキュリーズ、ＣＡ）を使用して、通常の読み取りは４．５～５ミリ秒である）を用いて、黄色ブドウ球菌から単離されたｐＡＺＴ－０１で形質転換した。次いで細胞を２８℃で選択ＢＨＩ培地にプレーティングした。 【０１２０】 細菌の形質転換は、代替の中間株、バクテリオファージ形質導入、及びヒートショックを含むがこれらに限定されない、形質転換の代替方法によって行うこともできる。 【０１２１】 Ｄ．タンパク質発現の誘導 フィラグリン発現を以下の方法でｐＡＺＴ－０１により形質転換されたＡＴＣＣ１２２２８において誘導した。まず、選択ＢＨＩ培地中で形質転換されたＡＴＣＣ１２２２８の２８℃での一晩培養物の５ｍｌを採取して、抗生物質を含む新鮮なＢＨＩの１００ｍｌに接種した。細胞をＯＤ６００が０．５～０．６５に達するまで増殖させ、次いで細胞を最終濃度の１．５％キシロースを用いて４．５時間誘導した。 【０１２２】 Ｅ．タンパク質発現及び分泌の分析 分析のために細胞を分画し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ電気泳動及びウェスタンブロッティングにより分析した。非誘導試料及び誘導試料からの細菌細胞をペレット化し、ＣｅｌＬｙｔｉｃ Ｂ細胞溶解試薬（シグマ－アルドリッチ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、セントルイス、ＭＯ）で溶解した。誘導試料からの上清も回収し、濃縮した。試料を還元試料緩衝液中に再懸濁し、次いでＴｒｉｓ－ＨＣＬランニングバッファーを用いて４～１５％Ｔｒｉｓゲル上で電気泳動した。電気泳動後に、ゲルをＰＶＤＦ膜に転写し、フィラグリンに対する一次ヤギモノクローナル抗体（ｓｃ－２５８９７、サンタ・クルズ・バイオテクノロジー（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ））で順次プローブした。次いで西洋ワサビペルオキシダーゼ結合ロバ抗ヤギ（ａｎｔｉ－ｇｏａｌ）抗体（ｓｃ－２０２０）をプローブし、二次抗体を、増強化学発光基質（ｅｎｈａｎｃｅｄ ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ）（ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ Ｗｅｓｔ Ｐｉｃｏ、サーモ・サイエンティフィック（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ））を使用してオートラジオグラフィー（Ｓｙｎｇｅｎｅ ＧｅｎｅＧｎｏｍｅ Ｂｉｏ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍ）によって検出した。 【０１２３】 上清及び細胞溶解物の分析は、目的のタンパク質を含むプラスミドによる形質転換、続くタンパク質発現の誘導にあたり、治療用ポリペプチドの成功した発現及び分泌を実証する。 【０１２４】 タンパク質発現及び分泌の検出は代替方法を用いても可能であり、現在の実施例は本発明の限定として解釈されるべきではない。 【０１２５】 Ｆ．前述の組成物によるヒト対象の治療 ｐＡＺＴ－０１を含む表皮ブドウ球菌の約１ｘ１０９コロニー形成単位（ＣＦＵ）を薬学的に許容される担体に加えることができる。前述の組成物は、異常な皮膚状態の治療又は予防を必要とする対象、例えば湿疹などの異常な皮膚状態を有するヒト対象の、当該状態の治療又は予防に有用である。当該組成物は、１日当たり少なくとも１回から、例えば１日当たり約３～４回まで、又は必要に応じてもしくは処方通りに、適用することができる。当該組成物は状態の治療を確実にするため、又は状態を予防し続けるために必要とされる限り使用することができる。治療期間は約１日から約１０～１４日まで又はそれ以上に変化させることができる。特定の例では、長期又は慢性治療を施すことができる。」 （オ） 図５ 「【図５】 ［図：0001430426000004.jpg］ 」 イ 引用発明 引用文献の「ベクターｐＡＺＴ－０１を用いてエレメントのフィラグリンを発現する表皮ブドウ球菌」に係る実施例１には、フィラグリンＤＮＡ配列（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿００２０１６）についての完全なオペロン、キシロース－誘導性プロモーター、輸出シグナル、細胞膜透過性ペプチドをシャトルベクターｐＪＢ３８マルチクローニングサイト（ＭＣＳ）に挿入したｐＪＢ３８－ＦＬＧベクター、すなわちプラスミドＡＺＴ－０１（ｐＡＺＴ－０１）が記載され（ア（エ）【０１１４】、ア（オ）図５、ア（イ））、エレクトロコンピテント表皮ブドウ球菌ＡＴＣＣ１２２２８をｐＡＺＴ－０１で形質転換し（ア（エ）【０１１９】）、ｐＡＺＴ－０１により形質転換されたＡＴＣＣ１２２２８においてフィラグリン発現を誘導したこと（ア（エ）【０１２１】）が記載されている。 そして、引用文献には「ヒトＦＬＧのｍＲＮＡ配列はジーンバンクアクセッション番号ＮＭ＿００２０１６を有し、上記配列番号１として再現される。」（ア（ウ）【００８３】）と記載されているから、上記実施例１に係る「フィラグリンＤＮＡ配列（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿００２０１６）についての完全なオペロン」とは、ヒトＦＬＧのｍＲＮＡ配列である配列番号１をコードするフィラグリンＤＮＡ配列に相当する。また、引用文献には「分泌シグナル又は輸出シグナルは、タンパク質が分泌経路に向かうことになっており、そのため細胞から分泌されることを示す、タンパク質上のペプチドである。」（ア（ウ）【００７８】）と記載されているから、上記実施例１に係る「輸出シグナル」は「分泌シグナル」に相当する。 以上のことから、引用文献には以下の発明（以下、「引用発明」という。）が記載されていると認められる。 「フィラグリン発現が誘導される、ｐＡＺＴ－０１により形質転換された、スタフィロコッカス細菌株である表皮ブドウ球菌株ＡＴＣＣ１２２２８であって、ｐＡＺＴ－０１は配列番号１で表されるヒトフィラグリンをコードする配列、並びに、分泌シグナル及び細胞膜透過性ペプチドをコードする配列を含む、細菌株。」 ウ 対比 本件補正発明と引用発明とを対比する。 （ア） 引用発明の「ｐＡＺＴ－０１」はエレクトロポレーションを用いた細胞株への形質転換に使用されたプラスミドベクターである（ア（エ）【０１１４】及び【０１１９】、ア（オ）図５、ア（イ））から、本件補正発明の「発現ベクター」に相当する。また、このようなベクターによる形質転換は遺伝子組換えの一種であるから、引用発明の「細菌株」は本件補正発明の「組換え微生物」に相当する。 また、引用発明では、「ｐＡＺＴ－０１」に「分泌シグナル」を含むことが記載されるところ、引用文献をみると、分泌シグナルは「タンパク質が分泌経路に向かうことになっており、そのため細胞から分泌されることを示す、タンパク質上のペプチドである」ことが記載される（ア（ウ）【００７８】）とともに、実施例１でもタンパク質発現や分泌を分析対象としていることから、引用発明の「細菌株」は本件補正発明における「フィラグリン（ＦＬＧ）ポリペプチドを分泌することができる」ものといえる。 （イ） 引用発明の「細胞膜透過性ペプチド」について、引用文献では「受容体を使用することなく、そして著しい膜の損傷を引き起こすことなく、イン・ビボでのカーゴ（ｃａｒｇｏ）の輸送を媒介するために使用することができる」ものとして記載され（ア（ウ）【００８０】）、これは本願明細書の段落００６２で「受容体を使用することなく、また、有意な膜損傷を引き起こすことなく、ｉｎ ｖｉｖｏで生体分子（例えば、タンパク質）の送達を容易にする、または媒介するペプチド配列である」と説明される「細胞透過性ペプチド」と同様の機能を有するものといえるから、引用発明の「細胞膜透過性ペプチドをコードする配列」は、本件補正発明の「細胞透過性ペプチドを発現することができる遺伝子を含む第２のコード配列」に相当する。 （ウ） 引用発明の「配列番号１で表されるヒトフィラグリン」に関し、本件補正発明の「配列番号４６」で表される「ＦＬＧドメイン９－１０（ＦＬＧドメイン［９－１０］）」との配列同一性を検討すると、両者の重複する部分のアミノ酸配列（１文字表記）のアラインメントは以下で図示されるとおりであり、本件補正発明の「配列番号４６」で表される「ＦＬＧドメイン９－１０（ＦＬＧドメイン［９－１０］）」のアミノ酸配列の全長は、引用発明の配列番号１で表される「ヒトフィラグリン」のアミノ酸配列中１４４１番目～１７６７番目の残基に相当し、引用発明の「配列番号１で表されるヒトフィラグリンをコードする配列」は、本件補正発明の「フィラグリンポリペプチドを発現することができる遺伝子を含む第１のコード配列」であって、「フィラグリンポリペプチドがＦＬＧドメイン９－１０（ＦＬＧドメイン［９－１０］）を含み」、「ＦＬＧドメイン９－１０（ＦＬＧドメイン［９－１０］）は、配列番号４６と少なくとも９０％の配列同一性を有」するものに相当する。 ［図：0001430426000005.jpg］ ［図：0001430426000006.jpg］ （注：図中、引用発明の「配列番号１」は、「ＪＰ２０１７－５１８３７０Ａ＿Ｓｅｑ１」と記載し、本件補正発明の「配列番号４６」は、「ＪＰ２０２０－５１３６０７＿Ｓｅｑ４６」と記載している。 ★印のある部分が「配列番号１」と「配列番号４６」が重複する部分であり、当該部分とその前後を抜粋した。 引用発明の「配列番号１」で表されるアミノ酸配列は、図示部分の前後にそれぞれ続いている。） 上記（ア）～（ウ）の点を踏まえると、本件補正発明と引用発明とは 「フィラグリン（ＦＬＧ）ポリペプチドを分泌することができる組換え微生物であって、該フィラグリンポリペプチドを発現することができる遺伝子を含む第１のコード配列と、細胞透過性ペプチドを発現することができる遺伝子を含む第２のコード配列とを含む発現ベクターを含み、該フィラグリンポリペプチドがＦＬＧドメイン９－１０（ＦＬＧドメイン［９－１０］）を含み、 前記ＦＬＧドメイン９－１０（ＦＬＧドメイン［９－１０］）は、配列番号４６と少なくとも９０％の配列同一性を有し、 前記組換え微生物は、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）である、 前記組換え微生物。」 である点で一致し、本件補正発明と引用発明との間で、実質的な相違点は見出せない。 エ 小括 以上からすると、本件補正発明は、他の選択肢の「微生物」について検討するまでもなく、引用文献に記載された発明であるといえるので、特許法第２９条第１項第３号に該当し、特許出願の際独立して特許を受けることができない。 （２） 審判請求人の主張 ア 審判請求人は、審判請求書において、新規性に係る査定理由に対して、以下の点を主張している。 引用文献１にはフィラグリンの記載はある（表１等）が、引用文献１は、ＦＬＧドメイン９－１０（ＦＬＧドメイン［９－１０］）に着目したものではない。また、引用文献１には配列番号４６と少なくとも９０％の配列同一性を有する配列の記載はなく、本願発明は引用文献１に記載された発明ではない。 少なくとも本願の新請求項１は、フィラグリン（ＦＬＧ）ポリペプチドを分泌することができる組換え微生物であって、該フィラグリンポリペプチドを発現することができる遺伝子を含む第１のコード配列と、細胞透過性ペプチドを発現することができる遺伝子を含む第２のコード配列とを含む発現ベクターを含み、該フィラグリンポリペプチドがＦＬＧドメイン９－１０（ＦＬＧドメイン［９－１０］）を含み、前記ＦＬＧドメイン９－１０（ＦＬＧドメイン［９－１０］）は、配列番号４６と少なくとも９０％の配列同一性を有する、組換え微生物を対象とするものであって、そのような記載がない引用文献１に対して新規性を有し、よってこの拒絶理由は解消した。 （主張中の「引用文献１」は、（１）アの「引用文献」である。） イ しかし、上記主張は、以下のとおりであって、採用することができないものである。 本件補正発明は、フィラグリンポリペプチドがＦＬＧドメイン９－１０（ＦＬＧドメイン［９－１０］）を含み、前記ＦＬＧドメイン９－１０（ＦＬＧドメイン［９－１０］）は、配列番号４６と少なくとも９０％の配列同一性を有する、フィラグリン（ＦＬＧ）ポリペプチドを分泌することができる組換え微生物であって、フィラグリンポリペプチドがＦＬＧドメイン９－１０（ＦＬＧドメイン［９－１０］）からなり、前記ＦＬＧドメイン９－１０（ＦＬＧドメイン［９－１０］）は、配列番号４６と少なくとも９０％の配列同一性を有する、フィラグリン（ＦＬＧ）ポリペプチドを分泌することができる組換え微生物ではない。 そうすると、本件補正発明のフィラグリンポリペプチドは、ＦＬＧドメイン９－１０（ＦＬＧドメイン［９－１０］）への着目の有無を問わず、ＦＬＧドメイン９－１０（ＦＬＧドメイン［９－１０］）以外のＦＬＧドメインを含むことを妨げるものではない。そして、ＦＬＧドメイン９－１０（ＦＬＧドメイン［９－１０］）を１４４１番目～１７６７番目の残基位置で本願の配列番号４６を１００％の配列同一性で含む、引用発明の配列番号１で表されるアミノ酸配列を有するフィラグリンポリペプチドは、本件補正発明のフィラグリンポリペプチドに包含されるものであるから、本件補正発明は引用発明を包含するものであり、本件補正発明は引用発明に対して新規性を有しない。 審判請求人が主張する「該フィラグリンポリペプチドがＦＬＧドメイン９－１０（ＦＬＧドメイン［９－１０］）を含み、前記ＦＬＧドメイン９－１０（ＦＬＧドメイン［９－１０］）は、配列番号４６と少なくとも９０％の配列同一性を有」することを発明特定事項としている点は、本件補正発明に係るフィラグリンがＦＬＧドメイン９－１０を部分構造として含んでいることについての主観的な認識を含むにとどまり、組換え微生物という「物」の発明である本件補正発明について、その構成を限定する意義を有するものということはできない。 （３） むすび 以上検討したところによると、本件補正は、特許法第１７条の２第６項で準用する同法第１２６条第７項の規定に違反するものであり、同法第１５９条第１項の規定において読み替えて準用する同法第５３条第１項の規定により却下されるべきものである。 よって、上記補正の却下の決定の結論のとおり決定する。 第３ 本願発明について 令和５年９月２５日付けの手続補正は上記のとおり却下されたので、本願の請求項１に係る発明は、令和５年３月６日付け手続補正書により補正された特許請求の範囲の請求項１に記載された事項により特定される、上記第２の１において、補正前の【請求項１】に記載したとおりのものである（以下、「本願発明」という。）。 第４ 原査定の拒絶理由 本願発明に対する原査定の拒絶の理由１の概要は、以下のとおりである。 （理由１）本願発明は、本願優先日前に頒布された刊行物である引用文献に記載された発明であるから、特許法第２９条第１項第３号に該当し、特許を受けることができない。 第５ 当審の判断 本願発明は、本件補正発明における「配列番号４６」と配列同一性に基づく限定がなく、「組換え微生物」の細菌の種類に関する限定がないものにあたる。 そして、引用文献に記載された事項、引用発明、対比及び判断は、上記第２の３（１）に記載したとおりであるから、本願発明と引用発明において実質的な相違点は存在しない。 第６ むすび 以上のとおり、本願の請求項１に係る発明は、引用文献に記載された発明であり、特許法第２９条第１項第３号に該当するから、他の請求項に係る発明について検討するまでもなく、本願は特許を受けることができない。 よって、結論のとおり審決する。